Determinación taxonómica de hemoparásitos y su

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Revista
de Investigación,
6 (1).
Diciembre
2005.
Revista de Investigación, ISSN
16576772.
Vol. 6 (1):Vol.
67-73.
Enero
- junio 2006.
Determinación taxonómica de hemoparásitos y
su prevalencia en búfalos de agua (Bubalus
bubalis) en el Magdalena Medio, Colombia1
GERMÁN ALONSO PRADA SANMIGUEL, JUAN CAMILO CRESPO
Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad de La Salle.
El objetivo fue hacer una determinación taxonómica y prevalencia de hemoparásitos en búfalos de
agua Bubalus bubalis de la hacienda La Suiza, ubicada en el municipio de Puerto Nare (departamento de
Antioquia), Magdalena medio, Colombia. Se analizaron 600 búfalos de agua para determinar presencia
y prevalencia de hemoparásitos. A cada búfalo se le tomó una muestra de sangre y luego se hicieron
frotis sanguíneos, los cuales se tiñeron con colorante Dip Quick. Las láminas con los parásitos coloreados
se observaron y fotografiaron con microscopio de luz con un sistema microfotográfico «Olimpos» con
aumentos de 400X a 1000X. La prevalencia de hemoparásitos encontrada en búfalos de agua fue la
siguiente: Anaplasma sp 54,7% (menores de 1 año de edad), 56,7% (entre 1 y 3 años de edad) y 52,2%
(mayores de tres años de edad); Trypanosoma sp 1,5% (menores de 1 año de edad) y 2% (mayores de tres
años de edad); Babesia sp solo se encontró en búfalos entre uno y tres años de edad (0,5%). Se concluye
que el hemoparásito con mayor prevalencia en la Hacienda La Suiza fue Anaplasma sp (54,6%).
Palabras clave: búfalo, Anaplasma sp, Trypanosoma sp, Babesia sp, hemoparásitos.
Taxonómic determination of hemoparasites and its prevalence
in water buffalos (Bubalus bubalis) in middle Magdalena Region,
Colombia
The purpose of this study was to do a taxonomic determination and prevalence of hemoparasites in water
buffalos (Bubalus bubalis) in La Suiza; a Ranch located in Puerto Nare (Antioquia), Middle Magdalena
Region, Colombia. 600 water buffalos were analyzed in order to determine presence and prevalence of
hemoparasites. Each buffalo was taken a blood sample, and then blood smears were done, stained with
Dip Quick colorant. The slides with stained parasites were photographed using a light microscope with
an «Olympus» micro photographic system, in increments from 400X to 1000X. The hemoparasites
prevalence found in water buffalos was as follows: Anaplasma sp 54.7% (under 1-year-old), 56.7% (between
1 and 3 years old), and 52.2% (over three-year-old); Tripanosoma sp 1.5% (under 1-year-old) y 2% (over
three year old); Babesia sp was only found in buffalos from 1 to 3 years old (0.5%). We concluded that the
hemoparasite with higher prevalence in La Suiza Ranch was Anaplasma sp (54.6%).
Key Words: Buffalo, Anaplasma sp, Trypanosoma sp, Babesia sp, hemoparasites.
1
Esta investigación fue financiada por la Universidad de La Salle.
Correspondencia: [email protected]
Recibido: octubre 11 de 2005.
Aceptado: enero 27 de 2006.
67
Determinación taxonómica de hemoparásitos y su prevalencia en búfalos de agua. Prada GA et al.
INTRODUCCIÓN
El Búfalo doméstico (Bubalus bubalis) es un animal
nativo de la India, Pakistán, y Extremo Oriente,
donde fue domesticado aproximadamente 2500
a. de C. Existen dos Géneros de búfalos: el
Syncerus caffer o búfalo africano que permanece
en estado salvaje el cual nunca ha podido ser
domesticado y el Bubalus bubalis que corresponde
al búfalo asiático del cual se presentan dos
variedades: el búfalo de río (Bubalus bubalis var.
bubalis) y el búfalo de los pantanos (Bubalus
Bubalis var. kerebau) (Rodríguez 1993). El cruce
entre búfalo y bovino no es posible por
incompatibilidad cromosómica (el búfalo tiene 50
cromosomas y el bovino 60) (Carrazoni 1998).
