PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL ELABORACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTÁNDAR PARA LA PRODUCCIÓN DE INÓCULOS DE MICROORGANISMOS Y METABOLITOS DE INTERES Y ACTUALIZACIÓN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADAFACULTAD DE CIENCIAS-PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA ROCIO DEL PILAR MONROY GARIBELLO EDNA CAROLINA OTÁLORA PEDRAZA TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para optar al titulo de MICROBIOLOGO INDUSTRIAL BOGOTÁ, D.C. 2008 NOTA DE ADVERTENCIA Articulo 23 de la Resolución Nº 13 de Julio de 1946 “La universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus trabajos de tesis. Sólo velará por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral católica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia” 2 ELABORACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTÁNDAR PARA LA PRODUCCIÓN DE INÓCULOS DE MICROORGANISMOS Y METABOLITOS DE INTERES Y ACTUALIZACIÓN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADAFACULTAD DE CIENCIAS-PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA ROCIO DEL PILAR MONROY GARIBELLO EDNA CAROLINA OTÁLORA PEDRAZA APROBADO __________________________ Dra. Luz Marlen Acosta Baez Especialista en Salud Ocupacional Director _________________________ Dra. Aura Marina Pedroza Ph. D Co – director ____________________________ Dra. Luisa Gutiérrez de Laverde Bacterióloga Jurado ___________________________ Dra. Luz Amparo Maldonado Bacterióloga Jurado 3 ELABORACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTÁNDAR PARA LA PRODUCCIÓN DE INÓCULOS DE MICROORGANISMOS Y METABOLITOS DE INTERES Y ACTUALIZACIÓN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD DEL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA APLICADAFACULTAD DE CIENCIAS-PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA ROCIO DEL PILAR MONROY GARIBELLO EDNA CAROLINA OTÁLORA PEDRAZA APROBADO _______________________ Dra. Ingrid Schuler Ph. D. Decana Académica __________________ Dr. Janeth Arias M. Sc. Directora de Carrera 4 AGRADECIMIENTOS A la Dra Aura Marina Pedroza por su incondicional apoyo y por su intervención en nuestra formación como personas y futuras profesionales. A la Dra. Luz Marlen Acosta por su aporte y colaboración desarrollo de este trabajo. durante el Al personal del laboratorio de Biotecnología aplicada, por sus oportunas respuestas y colaboración. A todas aquellas personas que de alguna manera colocaron un granito de arena para la culminación de este proyecto. 5 TABLA DE CONTENIDO Pág RESUMEN 1. INTRODUCCIÓN 13 2. MARCO TEÓRICO 15 2.1. Bioseguridad 15 2.2. Principios de Bioseguridad 15 2.2.1. Contención Primaria 16 2.2.2. Contención Secundaria 16 2.2.3. Prácticas y técnicas de Laboratorio 17 2.2.4. Equipos de Seguridad (Barreras Primarias) 17 2.2.5. Diseño y construcción de Instalaciones (Barreras Secundarias) 18 2.3. Niveles de Bioseguridad 19 2.3.1. Nivel de Bioseguridad 1 20 2.3.2. Nivel de Bioseguridad 2 21 2.3.3. Nivel de Bioseguridad 3 23 2.3.4. Nivel de Bioseguridad 4 23 2.4. Criterios Nivel de Bioseguridad según agente de Riesgo Biológico 24 2.4.1. Nivel de Bioseguridad 1 (Relación agente de Riesgo -1) 25 2.4.1.1. Prácticas microbiológicas estándar 25 2.4.1.2. Prácticas especiales 26 2.4.1.3. Equipos de seguridad (Barreras primarias) 26 2.4.1.4. Instalaciones del laboratorio (Barreras secundarias) 27 2.4.2. Nivel de Bioseguridad 2 (Relación agente de Riesgo -2) 27 2.4.2.1. Prácticas especiales 28 2.4.2.2. Equipos de seguridad (Barreras primarias) 30 2.4.2.3. Instalaciones del laboratorio (Barreras secundarias) 31 2.5. Riesgos químicos 35 2.5.1. Normas de prevención 38 6 2.5.1.1. Equipo de protección 39 2.5.1.2. Reglas generales 39 2.5.2. Sustancias tóxicas 40 2.5.3. Sustancias corrosivas 40 2.5.3.1. Líquidos corrosivos 40 2.5.3.2. Sólidos corrosivos 41 2.5.3.3. Gases corrosivos 41 2.5.4. Solventes inflamables 41 2.5.5. Productos químicos reactivos 41 2.5.6. Riesgos no percibidos 42 2.5.6.1. Sustancias cancerígenas, teratogénicas y/o mutagénicas 42 2.6. Riesgos físicos 42 2.7. Gestión de los residuos 43 2.7.1. Seguridad del personal para eliminación de residuos biológicos 47 2.7.2. Desactivación y tratamiento de residuos 48 2.7.2.1. Disposición de muestras biológicas y elementos de laboratorio 48 2.7.2.2. Disposición de ácidos inorgánicos 48 2.7.2.3. Disposición de ácidos orgánicos 49 2.7.2.4. Disposición de bases, aminas, sales básicas 49 2.7.2.5. Disposición de soluciones acuosas 49 2.7.2.6. Disposición de soluciones en disolventes orgánicos 49 2.7.3. Movimiento interno de residuos 50 2.7.4. Manual de gestión de residuos 51 2.8. Calidad 51 2.8.1. Características de calidad 52 2.9. Sistema de Gestión de Calidad 53 2.9.1. Documentación del Sistema de calidad 54 2.9.1.1. Pirámide de la documentación 55 2.9.1.2. Política de calidad y objetivos de calidad 56 2.9.1.3. Manual de calidad 57 7 2.9.1.4. Procedimientos documentados 58 2.9.1.4.1. Procedimientos operativos 58 2.9.1.5. Registros 59 2.9.1.6. Enfoque basado en procesos 59 2.10. Norma NTC-ISO-IEC 17025:2005 61 2.10.1. Alcance y campo de aplicación 62 2.10.2. Sistema de calidad 62 2.10.3. Control de documentos 63 2.10.3.1. Aprobación y emisión de documentos 63 2.10.3.2. Cambios en los documentos 64 2.10.4. Acciones correctivas 64 2.10.5. Acciones preventivas 65 2.10.6. Control de registros 65 2.10.6.1. Registros técnicos 66 2.10.7. Revisiones por la dirección 67 2.11. Sistema de Gestión Ambiental 67 2.12. Sistema de Gestión en Seguridad y Salud Ocupacional 69 2.12.1. Control operativo 71 3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN 73 3.1. Formulación del problema 73 3.2. Justificación 74 4. OBJETIVOS 75 4.1. Objetivo General 75 4.2. Objetivos Específicos 75 5. MATERIALES Y MÉTODOS 76 5.1. Diseño de la investigación 76 5.1.1. Población de estudio y muestra 76 5.2. Métodos 76 5.3. Recolección de la información 77 5.4. Análisis de la información 77 8 6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 78 7. CONCLUSIONES 80 8. RECOMENDACIONES 81 9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 82 10. ANEXOS 85 9 LISTA DE TABLAS Tabla 1. Resumen de Niveles de Bioseguridad recomendados para Agentes infecciosos. 33 Tabla 2. Código de color para almacenamiento de productos químicos. 36 Tabla 3. Señales de peligro para sustancias químicas de acuerdo con su acción. 37 Tabla 4. Clasificación de los residuos según su peligrosidad. 44 Tabla 5. Clasificación de los Residuos en el Laboratorio de Biotecnología Aplicada. 46 10 LISTA DE FIGURAS Figura 1. Pirámide de la documentación del Sistema de calidad. 11 56 RESUMEN Al llevar a cabo la actualización de la documentación dentro de un laboratorio, se logra proporcionar evidencia significativa de las actividades realizadas y de los procesos investigativos que se efectúan, permitiendo garantizar la reproducibilidad de sus ensayos. Es por esto que el presente trabajo ha tenido como objetivo, realizar la actualización de la documentación y proporcionar una mejora en el desempeño dentro de los parámetros de Bioseguridad, permitiendo la optimización de las actividades, una mayor confiabilidad en la realización de los procesos y en los resultados obtenidos, así como la permanente mejora continua del laboratorio, requerida en las normas de calidad para laboratorios de investigación. Para el logro de este objetivo, se hizo necesaria la revisión de los documentos concernientes al manual de Bioseguridad, así como la recopilación de información con base en metodologías obtenidas de los proyectos de grado de investigación realizados en el laboratorio para la elaboración de los procedimientos operativos estándar sobre la producción de inóculos de microorganismos y/o metabolitos. Estos procedimientos cumplen con los requerimientos exigidos por el comité de calidad del Departamento de Microbiología de la Facultad de Ciencias. Como resultado de éste trabajo, se obtuvo la actualización de las hojas de seguridad de reactivos y medios de cultivo, así como la actualización de las fichas técnicas de las cepas manipuladas en el laboratorio de Biotecnología aplicada, la actualización del manual de Bioseguridad, la realización de los procedimientos operativos estándar para la producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés del laboratorio, y un material interactivo, útil como modelo formativo que permite facilitar la comprensión de las actividades realizadas para investigación con la utilización de los biorreactores de 2 litros a escala de laboratorio. 12 1. INTRODUCCIÓN Los laboratorios de microbiología y biotecnología constituyen medio ambientes de trabajo especiales, generalmente únicos, debido a su carácter investigativo en microorganismos que pueden ser causa de riesgos de enfermedades infecciosas identificables para las personas que se encuentren en o cerca de ellos. El Laboratorio de Biotecnología Aplicada del Departamento de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana es un laboratorio de docencia, investigación y servicios donde se llevan a cabo diferentes procedimientos, con el fin de permitir una mejor aproximación a los conocimientos adquiridos por los estudiantes y contribuir en la formación de destrezas prácticas, al mismo tiempo que genera conocimientos, que resultan de los proyectos de investigación desarrollados y publicados, lo que da cuenta de los avances y hallazgos en diferentes líneas apoyando principalmente al sector industrial. Adicionalmente, el laboratorio se ocupa de brindar asistencia técnica, capacitación, apoyo investigativo y solución a problemas microbiológicos a nivel nacional. Por esta razón se hace imprescindible la documentación de los procedimientos realizados en este laboratorio, que permita el mejor manejo, control y evidencia necesaria para la ejecución de cada proceso, de este modo proporcionando al laboratorio el fácil desarrollo de sus pruebas, asegurando la trazabilidad de sus resultados y una mayor confiabilidad en la práctica de sus actividades, así como la permanente mejora continua del laboratorio. En Mayo de 2004, se elaboró un Manual de Bioseguridad e instructivos en los Laboratorios de Microbiologia de Alimentos, Microbiologia Ambiental y de 13 Suelos, Biotecnologia Aplicada y Parasitologia Ambiental, con el fin de identificar y analizar los posibles factores de riesgo biológico, físico, químico y de seguridad según la Guía Técnica Colombiana GTC 45:1997, realizándose en cada uno de ellos un panorama de riesgos los cuales fueron priorizados por grado de peligrosidad y de repercusión. Por estudios previos (Bonilla, M; Rozo, S. 2004) se ha encontrado que dicho laboratorio maneja un nivel alto de riesgo biológico debido a la mala manipulación de muestras posiblemente contaminadas y el incorrecto manejo del cepario que cuenta con microorganismos de riesgo 1 y 2; de la misma manera se maneja un alto nivel de riesgo químico debido al almacenamiento inadecuado de los reactivos. Mediante la realización de este proyecto se pretende realizar la actualización de la documentación y proporcionar una mejora en el desempeño dentro de los parámetros de bioseguridad, suprimir los documentos que ya no son vigentes y así mismo, elaborar los procedimientos operativos estándar para la producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés del laboratorio de Biotecnología Aplicada, con el fin de obtener una guía adecuada de dichos procesos útil en cualquier momento que se requiera; ya que de estos procesos no se tiene evidencia documentada en el laboratorio, siendo de gran importancia puesto que permiten la realización de las diversas prácticas y metodologías efectuadas en el laboratorio. Así mismo, se propone actualizar el manual de Bioseguridad, de acuerdo a las necesidades existentes, de tal manera que se logren proyectar beneficios mediante la participación activa del personal, en acciones específicas que apoyen y promuevan la bioseguridad, de este modo, ayudando a prevenir los factores de riesgos involucrados en el Laboratorio de Biotecnología Aplicada. 14 2. MARCO TEÓRICO 2.1. BIOSEGURIDAD La Organización Mundial de la Salud (OMS), enfatiza dentro de su manual de bioseguridad para laboratorios, que es primordial darle gran valor a la responsabilidad del personal dentro del laboratorio, para así disminuir los riesgos presentes que incluyen el uso indebido de muestras y equipos, haciendo fundamental que cada laboratorio cuente con un manual de Bioseguridad, programas de apoyo para su aplicación, y una política integral de seguridad. Las normas de bioseguridad en sí mismas, están destinadas a reducir el riesgo de transmisión de microorganismos de fuentes reconocidas o no reconocidas de infección en laboratorios de investigación, teniendo presente que debido al desarrollo científico técnico se deben prever revisiones periódicas de estas normas para asegurar la actualización de las mismas (Benavides, 2001). 2.2. PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD Los principios de Bioseguridad tienen tres pilares que sustentan y dan origen a las precauciones universales. Estos son la Universalidad, las Barreras de protección, y las Medidas de eliminación. Dentro de la Universalidad, nace el concepto de potencialidad, siendo entendida como la capacidad que posee cualquier persona de portar o transmitir microorganismos o agentes patógenos. Por otra parte, las Barreras de protección, corresponden a aquellos mecanismos y elementos que protegen contra la transmisión de infecciones, evitando riesgos; son clasificadas en inmunización activa (vacunas) y en barreras físicas de protección. 15 Las medidas de eliminación, por otra parte, establecen la manera de descartar principalmente los elementos de riesgo biológico, protegiendo no solamente a los individuos, sino también al medio ambiente. El término “contención” así mismo es utilizado para describir métodos seguros para manejar materiales infecciosos en el medio ambiente del laboratorio donde son manipulados o conservados. El objetivo de la contención es reducir o eliminar la exposición de quienes trabajan en laboratorios u otras personas, y del medio ambiente externo a agentes potencialmente peligrosos (CDC, 2000). 2.2.1. CONTENCIÓN PRIMARIA La contención primaria es conocida como la protección del personal y del medio ambiente inmediato del laboratorio a la exposición a agentes infecciosos. Estas barreras de protección son provistas tanto mediante buenas técnicas microbiológicas como a través del uso de equipos de seguridad adecuados (barreras físicas). Así mismo, el uso de vacunas puede brindar un mayor nivel de protección del personal en los laboratorios. (Organización Mundial de la Salud, 2005) 2.2.2. CONTENCIÓN SECUNDARIA Dentro de las Medidas de eliminación o contención secundaria, se busca la protección del medio ambiente externo al laboratorio de la exposición a materiales infecciosos; es de gran importancia destacar que para el logro de estas medidas se hace necesaria una combinación del diseño de la instalación y prácticas operativas adecuadas. Por lo tanto, los tres elementos 16 de ésta contención incluyen prácticas y técnicas de laboratorio, equipos de seguridad y el diseño de la instalación. Dentro de los laboratorios de análisis, es importante resaltar que la evaluación del riesgo del trabajo a realizar con un agente específico determina la combinación apropiada de estos elementos de contención. 