- BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA A LA MEDICINA CLÍNICA

- BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA
A LA MEDICINA CL
ÍNICA
CLÍNICA
- BACTERIOLOG
ÍA ESPECIAL
BACTERIOLOGÍA
Dr. Diego Faccone
[email protected]
Servicio Antimicrobianos
Departamento Bacteriología
Instituto Nacional de Enfermedades infecciosas
ANLIS – “Dr. Carlos G. Malbrán”
BIOLOGIA
BIOLOGIA MOLECULAR
MOLECULAR APLICADA
APLICADA AL
AL LABORATORIO
LABORATORIO DE
DE MICROBIOLOGIA
MICROBIOLOGIA
CONTENIDOS
I.
CONCEPTOS BASICOS INTRODUCTORIOS
II.
CONCEPTOS BASICOS DE GENETICA MICROBIANA
III. TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
IV.
METODOLOGÍAS MOLECULARES
V.
TIPIFICACIÓN MOLECULAR
VI.
EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR
BIOLOGIA
BIOLOGIA MOLECULAR
MOLECULAR APLICADA
APLICADA AL
AL LABORATORIO
LABORATORIO DE
DE MICROBIOLOGIA
MICROBIOLOGIA
SEMINARIOS
1- BIOINFORMÁTICA  ADN
2- BIOINFORMÁTICA  PROTEÍNAS
Bibliografía
-
Lewin B., “Genes”
Alberts B., “Biología Molecular de la Célula”
EXAMEN
JUEVES 12 de DICIEMBRE 18HS
BIOLOGÍA MOLECULAR
DOGMA CENTRAL DE LA
BIOLOGIA MOLECULAR
Replicación
Traducción
Transcripción
ADN
ARN
Proteína
Transcripción
inversa
Replicación
Francis Crick (1958/1970)
1
Desoxiribonucleotido = ADN
-Base nitrogenada
BASE
OH
HO
-Ácido fosfórico
P
ESTRUCTURA DEL ADN
O
O
5´
CH2
Desoxiadenosina
(adenina)
O
4´
C
H H
H H
3´
OH
-Pentosa
NH2
1´
N
N
2´
CH
H
HC
N
N
Ribonucleotido = ARN
P
P
O
P
BASE
OH
HO
P
O
O
5´
CH2
O
nucleósido
1´
4´
H
OH
H
3´
OH
H H
2´
OH
ATP ADP AMP
Tri- Di-
Mono-
Nucleótido
DESOXINUCLEOTIDOS (dNTP´s)
ADENINA
GUANINA
NH2
O
C
- ATP
- ADP
- AMP
N
N
H
CH
HC
P
P
N
P
P
O
P
OH
H
- TTP
- TDP
- TMP
P
O
P
OH
O
TIMINA
P
- ATP
- ADP
CH
- AMP
N
N
O
P
N
H2 N C
N
N
C
(H, uracilo  ARN)
NH2
C
C
CITOSINA
N
C CH3
N
CH
C
CH
C
CH
O
N
O
OH
P
P
P
N
O
OH
- CTP
- CDP
- CMP
P
OH
H2 C O
T
A
C
G
A
T
P
H2 C O
O
P
OH
G
2’:
de
s
C
ox
i
P
H2 C O
P P
5’
P
H2 C O
3’
H2 C O
P
O
H2 C O
O
P
P
H2 C O
-O
P
Grupo fosfato
H2 C O
P P
... 2 de abril de
1953, Molecular
Structure of
Nucleic Acids.
A Structure for
Deoxyribose
Nucleic Acid.
Nature 171: 737.
J. D. WATSON and F. H. C. CRICK
2
BIOSINTESIS DE ADN
P
P
O
O
P
O
P
O
P
O
OH
P P P
O
OH
5’
ADN (OH)n + desoxinucleótido trifosfato (dNTP)
3’
ADN (OH)n+1 + PPi
Replicación semiconservativa
Original
Nueva
Nueva
Original
3
REPLICACIÓN DEL ADN
Origen de replicación
(región rica en A-T):
único (bacterias), oriC
múltiple (eucariontes)
REPLICON:
fragm. de ADN en el cual
sucede un evento individual
de replicación;
posee los elementos
necesarios para el control
replicativo.
