GlobalFiler Express PCR Amplification Kit

REFERENCIA RÁPIDA
GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit –
PCR Amplification and CE
Pub. No. 4481786 Rev. A Translated from English Publication Number 4480794 Rev. B
Nota: Si desea conocer las recomendaciones sobre seguridad y riesgos biológicos, consulte la sección “Seguridad” en el documento
GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit User Guide (Pub. no. 4477672). Para cada uno de los productos químicos, consulte las fichas de
seguridad (SDS) y siga las instrucciones de manipulación indicadas. Use protectores oculares, vestimenta protectora y guantes apropiados.
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Resumen del producto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Prerrequisitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Realización de PCR. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Requisitos de la escalera alélica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
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Requisitos de los instrumentos de electroforesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
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Análisis de los datos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
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Garantía limitada de producto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
Resumen del producto
El GlobalFiler™ Express Kit (200 reacciones Part no. 4476609 o 1000 reacciones Part no. 4474665) es un ensayo multiplex de repeticiones
cortas en tándem que amplifica 21 loci de repetición autosómicos, Amelogenina, 1 locus de repeticiones cortas en tándem Y, y 1 locus de
inserción/borrado Y (indel Y). Está optimizado para permitir la amplificación directa de muestras de una sola fuente.
Prerrequisitos
Antes de empezar:
• Configurar muestras:
– Muestras de sangre o de mucosa yugal recogidas en sustratos de papel tratado (descrito en el documento de referencia
rápida Pub. no. 4481768).
– Muestras de sangre o de mucosa yugal recogidas en sustratos de papel sin tratar (descrito en el documento de referencia
rápida Pub. no. 4481777).
– Muestras de mucosa yugal recogidas en sustratos de hisopo (descrito en el documento de referencia rápida Pub. no. 4481759).
• Coloque esta guía en el área del laboratorio donde se realicen los procedimientos post-PCR.
Realización de PCR
¡IMPORTANTE! El GlobalFiler™ Express Kit ha sido validado para usarse con el Veriti® Thermal Cycler, el GeneAmp® PCR System
9700 con el bloque de muestras chapado en oro (Part no. 4314878) o el bloque de muestras de plata (Part no. N8050001).
1. Programe las condiciones de termociclado.
¡IMPORTANTE! Cuando utilice el GeneAmp PCR System 9700, seleccione el modo de rampa Max. Cuando utilice el Veriti®
Thermal Cycler, seleccione la velocidad de rampa del 100%. NO utilice el modo de emulación de 9600.
Paso inicial de
incubación
Cantidad de ciclos óptima†
Desnaturalización
EN ESPERA
95 °C
1 min
†
CICLO
94 °C
3s
Extensión final
Paso final
EN ESPERA
EN ESPERA
60 °C
8 min
4 °C
∞
Puesta al rojo vivo/extensión
60 °C
30 s
Determine la cantidad de ciclos óptima para su laboratorio de acuerdo con las instrucciones contenidas en la guía del usuario.
2. Cargue la placa en el termociclador y cierre la cubierta caliente.
¡IMPORTANTE! Si utiliza el termociclador 9700 con bloque de plata o de plata chapado con oro, ponga un MicroAmp®
Compression Pad (Part no. 4312639) en la parte superior de la placa para impedir todavía más la evaporación durante el
termociclado. El Veriti® Thermal Cycler no requiere una almohadilla de compresión.
3. Inicie el proceso.
4. Al término del proceso, conserve el DNA amplificado.
Si conserva el DNA...
Entonces manténgalo a...
<2 semanas
entre 2 y 8 °C
>2 semanas
entre -15 y -25 °C
¡IMPORTANTE! Proteja los productos amplificados de la luz.
Requisitos de la escalera alélica
Para genotipar las muestras con exactitud, debe procesar una muestra de escalera alélica junto con las muestras desconocidas.
Instrumento
Cantidad de escaleras
alélicas para procesar
Una inyección
equivale a
Cantidad de muestras por escalera alélica
3130
1 por 4 inyecciones
4 muestras
15 muestras + 1 escalera alélica
3130xl
1 por inyección
16 muestras
15 muestras + 1 escalera alélica
3500
1 por 3 inyecciones
8 muestras
23 muestras + 1 escalera alélica
3500xL
1 por inyección
24 muestras
23 muestras + 1 escalera alélica
3730
3 por inyección
48 muestras
15 muestras + 1 escalera alélica
¡IMPORTANTE! La variación de temperatura del laboratorio puede provocar cambios en la velocidad de migración de los fragmentos y
variación de tamaño entre procesos. Recomendamos la frecuencia anterior de inyecciones de escalera alélica, que debe explicar la
variación normal en la velocidad del proceso. Sin embargo, durante los estudios de validación internos, compruebe la frecuencia
requerida de inyección de escaleras alélicas para garantizar un genotipado preciso de todas las muestras en su entorno de laboratorio.
Es fundamental genotipar con un procesamiento de escaleras alélicas en las mismas condiciones que con las muestras, porque los
valores de tamaño obtenidos para la misma muestra pueden variar entre diferentes plataformas, a causa de las diferentes matrices
poliméricas y las diferentes condiciones de electroforesis.