2.2.3. PRÁCTICAS Y TÉCNICAS DE LABORATORIO Es de gran importancia reconocer que el elemento más importante de la contención es el cumplimiento estricto de las prácticas y técnicas microbiológicas estándar. Las personas que trabajan con agentes infecciosos o materiales potencialmente infectados deben conocer los riesgos potenciales, y también deben estar capacitadas y ser expertas en las prácticas y técnicas requeridas para manipular dichos materiales en forma segura. Principalmente la responsabilidad de brindar y organizar la capacitación adecuada del personal, incumbe al jefe o director del laboratorio; cada laboratorio debe desarrollar un manual de Bioseguridad, con el que se puedan identificar los riesgos que se puedan producir y que especifique las prácticas y procedimientos destinados a minimizar o eliminar las exposiciones a estos riesgos. (Organización Mundial de la Salud, 2005) 2.2.4 EQUIPOS DE SEGURIDAD (BARRERAS PRIMARIAS) Los equipos de seguridad incluyen cabinas de seguridad biológica (CSB), recipientes cerrados, y otros controles de ingeniería destinados a eliminar o minimizar las exposiciones a materiales biológicos peligrosos. Las cabinas de seguridad biológica son el dispositivo principal utilizado para proporcionar contención de salpicaduras o aerosoles infecciosos generados por diversos procedimientos microbiológicos. 17 Existen tres clases de cabinas de seguridad biológica (Clase I, II, III) utilizados en laboratorios microbiológicos. Las cabinas de seguridad biológica Clase I y Clase II de frente abierto son barreras primarias que ofrecen niveles significativos de protección del personal de laboratorio y del medio ambiente cuando se les utiliza en combinación con buenas técnicas microbiológicas. Las cabinas de seguridad biológica Clase II también brindan protección contra la contaminación externa de los materiales (por ejemplo, cultivos celulares y stocks microbiológicos) que se manipulan dentro del gabinete. La cabina de seguridad biológica Clase III ofrece el mayor nivel de protección posible para el personal y el medio ambiente. (CDC, 2000). Los equipos de seguridad pueden también incluir elementos de protección personal, tales como guantes, delantales, respiradores, máscaras faciales, gafas de seguridad, etc. En la mayoría de laboratorios, los equipos de protección personal se utilizan en combinación con cabinas de seguridad biológica y otros dispositivos que contienen los agentes o materiales que se manipulan. En algunas situaciones en las cuales resulta poco práctico trabajar con cabinas de seguridad biológica, los equipos de protección personal pueden formar la barrera primaria entre el personal y los materiales infecciosos, como ocurre en el laboratorio de Biotecnología aplicada. 2.2.5. DISEÑO Y CONSTRUCCIÓN DE INSTALACIONES (BARRERAS SECUNDARIAS) El diseño y la construcción de la instalación contribuyen a la protección de quienes trabajan en el laboratorio, proporcionan de este modo una barrera para proteger a las personas que se encuentran fuera del laboratorio, y protegen a las personas de la comunidad de agentes infecciosos que pueden ser liberados accidentalmente del laboratorio. 18 La barrera o barreras recomendadas dependen del riesgo de transmisión de los agentes utilizados. Los riesgos de exposición de la mayor parte del trabajo en instalaciones del nivel de Bioseguridad 1 y 2 serán el contacto directo con los agentes o exposiciones a contactos inadvertidos a través de medio ambientes de trabajo contaminados. Las barreras secundarias en estos laboratorios pueden incluir la separación del área de trabajo del laboratorio del acceso al público, la disponibilidad de un sistema de descontaminación (por ejemplo, autoclave) e instalaciones para el lavado de las manos. Cuando el riesgo de infección por exposición a un aerosol infeccioso está presente, se debe implementar un mayor nivel de contención y barreras secundarias múltiples para evitar que los agentes infecciosos se escapen hacia el medio ambiente. Dichas características de diseño incluyen sistemas de ventilación especializados para asegurar el flujo de aire direccional, sistemas de tratamiento de aire para descontaminar o eliminar agentes del aire de escape, zonas de acceso controladas, exclusas de aire en las puertas de acceso al laboratorio o edificios o módulos separados para aislar al laboratorio (Organización Mundial de la Salud, 2005). 2.3. NIVELES DE BIOSEGURIDAD Los laboratorios que manipulan muestras biológicas potencialmente infecciosas o trabajan con agentes microbiológicos, pueden ser clasificados en cuatro tipos, de acuerdo a los agentes manipulados y los riesgos que impliquen en su manipulación. Los niveles de bioseguridad, constan de combinaciones de prácticas y técnicas de laboratorio, equipos de seguridad e instalaciones de laboratorio. Cada combinación es específicamente apropiada para las operaciones llevadas a cabo, las vías de transmisión documentadas o sospechadas de los 19 agentes infecciosos, y la función o la actividad del laboratorio (Organización Mundial de la Salud, 2005). 2.3.1. NIVEL DE BIOSEGURIDAD 1 Las prácticas, los equipos de seguridad, el diseño y la construcción de la instalación del Nivel de Bioseguridad 1 son adecuados para laboratorios destinados a la educación o capacitación secundaria o universitaria, y para otros laboratorios en los cuales se trabaja con cepas definidas y caracterizadas de microorganismos viables que no se conocen como generadores sistemáticos de enfermedades en humanos adultos sanos. Por ejemplo Bacillus subtilis, Naegleria gruberi, el virus de la hepatitis canina infecciosa, y los organismos exentos conformes a las NHI Recombinant DNA Guidelines (Normas de ADN Recombinante de NIH) son representativos de los microorganismos que cumplen con estos criterios. Muchos agentes no comúnmente asociados con procesos de enfermedades en humanos son, no obstante, patógenos oportunistas y pueden causar infección en individuos jóvenes, ancianos, inmunodeficientes o inmunodeprimidos. Las cepas de vacunas que han sido sometidas a múltiples pasajes in vivo no deben ser consideradas avirulentas por el simple hecho de ser cepas de vacunas (Organización Panamericana de la Salud, 2002). El Nivel de Bioseguridad 1 representa un nivel básico de contención que se basa en prácticas microbiológicas estándar sin ninguna barrera primaria o secundaria especialmente recomendada, salvo una pileta para lavado de manos (Organización Panamericana de la Salud, 2002). El laboratorio no está necesariamente separado de los patrones de tránsito generales en el edificio. El trabajo se realiza generalmente sobre mesas de trabajo utilizando prácticas microbiológicas estándar. No es necesario el uso de equipos de contención especiales y en general no se los utiliza. El personal de laboratorio cuenta con una capacitación específica acerca de los 20 procedimientos realizados en el laboratorio y es supervisado por un científico con capacitación general en microbiología o una ciencia relacionada (Organización Mundial de la Salud, 2005). 2.3.2. NIVEL DE BIOSEGURIDAD 2 Las prácticas, los equipos, el diseño y la construcción de instalaciones del Nivel de Bioseguridad 2 son aplicables a laboratorios educativos, de diagnóstico, clínicos u otros laboratorios donde se trabaja con un amplio espectro de agentes de riesgo moderado que se encuentran presentes en la comunidad y que están asociados con enfermedad humana de variada gravedad. Con buenas técnicas microbiológicas, estos agentes se pueden utilizar en forma segura en actividades realizadas en una mesa de trabajo, siempre que el potencial de que se produzcan salpicaduras o aerosoles sea bajo. El virus de la Hepatitis B, el VIH, Salmonella spp, y Toxoplasma spp. son representativos de los microorganismos asignados a este nivel de contención. El Nivel de Bioseguridad 2 es adecuado cuando se trabaja con sangre derivada de humanos, fluidos corporales, tejidos o líneas de células primarias humanas donde puede desconocerse la presencia de un agente infeccioso (Organización Panamericana de la Salud, 2002). Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes están relacionados con exposiciones accidentales de membranas mucosas o percutáneas, o ingestión de materiales infecciosos. Debe tenerse especial precaución con agujas o instrumentos cortantes contaminados. Si bien no se ha demostrado que los organismos que se manipulan de rutina en el Nivel de Bioseguridad 2 sean transmisibles a través de la vía de aerosoles, los procedimientos con potencial de producir aerosoles o grandes salpicaduras que pueden incrementar el riesgo de exposición de dicho personal- deben llevarse a cabo en equipos de contención primaria o en dispositivos tales como una cabina de seguridad biológica (CSB) o cubetas centrífugas de 21 seguridad. Se deben utilizar las demás barreras primarias que correspondan, tales como máscaras contra salpicaduras, protección facial, delantales y guantes (Organización Panamericana de la Salud, 2002). Se debe contar con barreras secundarias, tales como piletas para lavado de manos e instalaciones de descontaminación de desechos a fin de reducir la contaminación potencial del medio ambiente (Organización Panamericana de la Salud, 2002). El laboratorio de Biotecnología aplicada está clasificado en el nivel de Bioseguridad 2, debido a que dentro de las actividades que realiza, se manipulan microorganismos que generan un riesgo potencial moderado para el personal del laboratorio y el medio ambiente; en el laboratorio se trabaja continuamente con las barreras primarias de protección del personal (guantes, tapabocas o protección facial, delantal o bata de laboratorio, técnicas microbiológicas adecuadas) y la capacitación indicada para la manipulación de agentes que pueden ser patógenos, con el fin de evitar los riesgos implicados en su utilización. Así mismo, se cuentan con barreras secundarias como la entrada restringida al laboratorio, y la entrada prohibida del personal externo a él cuando se están realizando actividades operativas. La manipulación de material contaminado se lleva a cabo descartando en la caneca de riesgo biológico o material peligroso (de color rojo) previa inactivación o esterilización en autoclave. Es importante enunciar que el laboratorio posee también una caneca de color gris, para el descarte de material de vidrio no contaminado, así como una caneca de color verde, para la eliminación de material no peligroso, biodegradable, de origen ordinario e inerte. También es importante hacer mención acerca de las superficies de trabajo, las cuales se desinfectan como mínimo una vez por día con solución de hipoclorito de sodio al 1% v/v, y antes o después de realizar alguna actividad. 22 Dentro del laboratorio se encuentra ubicada una estación lavaojos que posee también ducha, así como una instalación para el lavado de manos; respecto al control documental, las fichas de técnicas de seguridad de reactivos, las fichas las cepas y los instructivos de operación de equipos están disponibles para su lectura por parte del personal que trabaja en el laboratorio. 2.3.3. NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3 Las prácticas, equipos de seguridad y el diseño y la construcción de las instalaciones del Nivel de Bioseguridad 3 pueden aplicarse a instalaciones clínicas, de producción, investigación, educación o diagnóstico, donde se trabaja con agentes exóticos o nativos con potencial de transmisión respiratoria, y que pueden provocar una infección grave y potencialmente letal. La tuberculosis Mycobacterium, el virus de la encefalitis de St. Louis, y Coxiella burnetii son representativos de los microorganismos asignados a este nivel. Los riesgos primarios del personal que trabaja con estos agentes están asociados a la auto inoculación, ingestión y exposición a aerosoles infecciosos (Organización Panamericana de la Salud, 2002). Todas las manipulaciones de laboratorio se deben llevar a cabo en una cabina de seguridad biológica (CSB) u otros equipos cerrados, tales como cámaras de generación de aerosoles estanca-gas. Las barreras secundarias para este nivel incluyen el acceso controlado al laboratorio y requisitos de ventilación que minimizan la liberación de aerosoles infecciosos desde el laboratorio (Organización Panamericana de la Salud, 2002). 2.3.4. NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4 Las prácticas, equipos de seguridad, y el diseño y la construcción de instalaciones del Nivel de Bioseguridad 4 son aplicables al trabajo con agentes peligrosos o tóxicos que representan un alto riesgo individual de 23 enfermedades que ponen en peligro la vida, que pueden transmitirse a través de aerosoles y para las cuales no existen vacunas o terapias disponibles. Los virus como Marburg o la fiebre hemorrágica Congo-Crimeana se manipulan al Nivel de Bioseguridad 4 (Organización Mundial de la Salud, 2005). Los riesgos principales para el personal que trabaja con agentes del Nivel de Bioseguridad 4 son la exposición respiratoria a aerosoles infecciosos, la exposición de membranas mucosas o piel lastimada a gotitas infecciosas y la auto inoculación. Todas las manipulaciones de materiales de diagnóstico potencialmente infecciosos, cepas puras y animales infectados en forma natural o experimental, implican un alto riesgo de exposición e infección para el personal de laboratorio, la comunidad y el medio ambiente. (Organización Mundial de la Salud, 2005) El aislamiento completo del personal de laboratorio de los materiales infecciosos en aerosol se logra principalmente trabajando en una cabina de seguridad biológica (CSB) Clase III o en un traje de cuerpo entero, con provisión de aire y presión positiva. Por lo general, la instalación del Nivel de Bioseguridad 4 es un edificio separado o una zona totalmente aislada con sistemas de gestión de desechos y requisitos de ventilación especializados y complejos para prevenir la liberación de agentes viables al medio ambiente (Organización Mundial de la Salud, 2005). 2.4. CRITERIOS DEL NIVEL DE BIOSEGURIDAD LABORATORIOS SEGÚN AGENTE DE RIESGO BIOLÓGICO DE LOS Debido a que el laboratorio de Biotecnología aplicada se clasifica dentro del nivel de Bioseguridad 2, el cual se encuentra relacionado con los agentes de riesgo 1 y 2, a continuación se hace una referencia detallada de las técnicas microbiológicas apropiadas estándar y especiales, equipos de seguridad e instalaciones que aplican a los agentes asignados al nivel de Bioseguridad 1 y 2; así mismo, se enuncian en la tabla 1, el resumen de los agentes 24 biológicos por grupos de riesgo, incluyendo los niveles de Bioseguridad 3 y 4 (relación con agentes de riesgo 3 y 4 respectivamente). 