elaboración de una forma farmacéutica a partir del extracto de hojas
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UNIVERSIDAD REGIONAL AUTÓNOMA DE LOS ANDES “UNIANDES” FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PROYECTO DE INVESTIGACIÓN PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE BIOQUÍMICA FARMACÉUTICA TEMA: “ELABORACIÓN DE UNA FORMA FARMACÉUTICA A PARTIR DEL EXTRACTO DE HOJAS DE LA PLANTA ZORRILLA QUE DISMINUYA NIVELES DE GLUCOSA EN SANGRE, PLANTA NATIVA DEL CENTRO CULTURAL UNI-SHU DE LA COMUNA CHUIGUILPE DE SANTO DOMINGO DE LOS TSÁCHILAS” AUTORA: CORTEZ VILLARROEL MARCIA ARACELLY ASESORA: DRA. ESCOBAR LÓPEZ RUBÍ MAGNOLIA, Mg. AMBATO-ECUADOR 2016 CERTIFICADO DEL ASESOR Doctora Rubí Escobar López en calidad de Asesora del Proyecto de Investigación asignada por disposición de la Secretaria General de la Universidad UNIANDES certifica: que la Srta. Marcia Aracelly Cortez Villarroel , estudiante de la carrera de Bioquímica y Farmacia, ha concluido con el trabajo de tesis con el tema: “ELABORACIÓN DE UNA FORMA FARMACÉUTICA A PARTIR DEL EXTRACTO DE HOJAS DE LA PLANTA ZORRILLA QUE DISMINUYA NIVELES DE GLUCOSA EN SANGRE, PLANTA NATIVA DEL CENTRO CULTURAL UNI-SHU DE LA COMUNA CHIGUILPE DE SANTO DOMINGO DE LOS TSÁCHILAS”, el mencionado proyecto de investigación ha sido revisada en todas sus páginas, por tanto autorizo la presentación para los fines legales pertinentes ya que es original y cumple con los requisitos de fondo y forma exigidos por la universidad. Ambato, Julio 2016 Dra. Rubí Magnolia Escobar López. 180336688-7 Asesora de Tesis DECLARACIÓN DE LA AUTORÍA DEL PROYECTO DE INVESTIGACIÓN Quien suscribe Marcia Aracelly Cortez Villarroel, hace constar que es la autora del Proyecto de Investigación de Grado, titulado como: “ ELABORACIÓN DE UNA FORMA FARMACÉUTICA A PARTIR DEL EXTRACTO DE HOJAS DE LA PLANTA ZORRILLA QUE DISMINUYA NIVELES DE GLUCOSA EN SANGRE, PLANTA NATIVA DEL CENTRO CULTURAL UNI-SHU DE LA COMUNA CHUIGUILPE DE SANTO DOMINGO DE LOS TSÁCHILAS”, constituye una elaboración personal realizada únicamente con la dirección de la Asesora del Proyecto de Investigación. Srta. Marcia Aracelly Cortez Villarroel C.C1600862187 DEDICATORIA Dedico este trabajo principalmente a Dios, por haberme dado la vida y permitirme el haber llegado hasta este momento tan importante de mi formación profesional. A mi padre y a mi madre que siempre han estado ahí para mí brindándome su apoyo incondicional. A mis queridos docentes quienes me han enseñado que todo en la vida se consigue con paciencia sacrificio y mucho esfuerzo. También quiero dedicar este trabajo a cada una de las personas quienes van hacer uso de esta investigación para enriquecer y fortalecer sus conocimientos profesionales como guía de sus objetivos. Marcia Cortez. AGRADECIMIENTO Agradezco a Dios por protegerme durante todo mi camino y darme fuerzas para superar obstáculos y dificultades a lo largo de toda mi vida. A mi madre, que con su demostración de una madre ejemplar me ha enseñado a no desfallecer ni rendirme ante nada y siempre perseverar a través de sus sabios consejos. A la Dra. Viviana Basantes y Dra. Rubí Escobar quienes con mucha paciencia y dedicación me guiaron en el transcurso del presente trabajo investigativo. Marcia Cortez. RESUMEN La presente investigación tuvo como objetivo realizar la identificación taxonómica, el análisis físico-químico y el tamizaje fitoquímico mediante ensayos cualitativos, físicoquímicos, para determinar los principios activos presentes en la planta Zorrilla (Petiveria alliacea) y elaborar un jarabe natural a base del extracto de las hojas de la planta y su respectivo control de calidad. Los resultados obtenidos indicaron que la planta en estudio tiene: alcaloides, taninos, flavonoides, azucares reductores, saponinas lo que hace que tenga propiedades anestésicas, antisépticas, antibacteriana y antidiabéticas. Conteniendo azucares reductores, compuesto orgánico responsable de la acción farmacológica hipoglucemiante natural comprobando su uso ancestral como reductor de azucares en sangre. El jarabe natural a base del extracto de la planta en estudio contiene un edulcorante natural de Stevia bajos en carbohidratos, bajos en azúcar. Debido a que la Stevia tiene un efecto significante en la glucosa en sangre, lo que sirve para personas con diabetes, mejorando así su calidad de vida y brindando un nuevo producto natural innovador. . ABSTRACT This research was conducted with the purpose of carrying out a taxonomy identification, a physical and chemical analysis and a phytochemical screen through qualitative and physical-chemical methods in order to determine the active principles present in the Zorrilla plant (Petiveria alliacea), to later prepare a natural syrup from the extract of the plant´s leaves and run the correspondent quality control. The findings show that the plant under study has: tannins, flavonoids, reducing sugars and saponins which allow it to have antiseptic, antibacterial and antidiabetic properties. It contains reducing sugars which is the organic compound responsible of the natural glucose lowering action and this proves the ancestral use of the plant as blood sugar levels reducer. The natural syrup made from the extract of the plant under study contains a natural Stevia sweetener low in carbohydrates and sugar. Since Stevia has significant effect in blood glucose levels, it is useful for people with diabetes. The syrup improves the quality of life and will constitute a new natural innovative product. ÍNDICE GENERAL CERTIFICACIÓN DEL ASESOR DECLARACIÓN DE AUTORÍA DEL PROYECTO DE INVESTIGACIÓN DEDICATORIA AGRADECIMIENTO RESUMEN ABSTRACT ÍNDICE GENERAL ÍNDICE DE CUADROS ÍNDICEDE IMÁGENES ÍNDICE DE TABLAS ÍNDICE DE ANEXOS ÍNDICE DE ABREVIATURAS Pág. INTRODUCCIÓN __________________________________________________ 1 Antecedentes de la investigación ______________________________________ 1 Antecedentes legales _______________________________________________ 4 CAPITULO I ____________________________________________________ 10 MARCO TEÓRICO _______________________________________________ 10 1.1. Origen y evolución del objeto de investigación _____________________ 10 1.2. Análisis de las distintas posiciones teóricas sobre el objeto de investigación.11 1.2.2. Descripción de la planta._____________________________________ 12 1.2.3. Fitomedicamentos__________________________________________ 14 1.2.3.1Control de calidad para las plantas de uso medicinal ____________ 15 1.2.3.2 Calidad de las drogas crudas ______________________________ 15 1.2.3.3 Características microscópicas de drogas constituidas por hojas ___ 17 1.2.4 Diabetes. ___________________________________________________ 18 1.2.4.1. Síntomas _______________________________________________ 18 1.3.3.2Clasificación de la diabetes. ________________________________ 20 1.3.3Glucólisis. _______________________________________________ 24 1.2.5. Ensayos cuantitativos de la planta _____________________________ 26 1.2.5.1. Extracto vegetal ________________________________________ 27 1.2.5.2. Tamizaje fitoquímico del extracto de la planta. ________________ 28 1.2.5.3. Forma farmacéutica _____________________________________ 29 1.2.6. Clasificación de las formas farmacéuticas: _______________________ 29 1.2.6.1.Según el estado físico: ___________________________________ 29 1.2.6.2. Según las vías de administración: __________________________ 29 1.2.7. Jarabe ___________________________________________________ 30 1.2.7.1. Constituyentes Básicos __________________________________ 30 1.2.7.2Sustancias auxiliares:_____________________________________ 30 1.2.7.3. Control de calidad en jarabes ______________________________ 31 1.3. Valor critica de los conceptos principales de las distintas posiciones teóricas sobre el objeto de investigación. _____________________________________ 31 1.3.1. Fitoquímica _____________________________________________ 31 1.3.2. Farmacognosia __________________________________________ 32 1.3.3. Tecnología Farmacéutica __________________________________ 33 1.3.4. Fitofarmacia. ____________________________________________ 33 1.4. Conclusiones parciales del Capítulo I ____________________________ 34 CAPITULO II ____________________________________________________ 35 MARCO METODOLÓGICO Y PLANTEAMIENTO DE LA PROPUESTA ______ 35 2.1. Caracterización del sector, rama, empresa, contexto institucional o problema seleccionado para la investigación. ___________________________________ 35 2.1.1. Modalidad de la investigación _________________________________ 35 2.1.2. Tipos de investigación por su diseño y por su alcance ______________ 36 2.1.3. Tipo de investigación por su alcance _________________________ 36 2.1.4. Población y muestra ______________________________________ 36 2.1.5. Métodos, técnicas e instrumentos______________________________ 36 2.1.6. Métodos y técnicas del nivel empírico del conocimiento __________ 37 2.1.7. Métodos del nivel teórico de conocimiento _____________________ 37 2.2. Descripción del procedimiento metodológico para el desarrollo de la investigación. ____________________________________________________ 37 2.2.1. Métodos, técnicas y procedimientos de análisis __________________ 37 2.2.2. Estudio fitoquímico _________________________________________ 39 2.2. Resultados_________________________________________________ 47 a). Características microscópicas ___________________________________ 49 b). Identificación botánica _________________________________________ 51 c). Parámetros físicos químicos ____________________________________ 51 d). Tamizaje fitoquímico __________________________________________ 52 