La población mundial de búfalos se calcula en más
de 150 millones de cabezas, de los cuales el 95%
se encuentra en Asia. En Latinoamérica su cría se
viene realizando desde hace unos años en países
como Argentina, Brasil, Colombia y Venezuela
donde; por ser países tropicales, la cría ha sido
optima. Según datos de la Asociación
Colombiana de Bufalistas, existen 55.000 cabezas
en Colombia, distribuidas principalmente en los
departamentos de Córdoba, Sucre, Antioquia,
Casanare y Bolívar (Barrero y Mutis 2001).
En Colombia, se trabaja principalmente con el
búfalo de rio, animal con una buena aptitud
lechera y utilizado también para la producción
de carne y el trabajo en las fincas (Rodríguez 1993).
El promedio de producción lechera de una hembra
bufalína es de entre 7 a 8 litros diarios en una
lactancia de 7 meses; la leche presenta un
porcentaje ente el 7 y 8 % de grasa; lo cual la hace
muy apetecida para la fabricación de quesos,
yogures y mantequillas. En cuanto a la
producción de carne, los animales alcanzan un
peso aproximado de 410 kg en 20 meses.
Los búfalos son susceptible a un sinnúmero de
patógenos bacterianos y virales así como
parasitarios. De igual forma, la susceptibilidad de
estos animales constituye un problema, también
lo es el hecho de que esta especie haya podido
introducir patógenos nuevos al campo
colombiano que pudieran estar afectando la
población bovina local. Ante esta situación, urge
la necesidad de realizar estudios que aclaren
dichas incógnitas.
68
Es bien sabido que el clima cálido de Colombia es
muy prolífico en cuanto a hemoparásitos que
atacan al ganado bovino, debido a que se
presentan las condiciones de humedad,
temperatura y luminosidad que permiten la
supervivencia de una gran cantidad de
ectoparásitos que afectan a los bovinos y que
sirven de vectores para la transmisión de estas
enfermedades, creando en el campo colombiano
de zonas tropicales y subtropicales áreas
endémicas de hemoparásitos. Ya que estos
patógenos pueden compartir como huésped la
especie bufalina, se hace necesario determinar que
tipo de hemoparásitos están atacando a los
búfalos y si estos son los mismos de los bovinos,
o si por el contrario, son patógenos nuevos que
han sido introducidos al país con esta especie.
Los hemoparásitos reportados tanto en bovinos
como en bufalinos producen las siguientes
parasitosis:
Babesiosis. La Babesiosis es producida por un
protozoario del Género Babesia que pertenece al
subgénero Piroplasmea, orden Piroplasmida,
subfamilia Babesioidea y familia Babesiidae (Cordero
del Campillo et al. 1999). Estos microorganismos
son parásitos intraeritrociticos y son causantes
de anemia y hemoglobinuria, afectan a mamíferos
domésticos y salvajes y son transmitidos por
garrapatas de la familia Ixodidae, donde se
encuentran las garrapatas del Género Boophilus.
Son agentes heteroxenos obligados,
desarrollándose en el hospedador invertebrado
la fase sexual de su ciclo con formación de
gametogonia y esporogonia y en el hospedador
vertebrado, la fase asexuada del ciclo realizando
divisiones por fisión binaria (Smith 2002). Estos
organismos parasitarios al encontrarse en el
glóbulo rojo se nutren por pinocitosis,
hidrolizando la hemoglobina del eritrocito y
metabolizando la glucosa, dando lugar a la
formación de ácido láctico y manosa. La
babesiosis es una enfermedad de distribución
mundial presentándose en todos los continentes
particularmente en áreas tropicales y
subtropicales, entre los 320 Norte y 300 sur; debido
a que allí se dan las condiciones para la
sobrevivencia de los vectores (Schimidt 1971). En
los rumiantes existen al menos 6 especies de
babesia que los afectan, siendo la Babesia bovis y
Babesia bigemina las dos principales especies que
Revista de Investigación, Vol. 6 (1). Enero - junio 2006.
