OBSERVACIÓN DE LA MITOSIS EN CÉLULAS VEGETALES

OBSERVACIÓN DE LA MITOSIS EN
CÉLULAS VEGETALES
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OBJETIVO.
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Observación e identificación de las distintas fases de la mitosis en células vegetales.
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FUNDAMENTO TEÓRICO.
La mitosis es un proceso de reproducción celular por el que, a partir de una célula madre,
se originan dos células que tienen exactamente el mismo número y tipo de cromosomas que la
madre. Es un proceso cuya característica más importante es la duplicación del material genético y
en el que se pueden diferenciar cuatro fases: profase, metafase, anafase y telofase. Cada una de
estas fases viene determinada por un estado y posición diferente de los cromosomas durante el
proceso.
Fases de la mitosis.
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INTERFASE: Núcleos en interfase. La cromatina aparece bastante homogénea, a
excepción de zonas más claras que corresponden a los nucleolos.
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PROFASE: La cromatina comienza a condensarse. A medida que avanza este
estadio desaparece el nucleolo. Los“cromosomas” aparecen como filamentos
delgados.
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METAFASE: Cada cromosoma, integrado por dos cromátidas hermanas, se
dispone con su centrómero en el plano ecuatorial.
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ANAFASE: Las cromátidas hermanas se separan y comienzan a migrar hacia los
polos opuestos de la célula. Ahora los cromosomas se observan formados por una
sola cromátida, con los centrómeros dispuestos hacia los polos y los telómeros
hacia el centro de la célula.
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TELOFASE: No es posible individualizar los cromosomas. La cromatina
comienza a descondensarse en ambos núcleos hijos.
Para observar la mitosis en células vegetales se utilizan tejidos meristemáticos, en los que
las células se multiplican constantemente, por lo que será fácil "sorprender" algunas células en
distintas fases mitóticas.
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MATERIAL
Material de
laboratorio
Reactivos
Material
biológico
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Microscopio.
Mechero de alcohol.
Vidrio de reloj.
Portaobjetos y cubreobjetos.
Pinzas de madera.
Cuchilla o escalpelo.
Aguja enmangada.
Un vaso de precipitado (para enraizar la cebolla).
Ácido acético al 45 % (preparar 100 ml en frasco cuentagotas)
Orceína acética (preparar 100 ml en frasco cuentagotas)
Ácido clorhídrico 1 N ( preparar 50 ml en frasco cuentagotas)
Cebolla (también se podrían utilizar las raíces obtenidas a partir de
otros bulbos: ajos, puerros, jacintos, tulipanes, etcétera).
MÉTODO
1. Para conseguir raíces en crecimiento, se coloca el bulbo de cebolla (al que previamente se
habrán eliminado las raíces secas) sobre un vaso de precipitados (si es necesario se sujeta
mediante unos palillos). Se llena el vaso con agua hasta que toque superficialmente la zona
donde van a crecer las raicillas. Al cabo de 2 o 3 días empezarán a crecer las raíces.
También se pueden germinar semillas, para ello, se ponen en una placa de Petri con unos discos de
papel de filtro empapados de agua. Las placas se introducen en la estufa a 23-25°C hasta que se
produzca la germinación. Cuando las raíces tengan 1 cm se retiran de la estufa y se eligen las
semillas no contaminadas por hongos.
2. Elige una raíz joven (de unos 2 cm), lávala con agua y corta la punta a 5 mm del extremo.
3. Coloca la punta de la raíz en un vidrio de reloj. Para ablandar los tejidos e iniciar la tinción, se
cubre la raíz con orceína acética (orceína A) y clorhídrico 1 N en la proporción de 9:1, es
decir, 9 gotas de orceína por cada gota de HCI.
4. La hidrólisis debe hacerse en caliente, a unos 60 °C. Para ello, calienta el vidrio de reloj a la
llama del mechero, justo hasta que empiecen a desprenderse tenues vapores, ¡¡TENIENDO
MUCHO CUIDADO DE QUE NO HIERVA!!. Retíralo para que se enfríe y repite durante 8
minutos esta operación ( hasta 3 veces) , añadiendo más orceína si hiciera falta, de modo que
el líquido cubra en todo momento la punta de la raíz.
5. Saca la raicilla con la aguja enmangada y colócala sobre el portaobjetos. Con la cuchilla corta
el ápice a unos 2 mm. El resto se descarta ya que las células meristemáticas se encuentran en el
extremo, bajo la cofia.
6. Añade una gota de ácido acético al 45% (orceína B) para terminar de ablandar los tejidos.
7. Limpia con papel de filtro los posibles residuos del colorante. Coloca el cubreobjetos y realiza
un squash o aplastamiento. Para ello sitúa la preparación debajo de un papel de filtro doblado
y presiona con el dedo pulgar para aplastar el tejido y eliminar el exceso de colorante. Si al
retirar el papel de filtro se ve que la muestra no queda suficientemente aplastada, se puede
presionar el cubre en la zona donde está la raicilla con la parte posterior de la aguja
enmangada. En cualquier caso hay que evitar que el cubreobjetos se deslice sobre el
portaobjetos en el curso de la presión, y se debe conseguir una monocapa de células a través de
la que pase la luz.
8. Observar al microscopio. Al principio con un aumento pequeño, para localizar las células
meristemáticas mejor teñidas y en un solo plano. Luego, con mayor aumento, tratar de
identificar células en cada una de las fases mitóticas.
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ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS.
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Saca fotos a todas las fases mitóticas que has observado, anotando los aumentos y explicando
lo que sucede en cada una de ellas.
¿Qué significa estrictamente la palabra “mitosis”?.
¿Por qué se ha elegido para esta práctica el ápice de las raíces de cebolla?.
Hallar el tanto por crecimiento de células que está en mitosis y el tanto por ciento de células
que están en las diferentes fases.
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Para calcular el tanto por ciento de células que están en mitosis, contaremos 50 células y de
esas 50 contaremos las que están en alguna fase de la mitosis, de manera:
(Células que están en alguna fase de la mitosis/50 )x 100 %
Para calcular el tanto por ciento de células que están en las distintas fases de la mitosis,
contaremos unas 30 células que estén en alguna fase de la mitosis y procederemos de la
siguiente manera :
* Células que están en profase / células que están en alguna fase de la mitosis x 100
* Células que están en metafase / células que están en alguna fase de la mitosis x 100
* Células que están en anafase / células que están en alguna fase de la mitosis x 100
* Células que están en telofase / células que están en alguna fase de la mitosis x 100
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¿Has observado alguna célula en proceso de citocinesis? En caso afirmativo, dibuja estas
células tal y como las ves con el objetivo de más aumentos.