2.4. Conclusiones parciales del Capítulo II _____________________________ 55 CAPITULO III ___________________________________________________ 56 EVALUACIÓN DE RESULTADOS DE SU APLICACIÓN __________________ 56 3.1. Tema _______________________________________________________ 56 3.2. Introducción __________________________________________________ 56 3.3. Objetivos ____________________________________________________ 57 3.4. Identificación del problema ______________________________________ 57 3.41. Tipo de estudio ____________________________________________ 57 3.4.2. Lugar de desarrollo y aplicación de la propuesta. __________________ 58 3.4.3. Metodología empleada _____________________________________ 58 3.4.4. Secuencia de procedimientos ________________________________ 58 3.4.4.1. Desarrollo de la propuesta ________________________________ 58 3.4.5. Resultados _______________________________________________ 62 3.4.5.1. Resultado del control de calidad del jarabe. ___________________ 62 3.4.5.2. . Resultados del Análisis microbiológico _____________________ 65 3.5 Material para apoyar la difusión ___________________________________ 65 3.6 Beneficios que ofrece la propuesta ________________________________ 66 3.7 Esquema de la propuesta________________________________________ 66 3.8. Conclusión parcial del Capítulo III _________________________________ 67 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ____________________________ 68 Bibliografía Anexos ÍNDICE DE CUADROS Pág. Cuadro 1 Características macro morfológica de las hojas de la planta Zorrilla .... 48 Cuadro 2 Características organolépticas de la planta Zorrilla. ............................. 48 Cuadro 3 Identificación taxonómica de la planta Zorrilla ...................................... 51 Cuadro 4 Análisis Fitoquímico (Extracto Etéreo) de las hojas de la planta Zorrilla53 Cuadro 5 Análisis Fitoquímico (Extracto alcohólico) de las hojas de la planta Zorrilla. .............................................................................................................................. 53 Cuadro 6 Análisis Fitoquímico (Extracto Acuoso) de las hojas de la planta Zorrilla54 ÍNDICE DE IMÁGENES Pág. Imagen 1 Planta Zorrilla (Petiveria alliacea) ......................................................... 11 Imagen 2 Tipo de venación de la hoja de la planta Zorrilla .................................. 49 Imagen 3 Estructura microscópica del Corte transversal del mesófilo de la hoja de la planta Zorrilla......................................................................................................... 50 Imagen 4 Estructura microscópica del corte transversal del mesófilo de la hoja de la planta Zorrilla......................................................................................................... 50 Imagen 5 Esquema de la propuesta …………………………………………………. 66 ÍNDICE DE TABLAS Pág. Tabla 1 Determinación de los parámetros físico-químicos de la planta Zorrilla... 52 Tabla 2 Resultado de evaluación sensorial: Atributo del color, aroma, sabor del jarabe .................................................................................................................... 63 Tabla 3 Características organolépticas del jarabe a partir del extracto de hojas de planta Zorrilla......................................................................................................... 64 Tabla 4 Determinación de pH y densidad. ........................................................... 64 Tabla 5 Control microbiológico del jarabe a base del extracto de las hojas de la planta Zorrilla......................................................................................................... 65 ÍNDICE DE ANEXOS Pág. Anexo 1 Perfil del proyecto de investigación. Anexo A Anexo A 1 Ficha de Recolección._____________________________________ 19 Anexo A 2 Hoja de Catación. ________________________________________ 20 Anexo B Anexo B 1 Recolección de la muestra e identificación taxonómica de la planta Zorrilla (Petiveria alliacea). ________________________________________________ 22 Anexo B 2 Identificación taxonómica de la planta Zorrilla __________________ 23 Anexo B 3 Tamizaje fitoquímico de la planta Zorrilla ______________________ 24 Anexo B 4 Elaboración del jarabe y control microbiológico. _________________ 26 Anexo B 5 Etiqueta y Hoja volante del jarabe ___________________________ 27 ÍNDICE DE ABREVIATURAS OMS: Organización mundial de la salud ADA: Asociación Americana de Diabetes USP: United States Pharmacopeia (Farmacopea oficial de los Estados Unidos). %: Porcentaje mL: Mililitros g: Gramos cm: Centímetros m: Metros °C: Grados centígrados mg: Miligramos ufc: Unidades formadoras de colonias INTRODUCCIÓN Antecedentes de la investigación Abad J (2014), en su trabajo realizado “Él estudió de la actividad antioxidante y antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de (Peper pubinervulum C.DC) proveniente de Macas Ecuador”, manifiesta que la actividad antioxidante del aceite esencial de las hojas de (Piper pubinervulum) proveniente de Macas, Ecuador. Utilizó los métodos de inhibición del radical libre DPPH y ABTS se obtuvo un IC 50 igual a 20,399 µg / y 0,416 µg / mL respectivamente, que al compararlos con los IC 50 del aceite de (Thymus vulgaris) con 0,414 µg / mL y 0,231 µg / mL, demuestra una actividad antioxidante menor del aceite en estudio. Además realizaron el método de foto quimioluminiscencia con una capacidad antioxidante de 1,8 μmol Trolox / g. También se determinó la actividad antimicrobiana por el método de difusión en agar con discos. Entre las bacterias ensayadas, (Escherichia coli) ATCC 8739 y (Staphylococcus Aureus sub sp. Aureus) ATCC 6538P fueron las más susceptibles al presentar una MIC de 6,08 y 3,09 mg / mL respectivamente y entre las levaduras ensayadas, (Candida albicans) ATCC 10231 fue la más susceptible al presentar una MIC de 0,3909 mg / mL. Mediante el método de TLC – DPPH y autobiográfico determinó que las sustancias que poseen actividad antioxidante y antimicrobiana que al compararlos con la investigación de Coronel y Piedra (2014) de la que se adoptó la metodología de las placas TLC, concluyeron que los compuestos son: Elemicin, nerolidol, gamma- assaron, assarone e, dimethoxy 5 vinyl 1,2 benzodioxide 4-6, bisabolol, geranyllinalool, Isoeugenolmetil éter, Beta-Caryophyllene, alpha-Humulene, (+)-betaSelinene y Bicyclogermacrene. 1 Santander S, (2009) en su estudio “Influencia del tratamiento de (Petiveria alliacea) en la expresión diferencial de genes en células tumorales, nos dice que el estudio del perfil de expresión génica en las células eucariotas es una herramienta importante en el entendimiento de las huellas moleculares generadas en respuesta a un estímulo farmacológico. A partir de (Petiveria alliacea), una de las plantas colombianas con actividad antitumoral, obtuvieron la fracción FAST 8 7:3, en la cual encontraron diferentes compuestos, como el trisulfuro de dibencilo, uno de los componentes antitumorales más potentes reportados para la planta. Esta fracción también posee actividad cito tóxica sobre la línea de células tumorales K562 e induce cambios en el perfil de expresión de genes, que podrían estar relacionados de alguna forma con la actividad antitumoral tradicional reportada para esta planta. Esta actividad puede ser ejercida, en parte, por la presencia del trisulfuro de dibencilo y por la actividad de los otros componentes de la fracción. Utilizaron el ADNc-AFLP como herramienta útil en la tamización del perfil de genes transcritos en las células tumorales y, también, como herramienta útil para el descubrimiento de nuevos fármacos antitumorales. Salmerón R. (2012), en su trabajo “Utilización de la planta Anamú (Petiveria alliacea) en el tratamiento de la mastitis caprina en la finca Santa Rosa de la Universidad Nacional Agraria (UNA)”, utilizó un diseño completamente al azar (D.C.A) el que está compuesto por un lote de 14 cabras en ordeño, divididas en 2 grupos, cada grupo formado por 7cabras, seleccionadas al azar y sometidas a tratamientos distintos. Tratamiento I: Mastoxin20% (Solución de Anamú 20%) y Tratamiento II: Candela Mastivet. (Cloxacilinasódica200mg). Los resultados muestran que el cuarto derecho (CD) el 19 % reaccionaron positivos y 81% reaccionaron negativos, el cuarto izquierdo (CI) el 16 % reaccionó positivo y 84 % reaccionaron negativos. El tratamiento 1 Mastoxin 20%, (Solución de .Anamú 20%), alcanza su mayor efectividad a partir de los 21 días y el tratamiento 2 Candela Mastivet, (Cloxacilina sódica 200mg), alcanza su mayor efectividad a partir de los 28 días. 2 El tratamiento alternativo (I) a base de (Solución de Anamú 20%) mostró factibilidad económica y terapéutica. Delgado B. (2011), en su investigación “Propiedades entomotóxicas de los extractos vegetales de azadirachta indica, (Piper auritum) y (Petiveria alliacea) para el control de (Spodoptera exigua)”, manifiesta que se evaluó el efecto anti alimentario y la toxicidad de los extractos de Azadirachta indica, (Piper auritum) y (Petiveria alliacea) en larvas de (S. exigua) en condiciones de laboratorio y en un cultivo orgánico de tomate uva var. Santa a campo abierto. Este trabajo lo realizaron con los extractos hexánico y metanólico de semillas de (A. indica) y hojas de (P. auritum) y (P. alliacea) aplicados en diferentes concentraciones en larvas 4to instar de S. exigua. Las variables que se evaluaron fueron índice disuasión alimentaria (FDI), porcentaje de mortalidad y CL50. Realizaron un análisis de varianza (ANOVA) y una prueba de comparación de medias de LSD Fisher. El mayor efecto disuasivo alimentario encontraron en el extracto metanólico de (Neem), seguido por el de (P. auritum) y el menor efecto en el extracto de (P. alliacea). Los porcentajes de mortalidad para (A. indica), (P. auritum)y(P. alliacea)fueron 38.88, 28.8, 21.22 %, respectivamente, en condiciones de laboratorio, la misma tendencia se encontró en campo. La CL50 mostró que el extracto metanólico de (A. indica) fue el más tóxico (4.03 ppm), le siguió en efectividad el de (P. auritum) (42.08 ppm). En campo, la CL50 de los extractos metanólico de (A. indica, P. auritu y P. alliacea) fueron 9.61, 21.21 y 104.1 ppm, respectivamente. En el presente estudio encontraron que son marcadas las diferencias que existen entre las variaciones de toxicidad por especie y el tipo de extracto. 