se encuentran en Colombia (Dennet y Hawkey
2003). La enfermedad en el ganado también es
conocida con los nombres de piroplasmosis,
fiebre de Texas y tristeza, y se ha demostrado que
afecta animales diferentes a los bovinos tales
como visones americanos, búfalos de agua,
búfalos africanos y ciervos de cola blanca (Smith
2002). La Babesiosis es de gran importancia
sanitaria ya que es una zoonosis y puede ser
transmitida por la garrapata al hombre. Sin
embargo, la casuística real en humanos es
desconocida toda vez que los casos que se
diagnostican generalmente son accidentales
(Martín 1982).
Anaplasmosis. Este organismo es una Rickettsia
clasificada en la familia Anaplasmataceae, en
donde se encuentran los géneros Anaplasma,
Haemobartonella, Eperytrozoon y Aegyptionella, las
cuales se diferencian entre si por su hospedador
(especie a la que afectan), la localización en la
superficie de los glóbulos rojos y su morfología.
Existen cuatro tipos de Anaplasma siendo el mas
representativo en Bóvidos el Anaplasma marginale
debido en parte a su patogenicidad. Anaplasma
centrale también afecta a estos animales pero
posee muy baja acción patógena y su importancia
radica en que cumple un papel inmunizante
frente la acción patógena del Anaplasma marginale
(Biberstein 1994). El Anaplasma marginale, es
endémico y se encuentra en todos los continentes
principalmente en zonas tropicales y
subtropicales del globo, pero también se ubica
en zonas templadas, los hospedadores del agente
son los vacunos, algunos rumiantes silvestres y
quizás las ovejas (Otte 1992). El Anaplasma es
transmitido a través de picaduras de garrapatas,
entre las cuales la de mayor importancia es
Boophilus microplus, además puede ser trasmitido
por dípteros hematófagos como Tábanos, Stomoxis
y Haematobia; también se ha comprobado la
transmisión iatrogénica del agente a través de
agujas, instrumental quirúrgico, guantes de
cirugía y otros elementos (Cossio et al. 1997). Una
vez el parásito ingresa al torrente sanguíneo los
agentes penetran los eritrocitos por endocitosis
y se multiplican por fisión binaria, los cuerpos
neoformados son liberados de la superficie del
eritrocito y pasan a las células contiguas sin que
se produzca lesión celular visible (Lombardero
1990). La enfermedad se caracteriza por anemia
debido a la eliminación de los eritrocitos
parasitados por los macrófagos ubicados en el
bazo y el hígado (Gaido 1997).
Tripanosomiasis. Los tripanosomas son parásitos
cuya clasificación taxonómica corresponde al
Philum Protozoa, Subphilum Mastigophora
(locomoción por flagelos) clase Zoomastigophora,
Orden Kinetoplastidae, Familia Trypanonosomatidae,
Género Tripanosoma (Cordero del Campillo et al.
1999; Urquhart 2001, Panarella 2002). Estos
microorganismos son causantes de varias
enfermedades en humanos y animales en áreas
tropicales y subtropicales de los continentes
africano, asiático y americano. En humanos
ocasionan enfermedades de importancia sanitaria
como la enfermedad del sueño y la enfermedad
de chagas (Tinsley 1999). Existen seis especies de
Trypanosoma que afectan a los rumiantes (García
et al. 2001, Gaunt et al. 2003) siendo las de mayor
importancia en Colombia y sur América,
Trypanosoma vivax, Trypanosoma evansi y
Trypanosoma theileri. Algunas de sus características
morfológicas incluyen, el poseer un núcleo, un
flagelo y una mitocondria que integra el cuerpo,
poseen un complejo cinetoplástico integrado por
el Ácido Desoxirribonucleico (DNA)
mitocondrial y el cuerpo basal del flagelo, lo cual
constituye la base de su aparato locomotor
(Biberstein 1994, Cossio 1997, Hendrix 1999). Se
alimentan por pinocitosis y fagocitosis ya que los
miembros de este género tienen como hábitat el
torrente circulatorio y diversos tejidos de
animales vertebrados, incluyendo al hombre
(Johnstone 1998, Panarella 2002). Los Tripanosomas
requieren de un vector para transmitirse de un
animal a otro, siendo en América los mas
importantes los Tabanus spp, y las moscas Stomoxys
spp. En África la mosca Tse-Tse, es el vector más
importante en la transmisión de estos agentes en
humanos (Tinsley 1999).
