Marcadores moleculares

Marcadores moleculares
Raul Blas, 2010
Facultad de agronomia
Dpto. Fitotecnia
[email protected]
Marcador
Que marca (señal que se pone a una persona o cosa para
reconocerla), marca registrada …
Marker (Cambridge, 2002)
a sign wich shows where something is.
an action which is understood to represent or show a
characteristic of a person or thing or feeling.
Qué es un marcador?
Un marcador es considerado como un
carácter cuyo patrón de herencia puede
definirse en un nivel morfológico (fenotípico),
bioquímico o molecular.
Se asocian marcadores con caracteres, para
esclarecer la probabilidad de relación entre
un locus genéticos y un carácter determinado
Marcadores moleculares
Desde el punto de vista de un análisis de
relación genética los marcadores moleculares
son:
Puntos específicos fijados a un cromosoma
La herencia es completamente Mendeliana
Genética
Primera ley de Mendel?
En un diploide los dos
Alelos de un gen segregan en los
gametos con igual frecuencia
individuo: Aa
gametos: A 50%, a 50%
Primera ley de Mendel y frecuencias F2?
F1:
Aa
Aa
gametos f1 macho
gametos f1
hembra
F1
1/2A
1/2A 1/4AA
1/2a 1/4Aa
1/2a
1/4Aa
1/4aa
F2:
1/4AA 2/4Aa 1/4aa (codominante)
3/4A-
1/4aa (A dominante)
F2: AA 1/4 Aa 2/4 aa 1/4 (codominante)
A- 3/4
aa 1/4 (A dominante)
No se puede distinguir AA o Aa
Como se interpreta esto con marcadores moleculares:
AA
Aa
aa
Dominante
AA
Aa
aa
Co-dominante
Tipos de marcadores genéticos
1. Marcadores morfológicos (Efecto combinado de
muchos genes y el ambiente).
Caracteres morfológicos son los más antiguos y
ampliamente usados.
Son profundamente afectados por fluctuaciones
ambientales y por las etapas de desarrollo de la planta,
así como por el vasto número de individuos a analizar.
Marcador morfológico
Visualización de los
Fragmentos Amplificados
1
2
M
1
Polimorfismo
2
M
Marcadores moleculares
Cualquier señal o traza molecular que nos permite estudiar un caracter
(Fenotipo) o gen (Genotipo) asociado a este, y de herencia mendeliana
(Marcador Genético) y detectada como secuencias de ADN o proteínas
Detección de variabilidad a nivel de secuencias de ADN.
Fuentes de origen de MM
1. ADN cromosómico (genómico)
ADN codificante
ADN no codificante
ADN altamente repetido
2. ADN extracromosómico
ADN mitocondrial
ADN de cloroplastos
AFLP
RAPD
SSR
Procedimientos Generales en el uso de MM:
1. Extracción de DNA
2. Generación de polimorfismo
Enzimas de restricción
Reacción PCR
Combinación de los 2 anteriores (enzimas de
restricción y PCR)
3. Electroforesis (horizontal, y/o vertical)
4. Detección de los fragmentos
Sondas marcadas
Bromuro de etidio, UV
Quimioluminiscencia
tincion en plata
5. Autoradiografía y/o fotografia
6. Evaluación de los fragmentos
7. Análisis estadístico
Aislamiento de DNA
Moler hojas
+ cloroformo Transferir sobrenadante
+
Eliminar isopropanol,
Disolver en H20, TE
DNA
Proteina/polisacaridos
‘CTAB’
Marcos Malosetti, 2007 Wageningen University
Conceptos
Enzimas de restricción (Endonucleasas): Son proteínas
que reconocen secuencias cortas de nucleótidos
específicas y cortan ADN en esas zonas.
Pst I
ADN
Iniciadores (“Primers”): Es una secuencia corta de ácido
desoxirribonucleótido (ADN) que se ancla a una hebra del
ADN molde. El cual se requiere para la síntesis de ADN in
vitro (reacción de polimerización), ya que la ADN polimerasa
solo no es capaz de iniciar la polimerización de ADN .