Velocidad
Organismo No. repl. Longitud
Bacteria
1 4.200 kb 50.000 pb/min
3.600 pb/min
Levaduras
500
40 kb
2.600 pb/min
Insectos
3.500
40 kb
2.200 pb/min
Raton
25.000
150 kb
Plantas
35.000
300 kb
3
REPLICACIÓN DEL ADN
Cadena
“lagging”
Horquilla de
replicacion
5’
3’
3’
5’



5’
3’
Cadena “leading”
ENZIMAS:
* Helicasa + prot. SSB, desenrolla ADN doble cadena:

* Primasa (ARNpol; dnaG), fragm. ARN 10 pb :
* ADN replicasa:
DNApol III, síntesis (sub. , polC, dnaE).
* DNApol I: actividad exonucleasas 3’
* ADN ligasas:
5’ “proof reading” + 5’
3’.
4
TRANSCRIPCIÓN
ARN Ribosomal
ADN RNApol
ARN Mensajero
Proteína
ARN Transferencia
INICIACIÓN
Promotor


ARN
rpoA: ensamblado enz.,
reconocimiento del Pr,
activadores

rpoB
catálisis
’

rpoC
rpoD: especificidad
del Promotor
4
TRANSCRIPCIÓN
REGIÓN PROMOTORA
upstream
Codificante
- 35
- 10
+1: Inicio ARN
5’
3’
5’
Templado
17 bp
TTGACA
7 bp
TATAAT
downstream
4
TRANSCRIPCIÓN
TERMINACIÓN
ARN
A Ter. Intrínsecos
loop
B Rho-dependiente
5’
50-90 pb;
C, G
G-C
hairpin
stem
+
UUUUUU
5’
-UUU
REGIÓN TERMINADORA
Rho
4
TRANSCRIPCIÓN
UNIDAD TRANSCRIPCIONAL
REGIÓN
REGULADORA
MARCO ABIERTO DE LECTURA
´TERMINADOR
BACTERIAS
Transcripción
+
Traducción
+
Degradación
Sin
protección
Vida ½
2 min.
EUCARIONTES
Transcripción
Protección:
5’-CAP
+
3’-poliA
Vida ½
4-24 hs.
Sin
procesamiento
posterior
Procesamiento
post-transcripción
“splicing”:
ARNm maduro
5
TRADUCCIÓN: CÓDIGO GENÉTICO
ADN 5’
ATA GAT CCC TTC
ARNm 5’
AUA GAU CCC UUC
RIBOSOMA
Codones
Aminoacil-ARNt
ARNt
ARNt
ARNt
ARNt
Anticodón
AAG
PROT.
NH2
Phe
Ile - I Asp - D Pro - P Phe - F
COOH
C 5’
C
A
3’OH
5
TRADUCCIÓN: CÓDIGO GENÉTICO
4 nucleótidos
C-G-A-T
43=64 codones
DEGENERACION
20 aminoácidos
Ile AUU
CUU
CUC
CUA
CUG
UCU
UCC
UCA
UCG
ACU
ACC
ACA
ACG
CGU
CGC
CGA
CGG
Leu
Ser
Thr
Arg
GUU
GUC
GUA
GUG
CCU
CCC
CCA
CCG
GCU
GCC
GCA
GCG
GGU
GGC
GGA
GGG
Val
Pro
Ala
Gly
AUC
AUA
UUU
UUC Phe
AAU
AAC Asn
AGU
AGC Ser
UUA
UUG Leu
AAA
AAG Lys
AGA
AGG Arg
Met
Cys
CAU
CAC His
GAU
GAC Asp
UAU
UAC Tyr
UGU
UGC
CAA
CAG Gln
GAA
GAG Glu
UAA
UAG
AUG
Trp UGG
Stop UGA
Enlace peptídico
Aminoácido 1
Grupo R
O
R–C–C
H
O
R–C–C
H-N-H
H
H
O
H
O
C
–
C
–
-H
R
-N
H
Carboxi-terminal
Aminoácido 2
H-N-H
O
H
O
H
Amino-terminal
Grupo R
 No polares o hidrófobos
Polares – sin carga
– con carga positiva
– con carga negativa
Enlace peptídico
H O
COOH
H
R–C–C–N –C–R
NH2
H
1º NH2  COOH 2º
+
H2O
Enlace peptídico