Este parásito puede ingresar de dos formas al
huésped definitivo, la primera a travez de la piel
ocasionando prurito, lo que obliga a que el
hospedador final se rasque, produciéndose una
herida de la cual se vale el tripanosoma para
ingresar. Los tripanosomas que efectúan este tipo
de contagio y que se desarrollan en la parte
posterior del aparato digestivo del vector, son
clasificados como Stercoraria (Cordero del
Campillo et al. 1999; Urquhart y Col, 2001). La
segunda forma de infección se denomina
69
Determinación taxonómica de hemoparásitos y su prevalencia en búfalos de agua. Prada GA et al.
inoculativa y ocurre cuando el parásito es
introducido al hospedador a través de la probosis
del insecto. Este tipo de tripanosoma es clasificado
como Salivaria debido a que desarrolla parte de
su ciclo en las zonas anteriores de la parte
digestiva del hospedador intermediario (Cordero
del Campillo et al. 1999, Miranpuri 1988, Urquhart
et al. 2001).
Colombia es un país que presenta condiciones
ideales para el desarrollo de hemoparásitos
debido a que el 80% de su territorio se encuentra
ubicado en áreas tropicales y un 10% en áreas
subtropicales, lo cual permite la sobrevivencia de
la mayoría de vectores trasmisores de estas
enfermedades; esto acompañado por las
condiciones climáticas de calor y humedad que
se presentan en estas áreas del país, donde el
promedio de temperatura es de 27°C y la
humedad relativa fluctúa entre 70 y 85%;
adicionalmente la luminosidad factor de
importancia para el desarrollo de los vectores es
de mínimo 11 horas/día con un máximo de 12
horas día (Otte 1992, Wharton 1999).
A nivel nacional se han realizado algunos
estudios en la especie bufalina, los cuales han
tenido como propósito establecer parámetros o
rangos de referencia para constantes fisiológicas
y la identificación de parásitos gastrointestinales
y sanguíneos (Arbeláez et al. 1998; Sepúlveda et
al. 2000) estos estudios han sido realizados en los
departamentos de Antioquia y Córdoba.
El presente trabajo presenta los resultados de la
determinación taxonómica y de prevalencia de
hemoparásitos en búfalos de agua de una zona
caliente del Magdalena Medio.
MATERIALES Y MÉTODOS
El presente estudio fue realizado desde marzo del
año 2004 hasta agosto del mismo año, en la
hacienda bufalera «La Suiza» ubicada en la ribera
oriental del río Magdalena a la altura de los
municipios de Puerto Nare y Puerto Berrío
(Antioquia), corregimiento la Sierra, vereda La
Mina. Son 5.000 hectáreas divididas en 16 zonas en
las que pastorean cuatro mil doscientos búfalos
de agua (B. bubalis) Esta hacienda está integrada
por tres fincas a saber: Puerto Alicia, ubicada en
Puerto Berrío; así como La Espiga y Corinto en
70
Puerto Nare. La media anual de precipitación
reportada es de 2016 mm/año, con una máxima de
precipitación en mayo y una mínima en enero,
clasificándose la zona como selva húmeda tropical,
con una temperatura media de 27°C. La humedad
relativa media es de 85%, y su fisiografía
corresponde a un relieve ligeramente ondulado
con pendientes entre 3 y 12%, con pendientes
cortas y una altimetría entre los 125 y 200 msnm
(Instituto de Hidrología y Metereología 2004,
Gobernación de Antioquia 2004).