3 Antecedentes legales Constitución de la república del Ecuador En el Art. 14.-Se reconoce el derecho de la población a vivir en un ambiente sano y ecológicamente equilibrado, que garantice la sostenibilidad y el buen vivir, suma kawsay. El Art. 385.- Señala que el sistema nacional de ciencia, tecnología, innovación y saberes ancestrales, en el marco del respeto al ambiente, la naturaleza, la vida, las culturas y la soberanía, tendrá como finalidad: 1. Generar, adaptar y difundir conocimientos científicos y tecnológicos. 2. Recuperar, fortalecer y potenciar los saberes ancestrales. 3. Desarrollar tecnologías e innovaciones que impulsen la producción nacional, eleven la eficiencia y productividad, mejoren la calidad de vida y contribuyan a la realización del buen vivir. En el Art 395.- La Constitución reconoce os siguientes principios ambientales: 1) El Estado garantizará un modelo sustentable de desarrollo ambientalmente equilibrado y respetuoso de la diversidad cultural, que conserve la biodiversidad y la capacidad de regeneración natural de los ecosistemas, y asegure la satisfacción de las necesidades de las generaciones presentes y futuras. En el Art. 363.- El Estado será responsable de: 4.-Garantizar las prácticas de salud ancestral y alternativa mediante el reconocimiento, respeto y promoción del uso de sus conocimientos, medicinas e instrumentos. 4 7.-Garantizar la disponibilidad y acceso a medicamentos de calidad, seguros y eficaces, regular su comercialización y promover la producción nacional y la utilización de medicamentos genéricos que respondan a las necesidades epidemiológicas de la población. En el acceso a medicamentos, los intereses de la salud pública prevalecerán Sobre los económicos y comerciales. El Estado del arte de este proyecto de investigación es que en el Ecuador ha desarrollado la medicina natural y muchas de las plantas son utilizadas para curaciones como problemas de próstata, cardiovasculares, entre muchas otras. En la Región Costa, en las comunas de Tsáchilas la planta zorrilla es utilizada como anti cancerígena, energética, en curaciones Shamánica de sus habitantes, y es conocida con distintos nombres en diferentes países del Centro y Sur América, el Caribe y África. Es una hierba perenne de tallo recto, poco ramificado de 0,5 a 1 m de alto, con hojas alternas de forma elíptica y de 6 a 19 cm de largo. Sus flores son pequeñas de color blanco y el fruto es una baya cuneiforme que presenta cuatro ganchos doblados hacia abajo (Ferrer, 2010). La planta se ha utilizado desde los tiempos remotos con fines medicinales y ritos mágicos religiosos. Actualmente, se utiliza como medicamento herbolario para diferentes enfermedades y se comercializa por varias firmas como suplemento nutricional o como inmunomodulador. Esta planta ha motivado mucho interés en países fuera del área amazónica debido principalmente a sus posibles efectos antitumorales (Ruffa 2010). El presente trabajo de investigación, establecerá la relación que existe entre las aplicaciones tradicionales la planta zorrilla y sus principios activos mediante ensayos experimentales y clínicos en la planta y también la forma farmacéutica. 5 En lo referente al Planteamiento del problema la diabetes se está convirtiendo en una epidemia mundial relacionada con el rápido aumento del sobrepeso, la obesidad y la inactividad física. Se calcula que las muertes por diabetes aumentarán más de un 50% en los próximos 10 años. En los países desarrollados la mayoría de los diabéticos han superándola edad de jubilación, mientras que en los países en desarrollo el grupo más afectado es el de 35 a 64 años (OMS, 2014). El tratamiento de la diabetes puede ser por medicina tradicional y fototerapia que poco a poco ha tomado bases científicas más sólidas, que ayuda durante las primeras etapas de la enfermedad, existiendo evidencia acerca de la eficacia en el empleo de fitomedicamentos o suplementos alimenticios a base de plantas, con menos efectos secundarios (Castro, Villa, Ramirez, & Mosso, 2013). En Ecuador, el uso y conocimiento de plantas medicinales se desarrolló en las culturas prehispánicas y se acentúa esta práctica por 3 razones: la atención a sus enfermedades, la extensa flora, la amplitud en número de grupos indígenas que conservan sus propias tradiciones. El Ecuador presenta las condiciones óptimas para el cultivo, la identificación de plantas que podrían ser la base para el desarrollo de fitofármacos para el tratamiento de la diabetes. Determinándose así la necesidad de crear una forma farmacéutica de origen natural a partir del extracto de las hojas de la planta zorrilla para reducir los niveles de glucosa en sangre que ayudará a la población a mejorar su calidad de vida. La Formulación del problema se enfoca principalmente en: ¿Cómo ayuda los principios activos de planta zorrilla, a bajar los niveles de glucosa en sangre? En cuanto a la Delimitación del problema del proyecto de investigación se refiere a los Objetivo de la investigación y campo de acción. 6 El Objetivo de la investigación: Fitomedicamentos Y con respecto al Campo de acción son: Farmacognosia, Tecnología Farmacéutica, Fitofarmacia. El Lugar en donde se realizó fue en: La Provincia de Santo Domingo de los Tsáchilas, Comuna de Chiguilpe, Centro cultural UNI-SHU. La Identificación de las líneas de investigación es: - Farmacología y Gestión Farmacéutica El Objetivo General de este proyecto de investigación es: Elaborar una forma farmacéutica a partir del extracto de las hojas de la planta zorrilla, que disminuya niveles de glucosa en sangre. Los Objetivos Específicos son: - Identificar taxonómicamente la planta zorrilla. - Determinar cualitativamente los principios activos que posee la planta zorrilla. - Elaborar una forma farmacéutica elaborada a base del extracto de las hojas de la planta zorrilla. La principal Idea a defender es la forma farmacéutica a base del extracto de las hojas de la planta zorrilla es efectiva para disminuir los niveles de glucosa en sangre 7 La Justificación es importante el presente trabajo de investigación debido a que las plantas medicinales han sido utilizadas desde hace mucho tiempo en el tratamiento de varias enfermedades lo cual ha fomentado gran interés por el estudio de sus principios activos como una alternativa para la elaboración de nuevas formas farmacéuticas naturales. El interés fundamental del presente trabajo de investigación es la elaboración de un jarabe a base del extracto de la planta Zorrilla (Petiveria alliacea), lo cual demuestre por medio de la extracción de los principios activos que la planta contiene metabolitos secundarios específicos para reducir niveles de glucosa en sangre. Es por ello que debido a los beneficios que nos brinda la planta Zorrilla (Petiveria alliacea), surge la idea de continuar con la investigación sobre la elaboración del jarabe a partir de un extracto con posible actividad hipoglucemiante. La Novedad científica del proyecto de investigación en el centro cultural UNI-SHU de la Comuna Chiguilpe de Santo Domingo de los Tsáchilas se realizara un estudio fotoquímico de los principios activos de la planta zorrilla, dónde se va a identificar compuestos propios de la especie lo cual ayudara a la elaboración de una forma farmacéutica para tratar enfermedades la misma que ayudara al mejoramiento de la salud y calidad de vida de las personas. En cuanto al Aporte teórico para la presente investigación integrara los conceptos: - A nivel teórico Fortalecer los conocimientos de una forma farmacéutica a partir del extracto de hojas de la planta zorrilla la misma que posee propiedades curativas para disminuir los niveles de glucosa en sangre lo que servirá de sustento para crear nuevas hipótesis para futuras investigaciones. 8 - A nivel científico Comprobar los principios activos de la planta zorrilla mediante tamizaje fitoquímico basado en reacciones de coloración y precipitación y su posterior elaboración de una forma farmacéutica para la diabetes. La Significancia práctica del presente trabajo es de gran importancia debido a que servirá para futuras investigaciones y creación de nuevas formas farmacéuticas. - Investigación explicativa: brindara la sociedad una nueva forma farmacéutica natural y medicinal que ayude a la diabetes. Los Métodos técnicas e instrumentos se realizarán la revisión bibliográfica en libros, artículos científicos, revistas, en la cual se consultará la información teórica que llevará a la realización de la teoría de la investigación. Los Métodos del nivel empírico del conocimiento son: - Observación científica: se observará cual es el habitad natural de las plantas, sus usos, composición físico-química y aplicación en una forma farmacéutica. - Experimento: se determinará el control físico- químico y microbiológico de la materia prima y la forma farmacéutica. Los Métodos del nivel teórico de conocimiento son: - Histórico- Lógico: empleado en el marco teórico e investigación. - Hipotético- Deductivo: observación del fenómeno a estudiar, y verificación de la verdadera acción farmacológica de la planta zorrilla. 