RAPD 10-mer Set A
Tube A-01 5'-CAGGCCCTTC-3'
Tube A-02 5'-TGCCGAGCTG-3'
Tube A-03 5'-AGTCAGCCAC-3'
Tube A-04 5'-AATCGGGCTG-3'
Tube A-05 5'-AGGGGTCTTG-3'
Tube A-06 5'-GGTCCCTGAC-3'
Tube A-07 5'-GAAACGGGTG-3'
Tube A-08 5'-GTGACGTAGG-3'
Tube A-09 5'-GGGTAACGCC-3'
Tube A-10 5'-GTGATCGCAG-3'
Tube A-11 5'-CAATCGCCGT-3'
Tube A-12 5'-TCGGCGATAG-3'
Tube A-13 5'-CAGCACCCAC-3'
Tube A-14 5'-TCTGTGCTGG-3'
Tube A-15 5'-TTCCGAACCC-3'
Tube A-16 5'-AGCCAGCGAA-3'
Tube A-17 5'-GACCGCTTGT-3'
Tube A-18 5'-AGGTGACCGT-3'
Tube A-19 5'-CAAACGTCGG-3'
Tube A-20 5'-GTTGCGATCC-3'
RAPD 10-mer Set B
Tube B-01 5'-GTTTCGCTCC-3'
Tube B-02 5'-TGATCCCTGG-3'
Tube B-03 5'-CATCCCCCTG-3'
Tube B-04 5'-GGACTGGAGT-3'
Tube B-05 5'-TGCGCCCTTC-3'
Tube B-06 5'-TGCTCTGCCC-3'
Tube B-07 5'-GGTGACGCAG-3'
Tube B-08 5'-GTCCACACGG-3'
Tube B-09 5'-TGGGGGACTC-3'
Tube B-10 5'-CTGCTGGGAC-3'
Tube B-11 5'-GTAGACCCGT-3'
Tube B-12 5'-CCTTGACGCA-3'
Tube B-13 5'-TTCCCCCGCT-3'
Tube B-14 5'-TCCGCTCTGG-3'
Tube B-15 5'-GGAGGGTGTT-3'
Tube B-16 5'-TTTGCCCGGA-3'
Tube B-17 5'-AGGGAACGAG-3'
Tube B-18 5'-CCACAGCAGT-3'
Tube B-19 5'-ACCCCCGAAG-3'
Tube B-20 5'-GGACCCTTAC-3'
La reacción en cadena de la Polimerasa (Polymerase
Chain Reaction - PCR): Es una técnica in vitro de
amplificación enzimática del ADN. Mediante el cual
se obtiene millones de copias de secuencias
específicas del genoma de un organismo.
ciclos, consta de 3 pasos:
1. Denaturación: es una denaturación termal de la
muestra de ADN, a 94- 95°C.
2. Anclaje de iniciadores (Renaturación): la
temperatura de la mezcla es enfriada hasta los 3560°C.
3. Síntesis (polimerización): La temperatura es elevada
a 70 - 85 °C, la temperatura óptima (72°C)
Los componentes de amplificación para la reacción
PCR son:
•primers sintéticos, que son regiones
complementarias a las cadenas opuestas
que flanquean a la región de ADN blanco
que se desea amplificar.
• Una secuencia blanco en una muestra de
ADN
•Una enzima, la ADN Polimerasa
termoestable que pueda resistir altas
temperaturas de calentamiento (95° C a
más).
• Los cuatro deoxiribonucleótidos (dNTPs).
• Un buffer para darle las condiciones
adecuadas al sistema en conjunto.
2x-2x, x= número ciclos
Preparación de gel para electroforesis
Electroforesis: Es el movimiento de una partícula cargada
(ion) en un campo eléctrico. El movimiento se realiza en
medio líquido que está sostenida por sustancia sólida inerte,
como papel o gel semisólido.
Sistema de marcadores DNA
probe
*******
Basados en hibridación
DNA
RFLP, VNTR,
oligonucleotide fingerprinting
Basados en amplificación
DNA
RAPD, DAF, AFLP, SSR,
MP-PCR, ISSR, IRAP, REMAP,
STS, SCAR, CAPS
Basados en secuenciamiento
ATTAGTCTTACCTAGGAATCGATT
TAATCAGAATGGATCCTTAGCTAA
EST, SNP,
DNA microarray
Gupta et al., 1999
Tipo de polimorfismo
Alta resolucion:
Al nivel de par de bases
Baja resolucion:
Al nivel de fragmentos
de restriccion o
fragmentos amplificados
RFLP
RAPD
AFLP
SCAR
CAPS
SSR
i-SSR
RFLP
DNA genómico
+ Enzimas de restricción = digestión
Papel toalla
Electroforesis en
geles de agarosa
Membrana
Gel
Esponja
Southern Blot
Perfil de polimorfismo
obtenido
Hibridación
con sonda
Membrana con
DNA transferido
RFLP
Esta técnica se vale de la capacidad que tienen las enzimas de restricción para
poder reconocer secuencias especificas a lo largo del genoma, de modo que una
mutación puntual dentro del sitio de restricción resultará en la pérdida o ganancia
de una secuencia de reconocimiento, dando origen a un fragmento de restricción
de diferente longitud a la del original.