Se trabajó con un total de 600 animales, distribuidos
en tres grupos de 200 individuos cada uno,
seleccionados de acuerdo a su edad (< 1 año, 1 a 3
años y > 3 años). A los animales muestreados, se
les tomó su numero de identificación y su
temperatura corporal, luego se les recortó el pelo
de la punta de la cola, la cual fue luego lavada y
embrocada, para finalmente realizar un pequeño
corte con una hoja de bisturí con el fin de obtener
una gota de sangre, que fue colocada en una
lamina portaobjeto, para realizar un frotis
sanguíneo en capa fina. Esta muestra fue secada al
aire y luego coloreada mediante la tinción de Dip
Quick. Dicho colorante policromático contiene un
ácido DNA/RNA azul, otro básico con proteínas
eosinofílicas color anaranjado y por ultimo el color
violeta compuesto por sustancias policromáticas.
Para la técnica de tinción se fijó el frotis primero
con metanol remojando la lamina por 5 segundos,
posteriormente se remojó la misma en el colorante
anaranjado de nuevo por 5 segundos y por último
en el colorante violeta, por la misma cantidad de
tiempo. Así, luego debe lavarse suavemente cada
placa con agua limpia y esperar a que se seque la
muestra.
Los frotis sanguíneos ya coloreados fueron
transportados al laboratorio clínico de la Facultad
de Medicina Veterinaria de la Universidad de La
Salle para ser observados con microscopio de luz
y fotografiados con un sistema microfotográfico
«Olympus» con aumentos de 400X a 1000X.
El modelo estadístico realizado, fue un estudio
transversal o de prevalencia, analizado con Excel.
RESULTADOS
Determinación taxonómica. Con la técnica de
microscopía utilizada, solo se logró determinar
Revista de Investigación, Vol. 6 (1). Enero - junio 2006.
los hemoparásitos hasta género; esta técnica no
permite diferenciar rasgos morfológicos de la
especie. Los géneros encontrado en los búfalos
en estudio fueron los siguientes: Analasma,
Trypanosoma y Babesia; estos géneros se presentan
con frecuencia en bovinos del territorio nacional.
Prevalencia. Los búfalos menores de un año
mostraron una prevalencia de Anaplasma sp 54,7%
con 110 animales positivos (Figura 1), Tripanosoma
sp 1,5% (Figura 3) con 3 animales positivos y no
se encontró Babesia en este grupo de búfalos.
Los búfalos con edad entre 1 a 3 años, tuvieron
una prevalencia de Anaplasma sp del 56,7% con
114 animales positivos y no se encontró ninguno
positivo para Tripanosoma sp; en este grupo se
encontró una prevalencia del 0,5% para Babesia sp
(Figura 2) con un búfalo positivo.
Los búfalos mayores de 3 años, tuvieron una
prevalencia de Anaplasma sp del 52,2%, con 105
animales positivos, Tripanosoma sp del 2% con 4
animales positivos; no se encontró bufalos
positivos para Babesia en 200 muestras de sangre
de este grupo de edades.
La prevalencia de Anaplasma en los tres grupos
fue muy similar, donde en comparación con los
otros hemoparásitos (Babesia y Tripanosoma) tuvo
una notable mayor incidencia en la población de
búfalos.
Figura 1. La flecha esta indicando un Anaplasma
sp encontrado en este estudio en
eritrocitos de búfalo. Tinción con Dip
Quick, microfotografía con aumentos de
1000X.
En los grupos 1 y 3 (búfalos menores de un año y
animales mayores de 3) no se encontró presencia
de Babesia.
Figura 2. La flecha esta indicando Babesia sp
encontrada en este estudio en
eritrocitos de búfalo. Tinción con Dip
Quick, microfotografía con aumentos de
1000X.
El parásito del género Tripanosoma se encontró en
siete búfalos de los tres grupos de edad
analizados. En el grupo 1 se dio una prevalencia
de hemoparasitos de 1,5% con 3 casos positivos.
En el grupo 2 no se observó Tripanosoma en las
muestras de sangre analizadas; en el grupo 3
(búfalos mayores de 3 años) se encontraron 4
individuos positivos con una prevalencia del 2%.