2.4.1. NIVEL DE BIOSEGURIDAD 1 (Relación agente de Riesgo -1) El Nivel de Bioseguridad 1 es adecuado para trabajos que involucran agentes bien caracterizados, de riesgo 1, que no producen enfermedad en humanos adultos sanos, y que imponen un riesgo potencial mínimo para el personal del laboratorio y el medio ambiente. (Organización Mundial de la Salud, 2005) Las siguientes prácticas estándar y especiales, equipos de seguridad e instalaciones se aplican a los agentes asignados al nivel de Bioseguridad 1: 2.4.1.1. Prácticas Microbiológicas Estándar 1. El acceso al laboratorio debe ser limitado o restringido a criterio del director cuando se están llevando a cabo experimentos o trabajos con cultivos y especimenes. 2. Las personas se deben lavar las manos luego de manipular materiales viables, luego de quitarse los guantes y antes de retirarse del laboratorio. 3. No está permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en áreas de trabajo. Las personas que usan lentes de contacto en laboratorios deben también utilizar gafas de seguridad o un protector facial. Los alimentos se almacenan fuera del área de trabajo en gabinetes o refrigeradores designados y utilizados con este único fin. 4. Está prohibido pipetear con la boca; se utilizan dispositivos pipeteadores mecánicos. 5. Se deben instituir políticas para el manejo seguro de objetos cortantes o punzantes. 25 6. Todos los procedimientos se llevan a cabo con precaución a fin de minimizar la creación de salpicaduras o aerosoles. 7. Las superficies de trabajo se descontaminan como mínimo una vez por día y luego de todo derrame de material viable. 8. Todos los cultivos, stocks y otros desechos reglamentados se descontaminan antes de ser desechados mediante un método de descontaminación aprobado, como por ejemplo, mediante autoclave. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato son desde el laboratorio. Los materiales que se deben descontaminar fuera del laboratorio inmediato se embalan de conformidad con las normas locales, estatales y federales aplicables antes de retirarlos del establecimiento. 9. Se debe colocar una señal de advertencia de riesgo biológico en la entrada del laboratorio cuando se encuentren presentes agentes infecciosos. La señal debe incluir el nombre del agente o agentes en uso y el nombre y número de teléfono del investigador. (Organización Mundial de la Salud, 2005). 2.4.1.2. Prácticas especiales: Ninguna. 2.4.1.3. Equipos de seguridad (barreras primarias) 1. En general, no se requieren dispositivos o equipos de contención o equipamientos especiales, como cabinas de seguridad biológica para las manipulaciones de agentes asignados al nivel de Bioseguridad 1 (Agentes de Riesgo 1). 2. Se recomienda el uso de ambos, delantales o uniformes de laboratorio a fin de evitar que la ropa de calle se pueda contaminar o ensuciar. 3. Se deben usar guantes si existen lastimaduras en las manos o si la piel presenta alguna erupción. 26 4. Se debe utilizar protección ocular para los procedimientos en los que se puedan producir salpicaduras de microorganismos u otros materiales peligrosos. 2.4.1.4. Instalaciones del laboratorio (barreras secundarias) 1. Los laboratorios deben tener puertas para el control de acceso. 2. Cada laboratorio debe contener un lavamanos o pileta para el lavado de manos. 3. El laboratorio debe estar diseñado de modo que su limpieza sea sencilla. 4. Las superficies de las mesas de trabajo requieren ser impermeables al agua y resistentes al calor moderado y a solventes orgánicos, ácidos, álcalis y productos químicos utilizados para descontaminar la superficie de trabajo y los equipos. 5. Los muebles de laboratorio deben tener la capacidad de soportar cargas y usos previstos. Los espacios entre las mesas de trabajo, cabinas de seguridad biológica y equipos deben ser accesibles para su limpieza. (Organización Mundial de la Salud, 2005). 2.4.2. NIVEL DE BIOSEGURIDAD 2 (Relación agente de Riesgo -2) El nivel de Bioseguridad 2 es similar al nivel de Bioseguridad 1 es adecuado para trabajos que involucren agentes de riesgo 2, es decir de potencial moderado para el personal y el medio ambiente. Difiere del nivel de Bioseguridad 1 en que (1) el personal del laboratorio cuenta con una capacitación específica en la manipulación de agentes patógenos y está dirigido por científicos competentes; (2) el acceso al laboratorio es limitado cuando se están desarrollando actividades; (3) se toman precauciones extremas con elementos cortantes contaminados y (4) ciertos procedimientos que pueden generar aerosoles o gotitas infecciosas se llevan a cabo en 27 gabinetes de seguridad biológica o en otros equipos de contención física. (Organización Mundial de la Salud, 2005) Las siguientes prácticas especiales y estándar, los equipos de seguridad y las instalaciones se aplican a los agentes asignados al nivel de Bioseguridad 2: 2.4.2.1. Prácticas especiales 1. El director del laboratorio limita o restringe el acceso al laboratorio cuando se están realizando trabajos con agentes infecciosos. En general, no se permite dentro del laboratorio la presencia de personas que tienen un mayor riesgo de adquirir la infección o para quienes la infección pueden tener graves consecuencias. El director del laboratorio debe establecer políticas y procedimientos mediante los cuales las personas que han sido advertidas acerca de los riesgos potenciales y cumplen con requisitos específicos de ingreso (por ejemplo, inmunización) puedan entrar al laboratorio. 2. Se debe colocar una señal de advertencia de riesgo biológico en la entrada del laboratorio cuando se están utilizando agentes etiológicos. La información adecuada que debe colocarse incluye el agente o agentes que se están utilizando, el nivel de bioseguridad, el nombre del investigador, todo equipo de protección que deba utilizarse en el laboratorio y todos los procedimientos requeridos para retirarse del laboratorio. 3. El personal del laboratorio debe someterse a las inmunizaciones o a los análisis de los agentes manejados o potencialmente presentes. 4. Se deben incorporar los procedimientos de seguridad de los procedimientos operativos estándar o del manual de bioseguridad adoptado 28 o preparado específicamente para el laboratorio por el director del laboratorio. Se debe advertir al personal sobre los riesgos especiales y exigir que lea y siga las instrucciones sobre prácticas y procedimientos. 5. El director del laboratorio debe garantizar que el personal de laboratorio y de asistencia o soporte reciba la capacitación adecuada sobre los posibles riesgos asociados con el trabajo en cuestión, las precauciones necesarias para evitar exposiciones y los procedimientos de evaluación de exposición. El personal recibe las actualizaciones anuales o instrucción adicional según sea necesario conforme a las modificaciones de procedimientos o políticas. 6. Se debe siempre tener un alto grado de precaución con los artículos punzantes o cortantes contaminados, incluyendo las agujas y jeringas, portaobjetos para microscopio, pipetas, tubos capilares y escalpelos. a. El uso de agujas y jeringas y otros instrumentos punzantes o cortantes debe quedar restringido en el laboratorio para cuando no haya otra alternativa. b. Se hace necesario utilizar solamente jeringas con trabas para agujas o unidades de jeringa y aguja descartables (es decir, la aguja está integrada a la jeringa) para la aspiración de materiales infecciosos. Las agujas descartables utilizadas no se deben doblar, cortar, romper, recubrir o retirar de las jeringas descartables, o de otra forma manipular manualmente antes de su disposición; más bien, se deben colocar con cuidado en recipientes resistentes a punciones (generalmente Recipiente guardián de peligro biológico) para la disposición de objetos punzantes ubicados en un lugar conveniente. Los objetos punzantes o cortantes no descartables se deben colocar en un recipiente de paredes duras para su transporte al área de procesamiento para su descontaminación, preferentemente en autoclave. c. Se deben utilizar jeringas que re-enfundan las agujas, sistemas sin agujas, y otros dispositivos seguros cuando sea conveniente. 29 d. No se deben manipular directamente con las manos los artículos de vidrio rotos, sino que deben retirarse por medios mecánicos como un cepillo y pala, pinzas o fórceps. Los recipientes de agujas contaminadas, objetos punzantes y vidrio roto deben descontaminarse antes de desecharlos y se deben descartar de acuerdo a las reglamentaciones federales, estatales y locales. 7. Se deben descontaminar los equipos y las superficies de trabajo regularmente con un desinfectante efectivo después de trabajar con el agente infeccioso, y especialmente cuando se producen derrames evidentes, salpicaduras u otra contaminación por materiales infecciosos. 8. Se deben informar de inmediato al director del laboratorio los derrames y accidentes que deriven en exposiciones evidentes a los materiales infecciosos, en búsqueda de ofrecer la evaluación, el control del derrame. (Organización Mundial de la Salud, 2005). 2.4.2.2. Equipo de seguridad (barreras primarias) 1. Se pueden utilizar gabinetes biológicos mantenidos de manera adecuada, preferentemente de Clase II, u otros equipos de protección personal o dispositivos de contención física adecuados cuando: a. Se realicen procedimientos que puedan generar aerosoles o salpicaduras infecciosas. Entre otros, el centrifugado, pulverizado, mezclado, agitación, sonicación, la apertura de recipientes de materiales infecciosos cuyas presiones internas pueden ser distintas a las presiones ambiente. b. Se utilicen altas concentraciones o grandes volúmenes de agentes infecciosos. Dichos materiales pueden centrifugarse en el laboratorio abierto si se emplean rotores sellados o cubetas de seguridad para centrífugas, y si estos rotores o cubetas de seguridad se abren sólo en un gabinete de seguridad biológica. 30 2. Se utiliza una protección facial (gafas de seguridad, máscaras, protecciones faciales u otra protección) para las probables salpicaduras o aerosoles de materiales infecciosos u otros materiales peligrosos para el rostro cuando se deben manipular los microorganismos fuera de la cabina de seguridad biológica (CSB). 3. Se deben usar ambos, delantales, batas cortas o uniformes de laboratorio de protección adecuados para el laboratorio durante la permanencia en el mismo. Se debe retirar y dejar esta ropa de protección en el laboratorio antes de dirigirse a otras áreas (por ejemplo, cafetería, biblioteca, oficinas administrativas). 4. Se deben usar guantes cuando es posible que las manos entren en contacto con materiales infecciosos, superficies o equipos contaminados. Puede ser apropiado el uso de dos pares de guantes. Se descartan los guantes cuando están manifiestamente contaminados, y se retiran cuando se completa el trabajo con los materiales infecciosos o cuando está comprometida la integridad del guante. Los guantes descartables no se lavan, no se vuelven a usar ni se utilizan para tocar superficies “limpias” (teclados, teléfonos, entre otras), y no se deben usar fuera del laboratorio. Es necesario realizar un lavado de las manos después de retirarse los guantes. (Organización Mundial de la Salud, 2005) 2.4.2.3. Instalaciones del laboratorio (barreras secundarias) 1. Se hace primordial proveer puertas con llave a las instalaciones que contengan agentes restringidos. 31 2. Cada laboratorio debe contener un lavamanos. Se recomiendan los lavamanos controlados con los pies, las rodillas o los que operan automáticamente. 3. El laboratorio debe estar diseñado para que pueda limpiarse fácilmente. Es inadecuado el uso de alfombras y felpudos en los laboratorios. 4. Las superficies de las mesas de trabajo deben ser impermeables al agua y resistentes al calor moderado y a los solventes orgánicos, ácidos, álcalis y sustancias químicas empleadas para descontaminar las superficies y equipos de trabajo. 5. Se debe disponer de una estación para el lavado de ojos. 6. La iluminación debe ser adecuada para todas las actividades, evitando los reflejos y el brillo que puedan molestar la visión. (Organización Mundial de la Salud, 2005) 32 Tabla 1. Resumen de Niveles de Bioseguridad Recomendados para Agentes Infecciosos. N B S Agentes Prácticas Equipos de Seguridad (Barreras Primarias) Instalaciones (Barreras Secundarias) 1 No se ha comprobado que producen enfermedad en adultos sanos. (Riesgo 1) Prácticas Microbiológicas Estándar No se exige ninguna Se exige mesada abierta con pileta (s) en el laboratorio 2 Asociado con la enfermedad humana, riesgo = daño percutáneo, ingestión, exposición de la membrana mucosa.(Riesgo 2) Práctica BSL-1 más: • Acceso restringido • Señales de advertencia de riesgo biológico • Precauciones para “objetos punzantes” • Manual de bioseguridad que define la descontaminación necesaria de desechos o las políticas de control medico BSL-1 más: • autoclave disponible 3 Agentes indígenas o exóticos con potencial de Práctica BSL-2 más: • Acceso controlado Barreras Primarias = BSC Clase I o II u otros dispositivos de contención física utilizados para todas las manipulaciones de agentes que provocan salpicaduras o aerosoles de materiales infecciosos; PPE: ambos de laboratorio, guantes; protección del rostro cuando es necesario. Barreras Primarias = BSC 33 BSL-2 más: • Separación física de los 4 transmisión por aerosol, enfermedad que puede derivar en consecuencias graves o letales (Riesgo 3) • Descontaminación de todos los desechos • Descontaminación de la ropa de laboratorio antes del lavado • Suero de línea de base Clase I o II u otros dispositivos de contención física utilizados para todas las manipulaciones abiertas de agentes; PPE: ambos de laboratorio, guantes; protección respiratoria necesaria. corredores de acceso. • Acceso de cierre automático con doble puerta • No se recircula el aire de escape • Flujo de aire negativo dentro del laboratorio. Agentes peligrosos/exóticos que presentan un alto riesgo de enfermedad, que pone en riesgo la vida, infecciones de laboratorio de transmisión por aerosol o agentes relacionados con riesgos de transmisión desconocidos (Riesgo 4) Práctica BSL-3 más: • Cambio de ropa antes de ingresar • Ducha al salir • Descontaminación de todos los materiales a la salida de las instalaciones Barreras Primarias = todos los procedimientos realizados en BSC Clase III o Clase I o II junto con personal con un uniforme de cuerpo entero, con aire y presión positiva. BSL-3 más: • Edificio separado o zona aislada • Sistemas de alimentación y escape dedicados, vacío y descontaminación • Otros requisitos detallados en el texto (CDC, 2000) 34 2.5. RIESGOS QUÍMICOS Los riesgos químicos son causados por sustancias que por su naturaleza y composición pueden alterar la salud. El personal que trabaja en los laboratorios, no solamente se encuentra expuesto a riesgos biológicos por exposición a microorganismos potencialmente patógenos, si no también a riesgos químicos, por lo que es de gran importancia conocer de forma clara acerca de las capacidades tóxicas de éstos químicos, las vías de exposición y los peligros que pueden estar asociados con su manejo y almacenamiento. Las fichas de seguridad de los reactivos, facilitan la información sobre los datos de seguridad de los materiales y otras informaciones sobre los peligros químicos; son