9 CAPITULO I MARCO TEÓRICO 1.1. Origen y evolución del objeto de investigación En la selva amazónica, el anamú se utiliza como parte de un baño de hierbas contra la brujería por los indios y los curanderos locales. Los indios lo llaman Ka' apor mikurka'a (lo que significa hierba de zarigüeya) y lo utilizan para la medicina y la magia. Los nativos en Guatemala aplastan la raíz y la inhalan para la sinusitis, y los indios ese'eja en la Amazonía peruana preparan una infusión de las hojas para los resfriados y la gripe. El pueblo garífuna indígena en Nicaragua también emplea una infusión o decocción de la hoja para los resfriados, tos y dolores, así como para los rituales mágicos. La raíz se piensa que es más potente que las hojas. Se considera un analgésico y se usa a menudo en la selva en los remedios tópicos para la piel. Otros grupos indígenas machacan las hojas hasta formar una pasta y utilizarla externamente para dolor de cabeza, dolores reumáticos y otros tipos de dolor. Este mismo remedio también se utiliza como un insecticida. (Narut , 2014) Anamú tiene una larga historia en la medicina natural en todos los países tropicales donde crece. En la medicina herbaria ecuatoriana, se considera un diurético antiespasmódico, promotor menstrual, estimulante, y promotor de sudor. Herbolarios y profesionales de la salud natural utilizan anamú para el edema, la artritis, la malaria, el reumatismo y la mala memoria, y como un analgésico tópico y anti-inflamatorio para afecciones de la piel. 10 A lo largo de América Central, las mujeres utilizan anamú para aliviar los dolores de parto y facilitar el parto, así como para inducir abortos. En Guatemala, la medicina herbaria, la planta se llama apacín y una decocción de las hojas se toma internamente para las dolencias digestivas y la digestión lenta, flatulencia, y la fiebre. Una decocción de las hojas también se usa externamente como un analgésico para el dolor muscular y de enfermedades de la piel. Anamú se utiliza comúnmente en las grandes ciudades y pueblos de Sur y Centro América como un remedio natural para tratar los resfriados, la tos, gripe, infecciones respiratorias y pulmonares y el cáncer, y para apoyar el sistema inmunológico. En Cuba, los herbolarios hierven toda la planta y la utilizan para tratar el cáncer y la diabetes, y como. Anti-inflamatorio y abortivo. 1.2. Análisis de las distintas posiciones teóricas sobre el objeto de investigación. Planta zorrilla. Imagen alliacea) 1 Planta Zorrilla (Petiveria Fuente: Centro cultural UNI-SHU. Elaborado por: Cortez ,2015. 11 1.2.2. Descripción de la planta. Planta perenne que crece hasta 1 m, de raíz profunda, crece en lugares húmedos algo sombríos y en zonas ribereñas, en suelos arcillosos se dificulta el crecimiento de la raíz; requiere alta humedad relativa. Es una planta inmunoestimulante no muy común, crece silvestremente, se produce por semillas o estacas de las ramas no leñosas. La recolección de hojas debe hacerse antes de la floración. La flor es blanca y sale en racimos terminales. Es planta indeseable en potreros de climas cálidos. El aceite esencial es repelente contra la polilla de la ropa. (Polanco, 2012) Otros nombres: Apacín, Apacina, Apazote, Calauchín, Anamú Chanviro, Epacina, Hierba de las gallinitas, Hierba de toro, Hierba zorrillo, Huevo de gato, Ipacina, Mapurite, Mapurito, Mozote, Mucara, Mucura. Según el autor Restrepo, 2011. Considera que: a) Origen y distribución. Es una planta que se encuentra básicamente en el Amazonas y en las áreas tropicales de Centro y Sur América además en el Caribe y en África. b) Características botánicas. Es una planta herbácea perenne tropical con un fuerte olor a ajo especialmente las raíces. Flores: Las flores son pequeñas y blancas; el fruto es una baya cuneiforme provista de cuatro ganchos doblados hacia abajo. c) Características organolépticas. Tiene un fuerte olor a ajo, especialmente, en las raíces. d) Composición química. Contiene numerosos principios activos (triterpenos, betasitosterol, cumarina, etc.) siendo los más interesantes los derivados sulfurados: benzil-hidroxi-etil-trisulfito, dibenzil-trisulfido, tritiolaniacina y el D-pinitol (3-O-metilquiroinositol) que ejerce efectos similares a la insulina, disminuyendo los niveles de glucosa, actuando vía post-receptor de insulina. 12 e) Propiedades terapéuticas. Tiene muchas aplicaciones para la salud, muchos estudios se han llevado a cabo in vitro o en modelo animal como ratones, por lo que aún no se está clara su total eficacia. (Sariego, Marin, Ochoa, & Tamayo, 2013) Contra el cáncer: La planta anamú fue investigada con este fin durante la década de los 90’s y se comprobó que extractos de la planta tenían un efecto citotóxico para las células cancerígenas llegando a matar algunas de ellas, esta planta puede ayudar a inhibir el desarrollo de cáncer de mama y combatir activamente ciertos tipo de cáncer como leucemia, cáncer cerebral. (Alarcón, 2011) Estimula el sistema inmunológico: favorece de acuerdo a un estudio realizado en ratones, la producción de linfocitos y demás células que contribuyen al sistema inmunológico. (Alarcón, 2011) Artritis: tiene propiedades antiinflamatorias, propiedades que la hacen útil en múltiples padecimientos tales como la artritis, ayudando a reducir la inflamación en las articulaciones, además, puede ejercer efecto analgésico disminuyendo el dolor. (Alarcón, 2011) Para la diabetes: tiene efectos positivos sobre los niveles de glucosa en sangre, contribuyendo a disminuir sus niveles, sin embargo, se debe emplear con precaución para este fin, ya que su efecto no debe combinarse con el de fármacos para disminuir los niveles de glucosa en sangre sin consultarlo con su médico previamente. (Alarcón, 2011) 13 Es útil contra hongos: Uno de los usos tradicionales del anamú se debe a sus propiedades antimicrobianas e incluso antimicóticas, se ha comprobado que realmente puede ser útil en caso de infecciones por hongos y bacterias. (Alarcón, 2011) 1.2.3. Fitomedicamentos Según la Organización Mundial de la Salud, son “Productos medicinales acabados y etiquetados cuyos ingredientes activos están formados por partes aéreas o subterráneas de plantas u otro material vegetal, o combinaciones de éste, en estado bruto o en forma de preparaciones vegetales”. La investigación de las plantas medicinales ha logrado: - Obtener inventarios y clasificación terapéutica de las plantas. - Hallarcriterioscientíficosqueasegurenlacalidaddelaspreparacionesysuefica cia para el tratamiento de algunas enfermedades. - Desarrollar normas internacionales que regulen los Fitomedicamentos. Para una autentificación de la especie botánica empleada es necesario en primer lugar realizar la identificación botánica de la especie vegetal. (Miranda, 2009) a) Farmacognosia El estudio de los medicamentos que se obtienen de fuentes naturales, vegetales y animales. Esta ciencia se inicia con materia médica y se ocupa del origen botánico y zoológico, la composición bioquímica y los efectos terapéuticos de los fármacos naturales, sus derivados y constituyentes. (Bonier & Polanco, 2012) b) Fármaco botánica Rama de la farmacología, que se encarga de la caracterización botánica y química de especies vegetales medicinales. Incluye el análisis macroscópico, microscópico y el tamizaje fotoquímico de las plantas en estudio (Bonier & Polanco, 2012) 14 1.2.3.1Control de calidad para las plantas de uso medicinal El análisis y control de las drogas vegetales y derivados, especialmente productos extractivos, constituye uno de los pasos imprescindibles que debe efectuarse previamente a su utilización en un proceso de elaboración industrial o magistral de medicamentos. (Dehesa, 2010) Un control de calidad estricto es asegurar su identidad, de garantizar su pureza, descubrir eventuales adulteraciones, falsificaciones o contaminaciones, de certificar su estado de conservación y de identificar y valorar su contenido en principios activos, los cuales son, en definitiva, los responsables de su acción farmacológica y los que le confieren valor terapéutico. Hay dos partes importantes, que involucra el control de calidad de los Productos Naturales Medicinales 1. Análisis de materia prima (droga cruda, material semi procesado y los extractos) 2. Producto terminado Por lo tanto deben de ser definidas cada una de las sustancias a utilizar: a) Droga cruda: Son las drogas vegetales o animales que han recibido sólo el proceso de recolección y secado para estar en condiciones de ser almacenadas. b) Droga vegetal: puede llegar a ser un órgano o parte de un órgano de la planta: raíces, rizomas, bulbos, tubérculos, tallos, corteza, leño, hojas, flores, frutos, semillas. (Dehesa, 2010) 1.2.3.2 Calidad de las drogas crudas Para garantizar la calidad son esenciales prácticas adecuadas de cultivo, cosecha o colecta, secado, fragmentación y condiciones de almacenamiento. Ya que puede ocurrir que las drogas cumplan con las descripciones dadas en las Farmacopeas y no posean la calidad adecuada, debido al deterioro por una recolección, embarque 15 o almacenamiento defectuoso, o la alteración debida a la edad. La desecación excesiva hace a las hojas muy frágiles y causa rotura de las mismas en el transporte (Miranda, 2009) Para asegurar la calidad de la materia prima natural, son importantes los siguientes parámetros: a) Identificación evaluación de características organolépticas, macroscópicas y microscópicas, así como al perfil cromatográfico, reacciones de identificación y parámetros de pureza, entre los que se incluyen humedad, cenizas, constantes físicas, materia extraña, disolventes residuales.etc. b) Descripción organoléptica evaluación por medio de los órganos de los sentidos, olor gusto, tacto, fractura y ocasionalmente el sonido o chasquido. Este análisis consiste en determinar las características del compuesto que aprecian nuestros sentidos: vista y olfato. (Dehesa, 2010) c) Descripción macroscópica describen de acuerdo a sus características organolépticas, macroscópicas y microscópicas, las que constituyen el primer paso para establecer la identidad y el grado de pureza de tales materiales, y deben ser llevados a cabo antes de cualquier otro ensayo. (Dehesa, 2010) d) La descripción botánica identificación primario tanto para las drogas crudas como para las plantas para tisanas y las drogas pulverizadas, lo que es tomado en cuenta por las farmacopeas de estándares de calidad al menos en caso de drogas vegetales organizadas. Descripción macroscópica de la materia médica Se basa en la forma, el tamaño, el color y algunas características de la superficie y textura. Así mismo se considera la descripción de la hoja, del tallo, la raíz y las flores. (Dehesa, 2010) 16 e) Descripciones microscópicas Se emplea para confirmar la identidad de la planta. La descripción incluye características de los diferentes tipos de tejidos, estomas y tricomas o fibras. 