Figura 3. Las flechas indican Tripanosoma sp
encontrado en este estudio en
eritrocitos de búfalo. Tinción con Dip
Quick, microfotografía con aumentos de
1000X.
71
Determinación taxonómica de hemoparásitos y su prevalencia en búfalos de agua. Prada GA et al.
DISCUSIÓN
Los 600 búfalos involucrados en esta
investigación se seleccionaron aleatoriamente de
una población de 4133 individuos (Censo febrero
2004, Hacienda La Suiza). Esta muestra representó
un 99% de margen de confianza.
El colorante Dip Quick presentó una ventaja sobre
el colorante Giemsa, dada porque además de que
los parásitos coloreaban muy bien, permitió
observarlos muy bien al microscopio porque en
las láminas no quedaban residuos de colorante,
lo cual permitió observar Anaplasma; el colorante
Giensa no permitió observar Anaplasma porque
quedaban residuos que impedían observar con
nitidez este parásito.
De los hemoparásitos encontrados en búfalos de
la Hacienda la Suiza, el de mayor prevalencia
general fue Anapalasma sp, en los tres grupos por
edades de los búfalos se encontró un porcentaje
mayor al 54% respectivamente. Este resultado
varia de acuerdo con el encontrado por Miranpuri
(1988), donde en un grupo de animales, la
cantidad de afectados por Anaplasma sp fue de
aproximadamente 6,2% pero debe tenerse en
cuenta que dicha investigación fue realizada en
la India, donde juegan factores climáticos
diferentes comparativamente con los del trópico,
es por esta razón que la difusión de hemoparasitos
en Colombia puede ser mayor.
Al parecer los búfalos poseen cierta resistencia al
hemoparásito es por esta razón que la mayoría
de animales muestreados no mostraron una
sintomatología marcada a la enfermedad se
señala con relación al hemoparásito que una
cantidad de animales positivos al patógeno
estaban aparentemente sanos y eficientes
productivamente, lo cual podría interpretarse
como que al parecer el búfalo, es una especie
potencialmente resistente a estos protozoos
patógenos causantes de grandes pérdidas
económicas en el ganado vacuno (Sepúlveda et
al. 1984).
72
En cuanto a la baja presentación de Babesia sp
coincide con anteriores estudios en ganado
bufalino (Miranpuri 1988); en un muestreo de mas
de 300 animales en el noroeste de la India, solo se
encontró una prevalencia de Babesia sp del 2,2%.
La presencia de Babesia sp en búfalos no está de
acuerdo con Muralsedharan et al. (1984), quienes
reportaron que la ocurrencia de Babesia bovis está
limitada solo a bovinos.
La prevalencia de Trypanosma sp encontrada en
búfalos de la Hacienda La Suiza (1,16%) es mucho
menor que lo encontrado en Córdoba y
Antioquia por Sepúlveda et al. (1984) quienes en
74 búfalos encontraron una prevalencia de 16,7%.
La presentación sintomática de estas
enfermedades en la Hacienda La Suiza solamente
se ve reflejada en animales jóvenes, en donde se
da un cuadro nervioso, con perdida de sensibilidad
superficial en los miembros posteriores o
anteriores y debilidad, con una morbilidad de 2 a
3 animales por mes, parámetro que muestra que
los bufalinos jóvenes pueden sufrir cuadros
agudos, siendo en este caso los mas afectados;
caso contrario a lo que se pensaba en cuanto a la
inmunidad pasiva dada por las madres y la
resistencia adquirida por los animales jóvenes,
«frecuentemente se ha señalado una relación
inversa entre edad y resistencia a la infección por
hemoparásitos en la que los jóvenes son menos
susceptibles que los animales mayores» (Criado
2003). La mayoría de búfalos conviven con estas
enfermedades y no muestran síntomas
patológicos; por lo que a nivel productivo debe
tener una repercusión grave en producción de
leche y ganancia de peso. Por consiguiente, es
importante en trabajos futuros, evaluar
parámetros productivos como los anteriormente
mencionados.
Revista de Investigación, Vol. 6 (1). Enero - junio 2006.
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