Requisitos de los instrumentos de electroforesis
Requisitos del instrumento 3130 Series (antes de usar, activar la licencia de 6 colorantes según lo descrito en la guía
del usuario)
Analizador
genético
3130
3130xl†
Sistema
operativo
Windows® 7
Software de
recogida de
datos
Data
Collection
Software 4
Software
adicional
3130/3730 DC v4
6-Dye Module v1
(contacte con Life
Technologies)
Módulos de proceso y condiciones
• HIDFragmentAnalysis36_POP4_1
Condiciones de inyección: 3 kV/5 s
Condiciones de proceso: 15 kV/1500 s
• Set de Dye J6
Referencias
Applied Biosystems 3130
Series Data Collection
Software 4 Getting Started
Guide (Pub. no. 4477796)
• HIDFragmentAnalysis36_POP4_1
Condiciones de inyección: 3 kV/10 s
Condiciones de proceso: 15 kV/1500 s
• Set de Dye J6
† Hemos realizado estudios de validación para GlobalFiler™ Express Kit con las configuraciones 3130xl, 3500 o 3500xL.
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Referencia rápida sobre el GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit – PCR Amplification and CE
Requisitos del instrumento 3500 Series (antes de usar, procesar el actualizador de identificación humana según lo
descrito en la guía del usuario)
Analizador
genético
3500†
Sistema
operativo
Windows
Vista®
Software
de recogida
de datos
3500 Data
Collection
Software v1
Software
adicional
HID Updater
3500 DC v2
(Part no.
4480670)
Módulos de proceso y condiciones
• Plantillas de placa: 6dye_36_POP4
• Ensayos: GF+Norm_POP4 y
GF_POP4, que contienen el protocolo
de instrumento
HID36_POP4_J6_NT3200 con las
condiciones siguientes:
– Módulo de proceso: HID36_POP4
Referencias
Applied Biosystems 3500/3500xL
Genetic Analyzer User Guide
(Pub. no. 4401661)
HID Updater 3500 Data Collection
Software v2 Release Notes
– Condiciones de inyección:
1,2 kV/15 s
– Condiciones de proceso:
13 kV/1550 s
– Set de Dye J6
3500xL†
• Plantillas de placa: 6dye_36_POP4_xl
• Ensayos: GF+Norm_POP4_xl y
GF_POP4_xl que contienen el
protocolo de instrumento
HID36_POP4xl_J6_NT3200 con las
condiciones siguientes:
– Módulo de proceso: HID36_POP4
– Condiciones de inyección:
1,2 kV/24 s
– Condiciones de proceso:
13 kV/1550 s
– Set de Dye J6
3500†
Windows®
7
3500xL†
3500 Data
Collection
Software v2
HID Updater
3500 DC v2
(Part no.
4480670)
Igual que el 3500 Data Collection
Software v1 descrito más arriba
3500/3500xL Genetic Analyzer User
Guide (Pub. no. 4476988)
HID Updater 3500 Data Collection
Software v2 Release Notes
† Hemos realizado estudios de validación para el GlobalFiler™ Express Kit con las configuraciones 3130xl, 3500 o 3500xL.
Requisitos del instrumento 3730 Series (antes de usar, activar la licencia de 6 colorantes según lo descrito en la guía
del usuario)
Analizador
de ADN
Sistema
operativo
Windows® 7
3730
Software
de recogida
de datos
Data
Collection
Software 4
Software
adicional
Módulos de proceso y condiciones
Referencias
3030/3730 DC v4
6-Dye Module v1
(contacte con
Life
Technologies)
• GeneMapper36_POP7_1
Condiciones de inyección: 2 kv/10 s
Condiciones de proceso: 15 kV/1200 s
• Set de Dye J6
Applied Biosystems 3730/3730xl
DNA Analyzer Getting Started
Guide (Pub. no. 4478016)
Realización de la electroforesis
Prepare las muestras para la electroforesis inmediatamente antes de la carga.
1. Calcule el volumen de Hi-Di™ Formamide y el estándar de tamaño necesario para preparar las muestras:
Reactivo
GeneScan™
Hi-Di™
600
LIZ®
Formamide
Size Standard v2.0
Volumen por reacción
0,5 µl
9,5 µl
Referencia rápida sobre el GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit – PCR Amplification and CE
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Nota: Incluya muestras adicionales en los cálculos para compensar la pérdida que se produce durante
las transferencias de reactivos.
¡IMPORTANTE! El volumen del estándar de tamaño que se indica en la tabla es una cantidad sugerida. Determine la cantidad
adecuada del estándar de tamaño en función de sus experimentos y resultados.
2. Pipetee los volúmenes necesarios de los componentes en un tubo de polipropileno de tamaño apropiado.
3. Agite el tubo y, seguidamente, centrifúguelo brevemente.
4. Añada a todos los pocillos de un MicroAmp® Optical 96-Well Reaction Plate:
• 10 µl de la mezcla de formamida: estándar de tamaño
• 1 µl de producto de PCR o Escalera alélica
Nota: En los pocillos del blanco, añada 10 µl de Hi-Di™ Formamide.
5. Cierre herméticamente la placa de reacción con septa adecuados y, seguidamente, agite y centrifugue brevemente la placa para
garantizar que el contenido de cada pocillo queda bien mezclado y se recoge en la parte inferior.
6. Caliente la placa de reacción en un termociclador durante 3 minutos a 95 °C.
7. Coloque inmediatamente la placa en hielo durante 3 minutos.
8. Prepare toda la placa encima del muestreador automático.
9. Inicie el proceso de electroforesis.
Análisis de los datos
Para configurar el GeneMapper® ID-X Software para análisis de datos, consulte el documento GlobalFiler™ Express PCR Amplification
Kit User Guide (Pub. no. 4477672), el documento GeneMapper® ID-X Software v1.4 New Features and Installation Procedures User Bulletin
(Pub. no. 4477684) o el documento GeneMapper® ID-X SoftwareVersion 1.0 Getting Started Guide (Pub. no. 4375574).
Garantía limitada de producto
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December 2012