suministradas por los fabricantes de éstas sustancias y deben estar disponibles donde son utilizadas. (Organización Mundial de la Salud, 2005) Respecto al uso de reactivos y productos químicos en el laboratorio, es importante considerar que sólo se deben tener reactivos para el trabajo de rutina y en las cantidades mínimas necesarias; así como las reservas deben mantenerse en los estantes de reactivos, con llave y bajo la responsabilidad del docente especialmente asignado para este fin. Los estantes de almacenaje de reactivos deben contar con medios de conservación adecuados: estar en un lugar aireado y fresco, protegido de la luz solar, llamas o chispas; los deben ser estables, de concreto o metálicos, protegidos con pintura anticorrosiva y con barras contenedoras en los compartimentos. El material de los estantes también debe facilitar su adecuada limpieza. Los reactivos dentro del laboratorio de Biotecnología aplicada se encuentran almacenados por colores, según las recomendaciones del sistema SAF-T- 35 DATAMR, el cual es utilizado por algunas compañías norteamericanas productoras de reactivos. El código de colores es el siguiente: (Ver Tabla 2.) Tabla 2. Código de color para almacenamiento de productos químicos COLOR RIESGO Verde Bajo riesgo. Azul Blanco Rayado Salud: Toxicidad aguda. Reversible por exposición Salud: Peligro al contacto por corrosión; peligro para ojos y vías respiratorias. Peligro de reactividad y explosión. Peligro de combustión e inflamabilidad. Peligro al contacto. Amarillo Rayado Peligro de reactividad. Blanco Amarillo Rojo ALMACENAMIENTO INCOMPATIBILIDADES DE COLOR Área favorable para el almacenamiento de reactivos en general. ----- Área segura para almacenamiento de venenos. ----- Área a prueba de corrosión. Área separada y distante de materiales inflamables. Área especial para reactivos inflamables y venenosos. Área a prueba de corrosión y de riesgo para la salud. Área separada y distante de materiales combustibles y de riesgo para la salud. Blanco con franjas. ----Amarillo Amarillo Rayado Blanco Rojo Amarillo Fuente: Dorado, 2006 En la Etiqueta de cada Color, se encuentra la clasificación numérica de los riesgos, para evaluar el peligro respectivo según Salud, Inflamabilidad, Reactividad y Contacto. Los riesgos se encuentran de 0 a 4: 36 0 indica riesgo mínimo o nulo. 1 indica riesgo ligero. 2 indica riesgo moderado. 3 indica riesgo severo. 4 indica riesgo extremo. Algunos productos que no son compatibles entre sí, a pesar de clasificarse con el mismo color, están marcados con etiqueta rayada y deben almacenarse en la misma área, pero separados unos de otros. En general, en el laboratorio los recipientes más pesados o peligrosos son colocados en los niveles más bajos de las estanterías. Antes de emplear un reactivo, el estudiante, docente, o joven investigador se informa acerca de las propiedades químicas y físicas de éste, sus efectos sobre la salud, la forma correcta de empleo y su incompatibilidad con otras sustancias. Para esto se adquiere información en la etiqueta, catálogo según la marca del reactivo y hoja de seguridad, analizando: • Las señales de peligro (Ver Tabla 3). • Frases de riesgo o Frases R, y recomendaciones de seguridad y prudencia en el uso o Frases S: estas frases pertenecen a un sistema adoptado internacionalmente y se encuentran consignadas en catálogos de reactivos como los de Merck y Sigma-Aldrich. El estudiante, docente, o joven investigador está obligado a usar los elementos de protección requeridos en cada caso. Tabla 3. Señales de peligro para sustancias químicas de acuerdo con su acción SEÑALES DE PELIGRO INDICACIÓN Los productos inflamables tienen la facilidad de reaccionar ante cambios de temperatura. Su alta volatilidad incide en su posible inflamación. Advertencia sobre productos 37 inflamables Los productos corrosivos implican generalmente ácidos y bases. Estos productos tiene la propiedad de destruir tejidos vivos, quemar o irritar. Advertencia sobre productos corrosivos Los productos tóxicos poseen la capacidad de producir lesiones en el sistema nervioso central, enfermedad grave, o muerte en caso de ingesta, inhalación o absorción vía cutánea. Advertencia sobre productos tóxicos y/o venenos Los productos explosivos producen una liberación repentina de gases, reaccionando cuando se golpean, se aumenta su temperatura o su presión. Advertencia sobre productos explosivos Los productos radiactivos y/o carcinogénicos, son sustancias causantes de mutación celular en los organismos vivos, lo que induce a un crecimiento anormal de las células, al entrar en contacto directo con ellas. Advertencia sobre productos radiactivos y/o carcinogénicos. El manejo de los reactivos tóxicos, corrosivos, radiactivos y carcinogénicos, y de las reacciones químicas que puedan generar algún riesgo, debe efectuarse bajo campanas de extracción, utilizando los elementos de protección adecuados (guantes, gafas, máscara de protección, blusa). 2.5.1. NORMAS DE PREVENCIÓN La manipulación de productos químicos puede causar daño en los ojos, piel o en el sistema respiratorio. Aunque la ingestión oral no es usual, la sustancia tóxica puede afectar el tracto digestivo e incluso pasar al torrente sanguíneo. Las sustancias tóxicas, inhaladas o ingeridas, pueden producir efectos adversos en el hígado, cerebro, sistema nervioso central o en la sangre. 38 2.5.1.1. Equipo de protección El equipo mínimo de protección que debe utilizar el personal consta de blusa o bata de laboratorio, gafas de seguridad, máscara de gases y guantes especiales para manejo de productos químicos. Las sustancias tóxicas o corrosivas se deben manejar bajo campana extractora. 2.5.1.2. Reglas generales Antes de emplear cualquier reactivo, deben conocerse sus propiedades químicas y físicas, sus efectos sobre la salud, la forma correcta de empleo y su incompatibilidad con otras sustancias. Así mismo se debe leer en la etiqueta o catálogo los símbolos de peligrosidad, las frases de riesgo y las recomendaciones de seguridad. Si hay contaminación por contacto e irritación de la piel, se debe lavar con abundante agua. Si el reactivo es un ácido, neutralizar con bicarbonato de sodio diluido; si es una base, con ácido acético diluido (vinagre) o con ácido cítrico o bórico diluido. Si la contaminación es en los ojos, utilizar el lavaojos por 15 minutos y consultar al médico lo más rápido posible. Es de gran importancia conocer la ubicación y el uso de los antídotos y neutralizadores. Dentro de las reglas generales mas relevantes se encuentra el seguimiento de las indicaciones de almacenamiento dadas por la casa comercial, así como realizar prácticas adecuadas de operación como es el no pipeteo de líquidos con la boca. También se hace necesario rotular los reactivos preparados en el laboratorio con: nombre del reactivo, componentes, prueba en la que se utiliza, fecha de preparación, nombre de quien la preparó, símbolos de peligrosidad, frases R y S. 39 2.5.2. Sustancias tóxicas Las sustancias tóxicas tienen el potencial de afectar la salud, causan en algunos casos daños de magnitud considerable, incluso con consecuencias letales; el daño puede ser de efecto local o sistémico. La exposición puede ser a través de la piel, por inhalación o ingestión. • Derrame de tóxicos: El derrame de las sustancias tóxicas representa un peligro tanto para el personal, como para su entorno. Para contrarrestar este riesgo se debe usar un material absorbente y recogerlo en bolsa plástica sellada. Marcar como químico peligroso. • Productos inflamables: Si se trata de un producto inflamable, debe cerrarse inmediatamente la llave del gas y ventilar, de manera rigurosa, el área contaminada. Tener en cuenta que muchos vapores, además de su toxicidad, forman mezclas explosivas con el aire. 2.5.3. Sustancias corrosivas Pueden reaccionar con el material circundante y liberar vapores tóxicos. 2.5.3.1. Líquidos corrosivos Tienen gran efecto externo. La concentración y duración de la exposición determina el grado de la lesión ocasionada. Se consideran líquidos corrosivos los ácidos clorhídrico, fluorhídrico, nítrico, sulfúrico y acético; las bases de hidróxido de sodio, potasio y amonio; los hidrocarburos clorados; el fenol líquido. 40 2.5.3.2. Sólidos corrosivos La toxicidad depende de su solubilidad y de la duración del contacto. Son sólidos corrosivos los hidróxidos alcalinos, carbonatos alcalinos, sulfuros alcalinos, metales alcalinos, fósforo, sales de antimonio, sales de arsénico, sales de cromo, sales de mercurio, fosfato trisódico, fenol. 2.5.3.3. Gases corrosivos Son las sustancias corrosivas más peligrosas. Los gases son absorbidos por la piel y por inhalación. Ejemplos típicos son: amoníaco, cloro, ozono, dimetil sulfato, éteres clorados. 2.5.4. Solventes inflamables Deben almacenarse separados de las sustancias reactivas; por ejemplo, del ácido nítrico. Guardar en área bien ventilada, para prevenir la acumulación de vapores. Cuando se almacenan en gabinetes para inflamables o en refrigeradores, estos deben ser a prueba de chispas. Su manipulación debe hacerse siempre bajo campana extractora de gases. En su área circundante no debe haber fuentes de ignición. 2.5.5. Productos químicos reactivos Son sustancias que bajo ciertas condiciones reaccionan violentamente generando cantidades de calor, luz, gases o tóxicos que pueden ser nocivas para el entorno o para las personas. Se dividen en cuatro (4) grupos, de acuerdo con la naturaleza de su reactividad: • Explosivos: como los percloratos, componentes aromáticos del nitrógeno, peróxidos del éter, ácido pícrico, etc. 41 • Oxidantes y Reductores: sus reacciones generan calor y son a menudo explosivas. Ejemplos: persulfatos, fósforo, peróxidos orgánicos y azidas. • Sustancias activas con el agua: anhídridos ácidos y los metales alcalinos, como litio, sodio y potasio. • Sustancias que se activan con ácidos: metales alcalinos, carburos, cianuros, sulfuras. 2.5.6. Riesgos no percibidos Representan un alto riesgo para el trabajador; al no darse cuenta de que el peligro existe, se puede causar un envenenamiento crónico o sistémico. 2.5.6.1. Sustancias cancerígenas, teratogénicas y/o mutagénicas Son sustancias que en muy pequeñas dosis o por acumulación producen daños irreversibles en la salud. 2.6. RIESGOS FÍSICOS Son aquellos producidos por factores físicos, entre ellos se encuentran: • Riesgos Eléctricos: Este riesgo se basa en la exposición a un campo electromagnético, y son la causa más frecuente de incendios en laboratorios; generalmente se presentan por sobrecarga eléctrica, mal mantenimiento de las redes, tuberías de gas deterioradas, falta de adecuada manipulación de sustancias inflamables y químicos explosivos. Para el manejo, reparación o mantenimiento de los equipos eléctricos, con el fin de evitar los riesgos eléctricos, es indispensable seguir las siguientes normas: 42 El manejo o reparación de un equipo sólo debe efectuarlo el personal que esté capacitado para tal efecto. No se recomienda el uso de extensiones. Los equipos eléctricos no deben manipularse con las manos, pies o cuerpo húmedo, ni parado sobre piso húmedo. Se debe desconectar los equipos que produzcan chispas y solicitar inmediata revisión. Los cortocircuitos pueden ser muy peligrosos, especialmente cuando hay contacto con el chasis metálico o con superficies húmedas. El cableado del laboratorio debe ser efectuado por personal idóneo en la materia. Los cables o enchufes dañados deben ser reemplazados inmediatamente. Colocar los equipos de tal manera que no sobrecarguen el respectivo circuito. • Riesgos mecánicos: Este tipo de riesgo es causado por objetos de trabajo que se desplazan, elementos móviles, bordes filosos, superficies irregulares o defectuosas. • Riesgo térmico: Este riesgo se basa en la exposición a fuentes de frío o calor, como son el manejo y operación de autoclaves en el laboratorio, hornos eléctricos, incineradores, mecheros. 2.7. GESTIÓN DE LOS RESIDUOS Los desechos deben manejarse según lo establecido en el decreto 2676 del 2000, en el que se reglamenta la gestión integral de los residuos hospitalarios y similares. Básicamente, el objetivo es evitar el posible daño que pueda ser causado a las personas, enseres y medio ambiente. Antes de proceder a la eliminación, los residuos deben inactivarse. 43 Es indispensable realizar una correcta gestión de los residuos generados en el laboratorio, evitando al máximo su producción, reutilizándolos en caso de que haya posibilidad de hacerlo con algún tratamiento previo como la esterilización en autoclave, y recurriendo a la eliminación solo cuando esté justificado; para este fin, se hace imprescindible la identificación y conocimiento acerca de las clases de residuos según su nivel de riesgo y peligrosidad (ver tabla 4) Tabla 4. Clasificación de los residuos según su peligrosidad TIPO DE RESIDUOS CARACTERISTICAS NO PELIGROSOS Producidos en cualquier lugar y en desarrollo de una actividad. No presentan riesgo para la salud humana o el medio ambiente. Si ha estado en contacto con residuos peligrosos debe ser tratado como tal. • Biodegradables • Reciclables Son restos químicos o naturales (vegetales, residuos alimenticios no infectados, papel higiénico, detergentes biodegradables, maderas) que se descomponen fácilmente en el ambiente - No se descomponen fácilmente y ser puede reutilizar en procesos productivos como materia prima. Entre estos se encuentran papeles, plásticos, vidrio y telas. • Inertes • Ordinarios o comunes RESIDUOS PELIGROSOS No se descomponen ni transforman en materia prima y su degradación natural requiere largos periodos de tiempo. Entre estos se encuentran icopor, papel carbón. Generados en el desempeño normal de las actividades, como pasillos y áreas comunes. Producido con alguna de las siguientes características: infecciosos, combustibles, inflamables, explosivos, reactivos, radioactivos, volátiles, tóxicos, corrosivos. Se incluyen los envases, empaques que estén en contacto con estos. Pueden causar daño a la salud humana y al medio ambiente. 