1.2.3.3 Características microscópicas de drogas constituidas por hojas Histológicamente la hoja está compuesta de tres sistemas de tejidos: dérmico, fundamental y vascular. - Epidermis: se compone de células epidérmicas propiamente dichas, células oclusivas de las estomas, acompañadas o no de células subsidiarias, tricomas, etc. Las estomas son abundantes en las hojas y pueden ser animocíticos, paracíticos y diacíticos. Por lo general, hay una sola capa de células epidérmicas, pero la epidermis pluriestratificada se presenta con cierta frecuencia en hojas. - Mesófilo: ocupa la parte media de la hoja y sus límites superior e inferior son la epidermis adaxial y abaxial respectivamente. Puede ser relativamente homogéneo o puede estar diferenciado en un parénquima en empalizada y un parénquima esponjoso. El parénquima en empalizada, está formado por células altas, alargadas en sentido transversal a la superficie de la hoja. El parénquima esponjoso, en cambio, consiste de células de variadas formas, frecuentemente irregulares. El parénquima en empalizada se localiza habitualmente en la cara superior o adaxial y el parénquima esponjoso en la cara inferior o abaxial. - Sistema vascular: los haces vasculares más grandes, poseen traqueidas y vasos como elementos conductores. En los más pequeños los elementos de conducción son exclusivamente traqueidas con engrosamiento anular y helicado. - Tejidos de sostén: como tejidos de sostén encontramos, la colénquima, en posición subepidérmica. Muchas hojas presentan esclereidas en el mesófilo. (Miranda, 2009) 17 1.2.4 Diabetes. El cuerpo humano es una máquina extraordinariamente completa que necesita que le suministremos energía suficiente para llevar a cabo sus tareas cotidianas como: respirar, moverse, hacer la digestión, crecer, reparar las partes que se gastan, entre otros. Nuestra maquinaria biológica está compuesta por millones de células que dependen del aporte nutritivo contenido en los alimentos. (Carrasco, 2012) 1.2.4.1. Síntomas - Hiperglucemia - Cetosis - Poliuria - Glucosuria - Polidipsia - Polifagia. En caso de los niños y adolescentes, la diabetes se produce fundamentalmente por el hecho de que su cuerpo ha dejado de producir insulina. Esta hormona es fabricada por un grupo de células del páncreas (células beta). Su función es permitir que la glucosa llene a las células, la insulina no sólo se encarga de que estén “alimentadas” y de proporcionar la energía que precisan en todo momento para que realicen sus funciones; además, se trata de una sustancia con “visión de futuro”, es decir, facilita que se almacenen aquellos nutrientes que no se necesitan en el momento, para echar mano de ellos cuando haga falta. (Castro, Villa, Ramirez, & Mosso, 2013) Por tanto, este déficit de insulina que caracteriza a la diabetes debe suplirse mediante la inyección de insulina, de manera que emite lo máximo posible la producción de una persona sin diabetes. 18 La Diabetes es una enfermedad crónica que incapacita al organismo a utilizar los alimentos adecuadamente. Al ingerir los alimentos estos se descomponen convirtiéndose en una forma de azúcar denominada glucosa, que es el combustible que utilizan las células para proveer al organismo de la energía necesaria. Este proceso de transformar los alimentos en energía se llama metabolismo. Para metabolizar la glucosa adecuadamente, el organismo necesita una sustancia llamada insulina. La insulina es una hormona producida en el páncreas (que es una glándula localizada debajo del estómago), y cuya función es regular el uso de la glucosa en el organismo y por lo tanto es esencial en el proceso metabólico. La insulina trabaja permitiéndole a la glucosa alojarse en las células para que éstas la utilicen como combustible, manteniendo a su vez los niveles de glucosa en la sangre dentro de lo normal (70 a 110 mg/dL). Se la denominó insulina por el latín insula "isla", ya que se produce en los islotes de Langerhans. En el organismo normal, la insulina mantiene la glucosa sanguínea a un nivel satisfactorio (normoglucemia), previene su aumento o lo corrige, e influye en la producción y el consumo de glucosa. Cuando las concentraciones de azúcar en la sangre son bajas, el páncreas libera glucagón, que actúa contrariamente a la insulina, estimulando la degradación de glucógeno y la liberación de glucosa del hígado. Las personas con diabetes no producen suficiente insulina para metabolizar la glucosa, o la insulina que producen no trabaja eficientemente, por lo tanto la glucosa no se puede alojar en las células para ser transformadas en energía (metabolismo) y se acumula en la sangre en niveles elevados. La Diabetes es una enfermedad seria, pero las personas diabéticas pueden vivir una vida larga, saludable y feliz si la controlan bien. 19 Aunque aún no hay una cura para la Diabetes, ésta puede ser controlada. La meta principal en el tratamiento es mantener los niveles de azúcar en la sangre (glucemia) lo más cerca del rango normal como sea posible (70 a 110 mg/dL) durante la mayor cantidad de tiempo. Existen tres tipos de diabetes (diabetes tipo 1, diabetes tipo 2, y diabetes gestacional) y el tratamiento depender del tipo de diabetes. Las personas con Diabetes (tipo 1 y tipo 2) pueden trabajar y estudiar, y lo hacen bien. La disciplina necesaria para mantener un buen control de la Diabetes, generalmente hace de los diabéticos mejores trabajadores y estudiantes. Las personas con Diabetes, requieren comer en horas establecidas, sin embargo pueden realizar incluso, actividades que requieren grandes esfuerzos físicos. 1.3.3.2Clasificación de la diabetes. En 1997 la Asociación Americana de Diabetes (ADA), propuso una clasificación que está vigente. Se incluyen 4 categorías de pacientes y un quinto grupo de individuos que tienen glucemias anormales con alto riesgo de desarrollar diabetes, también tienen mayor riesgo cardiovascular: 1. Diabetes Mellitus tipo1 2. Diabetes Mellitus tipo2 3. Otros tipos específicos de Diabetes 4. Diabetes gestacional 5. Intolerancia a la glucosa y glucemia de ayunas alterada. a). Diabetes mellitus tipo1. Es el resultado de un proceso autoinmune con un inicio muy repentino, necesitan terapia de insulina para sobrevivir. (Guariguata & Nolam, 2013) Ésta puede desarrollarla desde el recién nacido hasta una persona entre los 25 y 30 años de edad, o tal vez mayor, algunos de ellos son: 20 - Uno o varios virus, como la gripe o infección estomacal, o hasta enfermedades más graves como el que causa la hepatitis. - Factores ambientales, como la contaminación del aire. - Caracterizada por una destrucción de las células beta pancreáticas, deficiencia absoluta de insulina, tendencia a la ceto acidosis y necesidad de tratamiento con insulina para vivir (insulinodependientes). Se distinguen dos sub-grupos: 1.- Diabetes autoinmune: Con marcadores positivos en un 85-95% de los casos, anticuerpos antiislotes (ICAs), anti GADs (decarboxilasa del ácido. glutámico) y anti tirosina fosfatasas IA2 e IA2 ß. Esta forma también se asocia a genes HLA. (Guariguata & Nolam, 2013) 2.- Diabetes idiopática: Con igual comportamiento metabólico, pero sin asociación con marcadores de autoinmunidad ni de HLA. Los síntomas no pasan inadvertidos y pueden ser: - Sentir mucha hambre. - Estar débil - Estar irritable - Tener pesadillas. - Perder peso 3.- Diabetes mellitus tipo2. Puede pasar inadvertida y sin diagnosticar durante años. En tales casos, los afectados no son conscientes del daño a largo plazo causado por su enfermedad. (Guariguata & Nolam, 2013) 4.-Otros tipos específicos de diabetes. Incluyen pacientes con defectos genéticos en la función de la célula beta como las formas llamadas MODY (maturityonsetiabetes of the young); otros con defectos 21 genéticos de la acción de la insulina; otros con patologías pancreáticas (pancreatectomía, pancreatitis aguda, pancreatitis crónica, neoplasia del páncreas, hemocromatosis); endocrinopatías (Cushing, acromegalia, glucagonoma, feocromocitoma). También algunos fármacos o tóxicos pueden producir diabetes secundaria (corticoide, ácido nicotínico, L-asparagina, interferón alfa, pentamidina); agentes infecciosos (rubeola congénita, coxsachie B, citomegalovirus, parotiditis) y por último, algunas otras enfermedades como los Síndromes de Down, Kleinefelter, Turner, enfermedad de Stiffman y Lipoatrofias. En estos casos se habla de diabetes secundaria, mientras los tipo 1 y 2 son primarios. (Carrasco, 2012) 5.