6
TRADUCCIÓN
RIBOSOMA
50S
ARNr 23S (2904 pb) + 5S,
31 proteínas diferentes
70S
30S ARNr 16S
21 proteínas diferentes
66% ARNr
5’
+1
30 nucleótidos
AAACAGGAGG (10 nuc)
Shine-Dalgarno
(RBS)
AUGUCGAAGCAA
GUG
Región
UUG
codificante
Iniciación
3’
UGA GCG
UAG
UAA
GUC GU
C CC
U
A UU
GA
U UUA AAA
UUUAUG - - - -
UUU
GG
U
U
- C AA
GGAGG AAU
U
G
UA
AAA UAC
Sitio P
Sitio A
Transpeptidación
Canal de
salida
5’
3’
G
UGA GC
UAG
UAA
U
GA
GUC GU
CCC
A
UU U U
UA AAA UUUAUG - - - - - C
UUU AAA
AAU
NH2
UA
C
U
AAU
GG
AG
UGG G AAU
G
UA
5’
3’
UGA GCG
UAG
GUC GU
CC
U
CA
GA
UU
U UUA AAA
AAU
AAA
UAA
GGU
CAG
CAG
CUA
NH2
UUU
UUUAUG - - - - - C
AA A
U
AAU
GG
AG
UGG G AAU
G
UA
UA
C
5’
3’
5
CA
G
AA
U
G
G
COOH
UUU
CAG
A
A
A
U
C
A
U
A
UA
AA
U GA
UAG CGC
UAA
Plegamiento
NH2
C
3’
UUUAUG - - -
CA
G
AA
C GC
A
U
C
GG
AG
UGG G AAU
G
UA
A
COOH
A
UUU
U
GG
A
CAG
AA
UAA
U UUA AAA
UU
A
A
--C
A
U
UGA GCG
UAG
GUC GU
CC
U
A
CA
G
UU
NH2
5
7
MARCO ABIERTO DE LECTURA = ORF
5’-UCCAUGCAACAUGGAUGCGAU….
RNAm
5’-UCC AUG CAA CAU GGA UGC GAU ….
5’-UC CAU GCA ACA UGG AUG CGA U ….
5’-U CCA UGC AAC AUG GAU GCG AU ….
AUG
UGA
5’-UCCAUGCAACAUGGAUGCGAUGUCGAAGUAUUGACUAA...
AUG
AUG
1º
2º
3º
MLA (ORF)
AUG
AUG
AUG
UGA
L
UAA
L
7
ORF´S
ARNm es policistrónico
Genes
Promotor
RBS
ARNm
OPERON
Operador
Varios genes bajo el
comando de un solo Pr
Gen regulatorio
Pr
lacZ
lacY lacA
LacZ
LacY LacA
Pr
Pr
+
Genes
regulatorios
Regulador
(represor)
(-)
LacI
+
Estructura primaria
NH2
COOH
Estructura secundaria
Giros b
α hélice
Paralela
Hojas β
Antiparalela
Piruvato quinasa
1 polipéptido 
4 dominios
Estructura terciaria
Fibrosa
Globular
 Dominio
Estructura cuaternaria
Globular
 Hemoglobina (4 polipéptidos o
subunidades)
Fibrosa
 Colágeno
Microfibrillas
Cadena de
tropocolágeno
Fibrilla
Fibra de
colágeno
Cadena de
aminoácidos
GENETICA MICROBIANA
GENOMAS MICROBIANOS
GEN.
Unidad mínima de ADN que
contiene la información
necesaria para la expresión de
una proteína o ARN.
GEN
OPERON.
Unidad que co-transcribe uno o más
genes regulados por una sola región
operador/promotor.
CROMOSOMA BACTERIANO.
Molécula de ADN circular
(generalmente) que contienen los
genes ESTRUCTURALES Y
FUNCIONALES de la bacteria.
CROMOSOMA
BACTERIANO
GENOMA.
Toda la información genética de
la bacteria: cromosoma +
elementos extracromosómicos
+
CROMOSOMA
+ PLASMIDOS
GENOMAS MICROBIANOS
GENOMAS MICROBIANOS
¿E. coli
con
distintos
tamaños?