44 • Residuos infecciosos o de riesgo biológico - Biosanitarios Contienen microorganismos patógenos, bacterias, virus, hongos, con alto grado de virulencia y concentración que puede producir enfermedad infecciosa en huéspedes susceptibles. Instrumentos utilizados durante procedimientos que tienen contacto con materia orgánica, guantes, material de laboratorio, medios de cultivo, láminas y laminillas. - Cortopunzantes Por ser punzantes o cortantes pueden originar accidente percutaneo infeccioso. Se encuentran agujas, pipetas, laminas de bisturí o vidrio. • Residuos químicos Restos de sustancias químicas y sus empaques, dependiendo de su concentración y tiempo de exposición tiene potencial para causar muerte, lesiones o efectos adversos para la salud humana y medio ambiente. - Metales pesados Son objetos, elementos o restos de estos en desuso, contaminados o que tengan metales pesados como Pb, Cr, Ba, Ni, Va, Zn, Hg, Ar y Se. - Reactivos Generan gases, vapores, humos tóxicos, explosión o reaccionan térmicamente cuando entran en contacto con otros elementos o compuestos, colocando en riesgo la salud humana y el medio ambiente. Dentro de estos se encuentran líquidos de fijado de laboratorio, medios de contraste y reactivos. Pueden ser de base mineral o sintética que se tornan inadecuados para su uso inicial, como por ejemplo aceites usados para el mantenimiento de equipos Fuente: (Organización Mundial de la Salud, 1997) - Aceites usados El almacenamiento y la eliminación de los residuos químicos debe hacerse en condiciones de seguridad, ordinariamente es necesario desactivarlos con un tratamiento previo. Para la recolección y el almacenamiento de los residuos, inicialmente se deben seguir algunas indicaciones: Separar los residuos de una sola sustancia química según el estado físico, 45 en líquidos, sólidos y gases Clasificar los líquidos: solventes, y otros. Sólidos: orgánicos e inorgánicos. Separar las mezclas de residuos de sustancias químicas según el estado físico en líquidos, sólidos y gases Clasificar los líquidos: solventes, y otros. Sólidos: orgánicos e inorgánicos. Separar los reactivos y residuos especiales según el estado, en líquidos y sólidos, y en: -Sustancias orgánicas halogenadas (Ej. organoclorados) -Organometálicos (Ej. metaloenzimas) -Metales pesados (Ej. plomo, cadmio, mercurio, níquel) La recolección debe hacerse en recipientes debidamente rotulados y el almacenamiento en un lugar bien ventilado. Según el decreto 2676 del 2000, la clasificación de los residuos, y el color del recipiente que compete para el laboratorio de Biotecnología aplicada debe ser: (Ver Tabla 5.) Tabla 5. Clasificación de los Residuos en el laboratorio de Biotecnología aplicada. TIPO DE RESIDUO ETIQUETA PELIGROSOS INFECCIOSOS Biosanitarios, Cortopunzantes y Químicos Citotóxicos Rotular con: RIESGO BIOLÓGICO CONTENIDO BÁSICO Compuestos por cultivos, mezcla de microorganismos, medios de cultivo, filtros de gases utilizados en áreas contaminadas por agentes infecciosos o cualquier residuo contaminado por éstos. 46 COLOR Rojo TIPO DE RESIDUO ETIQUETA CONTENIDO BÁSICO NO PELIGROSOS Reciclables Vidrio Rotular con: RECICLABLE VIDRIO Toda clase de vidrio. COLOR Gris Rotular con: NO PELIGROSOS Biodegradables NO PELIGROSOS BIODEGRADABLES o NO PELIGROSOS ORDINARIOS Y/O INERTES Hojas, resto de alimentos no contaminados. Servilletas, empaques de papel plastificado, barrido, icopor, vasos desechables, papel carbón, tela. Verde 2.7.1. SEGURIDAD DEL PERSONAL PARA ELIMINACIÓN DE RESIDUOS BIOLÓGICOS La manipulación del material contaminado debe realizarse con máximo cuidado, utilizando los elementos de protección personal (guantes, gafas, máscaras y blusa o bata). Antes de descartar medios de cultivo, estos se deben esterilizar en autoclave a 121°C y 15 psi de presión, por 15 minutos como mínimo. La esterilización debe hacerse lo más pronto posible, una vez se decida el desecho del material. Se hace necesaria la verificación del funcionamiento del autoclave con las cintas especiales que cambian de color al alcanzar la temperatura deseada. Una vez que los cultivos (crecimiento en caja de petri o en tubos) son leídos, deben ser desinfectados sumergiéndolos en una solución de hipoclorito de sodio al 5%, durante 24 horas; después deben ser empacados en papel kraft, y ser enviados a esterilizar en autoclave a 121°C, 15 Ib de presión por 20 minutos; a continuación se deben colocan en bolsas rojas. 47 Todo material reutilizable que contenga muestras biológicas debe sumergirse en solución de hipoclorito de sodio al 5%, dejar mínimo 30 minutos en recipiente tapado y posteriormente llevar a esterilización. 2.7.2. DESACTIVACIÓN Y TRATAMIENTO DE RESIDUOS 2.7.2.1. Disposición de muestras biológicas y elementos de laboratorio • Agujas, jeringas: estos elementos deben ser recolectados en los guardianes de seguridad, desactivar con peróxido de hidrógeno 20% (v/v) por aproximadamente 30 minutos, en recipiente tapado, y enviar periódicamente al incinerador. • Elementos de trabajo de rutina en el laboratorio (tubos, puntas, pipetas): deben ser sumergidos en solución de hipoclorito al 5%, durante 30 minutos en recipiente tapado. Posteriormente se deben lavar, secar y guardar en el sitio indicado. • Muestras biológicas: se deben desinfectar con solución de hipoclorito de sodio al 5% por mínimo 30 minutos en recipiente tapado, diluir 1:10 y desechar por el sifón. 2.7.2.2. Disposición de ácidos inorgánicos Para realizar el descarte de ácidos orgánicos, es importante inicialmente neutralizar hasta pH 6-8 añadiendo lentamente hidróxido de sodio en solución o en lentejas. A continuación se deben almacenar en recipientes adecuados, rotular y llevarlos al sitio de adecuación, para ser recogidos posteriormente por la empresa autorizada para su eliminación. 48 2.7.2.3. Disposición de ácidos orgánicos Para la desactivación de ácidos orgánicos, es necesario neutralizar estos desechos con carbonato de sodio, cal o una solución diluida de soda. Posteriormente, se debe ajustar a pH 6-8, almacenar en recipientes adecuados, rotular y llevarlos al sitio de adecuación para ser posteriormente recogidos por la empresa autorizada para su eliminación. 2.7.2.4. Disposición de Bases, aminas, sales básicas y soluciones básicas Para el descarte de residuos alcalinos, estos deben ser neutralizados hasta pH 6-8 añadiendo lentamente ácido sulfúrico diluido. A continuación, llevar a almacenamiento en recipientes adecuados, rotular y llevar al sitio de adecuación para ser recogidos posteriormente por la empresa autorizada para su eliminación. 2.7.2.5. Disposición de soluciones acuosas Para la disposición de soluciones acuosas, si la concentración de soluto y la cantidad por eliminar son elevadas, se necesita tratamiento de acuerdo con la identidad del soluto. Si ambas son bajas, se debe diluir por lo menos 1:20 con agua y a continuación eliminar por el desagüe dejando correr abundante agua. 2.7.2.6. Disposición de soluciones en disolventes orgánicos Para el descarte de soluciones en disolventes orgánicos, es necesario almacenar estas en recipientes adecuados, rotular, y mantenerlas alejadas de llamas abiertas o de cualquier otra fuente inflamable. Posteriormente, 49 deben ser llevadas al sitio de adecuación para ser recogidos posteriormente por la empresa autorizada para su eliminación. 2.7.3. MOVIMIENTO INTERNO DE RESIDUOS. Residuos Biosanitarios: En el laboratorio de Biotecnología aplicada se encuentra 1 caneca con bolsa roja de riesgo biológico; en ella se depositan los guantes, filtros y jeringas, y todo material contaminado con muestras biológicas. Al llenarse la bolsa roja ésta es marcada haciendo referencia al laboratorio y recogida dos veces al día, (mañana entre las 8 y 10 a.m.) y (tarde entre las 3 y 5 p.m.) por el conserje quien es el encargado de sacarlos del laboratorio y llevarlos a la caneca roja ubicada detrás del edificio Félix Restrepo la cual esta marcada con el nombre del laboratorio; posteriormente estos residuos son recogidos por el auxiliar de servicios generales todos los días a las 6 a.m., quien los lleva al deposito de desechos biológicos ubicado detrás del edificio de genética, donde son recogidos por los funcionarios de la empresa ECOCAPITAL INTERNACIONAL S.A. E.S.P (quien tiene un contrato externo con el Hospital Universitario San Ignacio) todos los días de 10 a 12 p.m. ésta empresa se encarga de pesar los residuos, y transportarlos para su debido tratamiento mediante desactivación por alta eficiencia por autoclave. (Ver anexo 5. Ruta sanitaria-Ruta de evacuación de residuos del laboratorio de Biotecnología aplicada) Residuos Biodegradables: Los residuos biodegradables son ubicados en bolsas de color verde (papel, plástico, icopor); su recolección se realiza 2 veces al día (mañana y tarde) por el conserje, estos residuos son llevados al centro de acopio ubicado en la 50 calle 45 N° 6-75 en la parte posterior de la cafetería del edificio Félix Restrepo donde son depositados en contenedores, donde posteriormente son recogidos cada dos días en las horas de la noche entre las 10 y las 12 de la noche por la empresa LIME (Limpieza Metropolitana S.A. E.S.P.) quien tiene un contrato interno con la Universidad Javeriana. (Ver anexo 5. Ruta sanitaria-Ruta de evacuación de residuos del laboratorio de Biotecnología aplicada) 2.7.4. MANUAL DE GESTIÓN DE RESIDUOS Todo laboratorio debería elaborar un manual para la gestión de los residuos, siguiendo las directrices generales contenidas en el plan de residuos de cada laboratorio. Esta recomendación, es obligatoria en caso de que el laboratorio busque la certificación o acreditación del mismo. Algunos aspectos a considerar en un manual para gestión de residuos son: · Reducción y/o minimización de los residuos en la fuente de origen. · Segregación en la fuente de los residuos infecciosos, no infecciosos y reactivos. · Señalización, identificación y rotulación de los residuos infecciosos y su peligrosidad, así como de residuos no infecciosos y reactivos. · Normas de almacenamiento y transporte de los diferentes residuos. · Normas de acción en caso de vertidos y derrames accidentales, educación al personal sobre la exposición a residuos. · Plan de contingencia ante el fallo de las medidas de contención habituales. (Icontec GTC 35, 2003) 2.8. CALIDAD Las organizaciones han venido integrando el concepto de calidad en sus procesos debido a la competencia que ha suscitado la globalización. En la actualidad, las compañías buscan la certificación con normas o sellos de 51 calidad, buscando probar a los consumidores que los productos o servicios que prestan son aptos para el uso y así mismo, sugiriendo un valor mayor de confiabilidad a la organización. La calidad en términos generales implica la conformidad con los requerimientos, la totalidad de funciones del servicio o producto que satisfacen las necesidades especificadas, así como la aptitud para el uso; la calidad es la búsqueda de conseguir entregar al cliente el más relevante valor en el producto o servicio suministrado. (Hoyle, 1996). La calidad se denota en el producto o servicio, cuando este posee funciones que satisfacen las necesidades del cliente, siendo equivalente y reconocido como producto de calidad. (Hoyle, 1996) 2.8.1. Características de calidad Las características o funciones de calidad de un producto o servicio, son aquellas que se necesitan para satisfacer las necesidades del cliente o para alcanzar la aptitud para el uso. Cuando se trata de productos, las características son casi siempre características técnicas mientras que las características de calidad de los servicios, como es el caso de los laboratorios de investigación y docencia, por lo general tienen una dimensión humana. Algunas de las características más importantes de calidad de productos son la accesibilidad, disponibilidad, apariencia, adaptabilidad y durabilidad; entre las características más importantes de calidad a nivel de servicios se encuentran la accesibilidad, la precisión, la credibilidad, la efectividad, la confiabilidad y la eficiencia. Éstas características se deben especificar para cada organización, y su realización se debe también controlar, asegurar, mejorar, dirigir y demostrar; éstas son las características que constituyen la materia objeto de los requerimientos especificados a los que se refieren los estándares ISO 9000:2000. 52 2.9. SISTEMA DE GESTIÓN DE CALIDAD El propósito de un sistema de calidad es permitirle a las organizaciones conseguir, mantener y mejorar la calidad en sus productos y/o servicios; en este sistema se organizan los recursos para alcanzar ciertos objetivos, estableciendo reglas y una infraestructura, que si se mantiene, proporciona los resultados deseados. Los sistemas de calidad pueden dirigirse a una de las metas de calidad o a todas ellas, y pueden estar limitados al control de la calidad, es decir, mantener los estándares, más que mejorarlos. Los estándares ISO 9000:2000, están enfocados únicamente sobre la calidad del producto o servicio suministrable. (Hoyle, 1996) Las normas ISO 9000 son una serie de estándares internacionales para sistemas de calidad. Especifican las recomendaciones y requerimientos para el diseño y valoración de un sistema de gestión, con el propósito de asegurar que las organizaciones proporcionan productos y servicios que satisfagan los requerimientos especificados. Estos requerimientos pueden ser específicos del cliente que las organizaciones se comprometen a proporcionar en ciertos productos y servicios o pueden ser requerimientos de un mercado concreto determinados por la organización (Hoyle, 1996). Un enfoque para desarrollar e implementar un sistema de gestión de la calidad comprende diferentes etapas tales como: a) Determinar las necesidades y expectativas de los clientes, y de quienes estén interesados. b) Establecer la política y objetivos de calidad de la organización. c) Determinar los procesos y las responsabilidades necesarias para el logro de los objetivos de la calidad. d) Determinar y proporcionar los recursos necesarios para el logro de los objetivos de calidad. 53 e) Establecer los métodos para medir la eficacia y eficiencia de cada proceso. f) Aplicar éstas medidas para determinar la eficacia y la eficiencia de cada proceso. g) Determinar los medios para prevenir no conformidades y eliminar sus causas. h) Establecer y aplicar un proceso para la mejora continua del sistema de gestión de calidad. Una organización que adopte el enfoque anterior (enfoque basado en procesos) genera confianza en la capacidad de sus procesos, con el que se busca que la organización articule sus procedimientos y tareas de forma sistémica, evidenciado en la calidad de sus productos y proporcionando una base para la mejora continua de la organización. (NTC-ISO 9001, 2000) 2.9.1. Documentación del Sistema de Calidad La documentación permite la comunicación del propósito y la coherencia de la acción o realización de las actividades. Su utilización contribuye a: · Lograr la conformidad con los requisitos del cliente y la mejora de la calidad. · Proveer la información apropiada · Proporcionar evidencias objetivas, repetibilidad y trazabilidad. · Evaluar la eficacia y la adecuación continua del sistema de gestión de calidad. Cada organización determina la extensión de la documentación requerida y los medios a utilizar. Esto depende de factores tales como el tipo y el tamaño de la organización, la complejidad e interacción de los procesos, la complejidad de los productos, los requisitos de los clientes, los requisitos reglamentarios que sean aplicables, la competencia demostrada del personal 54 y el grado en que sea necesario demostrar el cumplimiento de los requisitos del sistema de gestión de calidad. (NTC-ISO 9001, 2000) La elaboración de la documentación no debería ser un fin en sí mismo, sino una actividad que aporta valor; esta debe incluir: a) Declaraciones documentadas de una política de calidad y de los objetivos de calidad. b) Manual de calidad. c) Procedimientos documentados. d) Instrucciones de trabajo. e) Registros requeridos. f) Los documentos que necesita la organización para asegurarse de la eficaz planificación, operación y control de procesos. 