-. Diabetes gestacional. Se caracteriza por hiperglucemia, que aparece en el curso del embarazo. Se asocia a mayor riesgo en el embarazo y parto y de presentar diabetes clínica (60% después de 15años). La diabetes gestacional puede desaparecer al término del embarazo o persistir como intolerancia a la glucosa o diabetes clínica. 6.-. Intolerancia a la glucosa y glucemia de ayuna alterada. La intolerancia a la glucosa: Se caracteriza por una respuesta anormal a una sobrecarga de glucosa suministrada por vía oral. Este estado se asocia a mayor prevalencia de patología cardiovascular y a riesgo de desarrollar diabetes clínica (515% por año). Glucemia de ayuno alterada: Se caracteriza por el hallazgo de una glucemia de ayuno entre 100 y 125 mg/dL. Su identificación sugiere el realizar una prueba de sobrecarga de glucosa oral, para la clasificación definitiva. (Guariguata & Nolam, 2013) 22 Entrada de la glucosa a las células. Para que la glucosa pueda ser utilizada por las células, primero debe atravesar la membrana plasmática y entrar en el citosol. Mientras que la absorción de glucosa en tracto GI (y en los túbulos renales) se realiza por transporte activo, el movimiento de glucosa desde la sangre a la mayoría de las células del organismo se produce por difusión facilitada. La insulina aumenta la velocidad de difusión facilitada de glucosa en la mayoría de las células excepto en las neuronas y los hepatocitos. Justo en momento de entrar en las células, la glucosa se fosforila. Se combina con un grupo fosfato, producido por la degradación de ATP, para formar glucosa 6fosfato. Las enzimas que catalizan las fosforilaciones reciben el nombre de cinasas. La fosforilación retiene glucosa en las células de forma que pueda salir. Los hepatocitos, las células de los túbulos renales y las células epiteliales intestinales tienen la enzima necesaria (fosfatasa) para separar el grupo fosfato, lo cual permite a la glucosa salir de la célula hacia la circulación sanguínea. Catabolismo de la glucosa La oxidación de glucosa recibe el nombre de respiración celular. Comprende la glucólisis, la formación de acetil coenzima A, el ciclo de Krebs y la cadena de transporte electrónico. La glucolisis tiene lugar en la mayoría de las células del organismo. Libera dos moléculas de ATP por cada glucosa utilizada y no requiere oxígeno. Por ello, es una forma de sintetizar ATP de forma anaeróbica (sin oxígeno) y recibe el nombre de respiración celular anaeróbica. 23 Sin embargo, la glucólisis es el paso previo al ciclo de Krebs y a la cadena de transporte electrónico, procesos que requieren oxígeno y que proporcionan hasta 34 o 36 molécula de ATP por molécula de glucosa. Estas reacciones de síntesis de ATP constituyen la respiración celular aeróbica. 1.3.3Glucólisis. El término glucólisis (glyco=azúcar; lysis=rotura) hace referencia a una serie de reacciones químicas que suceden en el citosol celular y que descomponen una molécula de glucosa de seis átomos de carbono en dos de ácido pirúvico de tres átomos de carbono. La utilización de los carbohidratos se hace para obtener energía. La oxidación completa de un mol de glucosa libera 686000 calorías. Para que esto suceda debe fragmentarse y oxidarse la molécula de glucosa. El primer paso se denomina glucólisis y produce dos moléculas de ácido pirúvico. La glucólisis es consecuencia de 10 pasos, o reacciones química, cada una catalizada por una enzima especifica. La reacción total que incluye estos pasos es: GLUCOSA+ 2ADP+2PO42 ácido pirúvico + 2ATP +4H. 1.3.3.1 Formación de acetil coenzima A. Cada paso de la oxidación de la glucosa requiere una enzima diferente y, a menudo, también una coenzima. En este momento solo nos interesa una coenzima A (CoA). Esta importante coenzima se deriva del ácido pantoténico, otra vitamina B. 24 1.3.3.2 Insulina. La insulina es una hormona de carácter anabólico relacionada con el control de la ingesta alimentaria y del metabolismo energético. Su secreción es estimulada, especialmente por la elevación de la glucemia en respuesta a la ingesta de carbohidratos. Sin embargo, esta hormona también es secretada tras la ingesta de proteínas y de lípidos. La insulina desempeña un papel importante en el control del peso corporal, por ser una de las hormonas responsables de la regulación de la ingesta alimentaria y del gasto energético. 1.3.3.3 Tratamiento. Las hiperglucemias sintomáticas graves se tienen que tratar adecuadamente con el objeto de controlar una serie de alteraciones en diferentes vías metabólicas: - Una movilización y oxidación de ácidos grasos. - Catabolismo exagerado de proteínas que producen causar atrofia muscular. - Una producción excesiva de glucosa endógena. El planteamiento de un programa terapéutico a largo plazo para un paciente con diabetes debe tener en cuenta los siguientes aspectos: - Valoración de la expectativa de vida; - La existencia de complicaciones propias de la diabetes. - El padecimiento de trastornos neuropsiquiátricos. - La cooperación del paciente para comprender el programa terapéutico. 25 1.3.3.4 Metabolitos con propiedades hipoglucemiantes La capacidad de cierta planta para disminuir los niveles de glucosa, las señalan como candidata para el desarrollo de un fitofármaco a utilizar en el tratamiento de diabetes mellitus. Se ha investigado la presencia de metabolitos secundarios en plantas medicinales utilizadas empíricamente por su acción hipoglucemiantes por medio de marcha fitoquímica. Entre estos metabolitos secundarios se encuentran: Alcaloides Flavonoides Taninos Saponinas Glucósidos. La presencia de estos metabolitos se la determinara mediante el empleo de reactivos de coloración y precipitación. 1.2.5. Ensayos cuantitativos de la planta Control de calidad de la planta El control de calidad de la droga vegetal para la obtención de extractos, es un factor de gran importancia para garantizar la seguridad, eficacia e inocuidad del producto final obtenido. (Dehesa, 2010) Contenido de humedad. Se entiende por humedad el agua libre que contiene el material vegetal, para una buena conservación debe ser inferior al 10%, evitar que se produzca procesos enzimáticos, y para expresar la valoración de los principios activos referidos a materia seca. Método Karl-Fisher. 26 Es muy útil en muestras con bajo contenido en humedad, se basa en la reacción cuantitativa del agua con dióxido de azufre y yodo en medio anhidro y presencia de una base. El yodo y anhídrido sulforoso en presencia de agua reaccionan, formando sulfúrico y ácido yodhídrico. Para desplazar el equilibrio se emplea una base como la piridina. Cenizas Representan el contenido en sales minerales o en materia inorgánica de la droga. En condiciones rigurosas, es constante y nos permite determinar falsificaciones por otras drogas, tierras u otros minerales. Las cenizas dan una idea del contenido en materia mineral de la planta, que suele ser alrededor del 5%.Su determinación es importante porque la materia mineral puede ser responsable de alguna acción farmacológica (por ejemplo, las sales de potasio son responsables de la acción diurética del equiseto, diente de león y ortosifon), si su contenido es elevado, puede ser indicador de contaminación por adición de materia mineral o tierra, especialmente en raíces. Cenizas totales. Se basa en calcinar hasta que quedan blancas. El residuo que queda corresponde a las cenizas derivadas del tejido vegetal (cenizas fisiológicas) y a las de la materia extraña (cenizas no fisológicas) (Dehesa, 2010) 1.2.5.1. Extracto vegetal a) Métodos de extracción.: Los extractos son sustancias concentradas, obtenidas mediante maceración en líquidos, como agua, alcohol, éter, o mezcla de éstos. Se aplica en gotas o mezclas diversas, y pueden ser consistencias líquidas, densas, fluidas o secas. Los extractos líquidos, son ligeramente espesos, parecidos a los de un almíbar. Los extractos fluidos, como los del helecho macho, tienen consistencia similar al de la miel fresca. El extracto denso, como el de la belladona, contiene un máximo del 20%de agua, mientras que el 80% es materia seca. El extracto seco, como el del ruibarbo, tiene solamente un 5% de agua, por lo que puede ser convertido fácilmente en polvo (Enriquez, Prieto, & Ruiz, 2010) 27 b) Maceración: Es una extracción que se realiza a una temperatura ambiente de 15º y20ºC. El líquido para la solución puede ser agua o alcohol, los tiempos concretos de maceración dependen del tipo de droga a extraer. (Enriquez, Prieto, & Ruiz, 2010) c) Principios activos: son sustancias que se encuentran en las distintas partes u órganos de las plantas y que alterando o modificando el funcionamiento de órganos y sistemas del cuerpo humano y animal la investigación científica ha permitido descubrir una variada gama de principios activos, de los cuales los más importantes en salud, son los aceites esenciales, los alcaloides, glucósidos o heterósidos, mucílagos y gomas, y los taninos. Existen en las plantas otros principios activos relevantes denominados nutrientes esenciales, como las vitaminas, minerales, aminoácidos, carbohidratos y fibras, azúcares diversos, ácidos orgánicos, lípidos y los antibióticos. (Enriquez, Prieto, & Ruiz, 2010) 1.2.5.2. Tamizaje fitoquímico del extracto de la planta. O screening fitoquímico permite determinar cualitativamente los principales grupos químicos presentes en una planta y a partir de allí, orientar la extracción y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los grupos de mayor interés, como son las reacciones de color y precipitación a) Ensayo de Dragendorff, Mayer o Wagner (alcaloides):Permite reconocer en un extracto la presencia de alcaloides, b) Ensayo de Shinoda. (Flavonoides): Permite reconocer la presencia de flavonoides en un extracto de un vegetal. c) Ensayo de Liebermann-Buchard (triterpenos y/o esteroides): Permite reconocer la presencia de triterpenos y/o esteroides. d) Ensayo de Borntrager (quinonas):Es útil para detectar la presencia de quinonas e) Ensayo de Baljet (cumarinas): Es útil para reconocer la presencia de compuestos con agrupamiento lactónico, en particular cumarinas, aunque otros compuestos lacónicos pueden dar resultado positivo. 