⋍ 5,5 Mbp
⋍ 4,6 Mbp
⋍ 4,3 Mbp
⋍ 2,2 Mbp
Algunos genomas de E. coli secuenciados
8
MUTACIONES
PUNTUALES:
ADN
ATA GAT CCC TTC
Replicación
ADN
ATA GAT GCC TTC
REARREGLOS:
ADN
ATA GAT CCC TTC
inserción
ATA GA
deleción
ADN
T CCC TTC
8
MUTACIONES
PUNTUALES:
Espontáneas
10-7 / 10-11 por base
Inducidas por agentes mutagénicos
Físicos
 Radiaciones
10-6 por gen
Transición (más frec.):
Purina (A)
Purina (G)
Pirimidina (C)
Pirimidina (T)
no ionizantes; ionizantes
Químicos  Análogos de base
 Modificación qca.
 Agentes alquilantes
 Agentes intercalantes
Biológicos  Inserción/deleción de
elementos genéticos
Sitio dirigida  Ingenieria genética
Transversión (menos frec.):
Purina (A, G)
Pirimidina (T, C)
C
O
Ejemplo:
mutación
inducida
O
NH2
N
CH
C
CH
ác. nitroso
O
N
CITOSINA
C≡G
A=T
H
C
N
CH
C
CH
N
URACILO
ác. nitroso
ác. nitroso
T=A
G≡C
8
MUTACIONES
PUNTUALES:
5’…T A C…
…A T G…5’
MUTACIONES
ADN
AAC
TTG
TAG
ATC
REPLICACION
NORMAL
TAT
ATA
TAC
ATG
Alelos
TRANSCRIPCION
ARN
codón AAC
Asparagina
codón UAG codón UAU
Stop
Tirosina
codón UAC
Tirosina
TRADUCCION
PROTEINA
Mutación
MISSENSE
Mutación
Mutación
NONSENSE SILENCIOSA
WILD TYPE
8
MUTACIONES
REARREGLOS:
Inserción de ADN exógeno
ORF
INSERTO
Interrupción ORF:
Interrupción promotor:
- Proteína quimera: ¿funcionalidad?
- Proteína trunca
- Modificación nivel de expresión:
¿expresión?
- Expresión de proteína del inserto
8
MUTACIONES
REARREGLOS:
Deleción de ADN
ORF
ELEMENTO MOVIL
Escisión
ELEMENTO MOVIL
Eliminación ORF:
- Perdida de funcionalidad
ORF
Duplicación ORF
9
GENOTIPO Y FENOTIPO
GENOTIPO: información genética
de un organismo
FENOTIPO: características o propiedades
observables
de
un
organismo,
resultantes de su genotipo.
Genotipo relevante: diferencias con
el organismo “wild-type”
lacZ
hisC1
LacZ-: no fermenta galactosa
HisC-: no sintetiza histidina
rpsL
StrR: resistente a streptomicina
recA
RecA-: incapaz de recombinar
MUTACION: cambio heredable en la
secuencia de bases del genoma de
un organismo.
MUTANTE: organismo cuyo genoma
posee una mutación.
10
REVERSIONES
ón
i
c
e
Del
Cepa salvaje
o wild type
Inserción
Mutante por
deleción
Mutante por
inserción
Delec
ión
le
a
tu
n
pu sitio
n
ió mo
c
a
t mis
u
M el
Mutación
puntual
Mutante por
sustitución
Mutación
supresora
n
Revertante
verdadera
Revertante
2º sitio
10
REVERSIONES
Fenotipo salvaje
en
l
a
tu
n
u
p
n
tio
i
ó
s
i
c
o
ta
m
u
s
i
M
el m
Fenotipo salvaje
Revertante
verdadera
Mutación
Mutante por
sustitución
Fenotipo mutante
*
M
su uta
pr ció
es n
or
a
Cepa salvaje
o wild type
Revertante
2º sitio
*
Fenotipo revertante
de 2º sitio
*
El fenotipo del mutante en 2º sitio anula el
fenotipo del mutante inicial. Se revierte al
fenotipo salvaje
11
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO: TRANSFORMACIÓN
ADN
“desnudo”
“Uptake”
Recombinación
de ADN
Homologa
Cepa
COMPETENTE
Cepa
TRANSFORMANTE
Alelo R
(exógeno)
Alelo S
(bacteriano)
RecA
Recombinante
(gen en mosaico)
11
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO: TRANSFORMACIÓN
Natural
Bacillus,
Streptococcus
Haemophilus
Neisseria
Inducida
- Feromonas
- pH
Estado de competencia  15-20 min
CSP
Peterson MM 51.1051-70 (2004)
Membrana
celular
Morrison RM 151:445-451 (2000)
12
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO:
TRANSDUCCIÓN
Bacteriófagos:
Genoma viral
Cápside
Cola
Ciclo lítico
Receptor
Lisis bacteriana
Multiplicación
Ciclo lisogénico
Inyección
Inducción
Integración
Duplicación
bacteriana
12
ADQUISICIÓN DE ADN
EXÓGENO:
TRANSDUCCIÓN
Regulación ciclos lítico y
lisogénico del fago
Lambda
OL/PL
Head
Tail
OR/PR
Recomb
PR´
Replic Lys
cl
12
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO: TRANSDUCCIÓN
Bacteriófagos
Fago λ
Fago T4
Fago M13
• dsADN
• Ciclos lítico y lisogénico
• 48,5 Kb
• E. coli
• dsADN
• Ciclo lítico
• 165 Kb
• E. coli
•Presencia de genes esenciales
y no esenciales
• ssADN
• Ciclo lítico
• 6,4 Kb
• E. coli
• Requiere pili F para infección
Transducción
• Transducción generalizada: ADN
bacteriano es empaquetado en el fago
 una proporción de ADN bacteriano
es inyectado en una nueva célula
infectada  recombinación homologa.