2.9.1.1. Pirámide de la Documentación La pirámide documental describe una jerarquía característica de la documentación de un sistema de calidad. El orden de desarrollo de la jerarquía en determinada organización dependerá de sus circunstancias particulares. (Alexander, 1998) La pirámide comprende varios niveles (Ver figura 1): El Nivel A, en el que se ubica el manual de calidad, el cual describe el sistema de calidad en concordancia con la política y objetivos de calidad. El Nivel B, en el que se ubican los procedimientos del sistema de calidad, los cuales describen las actividades de la unidad funcional necesarias para implantar los elementos del sistema de calidad. Y el Nivel C, en el cual se encuentran los documentos de calidad, conformados por documentos de trabajo detallado, como los instructivos (que describen en forma breve el modo de realizar una actividad ) y los registros 55 de calidad (que evidencian el desarrollo de las actividades). (Alexander, 1998) Manual de Calidad Procedimientos - Sistema de Calidad Documentos de Calidad Figura 1. Pirámide de la documentación del sistema de calidad 2.9.1.2. Política de Calidad y Objetivos de la Calidad La política de la calidad y los objetivos de la calidad se establecen para proporcionar un punto de referencia para dirigir la organización. Ambos determinan los resultados deseados y ayudan a la organización a aplicar sus recursos para alcanzar dichos resultados. La política de calidad es el resultado de un análisis de los planes del cliente, así como el valor agregado que es posible ofrecer a su cadena productiva, basándose en sus requisitos. (Nava, 2005) La política de calidad proporciona un marco de referencia para establecer y revisar los objetivos de la calidad; éstos tienen que ser coherentes con la política de calidad y el compromiso de mejora continua, y su logro debe ser medible. El logro de los objetivos de la calidad puede tener un impacto positivo sobre la calidad del producto, la eficacia operativa y el desempeño 56 financiero, y en consecuencia sobre la satisfacción y la confianza de los clientes y la organización. (NTC-ISO 9001, 2000) 2.9.1.3. Manual de Calidad El manual de calidad se refiere a los procedimientos del sistema de calidad documentado propuesto para la planificación global y administración de actividades que impactarán en la calidad de una organización. El manual de calidad debe describir de manera general las políticas de calidad de la organización, e incluir los procedimientos de calidad o una referencia de ellos, así como una descripción de la interacción de los procesos del sistema de calidad; deben también estar incluidos la política y los objetivos de calidad. (Alexander, 1998) En una descripción más detallada, el manual de calidad debe contener: a) Titulo, alcance del sistema de gestión de calidad y área de aplicación. b) Justificación de cualquier exclusión del sistema. c) Tabla de contenido del manual. d) Páginas introductorias sobre la organización y el manual en sí. e) La política y los objetivos de calidad de la organización. f) Descripción de la organización, responsabilidades y autoridades. g) Descripción de los elementos del sistema de calidad. h) Referencia a procedimientos del sistema de calidad. i) Referencia a los procesos y su interacción (red o mapa de procesos), caracterización de los procesos. j) Sección de definiciones, si es requerido. k) Apéndice para datos de apoyo acerca del manual, si es necesario. (Fontalvo, 2004) 57 2.9.1.4. Procedimientos documentados Los procedimientos documentados son una secuencia de pasos para ejecutar una tarea de rutina. (Hoyle, 1996). En ellos se describe como se desempeñan las diferentes actividades en una organización. En concordancia con la serie ISO 9000, estos procedimientos deben cubrir todos los elementos aplicables del sistema de calidad de la norma; deben describir, a un grado de detalle requerido para un control adecuado de las actividades concernientes, las responsabilidades, autoridades e interrelaciones del personal que administra, desempeña, verifica o revisa el trabajo que afecta la calidad, haciendo explícito como las diferentes actividades deberán ser desempeñadas y la documentación a ser utilizada. (Alexander, 1998) 2.9.1.4.1. Procedimientos operativos Los procedimientos de operación establecen cómo se realizan tareas específicas. Subcategorías de estos procedimientos pueden incluir procedimientos de prueba, procedimientos de inspección, procedimientos de instalación, etc. Éstos hacen referencia a los estándares y guías que se necesitan para llevar a cabo la tarea, documentar los resultados y contener los formularios utilizados para registrar la información. (Hoyle, 1996); el principal propósito de los procedimientos operativos es garantizar la consistencia, reproducibilidad e uniformidad en el desarrollo de los procesos y las características finales del producto. 58 2.9.1.5. Registros Los registros son aquellos documentos o datos que se pueden presentar a terceros para demostrar el cumplimiento de un requerimiento de calidad; proporcionan evidencia que indica que se realizan las actividades establecidas en los procedimientos documentados e instrucciones de trabajo las exigencias de la serie ISO 9000, se cumplen mediante los procedimientos, y los registros son el aval que confirma el cumplimiento de una exigencia. En cada procedimiento se deben identificar con exactitud los documentos o datos que podrán servir como registros. (Alexander, 1998) 2.9.1.6. Enfoque basado en procesos La serie de normas ISO 9000, se dirigen primordialmente al alcance de resultados más eficientemente, por medio de la gestión como un proceso de los recursos y las actividades (planteando las actividades como un proceso). (NTC-ISO 9001, 2000) El propósito de realizar un modelo de procesos, es alinear las actividades de la organización en una sola dirección, de manera que todas estén orientadas a la satisfacción del cliente; el enfoque basado en procesos, asegura que las actividades se visualizan, iniciando con la identificación de las necesidades de los clientes hasta llegar a la realización de los resultados deseados a través de toda la organización. De acuerdo a la norma ISO 9000, un producto se define como el resultado de un proceso; con este concepto, se construye el modelo básico para el desarrollo de un proceso, en el que se establecen diferentes factores que se agrupan: las actividades, las cuales representan la manera de organizar para 59 desarrollar los productos, los facilitadores, que apoyan la actividad principal de la organización, y la administración, que tiene el compromiso de dirección para la consecución de las metas, todo esto en pro de la satisfacción del cliente. (Nava, 2005) Una metodología que facilita la gestión del enfoque basado en procesos, es el ciclo de calidad de Edward Deming. El ciclo de calidad, (planear (P), hacer (H), verificar (V) y actuar (A)), tiene amplia aplicación en la calidad, y es utilizado en la familia ISO 9000 de manera muy explicita. La planificación (P) incluye la determinación de objetivos y el desarrollo del enfoque de procesos, para luego realizar (H) el producto con los recursos necesarios, y llevar a cabo el despliegue a través de la medición de los diferentes factores del proceso (V), registrando y analizando los datos, efectuando acciones correctivas y preventivas, realizando la revisión de la dirección y actuando (A) proponiendo mejoras a la política y los objetivos de calidad. (Nava, 2005) Planificar: Establecer los objetivos y los procesos necesarios para conseguir resultados de acuerdo con los requisitos del cliente y las políticas de la organización. Hacer: Implementar los procesos. Verificar: Realizar el seguimiento y la medición de los procesos y los productos respecto a las políticas, los objetivos y los requisitos para el producto, e informar sobre los resultados. Actuar: Tomar acciones para mejorar continuamente el desempeño de los procesos. (NTC-ISO 9001, 2000) Un enfoque de este tipo, cuando se utiliza dentro de un sistema de gestión de la calidad, enfatiza la importancia de: 60 a) La comprensión y el cumplimiento de los requisitos. b) La necesidad de considerar los procesos en términos que aporten valor. c) La obtención de resultados del desempeño y eficacia del proceso d) La mejora continua de los procesos con base en mediciones objetivas. (NTC-ISO 9001, 2000) Los requisitos establecidos por ISO 9000:2000, para la implementación de un sistema de gestión de calidad, son aplicables a todas las organizaciones sin importar el tipo de producto o servicio que preste; bajo el esquema de ésta normativa, se puede lograr la certificación por una tercera parte que verifica y valida las organizaciones. Sin embargo, para los laboratorios de ensayo y calibración como el laboratorio de Biotecnología aplicada, la certificación con ésta norma no garantiza la competencia del laboratorio en el desarrollo de sus actividades, por lo que se hace muy importante una acreditación con la norma NTC-ISO-IEC 17025:2005, la cual permite verificar y reconocer la competencia de los laboratorios en las operaciones y técnicas realizadas, generando un mayor grado de confianza en la satisfacción de los clientes, así como en la entrega de resultados. 2.10. NORMA NTC-ISO-IEC 17025:2005 La norma ISO-IEC 17025:2005, ha sido escrita para incorporar todos los requerimientos de la norma ISO 9001 que son relevantes para los laboratorios de ensayo y calibración; especifica tanto los requerimientos técnicos, como la competencia técnica de los laboratorios. Los laboratorios de ensayo y calibración que implementan la norma ISO-IEC 17025, operan de acuerdo con la norma ISO 9001, debido a que la norma ISO-IEC 17025 cumple con los requisitos técnicos de la serie ISO 9000. 61 2.10.1. Alcance y campo de aplicación La norma NTC-ISO-IEC 17025:2005 establece los requisitos generales para la competencia en la realización de ensayos y/o calibraciones, incluido el muestreo. También abarca los ensayos y las calibraciones que se realizan utilizando métodos normalizados, métodos no normalizados y métodos desarrollados por el propio laboratorio. La aplicación de esta norma incide primordialmente en los laboratorios, para el desarrollo de los sistemas de gestión en sus actividades de calidad, actividades técnicas y actividades administrativas. El campo de aplicación también abarca a los clientes del laboratorio, organismos de acreditación y las autoridades reglamentarias cuando confirman o reconocen la competencia de los laboratorios. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005) 2.10.2. Sistema de calidad Dentro del sistema de calidad, se hace imprescindible que el laboratorio documente su política, sistemas, programas, procedimientos e instrucciones, para asegurar la calidad de los resultados de las calibraciones, ensayos y productos. La documentación del sistema, debe ser comunicada al personal pertinente, debe ser comprendido por él, debe estar a su disposición y debe ser implementado por él. Dentro del manual de calidad, debe incluirse la política del sistema de gestión del laboratorio, así como los objetivos generales, los cuales deben ser determinados y examinados por la autoridad de la alta dirección. La política de calidad debe incluir los siguientes aspectos (NTC-ISO-IEC 17025, 2005): 62 -El compromiso de la dirección del laboratorio con la buena práctica profesional y con la calidad de sus ensayos, productos y calibraciones durante el servicio a sus clientes. -Una declaración de la dirección con respecto al tipo de servicio ofrecido por el laboratorio. -El propósito del sistema de gestión concerniente a la calidad -Un requisito de que todo el personal relacionado con las actividades de ensayo y de calibración dentro del laboratorio se familiaricen con la documentación de la calidad e implementen la política y los procedimientos en su trabajo. -El compromiso de la dirección del laboratorio debe cumplir esta norma y mejorar continuamente la eficacia del sistema de gestión. 2.10.3. Control de Documentos Para el control de la documentación en los laboratorios, se debe constituir y mantener un procedimiento para el control de todos los documentos que forman parte del sistema de gestión, las normas y documentos normativos, métodos de ensayo y/o calibración, dibujos, el software, las especificaciones, las instrucciones y los manuales. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005) 2.10.3.1. Aprobación y emisión de documentos Los documentos que han sido distribuidos entre el personal de laboratorio como parte del sistema de gestión, deben ser revisados y aprobados para su uso, estableciendo una lista maestra de control de los documentos. En este procedimiento se identifica la vigencia de los documentos del sistema de gestión y su distribución, evitando de este modo el uso de documentos obsoletos o no válidos. 63 Dentro de los procedimientos o documentos adoptados se debe asegurar que las ediciones de éstos, estén disponibles en los sitios en los que se realicen las actividades y operaciones del laboratorio; se hace imprescindible su revisión periódica, para la realización de modificaciones que aseguren el cumplimiento con los requisitos técnicos vigentes. Los procedimientos o documentos que sean obsoletos, deben ser marcados y retirados de inmediato, para evitar su uso involuntario por parte del personal. (NTC-ISOIEC 17025, 2005) 2.10.3.2. Cambios en los documentos Para la realización de los cambios a los documentos, se hace necesaria la revisión y aprobación por parte de quienes realizaron su aprobación y revisión original. El personal designado debe tener acceso a los antecedentes pertinentes sobre los que se basará su revisión y su aprobación. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005) Así mismo, si es posible, se debe realizar una identificación del texto nuevo o modificado dentro del documento o en los anexos. También son necesarios los controles a las modificaciones realizadas a los documentos que se encuentran en sistemas informáticos, utilizando procedimientos que describan su realización y forma de control. 2.10.4. Acciones Correctivas Cuando se ha identificado un trabajo no conforme o fuera de las especificaciones técnicas y procedimientos del sistema de gestión, el laboratorio debe establecer una política y procedimiento correctivo, designando personal capacitado que pueda realizar e implementar estas acciones correctivas. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005) 64 Para la identificación de la acción correctiva adecuada, es necesaria la realización de un análisis de las causas del suceso. Las acciones que deben ser seleccionadas e implementadas, deben ser aquellas que brinden una posibilidad mayor de eliminar el problema y prevenir su ocurrencia. Cuando se corrige una no conformidad, debe someterse a una nueva verificación para demostrar su conformidad con los requisitos. 2.10.5. Acciones Preventivas El laboratorio debe determinar las acciones para eliminar las causas o potenciales fuentes de no conformidades o problemas para prevenir su ocurrencia. Se debe establecer un procedimiento documentado para determinar e implementar las acciones preventivas necesarias, así como un registro de los resultados de las acciones llevadas a cabo, que proporcione evidencia sobre la eficacia de la acción. Es necesario hacer seguimiento y revisión de las acciones tomadas, con el fin de reducir la probabilidad de su repetición. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005) 2.10.6. Control de Registros El laboratorio debe establecer procedimientos para la identificación, la recopilación, la codificación, el acceso, el archivo, el almacenamiento, el mantenimiento y la disposición de los registros de calidad (entre los que se deben incluir los informes de auditorías internas, revisiones por la dirección y registros de acciones correctivas y preventivas) y los registros técnicos. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005). 65 2.10.6.1. Registros Técnicos Los registros técnicos hacen evidentes los resultados obtenidos, indicando que se realizan las actividades establecidas en los procedimientos documentados e instrucciones. Son una acumulación de datos e información resultante de la realización de los ensayos y/o calibraciones que indican el cumplimiento de los requisitos del sistema y de los especificados para los procesos. Dentro de éstos registros se encuentran los formularios, contratos, hojas de trabajo, manuales de trabajo, hojas de verificación, notas de trabajo, gráficos de control, informes de ensayos y certificados de calibración externos e internos, notas, publicaciones y retroalimentación de los clientes. El laboratorio debe conservar, por un periodo determinado los registros de las observaciones originales, de los datos derivados y de información suficiente para establecer un protocolo de control, los registros de calibración, los registros de personal y una copia de cada informe de ensayos o certificado de calibración emitido. Los registros correspondientes a cada ensayo o calibración deben contener suficiente información para facilitar, cuando sea posible, la identificación de los factores que afectan a la incertidumbre y posibilitan que el ensayo o la calibración sea repetido bajo condiciones lo mas cercanas posibles a las originales. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005). Cada registro debe incluir la identidad del personal responsable de la actividad, muestreo, o de la realización de cada ensayo o calibración y de la verificación de los resultados. Las observaciones, los datos y los cálculos se deben registrar en el momento de hacerlos y deben poder ser relacionados con la operación en cuestión. Cuando ocurran errores en los registros, cada error debe ser tachado, no debe ser borrado, hecho ilegible o eliminado, y el valor correcto debe ser escrito al margen. Todas estas alteraciones a los 66 registros deben ser firmadas por la persona que hace la corrección. (NTCISO-IEC 17025, 2005) 2.10.7. Revisiones por la dirección Las revisiones realizadas por la dirección del laboratorio, tienen como fin asegurar la conveniencia, adecuación, eficacia y eficiencia del sistema de gestión con respecto a los objetivos de calidad, política de calidad y las actividades de ensayo y/o calibración del laboratorio, así como la determinación de realizar e implementar actividades de mejora y los cambios o acciones que sean necesarias. La revisión debe tener en cuenta los siguientes elementos: -Adaptabilidad de las políticas y procedimientos. -Informes y/o reportes del personal directivo y de supervisión. -Resultados de las auditorias internas recientes. -Acciones correctivas y preventivas. -Resultados de las auditorías externas. -Documentación de quejas. -Retroalimentación de los clientes. (NTC-ISO-IEC 17025, 2005) 2.11. SISTEMA DE GESTIÓN AMBIENTAL Debido a que un laboratorio no puede limitarse únicamente a la competencia técnica y a los requerimientos administrativos de calidad, se hace necesario contemplar los aspectos concernientes a la realización de sus actividades con relación a su posible impacto sobre el medio ambiente; existen normas que contemplan estos aspectos y apoyan el desarrollo del sistema de gestión. 67 La norma ISO 14001:2004, establece los requisitos de un sistema de administración ambiental, que permite a una organización formular políticas y objetivos ambientales, tomando en cuenta los requisitos legislativos y la información sobre los impactos ambientales significativos. Esta norma es aplicable a los aspectos ambientales que una organización puede controlar y sobre los cuales tenga una influencia. (NTC-ISO 14001, 2004) La política ambiental de una organización, debe ser apropiada al tipo de impactos ambientales que generan sus actividades, productos o servicios, así como contener un compromiso de mejoramiento contínuo y prevención de la contaminación; debe también incluir un compromiso de cumplimiento con la legislación y regulaciones ambientales pertinentes. Los aspectos ambientales son conformados por aquellos elementos de las actividades, productos o servicios de la organización que pueden interactuar con el medio ambiente. El proceso de identificar los aspectos ambientales significativos asociados con las actividades de las unidades operativas debe considerar, cuando sea pertinente, algunas consideraciones respecto a: -Emisiones al aire. -Descargas al agua. -Manejo de residuos. -Contaminación de la tierra. -Uso de materias primas y recursos naturales. -Otros asuntos ambientales de la comunidad local. Las organizaciones entonces, deben establecer y mantener unos procedimientos documentados para identificar los aspectos ambientales de sus actividades, productos o servicios que pueda controlar: -Determinando cuáles tienen o pueden tener impacto significativo en el ambiente. 68 -Asegurando que los aspectos relacionados con los impactos significativos, se tengan en cuenta para establecer los objetivos ambientales de la organización. La organización debe mantener ésta información actualizada. (NTC-ISO 14001, 2004) Esta norma, contiene elementos esenciales del sistema de administración, basados en el proceso cíclico de planear (P), hacer (H), verificar (V) y actuar (A). Se hace imprescindible que el sistema de administración ambiental permita que la organización: -Establezca una política ambiental apropiada para ella. -Identifique los aspectos ambientales que surgen de las actividades, para determinar los impactos ambientales significativos. -Identifique los requisitos legislativos y regulatorios pertinentes. -Establezca una estructura y unos programas para implementar la política y lograr los objetivos ambientales propuestos. -Facilite las actividades de planificación, control, monitoreo, acciones correctivas, auditorias y revisión por la dirección, para garantizar la conformidad con la política ambiental. (NTC-ISO 14001, 2004) 2.12. SISTEMA DE GESTIÓN EN SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL El sistema de gestión en seguridad y salud ocupacional, ha sido desarrollado para ser compatible con las normas de gestión de calidad ISO 9001:2000 y la norma de gestión ambiental ISO 14001:2004, para facilitar a las organizaciones la integración de éstos sistemas. La norma NTC-OHSAS 18001:2001, indica los requisitos para un sistema de administración de seguridad y salud ocupacional (S & SO), que permiten a un 69 organización controlar sus riesgos de S & SO y mejorar su desempeño. (NTC-OHSAS 18001, 2001) Esta norma es aplicable a cualquier organización que desee establecer un Sistema de gestión en Seguridad y Salud ocupacional (SGS & SO) con objeto de eliminar o minimizar los riesgos para los empleados e implementar, mantener y mejorar continuamente, asegurando su conformidad con la política establecida en S & SO. La organización debe establecer y mantener procedimientos para la continua identificación de peligros, la evaluación de riesgos y la implementación de las medidas de control necesarias. Estos procedimientos deben incluir las actividades rutinarias y no rutinarias, las actividades de todo el personal que tenga acceso al sitio de trabajo, y las instalaciones en el sitio de trabajo. Así mismo, la organización debe asegurar que los resultados de estas evaluaciones y los efectos de estos controles sean tomados en cuenta cuando se fijen los objetivos y la política de S & SO, la cuál debe ser apropiada a la escala de riesgos de la organización e incluir un compromiso de mejoramiento contínuo; la organización también debe establecer y mantener unos programas de gestión de S & SO para lograr sus objetivos, estos programas deben incluir la autoridad designada para el logro de los objetivos en los niveles pertinentes de la organización, así como los medios y el cronograma con los cuales se lograran los objetivos. La organización debe documentar y mantener esta información actualizada. (NTC-OHSAS 18001, 2001) La responsabilidad final por S & SO recae en la alta gerencia; se debe designar un integrante de alto nivel gerencial con la responsabilidad particular de asegurar que el sistema de gestión de S & SO esté 70 implementado adecuadamente y que cumplan los requisitos en todos los áreas de operación. (NTC-OHSAS 18001, 2001) Respecto al personal, este debe ser competente para realizar las tareas que puedan tener impacto sobre S & SO en el sitio de trabajo. La competencia se debe definir en términos de la educación, entrenamiento y/o experiencia apropiada. La organización debe establecer y mantener procedimientos para asegurar que los empleados que trabajan en cada una de las funciones y niveles pertinentes tengan conocimiento de: -La importancia de la conformidad con la política y procedimientos de S & SO y con los requisitos del sistema de gestión de S & SO. -Las consecuencias reales o potenciales, de sus actividades de trabajo para la S & SO y los beneficios que tienen en S & SO el mejoramiento en el desempeño personal. -Sus funciones y responsabilidades para lograr la conformidad con la política y procedimientos de S & SO y con los requisitos del sistema de gestión de S & SO, incluido la preparación para emergencias y los requisitos de respuesta. -Las consecuencias potenciales que tiene apartarse de los procedimientos operativos especificados. (NTC-OHSAS 18001, 2001) 2.12.1. Control operativo Dentro del control operativo, se hace necesario reconocer las operaciones y actividades asociadas con riesgos identificados donde se deba aplicar medidas de control. La organización debe planificar estas actividades, incluido el mantenimiento, con el fin de asegurar que se lleven a cabo bajo condiciones especificadas, para lo cual debe: -Establecer y mantener procedimientos documentados para cubrir situaciones en que su ausencia pueda causar desviaciones de la política y objetivos de S & SO. 71 -Estipular criterios de operación en los procedimientos. -Establecer y mantener procedimientos relacionados con los riesgos identificados de S & SO de los bienes, equipos y servicios que la organización compre y/o utilice y comunicar los procedimientos y requisitos operativos pertinentes a los proveedores y contratistas. -Establecer y mantener procedimientos para el diseño del sitio de trabajo, procesos, instalaciones, maquinaria, procedimientos operativos y organización del trabajo, incluso su adaptación a las capacidades humanas, con el fin de eliminar o reducir los riesgos de S & SO. (NTC-OHSAS 18001, 2001) 72 3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN 3.1. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA El manual de Bioseguridad del laboratorio de Biotecnología aplicada, fue creado no solamente para evaluar los riesgos existentes, sino también para proporcionar los parámetros indicados para su control, así como para permitir la documentación de los principales procedimientos utilizados para la obtención de productos y procesos de interés biotecnológico; del mismo modo, y debido a los cambios observados en la normatividad actual, se hace necesario realizar una revisión y actualización de la documentación y del manual de Bioseguridad (primera versión), así como la elaboración de los procedimientos operativos estándar para la realización de los procesos de producción de inóculos de hongos y bacterias utilizadas como biocontroladores, productores de enzimas, probióticos, productores de etanol y fitopatógenos utilizados en investigación. La actualización y revisión de la primera versión del manual de Bioseguridad, así como la realización de un documento ágil para su análisis dentro del laboratorio, y la elaboración de la evidencia documentada de los procedimientos a seguir para la ejecución de los procesos de producción de inóculos y los procesos de producción de metabolitos de interés, servirá como una herramienta organizada y sistemática para dar cumplimiento a la legislación que hace énfasis en la realización y actualización de los manuales de Bioseguridad, valorados por su evidencia documentada. 73 3.2. JUSTIFICACIÓN Debido a las actividades que se realizan en los laboratorios de microbiología, como el laboratorio de Biotecnología aplicada, se hace necesaria la revisión y actualización del manual de Bioseguridad existente, y de esta manera documentar el estado actual y las actividades realizadas dentro del laboratorio, permitiendo así un mayor enfoque en la mejora y el control de los riesgos; este proceso es un primer paso para iniciar el desarrollo de la implementación del sistema de gestión de calidad para laboratorios, con el cual se podrán tomar decisiones y medidas necesarias para mejorar las actividades del laboratorio, su imagen frente a usuarios, entidades gubernamentales y permitir la acreditación en competitividad por la SIC. El manual de bioseguridad describe prácticas microbiológicas especiales y estándar así como equipos de seguridad e instalaciones, los cuales son recomendados según el nivel de bioseguridad del laboratorio. Además incluye conceptos básicos en materia de seguridad biológica. Es de gran relevancia actualizar la documentación planteada inicialmente, que abarque la elaboración de los procesos de producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés, así como la realización de un material de fácil manejo para los analistas del laboratorio, que permita un adecuado manejo de los equipos utilizados en investigación. 74 4. OBJETIVOS 4.1 Objetivo general • Elaborar los procedimientos operativos estándar para la producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés, y actualizar el manual de bioseguridad del Laboratorio de Biotecnología Aplicada de la Facultad de Ciencias - Pontificia Universidad Javeriana. 4.2 Objetivos específicos • Revisar la documentación existente y sacar de circulación los documentos que ya no sean aplicables o vigentes dentro del laboratorio de Biotecnología Aplicada. • Renovar y actualizar las fichas técnicas de la colección de microorganismos del laboratorio de Biotecnología Aplicada. • Actualizar y complementar las hojas de seguridad de los reactivos químicos y medios de cultivo del laboratorio. • Elaborar los procedimientos operativos estándar para la producción de inóculos de hongos y bacterias utilizadas como biocontroladores, productores de enzimas, probióticos, productores de etanol y fitopatógenos utilizados en investigación. • Elaborar un material interactivo, útil como modelo didáctico dentro del laboratorio de Biotecnología aplicada, que permita facilitar la comprensión de las actividades realizadas para investigación con la utilización de los biorreactores a escala de laboratorio. 