28 f) Ensayo de espuma (saponinas): Permite reconocer en un extracto la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como triterpénica. g) Ensayo de cloruro férrico: Permite reconocer la presencia de compuestos fenólicos y/o taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la planta se realiza con alcohol, el ensayo determina tanto fenoles como taninos. h) Ensayo de Fehling (azúcares reductores): Consiente reconocer en un extracto la presencia de azúcares reductores. i) Ensayo de mucilagos: Permite reconocer en los extractos de vegetales la presencia de esta estructura tipo polisacárido, que forma un coloide hidrófilo de alto índice de masa que aumenta la densidad del agua donde se extrae. 1.2.5.3. Forma farmacéutica Disposición individualizada que se adaptan las sustancias medicinales (principios activos) y excipientes para constituir un medicamento, es decir, la forma de preparar un medicamento con el fin de facilitar su administración. (Ferrandis, 2010). 1.2.6. Clasificación de las formas farmacéuticas: 1.2.6.1. Según el estado físico: a) Líquidos: suspensiones, jarabes, elixir, loción, solución, aerosol, etc. b) Sólidos: tabletas, comprimidos, cápsulas, supositorios, etc. c) Semisólidos: ungüentos, pomadas, cremas, etc. 1.2.6.2. Según las vías de administración: a) Oral: tabletas, comprimidos, cápsulas, jarabes, suspensiones b) Parenteral: inyectables (suspensiones y soluciones) c) Intracavitarias: Rectal, Vaginal y Uretral. Se presentan bajo la forma de óvulos, soluciones, cremas y supositorios. d) Tópica: (Dérmicas o superficiales): cremas, ungüentos, pomadas, lociones y aerosoles. e) Inhalaciones: aspiradas por la nariz o la boca. (Morales, 2015) 29 1.2.7. Jarabe Los jarabes son soluciones concentradas de azúcares en agua o en otro líquido acuoso, a menudo tiene incluido el alcohol como conservador, como solvente de sustancias aromatizantes y contiene la droga. Los jarabes son eficaces para enmascarar el sabor de las drogas amargas o saladas. Se utilizan por vía oral, especialmente en pediatría por su sabor dulce. (Helman, 2010) 1.2.7.1. Constituyentes Básicos Los jarabes están constituido por: a) Principio Activo. Es la sustancia que ejerce la acción farmacológica a la que está destinada la forma farmacéutica b) Vehículo o Solvente. El vehículo o componente líquido de la formulación suele ser agua o mezclas con sorbitos, glicerina, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos o etanol. Con menor frecuencia, se emplean disolventes oleosos, como aceites vegetales, parafina, polidimetilsiloxano La selección del vehículo es crítica en función de la solubilidad del principio activo y su estabilidad. Se suelen incorporar reguladores de pH (carbonatos, ácido cítrico, ácido tartárico, bicarbonato, etc.) ya que esta tiene una influencia directa en ambos aspectos (Reminton, 1999) 1.2.7.2 Sustancias auxiliares: a) Correctores de aroma y sabor: Las propiedades organolépticas desagradables de muchos fármacos y excipientes se perciben de forma más cargada en formas liquidas al tener mayor contacto con las papilas gustativas que en otras formas de administración. Se emplean edulcorantes naturales o sintéticos (sacarosa, fructuosa, glucosa, sorbitol, glicerina, sacarina, etc.), y saborizantes y aromatizantes permitidos por las autoridades sanitarias, pueden ser naturales o sintéticos. 30 b) Preservantes Antimicrobianos. Para evitar el desarrollo de microorganismos, se incorporan a la formulación agentes antimicrobianos. Los más empleados son los ésteres del ácido para hidroxibenzoico (parabenos), el ácido benzoico y su sal sódica. Se añaden en concentraciones bajas (<0.5%) Además pueden incluirse estabilizantes, antioxidantes, buffers, colorantes entre otras sustancias auxiliares de acuerdo a las características del principio activo y el resto de los componentes de la formulación. c) Control de calidad en jarabes Entre los principales ensayos de calidad que le realizan a los jarabes se encuentran: Características organolépticas (olor, color, sabor y transparencia), Uniformidad de masa, Densidad, Punto de ebullición, Índice de refracción, Viscosidad, Control microbiológico, Cuantificación del ingrediente activo. d) Envasado y almacenamiento El envasado de los jarabes debe hacerse en frio y en recipientes cuya capacidad permita dejar pequeñas cámaras de aire. Tratándose de jarabes medicinales, estos deben ser dispuestos en frascos oscuros, con capacidades que oscilan entre 60 y 150mL prefiriéndose aquellos frascos con cuello de reborde. (Burger., 1979) 1.3. Valor critica de los conceptos principales de las distintas posiciones teóricas sobre el objeto de investigación. 1.3.1. Fitoquímica La palabra “fitoquímica” viene de prefijo griego Phyto que significa PLANTA y Química, significa entonces “COMPUESTOS QUÍMICOS DE LAS PLANTAS”. Es la ciencia responsable del estudio de los componentes químicos de los vegetales; estudia cada grupo de la planta, desde su estructura química molecular, hasta las propiedades biológicas de los vegetales como los principios activos, los olores, pigmentación, entre otros, estos compuestos no cumplen una función elemental o principal para su actividad vital, pero por el contrario puede prevenir enfermedades letales como el cáncer en los humanos y al mismo tiempo la planta los utiliza como 31 sustancias para su protección y para comunicarse con otra especies vegetales y animales. (Torres , 2010). Fitoquímica tiene una gran importancia para la determinación de los componentes activos de las plantas medicinales, su cuantificación y análisis de los efectos beneficiosos y perjudiciales a la salud humana. (Ortega , 2010) Análisis critico En la actualidad la fitoquímica se ha orienta do principalmente al estudio de los componentes químicos de las plantas y a la cuantificación y análisis de las mismas. 1.3.2. Farmacognosia Significa literalmente, conocimiento (gnosis) de los medicamentos o drogas (pharmakon). (Rosales , 2011) Farmacognosia es una palabra derivada de dos vocablos griegos: Fármaco, que significa base medicamentosa, planta, veneno y gnosis, que significa conocer. Es decir, el la ciencia que se encarga del examen y caracterización de las drogas o bases medicamentosas, de origen vegetal, animal o mineral de que se vale el farmacéutico para la preparación de medicamentos. (Gonzales , 2008). Análisis critico La farmacognosia se considera como una ciencia que estudia las bases medicamentosas o drogas de origen vegetal o animal que sirven de materias primas para la preparación de medicamentos; abarcando además su valoración y conservación. 32 1.3.3. Tecnología Farmacéutica Es un área de las ciencias farmacéuticas que estudia la elaboración de las formas farmacéuticas (medicamentos), Tanto el proceso como la formulación (composición). (Bernad , 2012) Tecnología farmacéutica es la parte de las Ciencias Farmacéuticas que se encarga del estudio de las operaciones tecnológicas y de los componentes implicados en la fabricación de los medicamentos. (Vera , 2013) Análisis critico La tecnología farmacéutica estudia la elaboración de medicamentos y principalmente de sus componentes. 1.3.4. Fitofarmacia. Proviene de dos vocablos - Fito = Reino Plantae o Vegetal y Farmacia = Ciencia que enseña a conocer los cuerpo naturales y sus asociaciones; y el modo de elaborarlos y combinarlos; los cuales están destinados para prevenir, diagnosticar, tratar, aliviar y curar las enfermedades; y para conservar una buena salud. Por lo Tanto, Es aquella disciplina científica que emplea las plantas medicinales, recursos naturales vegetales, productos naturales botánicos y afines; para usos en la salud. (Yanza , 2013 ) Análisis critico La Fitofarmacia es una ciencia que se encarga del estudio de los metabolitos secundarios de las plantas, para posteriormente utilizarlos con fines medicinales. 33 1.4. Conclusiones parciales del Capítulo I La fitoquímica es la ciencia responsable del estudio de los componentes químicos de los vegetales; estudia cada grupo de la planta, desde su estructura química molecular, hasta las propiedades biológicas de los vegetales como los principios activos, los olores, pigmentación, entre otros, estos compuestos no cumplen una función elemental o principal para su actividad vital, pero por el contrario puede prevenir enfermedades letales como el cáncer en los humanos y al mismo tiempo la planta los utiliza como sustancias para su protección y para comunicarse con otra especies vegetales y animales La farmacognosia es el estudio de los medicamentos que se obtienen de fuentes naturales, vegetales y animales. Esta ciencia se inicia con materia médica y se ocupa del origen botánico y zoológico, la composición bioquímica y los efectos terapéuticos de los fármacos naturales, sus derivados y constituyentes. La tecnología farmacéutica es la parte de las Ciencias Farmacéuticas que se encarga del estudio de las operaciones tecnológicas y de los componentes implicados en la fabricación de los medicamentos. La Fitofarmacia es aquella disciplina científica que emplea las plantas medicinales, recursos naturales vegetales, productos naturales botánicos y afines; para usos en la salud. La Planta zorrilla (Petiveria alliacea) es una planta originaria de la selva amazónica, puede tener un olor similar al ajo, se la conoce también como anamú, es hipoglucemiantes disminuye los niveles de glucosa en sangre a personas diabéticas, lo que hace referencia que la diabetes es una enfermedad en la que los niveles de glucosa (azúcar) de la sangre están muy altos. 