(105-108/cel; límite empaquetado)
• Transducción especializada: La
escisión imprecisa del profago hace que
el genoma viral contenga ADN
bacteriano (perdida de genes virales) 
fago defectivo?
12
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO:
TRANSDUCCIÓN
Bacteriófagos:
Genoma viral
Cápside
Cola
Ciclo lítico
Traducción generalizada
Receptor
Lisis bacteriana
Multiplicación
Ciclo lisogénico
Traducción
especializada
Inyección
Inducción
Integración
Duplicación
bacteriana
13
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO: CONJUGACIÓN
Genes relacionados con la
movilidad = MOB o Dtr
(DNA-transfer replication)
B
R
ep
MO
F
P
M
Plásmidos
•
•
•
•
ADN circular (ds)
extra-cromosomómico
autoreplicativo (replicasa)
heredable
Replicasa
Genes relacionados con la
conjugación/apareamiento =
MPF (mating pair formation)
ss-ADN
Receptor
Cepa DADORA
Cepa ACEPTORA
Cepa DADORA
Cepa TRANSCONJUGANTE
13
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO: CONJUGACIÓN
MOB  oriT + Relaxasa
- oriT = Origen de transferencia
- Relaxasa = Reconoce oriT en cis
Movilización de plásmidos
MO
B
T4CP
MP
T4CP = Proteína de acoplamiento
tipo IV
F
MO
B
T4SS
MPF  12-30 genes
- T4SS = Sistema de secreción
tipo IV
No movilizable
(sin modulo MOB o
MOB funcional)
No movilizable
Movilizable
Conjugativo
oriT relaxasa T4CP
T4SS
MOB
MPF
13
ADQUISICIÓN DE ADN EXÓGENO: CONJUGACIÓN
- Extracromosómico: autoreplicativo y heredable
- Tamaño variable: 2-300 Kb
- Numero de copias variable: 1-200 copias/célula
(bajo-medio-alto) (xej. ColE1⋍20 copias)
Plásmidos
Características
- Rango de hospedador: amplio o acotado
- Incompatibilidad: más de 20 grupos de INC
- Distintas funciones: rutas metabólicas, factores de
virulencia, genes de resistencia
- Baja frecuencia de perdida de plásmido (<10-7 cél)
- Sistemas veneno/antídoto (plásmidos R1)
- Plásmidos movilizables < plásmidos conjugativos
(genes MPF)
Compatibilidad de Plásmidos
Duplicación
celular
Plásmidos Compatibles
Se segregan conjuntamente
Plásmidos Incompatibles
Se segregan separadamente
13
ADQUISICIÓN DE ADN
EXÓGENO: CONJUGACIÓN
Transposones conjugativos
- ADN lineal, inserto en cromosoma o
plásmido.