Las mutaciones causadas por una inserción, deleción o inversiones en el DNA
también llevan a variación en la longitud de los fragmentos de restricción.
Los fragmentos del genoma generados por las enzimas de restricción son
separados en un gel de agarosa para luego ser transferidos a un soporte sólido
que puede ser una membrana de nylon o nitrocelulosa.
La transferencia de los fragmentos de DNA desde la matriz de agarosa hasta la
membrana se realiza por capilaridad.
Una vez que se encuentran en el soporte sólido, el DNA digerido y separado,
puede ser hibridizado con una sonda (DNA de una sola hebra) que debe estar
marcada para su fácil detección.
La sonda se hibridará en el lugar donde encuentre la zona complementaria a su
secuencia. Para hacer visible el lugar donde se ha hibridado la sonda, ésta debe
tener algún tipo de señal (marcaje)
Obtención de marcadores
RFLP.
RAPD
Random Amplified
Polymorphic DNA
Amplificación de ADN anónimo con
cebadores de secuencia arbitraria
RAPD: iniciaodores unicos , cortos y aleaoritos
Temperatura de Hibridizacion: 36-42C
Consiste en la amplificación mediante PCR de un ADN anónimo,
utilizando para ello un cebador de secuencia arbitraria
Normalmente se usa un solo iniciador de 10 nucleótidos de longitud
RAPD:AMPLIFICA MULTIPLES REGIONES
(MULTILOCI)
Correspondencia entre fragmentos
amplificados y bandas en un gel
_
+
Los RAPDs son marcadores dominantes
A
A
a
A
1
2
3
a
a
1
2
3
AA Aa aa
Ventajas
 Requiere baja cantidad de DNA
 Facil de obtener
 Aplicabilidad a cualquier genoma
 Bajo costo
Desventajas
 Problemas de reproducibilidad
 Presencia de homoplasia en las bandas
 Nivel de información limitada debido a su
naturaleza dominante (no se puede diferenciar un
heterocigoto de un homocigoto, el locus se reduce
a un solo alelo)
RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)
Reaccion PCR
Primers deben encontrar
secuencias
complementarias entre
200 – 2500 pb
Tincion (bromuro de
etidium)
RAPD
Reaccion PCR
Electroforesis
Tinción y visualización de los fragmentos de amplificaci
Polimorfismo con la
técnica RAPD
AFLPs
Amplified Fragment
Length Polymorphism
Metodología de obtención de Marcadores AFLP
ADN Genómico
Mse I
Eco RI
Digestión
Eco adapter
Mse adapter
Ligación
PCR1:Preamplificación
Eco primer
N
N
Mse primer
Eco primer
NNN
Pcr2:Amplificación
selectiva
NNN
Mse primer
Electroforesis
Autoradiografía
Tinción Nitrato de plata
Principios de la técnica AFLP
GAATTC
TTAA
CTTAAG
AATT
Eco RI
Mse I
AATTC
G
T
1. Digestión del
ADN Genómico
Liberación de fragmentos con
terminales Eco RI y Mse I
AAT
TA
TTAA
Adaptador Eco RI
Adaptador EcoRI: 5’-CTCGTAGACTGCGTACC
CATCTGACGCATGGTTAA-5’
AATTCN
TTAAGN
Adaptador Mse I
2. Ligación con
adaptadores de
secuencia conocida
Adaptador Msel: 5’-GACGATGAGTCCTGAG
TACTCAGGACTCAT-5’
NTTA
NAAT
Primer EcoRI+1(E+1): 5’-GACTGCGTACCAATTCN
5
T
AATTCN
TTAAGN
AATTCTNN
TTAAGANN
Primer Msel+1 (M+1): 5’-GATGAGTCCTGAGTAAN’
3. Amplificación preselectiva
NTTA
NAAT
G
5
NNCTTA
NNGAAT
4. Amplificación selectiva
5’
TTG
AATTCTNN
TTAAGANN
AATTCTTG
TTAAGAAC
NNCTTA
NNGAAT
AGG
TCCTTA
AGGAAT
Electroforesis en geles de poliacrylamida
5’
Obtención de
marcadores AFLP
Polimorfismo en
Arracacha, según la
combianción de los
iniciadres E-AAC/M-CTT.