75 5. MATERIALES Y MÉTODOS 5.1 Diseño de la investigación Por medio de una investigación de tipo observacional, analítica y descriptiva, se recopiló la información relacionada con practicas tales como: control de proceso de almacenamiento de productos químicos y su manipulación, almacenamiento y colección de cepas de microorganismos del laboratorio de Biotecnología aplicada, equipo para preparación y respuesta ante emergencias, procesos de revisión y aprobación para procedimientos operativos estándar. 5.1.1 Población de estudio y muestra Laboratorio de Biotecnología aplicada del Departamento de Microbiología de la Facultad de Ciencias - Pontificia Universidad Javeriana. 5.2 Métodos Se realizó una recopilación de datos por medio de la observación de las prácticas y proyectos de grado llevados a cabo por el laboratorio, entrevistas personales con el coordinador, revisión y verificación de la documentación anterior y de información obtenida a través de registros y manuales de procedimientos establecidos. De esta manera se buscó determinar el estado de vigencia de la documentación del laboratorio frente a los objetivos y metas planteadas. Por medio de estos resultados se inició la realización de las actualizaciones pertinentes y los aspectos relevantes que aun no habían sido documentados. 76 5.3 Recolección de la información • Fuentes primarias: Por medio de comunicaciones y reuniones internas con el coordinador del laboratorio, se buscó determinar el alcance de las actividades, la revisión de la documentación y la revisión del manual de Bioseguridad; también se obtuvo información por medio de comunicaciones y reuniones internas con el director del proyecto para revisión y evaluación de la metodología y realización de los procedimientos. • Fuentes secundarias: Se realizó revisión de bibliografía y normatividad que fuera pertinente para implementación, haciendo el reconocimiento de los parámetros anteriores obtenidos en la primera versión del manual de Bioseguridad. 5.4 Análisis de la información A partir de la información recolectada se precisó la realización de la documentación mediante el programa de gestión y control documental para los laboratorios del departamento de microbiología (Guarnizo, 2005) definiendo los procedimientos que determinan las actividades realizadas dentro del laboratorio y la forma de realización de cada protocolo de producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés, documentación sobre las cepas del laboratorio, hojas de seguridad de reactivos y manual de bioseguridad. 77 6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Como resultado de éste trabajo, el laboratorio de Biotecnología aplicada ha acopiado la documentación de los procedimientos operativos para la realización de los procesos de producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés utilizados en investigación (Ver anexo 1), obteniendo 21 procedimientos en total; cada uno de éstos procedimientos fue elaborado formulando su objetivo, el alcance, la responsabilidad, la frecuencia, el manejo de residuos, los documentos utilizados como referencia para su elaboración y el contenido, que incluye definiciones, fundamento, materiales, el procedimiento a realizar y los anexos. Dentro de los documentos específicos de actualización de la colección de microorganismos y sus fichas técnicas (Anexo 2), se identifican 20 grupos de microorganismos, entre los que se encuentran: Bacterias termófilas productoras de enzimas amilolíticas. Bacterias termófilas productoras de enzimas celulolíticas. Bacterias termófilas productoras de enzimas lipolíticas. Bacterias termófilas productoras de enzimas pectinolíticas. Bacterias termófilas productoras de enzimas proteolíticas. Bacterias termófilas productoras de enzimas quitinolíticas. Bacterias termófilas productoras de enzimas amilolíticas-proteolíticas (doble actividad) Actinomicetes termófilos Bacterias mesófilas productoras de enzimas amilolíticas. Bacterias mesófilas productoras de enzimas celulolíticas. Bacterias mesófilas productoras de enzimas proteolíticas. Microorganismos promotores de solubilizadoras) Microorganismos biofertilizantes 78 crecimiento (bacterias fosfato Microorganismos biocontroladores Microorganismos fitopatógenos Microorganismos productores de solventes Microorganismos probióticos Microorganismos tolerantes a metales pesados Microorganismos ligninolíticos Cepas docencia. Cada grupo de microorganismos posee parámetros de catalogación como son la fuente de origen, su temperatura de almacenamiento, la temperatura óptima de crecimiento, el nivel de bioseguridad al que pertenece, el tipo de conservación en el que se encuentra, las condiciones óptimas de producción así como el medio de cultivo apropiado para ésta, el producto generado por el microorganismo, el anterior código de ubicación y el código asignado en ésta actualización. Respecto a la actualización de las hojas de seguridad de reactivos y medios de cultivo (Anexo 3), se obtuvo un total de 42 hojas de seguridad de reactivos y medios, relacionados a continuación: 1-Butanol 3,4 Dimetoxibencil alcohol 96% ABTS Ácido 3,5-Dinitrosalicílico Ácido 5,5-dietilbarbitúrico, sal sódio Ácido Clorhídrico Fumante 37% Ácido Nítrico Ácido Orto-Fosfórico 85% Ácido Succínico Dimetil éster Ácido Succínico, hexahidrato sal de disodio Agar Bacteriológico (Agar # 1) 79 Agar BHI Agar Dermacel Agar Endo Amoxicilina (1g/tableta) Ampicilina 500g Caldo EC (Coliformes Fecales) Caldo LB (Coliformes Fecales) Carboximetilcelulosa Celulosa Microcristalina Coloidal EDTA (sal disodio) Electrolito O2 Fenolftaleína Fosfato de Amonio dibásico Fosfato de Sodio dibásico 12-hidrato L(+) Ácido Tartárico Melaza Negro Sudan B Quitina Rojo Congo Rojo de Fenol (Sal de Sodio) Rojo de Nilo Sales Biliares Silicona Emulsionada 60% Solución llenante-Electródo de Oxígeno disuelto Sulfato de Cromo III Sulfato de Manganeso monohidratado Tartrato de Sodio y Potasio 4-hidrato Tiamina Triptona Triptosa 80 Zinc en polvo Además se actualizo el manual de bioseguridad del laboratorio (Anexo 4) y se desarrollo un material interactivo, que permite facilitar la comprensión sobre la utilización de los biorreactores a escala de laboratorio. La documentación de los procedimientos operativos estándar para la producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés, permite al laboratorio de Biotecnología aplicada, tener la información adecuada para realizar cada proceso de producción de hongos y bacterias utilizadas como biocontroladores, productores de enzimas, probióticos, productores de etanol y fitopatógenos, con los cuáles se efectúan análisis e investigaciones biotecnológicas. Estos procedimientos documentados sirven de evidencia para una futura implementación de un sistema de gestión de calidad en el laboratorio, debido a que esta documentación, es exigida en los requisitos de gestión de la norma NTC-ISO-IEC 17025:2005. Los documentos obtenidos con la realización del presente proyecto, son ubicados dentro del laboratorio, en función de permitir el fácil alcance de estos al personal que trabaja en el laboratorio; es responsabilidad del coordinador del laboratorio conservar y actualizar la documentación alcanzada. Por otra parte, con la actualización realizada a la colección de microorganismos y sus fichas técnicas, se brinda una mejor información respecto a la localización y ubicación de las cepas de investigación y de docencia utilizando una nueva codificación para cada cepa, así mismo evidenciando las características generales de cada microorganismo, su utilidad, el medio de cultivo preferencial de crecimiento, su temperatura de conservación y su temperatura óptima de crecimiento. 81 La actualización de las hojas de seguridad de reactivos y medios de cultivo permite al personal del laboratorio conocer más fácilmente la información de seguridad y riesgo de cada sustancia química presente en el laboratorio. Cada ficha técnica de los reactivos encontrados manifiesta la composición del reactivo o medio de cultivo, las medidas de bioseguridad necesarias que debe tomar el personal para su manipulación, el nivel de toxicidad y peligrosidad, y el sitio adecuado para su almacenamiento. El manual de bioseguridad obtenido se ha constituido como una guía que facilita el entendimiento de los protocolos y actividades microbiológicas apropiadas en términos de seguridad biológica, tanto para los analistas e investigadores, como para el entorno ambiental y disposición adecuada de residuos. El manual proporciona información detallada de las acciones a tomar en caso de accidentes con material biológico o químico, y procedimientos para evitar riesgos físicos, químicos y biológicos. Así mismo, el desarrollo del material interactivo facilita la formación de los futuros analistas sobre el montaje y control de los reactores a escala de laboratorio, permite un cómodo desarrollo de las investigaciones realizadas y una mejor adaptabilidad a las actividades biotecnológicas. 82 7. CONCLUSIONES - Los procedimientos operativos estándar para la producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés, permite al laboratorio de Biotecnología aplicada, tener la información adecuada para realizar cada proceso de producción de hongos y bacterias utilizadas como biocontroladores, productores de enzimas, probióticos, productores de etanol y fitopatógenos. - La documentación obtenida, permite al laboratorio de Biotecnología aplicada estar más cerca de una futura acreditación por la norma NTC-ISOIEC 17025: 2005, ya que esta documentación cumple en parte los requisitos administrativos exigidos en la norma. - El manual de bioseguridad obtenido se ha constituido como una guía que facilita el entendimiento de los protocolos y actividades microbiológicas apropiadas en términos de seguridad biológica, tanto para las personas analistas e investigadores, como para el entorno ambiental y disposición adecuada de residuos. - La actualización de la documentación de las hojas de seguridad de reactivos y medios de cultivo obtenida, así como la actualización de la colección de microorganismos y sus fichas técnicas, permite al personal del laboratorio de Biotecnología aplicada conocer más fácilmente la información de seguridad y riesgo de cada sustancia química y cepa utilizada en investigación; da pautas para su manejo adecuado, dentro de las practicas de bioseguridad. 83 8. RECOMENDACIONES - Se recomienda mantener una copia de los documentos generados, en medio electrónico para facilitar las próximas actualizaciones de la documentación. - Implementar un programa de control de la documentación que especifique la secuencia de actividades para la aprobación, elaboración o enmienda de los documentos de calidad y los documentos técnicos. - Reforzar la formación de los analistas sobre las buenas prácticas de laboratorio, verificando el control de lectura del manual de bioseguridad elaborado mediante este trabajo. - Organizar la documentación en fólderes plásticos de argolla triple con forros plásticos para cada uno de los documentos generados de modo que sean protegidos y se facilite su revisión. 84 9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALEXANDER, A. 1998. Manual para documentar sistemas de calidad. Primera Edición. Editorial Prentice Hall. México. BENAVIDES G, F; RUIZ F, C; GARCÍA, G; A. Artículos de Seguridad Ltda. (ARSEG). 1991. Tecnología en Calidad Salud Ocupacional [en línea]: Compendio de normas legales sobre salud ocupacional <http://www.itm.edu.co/InfoAcademica/Programas/Pro_Tecnologias/T_Calida d/MICROS/SaludOcupacionalWeb.pdf> [Consulta: 25 abr. 2007.] Colombia 46 p. BONILLA M, A; ROZO S. A. 2004. Identificación, análisis de riesgos y diseño del manual de bioseguridad e instructivos en los laboratorios de microbiología de alimentos, microbiología ambiental y de suelo, biotecnología aplicada y parasitología molecular correspondientes al departamento de microbiología de la facultad de ciencias. Microbiología Industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Bogotá, D. C. Bioseguridad en el laboratorio de microbiología y biomedicina. Centros para el control y la prevención de enfermedades (CDC) 2006. Cuarta edición. Curso de gestión de calidad para laboratorios. Organización Panamericana de la Salud (OPS) 2005. Washington, D. C. DELGADO, E; DÍAZ, P. A. 2007. Elaboración y documentación del programa de limpieza y desinfección de los laboratorios del departamento de microbiología de la Pontificia Universidad Javeriana. Microbiología Industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Bogotá. 85 FONTALVO, T. 2004. Herramientas efectivas para el diseño e implantación de un sistema de gestión de la calidad ISO 9000:2000. Primera Edición. Editorial ASD 2000. Bogotá. Colombia. GUARNIZO, J. 2005. Elaboración y documentación del programa de gestión y control documental en los laboratorios del departamento de Microbiología que prestan servicios de la facultad de ciencias en la Pontificia Universidad Javeriana, de acuerdo con los requisitos de la norma NTC-ISO-IEC 17025:1999. Microbiología Industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de Ciencias. Departamento Microbiología. Bogotá. HOYLE, D. 1996. ISO 9000 Manual de sistemas de Calidad. Tercera Edición. Editorial Paraninfo. España. NAVA, V. 2005. ISO 9000:2000, estrategias para implementar la norma de calidad para la mejora continua. Primera edición. Limusa-Noriega editores. México. NTC-ISO 9000:2000. Sistemas de gestión de la calidad. Fundamentos y vocabulario. Editada por ICONTEC. Bogotá. Colombia. NTC-ISO 9001:2000. Sistemas de gestión de la calidad. Requisitos. Editada por ICONTEC. Bogotá. Colombia. NTC-ISO 14001:2004. Sistema de gestión ambiental. Requisitos con orientación para su uso. Editada por ICONTEC. Bogotá. Colombia. 86 NTC-ISO-IEC 17025:2005. Requisitos generales de competencia de laboratorios de ensayo y calibración. Editada por ICONTEC. Bogotá. Colombia. NTC-OHSAS 18001:2001. Sistema de gestión en seguridad y salud ocupacional. Editada por ICONTEC. Bogotá. Colombia. Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Organización Mundial de la Salud (OMS) 2005. Tercera Edición. Ginebra, Suiza. Manual de Buenas Prácticas de Laboratorio. Prácticas de calidad reguladas para laboratorios de investigación y desarrollo no clínico. Organización Mundial de la Salud (OMS), TDR, Banco Mundial. 2000. Primera Edición. Ginebra, Suiza. 87 10. ANEXOS Anexo 1. Documentación de los procedimientos operativos para la producción de inóculos de microorganismos y metabolitos de interés. Anexo 2. Documentos específicos de actualización de la colección de microorganismos y sus fichas técnicas. Anexo 3. Documentación de las hojas de seguridad de reactivos y medios de cultivo. Anexo 4. Manual de bioseguridad del laboratorio de Biotecnología aplicada. Anexo 5. Ruta sanitaria-Ruta de evacuación de residuos del laboratorio de Biotecnología aplicada 88