- Distintas funciones: rutas metabólicas,
factores de virulencia, genes de
resistencia
- x ej: Tn916, Tn5397
14
RECOMBINACIÓN
HOMOLOGA
Secuencias homologas de
larga extensión
SITIO ESPECÍFICA
Secuencias específica
(fagos, transposon)
TRANSPOSICIÓN
Inserción en una secuencia
sin homología
(secuencias de inserción,
transposones)
Fago
Fago
Tn
Tn
14
RECOMBINACIÓN
HOMÓLOGA
Moléculas de ds-ADN
con secuencias
homólogas
Corte en una hebra de
ADN en cada duplex
homólogo (nicked)
Intercambio de hebras
cortadas con el otro
duplex homólogo
Desplazamiento del
punto de intercambio
2º corte en la misma hebra
Ligación
de “nicks”
Genoma no
recombinante pero con
región heteroduplex
2º corte en la otra hebra
Intercambio y
desplazamiento
del 2º punto de
recombinación.
Ligación de
“nicks”
Genoma
recombinante
reciproco
15
ELEMENTOS MOVILES
Secuencias de Inserción (IS) o
Transposon simple
Repeticiones invertidas
ATCCG
TAGGC
Transposasa
CGGAT
GCCTA
ATGCCTAGT
TACGGATCA
Secuencia Target
~ 9 bp
IS se insertan en:
- secuencia específica
- sitios calientes
- al azar
ATGCCTAGT
TACGGATCA
ATCCG
TAGGC
Transposasa
INSERTION SEQUENCE
Se generan
repeticiones directas
CGGAT
GCCTA
ATGCCTAGT
TACGGATCA
>500 IS´s agrupadas
en estas familias y
definidas por la
secuencia de la
Transposasa
Transposones Compuestos (Tn)
GENES FLANKEADOS
POR DOS SECUENCIAS DE INSERCION(IS)
IS en igual dirección
IS
GENES
IS
IS en dirección invertida
IS
GENES
IS
*Si ambos IS´s son iguales pueden
ser los 2 o solo 1 funcional
Gen resistencia
No funcional
IS10L
TET, CMP,
KAN, AMP
AATTC
TTAAG
Transposasa Resolvasa
TetR
IS10R
Tn10
Transposones Compuestos (Tn)
Transposición
Replicativa: Duplicación del Tn,
copia en sitio original y nuevo
(Transposasa + Resolvasa)
Tn
No-replicativa / Conservativa: El Tn
se mueve de un sitio a otro sin dejar
copia en sitio original (Transposasa)
Tn
Tn
Tn
Tn
Tn1546
ORF1
ORF2
vanR
vanS
vanH
vanA
vanX
vanY
vanZ
IRL
IRR
GTTAA
Tn1546
GTTAA
ORF1
ORF2 vanR vanS
vanH vanA vanX
vanY vanZ
GTTAA
IRL
IRR
ORF1:
Posible Transposasa
ORF2:
Posible Resolvasa
IR’s:
38bp caracteristicas de Tn3
Sitios res: 12bp repetidas en region intergenica de ORF1 y ORF2
vanA = vanR (Activador Transcripcion), vanS (Reg Negativo de la Transcripcion), vanH
(Deshidrogenasa), vanA (Ligasa), vanX (D,D-dipeptidasa), vanY (D,D-Carboxipeptidasa), vanZ (R Teico)
ORF1, ORF2, vanY, vanZ
 29-37% GC
vanS, vanR, vanH, vanA, vanX  41-45% GC
Distintos origenes
16
REGULACIÓN GENICA: INDUCCIÓN TRANSCRIPCIÓN
Factores externos
- Sustratos
- Factores ambientales
Activación de factores de transcripción:
- Fosforilación del FT
- Activación por unión al sustrato
Factores internos
- Metabolitos enzimáticos
Activación de factores de transcripción:
- Activación por unión al sustrato
16
REGULACIÓN GENICA
Operador
Gen regulatorio
Pr
+
LacY LacA
D
C
B
A
Pr
Represor inactivo
(-)
Represor
activo
LacZ
Operon lac
Operador
E
+
lacY lacA
Pr
Pr
Regulador
(represor)
(-)
LacI
Presencia de
triptófano
lacZ
E
No se expresa
operon triptófano
D
C
B A
Operon trp
Biosíntesis de
triptófano
Regulación expresión metilasa ErmC
Fin del
péptido
lider
Inicio del
péptido lider
1
2
Secuencia de
Shine-Dalgarno
MLSB inducible
4
3
Metilasa
ErmC
Secuencia de
Shine-Dalgarno
ERY
Inicio del
péptido lider
2
Fin del
péptido lider
Péptido
lider
Secuencia de
Shine-Dalgarno
4
1
Macrólido
de 14 o 15
miembros
3
CLI
EXPRESION DE LA
METILASA ErmC