Ventajas
 Reproducibles
 Elevado número de bandas obtenidas por gel
 No se necesita información previa para su
desarrollo (sondas o iniciadores específicos)
Desventajas
 Presencia de homoplasia en las bandas
 Nivel de información limitada debido a su
naturaleza dominante
Raul Blas
SSR
Simple Sequence Repeat
Sinónimos
Microsatélites
STR - Short Tandem Repeat
STMS - Sequence Tagged Microsatelite Site
SSLP - Simple Sequence Length Polymorphism
¿Que son microsatélites?

Fragmentos de ADN formados por unidades repetitivas
de secuencia simple.

Estas unidades o motivos se componen de 1 a 6 pares
de bases y su grado de repetición es relativamente bajo.

Se utilizan un par de iniciadores (20 pb aprox) para su
amplificación
TTTTTTTTTT = T10
AGAGAGAGAGAG = AG6
CATCATCATCATCATCAT = CAT6
TAGTTAGTTAGTTAGTTAGTTAGT = TAGT6
Mononucleotido
Dinuclotido
Trinucleotido
Tetranucleotido
(TC)14
ADN
genómico
Microsatélite
......CAGCCCGTAAATGTATCCATCATTAGCTTTCGATAAAGACCATCT C TCTCTCTC TCT CTC TCTCTC T CT CTGTGAAACCCAGTTGAATTAGAATTTTGAATTT......
......GTCGGGCATTTACATAGGTAGTAATCGAAAGCTATTTCTGGTAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGACACTTTGGGTCAACTTAATCTTAAAACTTAAA......
OBTENCION DE MICROSATELITES
http://www.personal.psu.edu/faculty/j/e/jec16/Image02.htm
Tipos de SSR
Perfectos: (CA)n
Imperfectos: (CA)n – CCA – (CA)m
n, m y r = número de
repeticiones del
motivo
Compuestas: (CA)n (TG)m
Compuesta interrumpido: (CA)n –TG-(TG)m
Compleja: (CA)n –TG-(TG)m (TA)r
GTn los mas extendidos en genoma de mamíferos
Atn la mas extendida en genoma de vegetales
GAn mas abundante en cebada y arroz
Marcadores microsatélite
2. Electroforesis en geles
Poliacrilamida o agarosa (casos
muy limitados)
Etapas de la técnica SSR incluyen:
1000 pb
1. Reacción
PCR, con dos
iniciadores
especificos para
un locus SSR
100 pb
M P1 P2 1 2 3 4 5 6
F1
stop
Gene Amp
F2
F3
F4
F5
1
2
3
4
5
6
7
8
9
enter
0
ce
IBT
I
I
I
II
Huamani, 2008
III
PCR en P1, 3 y 6
II
II
III
PCR en P2, 2 y 5
III
PCR en 1 y 4
DNA individuo 1
AT12
ATATATATATATATATATATATAT
Región
conservada
Región
Conservada
Iniciador 1
Iniciador 2
ATATATATATATATATAT
DNA individuo 2
AT9
Los SSR son marcadores codominantes
1
2
3
4
5
1 2 3 4 5
Extrategias de desarrollo de iniciadores SSR
1. Clonamiento, secuenciamiento y diseño de iniciadores
2. Identificación de primers microsatélite a partir de
marcadores ISSR
3. Búsqueda de marcadores SSR en la base de datos del
Genbank.
4. Transferibilidad de otras especies afines (empleo de
iniciadores disponibles)
Ventajas

Poseen alta variabilidad en sus loci, apropiado
para los análisis de diversidad genética.

Se encuentran distribuidos por todo el genoma
permitiendo hacer un buen muestreo genético
del material en estudio.
Desventajas
Su
Su
caractierizacion es especifica por especie
identificacion(descubrimiento) y hacerlo
usable es costoso. Requiere secuenciamiento de
librerias de DNA
Aplicacion de marcadores moleculares
Analisis de la diversidad genetica
Herencia y mapeo
Genes candidatos
Herramienta de seleccion: Seleccion
asisitida por marcadores moleculares (MAS)
Raul Blas, 2010
Fases sucesivas en la creación de una
nueva variedad
1. Gestion de recursos
2. Cambios en los genotipos
3. Selección (selección estabilizadora),
4. Multiplicación del genotipo mejorado
Mejoramiento genetico de plantas
Idiotipo
Biologia
Tecnologia
Tiempo
Materiales
Presupuesto
Métodos de
mejoramiento
Poblaciones naturales,
variedades nativas, …
Ganancia
genética
Objetivos
Contexto:
Agronomico
Industrial
Alimenticio
social
Fases sucesivas en la creación de una
nueva variedad
1. Gestion de recursos genéticos
2. Cambios en los genotipos
3. Selección (selección estabilizadora),
4. Multiplicación del genotipo mejorado
Selección asistida por marcadores moleculares
– Molecular assisted selection (MAS)
Es la selección indirecta por la presencia o
ausencia de un fenotipo o componente fenotípico
deseado, basado en la secuencia o patrones de
banda de los marcadores moleculares ubicadas
dentro o cerca de genes que controlan el fenotipo.
La secuencia polimorfico o patron de banda del
marcador molecular es indicativo de la presencia o
ausencia de un gen específico o segmento
cromosomal que es conocido y que lleva un alelo
deseado.
Capel et al. (2000)
… Molecular assisted selection (MAS)
Es la posibilidad de disponer de marcadores
ligadas a los genes implicados en la variacion de
los caracteres seleccionados.
MAS tiene los siguientes objetivos:
•Dirigir las recombinaciones para acumular en
un mismo genotipo los genes o segmentos
cromosomicos favorables
•Facilitar la selección (selección eficaz)
Aspectos a considerar en MAS
•Distancia genética (Mapas de ligamiento)
Marcadores asociados con caracteres de interes (<
5cM) (Kelly, 1995)
En algunos cultivos existen mapas bien definidos y
densos : Arroz, maiz, trigo, tomate, papa
•Modo de herencia (Calidad marcador)
Codominantes (capacidad de identificar los genotipos)
•Tipo de marcador
•Material genético
Generación de un mapa genético
Mapa genético: Representacion de marcadores/
genes en los cromosomas (orden + distancias)
Requisitos:
– poblaciones segregantes
– Determinación de los genotipos de los marcadores
– Estimación de las frecuencias de recombinación entre
todos los pares de marcadores
– Determinación de grupos asociados
– Determinación el orden por grupo de asociación
Tamaño de la población
 Determinado por el numero de semillas y de marcadores
disponibles, es importante establecer el numero minimo de
individuos a utilizar para conocer la precision del calculo de las
frecuencias de recombinacion que permitan construir un mapa
fiable.
 Usualmente la progenie a evaluar se cosntitule de >100 individuos
a fin de reducir el error estandar
 Otros autores consideran suficiente un numero de 50 individuos
Poblacion de mapeo
 Los descendientes mas usados tienen como punto de partida dos
parentales homocigotas, esto por cruzmiento produce f1 todos
identicos y heterocigotas para todo los locus que han sido fijados
alelos diferentes en los parentales
 Se debe buscar parentales geneticamente bien alejadas para que el
numero de locus polimorficas no sean limitantes
 Tres tipos principales de poblacion de cartografia pueden ser
derivados de estos cruzamientos
Tipos de poblaciones para mapeo
AA
x
F1
F1xBB
BC1F1
AB, BB
X
F2
AA, AB, BB
BB
AB
X
X
X
X
X
duplicacion
RIL
AA, AB? BB
Retrocruza: BC1F1
Poblacion segregante filial 2: F2
Lineas endogamicas recombinantes: RILs
Lineas de haploides duplicados: DH
DH
AA, BB
Determinación del orden
Ejemplo:
Par
Frecuencia de
Recombinación
---------------A-B
0.1
B-C
0.1
A-C
0.2
A
B
C
+----------+----------+
<- 0.1 -> <- 0.1 ->
<0.2
->
No es posible otro orden!!!
Tres marcadores
Ejemplo con tres marcadores
0
Marcador 1
14
Marcador 3
• Tabla de conteo de recombinaciones
• Marcador 1 <–> Marcador 2 = 30
• Marcador 1 <–> Marcador 3 = 15
• Marcador 2 <–> Marcador 3 = 20
– Cuáles son las posibilidades?
15
M1
30
M2
M3
M1
M3
M2
20
M2
M1
M3
33
30
20
15
20
30
15
Marcador 2
Gebhart (2004)
Determinacion de sexo en
plantas
Phoenix dactylifera L
Ubicacion taxonomica:
Family:Palmaceae
Sub-family: Coryphyoideae
Tribe:Phoeniceae
Genus: Phoenix
El genero Phoenix, presenta ~ 12 especies, incluida
CONVERTIR LOS MARCADORES AFLP A SCAR
Secuenciar el fragmento y elaborar iniciadores especificos
SCAR
“Sequence-characterized amplified regions”
Aplicaciones
Búsqueda de co-dominancia
• Selección asistida
• Análisis de asociación
Aplicabilidad de marcadores PVY-LB
para mejoramiento
Objectivos:
Identificación de clones con el gen Ry adg y Rysto para
inmunidad a PVY.
Identificación de clones con genes R dem o R blb o QTLs (que
gobiernen un alto porcentaje de la resistencia observada) para
resistencia rancha (tizón).
Material vegetal
Se analizó en total 61 clones, mas 5 controles:
36 clones avanzados resistentes y/o
tolerantes a TT y PVY:
población B3
población LTVR
hibridos somaticos
25 cultivares nativos (Huanuco) de adg, gon y
phu:
14 clones resistentes a LB
11 clones susceptibles a LB
Métodos:
Se utilizaron marcadores alelo-específicos (iniciadoresSCARs, CAPs) seleccionados en CIP and Max Plant
Institute:
Identificación de clones con resistencia a PVY
Se han identificado y validado 4 iniciadores:
•Adg: RYSC3
•stolon (M5, M6 y M17)
Primers and its sequences used in genotipes screening
Marker Ry-linked
Primer
polymorphism name
RYSC3
3.3.3S
Adg23R
M5
MseI, Tru
M5-m
M5-p
M6
Rsa I
M6Rsa
M6Taq
M17
Pst I
M17-m
M17-1
Sequence
5’-ATA CAC TCA TCT AAA TTT GAT GG-3’
5’-AGG ATA TAC GGC ATC ATT TTT CCG A-3’
GCT GTT CAC AAT GGG AAC ATG G
CAT ACA AAC TAC TTC TAC CAC G
TCC GAA ATG TTT GGG CTG ACA TC
AAG GGA TCC AAA AAG GTG GTT CA
GAC TGC TTT CTC TCC ACG TGG C
GAT CAC AGA TGT TTT ACC TTC GAT G
Resultados
Tamizado para PVY
Perfil de amplificación para 14 clones (primer M5)
M
M
M
M= marcador de peso molecular (cada 100pb), la
flecha indica el marcador con un peso molecular de
400bp
... Tamizado para PVY
Perfil de amplificación para 18 clones (primer M17)
Identificacion de genes para
resistencia a la rancha
Estrategia de trabajo para mapeo genetico
S. phureja
Clon 618
S. circaeifolium
CIP-761030
(6b.25; 6b.39)
x
F1
plantulas (~300)
Analisis fenotipico
Analisis molecular
selected
clones
AFLP
invernadero
campo
92
Analisis de datos, mapeo
SSR
Procedimiento para la aplicacion de MM en la
seleccion: MAS
•Extraccion de DNA
•PCR (amplificacion del marcador de interes)
•Electroforesis
•Visualizacion de DNA
•Evaluacion de polimorfismo (lectura de geles)
•Descarte de individuos sin alelo de interes
•Plantas seleccionadas
Identificación de progenies hibridas
MM como herramienta en Mejoramiento
Confiabilidad y repetibilidad
Marcadores con estrecho ligamiento a genes de
caracteristicas importantes
Muy importante para caracteristicas dificiles (aquellas
que no pueden ser facil o confiablemente medidos
usando metodologias tradicionales (e.g. resistencia a
nematodes…)
Otros pueden no ser visibles o solo detectados en
plantas maduras
Otros son muy dificiles o costosas para el tamizado
La posibilidad de manejar poblaciones de
mejoramiento de gran tamaño (en espacio reducido)
Limitaciones de la Tecnica MAS
Mapa genetico denso para el cultivo
Marcador ligado al gen (<5 cM)
Equipamiento
Tecnicos calificados para lab.
Producción de semillas y uso de marcadores
moleculares
Caracterización de cultivares
Pureza genética de cultivares
Identificación de variedades
Dos cultivares de soya
Pureza genética
Conclusion:
Marcadores moleculares pueden tener numerosas aplicaciones en
los diferentes fases de la seleccion:
Optimizacion de la conservacion de recursos geneticos
Seleccion de los parentales
Identificacion de alelos interesantes
Construccion de genotipos acumulando alelos interesantes
Finalmente, los MM dispone al mejorador para gestionar y
valorizar la variabilidad genética
Consideración
La selección asistida por marcadores y la
selección fenotípica tradicional no son estrategias
excluyentes y los programas de mejoramiento
genético de mayor eficiencia se logran mediante
una combinación de ambas estrategias.