34 CAPITULO II MARCO METODOLÓGICO Y PLANTEAMIENTO DE LA PROPUESTA 2.1. Caracterización del sector, rama, empresa, contexto institucional o problema seleccionado para la investigación. La provincia de Santo Domingo De Los Tsáchilas está situada en los flancos externos de la cordillera occidental de los Andes, la provincia tiene de superficie 3.857 km² a una altitud de 625 msnm, se encuentra a 120 km, de distancia del mar. Limites políticos - Norte: Provincias de Pichincha y Esmeraldas - Sur: Los Ríos y Cotopaxi - Este: los cantones Quito y Mejía - Oeste: Manabí Es una zona climática lluviosa tropical, su temperatura habitual es de unos 18 a 33 °C. (Sistema Nacional del Ecuador SIN 2015). 2.1.1. Modalidad de la investigación - Cualitativa: porque se determinará las características botánicas, organolépticas, micro morfológico e histológico y sus principios activos. - Cuantitativa: se realizará los análisis físicos, químicos y microbiológicos y se comprobará la eficacia de la forma farmacéutica. 35 2.1.2. Tipos de investigación por su diseño y por su alcance Tipo de diseño de la investigación Por su diseño Tipos de diseño experimentales - Diseño experimental puro: se identificará los principios activos de la planta. - Diseño Cuasi experimental: se elaborará una forma farmacéutica a base de los principios activos de la planta y se validará su eficacia. Tipo de diseños no experimentales - Diseño transversal: se recolectará los datos de los principios activos, para corroborar su acción farmacológica. 2.1.3. Tipo de investigación por su alcance Tipo de investigación por su alcance. - Investigación exploratoria: Se familiarizará con los principios activos que contiene la planta, análisis físico- químico y microbiológico. - Investigación descriptiva: Se identificará las características y propiedades predominantes de la planta como su taxonomía, principios activos y las características físico- químicas de la forma farmacéutica. 2.1.4. Población y muestra - Para la extracción de los principios activos las plantas se recolectan en el Centro Cultural UNI-SHU de la Comuna Chiguilpe de Santo Domingo de los Tsáchilas. 2.1.5. Métodos, técnicas e instrumentos - Se realizará la revisión bibliográfica en libros, artículos científicos, revistas, en la cual se consultará la información teórica que llevará a la realización de la teoría de la investigación. 36 2.1.6. Métodos y técnicas del nivel empírico del conocimiento Observación científica: se observó cual es el habitad natural de las plantas, sus usos, composición físico-química y aplicación en una forma farmacéutica. Experimento: se determinó el control físico- químico y microbiológico de la materia prima y la forma farmacéutica. 2.1.7. Métodos del nivel teórico de conocimiento - Histórico- Lógico: empleado en el marco teórico e investigación. - Hipotético- Deductivo: observación del fenómeno a estudiar, y verificación de la verdadera acción farmacológica del Huito 2.2. Descripción del procedimiento metodológico para el desarrollo de la investigación. 2.2.1. Métodos, técnicas y procedimientos de análisis a. Materiales de laboratorio - Mechero - Erlenmeyer - Frascos ámbar - Embudos de separación - Papel filtro - Tubos de ensayo - Probetas - Balones de aforo - Varillas de vidrio - Pipetas - Vasos de precipitación - Gradillas 37 - Placas porta y cubre objetos - Gillette - Gotero - Pinza b. Equipos - Microscopio - Sorbona - Estufa - Autoclave - Balanza analítica - Desecador - Horno mufla - Baño María c. Reactivo - Agua destilada - Solución de peróxido de hidrógeno concentrado - Ácido nítrico o solución de nitrato de amonio al 10 % m/v - Cloruro de metileno - NaSO4 anhidro - Agua peptonada - Hipoclorito de sodio a 10 ppm, - Acetona al 99,5% - Cloruro de sodio - Éter dietílico - Alcohol 96% - Reactivo de Sudan - Reactivo de Mayer - Reactivo de Wagner 38 - Reactivo de Liberman - Reactivo de Kedde - Reactivo de Fehling A - Reactivo de Fehling B - Tricloruro férrico al 5% - Ácido clorhídrico al 1% - Ácido clorhídrico concentrado - Anhídrido acético - Ácido sulfúrico concentrado - Alcohol amílico - Hidróxido de sodio al 5 % - Cinta de magnesio metálica - Agar PCA - Agar Maconkey - Carboximetil celulosa - Ácido cítrico al 5% d. Muestra Muestra vegetal - Hojas de planta zorrilla (Petiveria alliacea). 2.2.2. Estudio fitoquímico a). Recolección La planta zorrilla (Petiveria alliacea) fue recolectada en la Comuna de Chiguilpe ubicada a una altura de 625 m.s.n.m. perteneciente al Centro Cultural UNI-SHU de la Provincia de Santo Domingo de los Tsáchilas. b). Comprobación taxonómica Se tomaron 2 muestras completas de la especie en estudio y se identificó taxonómicamente en el Herbario Nacional del Ecuador. 39 c). Características organolépticas Se realizó este análisis con el fin de determinar las características físicas de la materia prima, y de este modo conocer su sabor, textura, olor y color, parámetros que ayudaron para determinar las características de las hojas en el estudio. d). Identificación micro morfológica (Cortes Histológicos) Se realizó finos cortes transversales de la hoja y se procedió a colocar agua para la observación en el microscopio. e). Determinación del contenido de Humedad: Método Gravimétrico Se Pesó 2g ± 0.5 mg de droga cruda, Se colocar a una pesa filtro previamente tarada y se secó a 100 °C durante 3 horas. La pesa filtro poner en un desecador donde se dejó enfriar hasta llegar a la temperatura ambiente y se pesó; Colocar nuevamente en la estufa durante 1 hora y se repitió el procedimiento hasta obtener masa constante. Cálculos: %H= (M2-M1) / (M2-M)*100 Dónde: H= Porcentaje de Humedad M= Masa de la muestra de ensayo (g) 40 M1= masa de la pesa filtro con la muestra desecada (g). M2= Masa de la pesa filtro con la muestra de ensayo (g). 100= Factor matemático para los cálculos. f). Determinación del contenido de cenizas totales Calcinar previamente las cápsulas en la mufla a 600 ºC durante 2 horas, e introducir en el desecador hasta que alcanzan la temperatura ambiente y se pesan (P 1). A continuación se introducen en las cápsulas aproximadamente 2 g de muestra y se pesa de nuevo (P2). Se introduce en la mufla a 600 º C durante 2 horas. Trascurrido dicho tiempo se llevan las cápsulas a un desecador hasta que alcancen la temperatura ambiente y se pesan (P3). Cálculos % Cenizas= (P3-P1) / (P2-P1)*100 P1= peso en gramos de la cápsula vacía P2 = peso en g de la cápsula con la muestra P3= peso en g de la cápsula con la muestra calcinada g). Secado de las hojas de la planta zorrilla (Petiveria alliacea). - Se recolecto las hojas y eliminar los cuerpos extraños. Posteriormente lavar abundante agua. - Sumergir en agua con hipoclorito de sodio al 10 %, durante 10 minutos y dejar escurrir expuestos al sol por aproximadamente una hora. - Se tritura las hojas secas, someter a un proceso de secado en una estufa a 35 º C durante 2 días. 41 - Almacenar las drogas secas en fundas de papel estériles, que se introducen luego en recipientes herméticos para protegerlos de la luz. h. Obtención de los extractos Tamizaje fitoquímico De la muestra de ensayo previamente pulverizada y tamizada, pesa exactamente 50g y se transfirió a un matraz de 250mL, añadir 150mL de éter di etílico, dejándose en maceración durante 48h a temperaturas menores de 15 º C. Posteriormente se procedió a filtrar con papel filtro tarado, se midió el volumen y se calculó la concentración del extracto etéreo, el residuo se secó y pesó. A éste residuo se sometió a extracción con un volumen de etanol 70ºGL equivalente a tres veces el peso del residuo, el cual se dejó en maceración durante 48h a temperatura ambiente. Filtrar con papel de filtro tarado y el residuo se secó y pesó. Realizar la extracción acuosa de este residuo con un volumen de agua equivalente a tres veces su peso, el cual se dejó en maceración durante 48h a Temperatura ambiente. Finalmente se filtrar con papel de filtro tarado y el residuo se secó y pesó. Anotar los pesos y realizar los cálculos. Marcha fitoquímica. Se realizó la identificación de los metabolitos secundarios haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación. El extracto éter di etílico, se dividió en fracciones para la realización de los ensayos: a). Ensayo de Mayer o Wagner: Extracción ácida: Si la alícuota del extracto esta disuelta en un solvente orgánico este debe evaporarse en baño de agua. El residuo redisolver en 1 mL de ácido clorhídrico al 1 % en agua 42 Si el extracto es acuoso a la alícuota se le añade 1 gota de ácido clorhídrico concentrado (calentar suavemente y dejar enfriar hasta acidez). Se añadió una pisca de cloruro de sodio en polvo. Se Agito y se filtró. Se añadió 2 o 3 gotas de solución reactiva Mayer Resultados (+): Opalescencia (++) Turbidez definida (+++) Precipitado coposo Para alcaloides cuaternarios y/o animo-óxidos se encontrarán en el extracto acuoso La reacción deberá ser (++) o (+++) La reacción si es (+) se deberá a una extracción incompleta de bases. b). Ensayo de Dragendorff Si la alícuota del extracto esta disuelta en un orgánico este debe evaporarse en baño de agua. El residuo re disolverse en 1 mL de ácido clorhídrico al 1 % en agua Si el extracto es acuoso a la alícuota se le añade 1 gota de ácido clorhídrico concentrado (calentar suavemente y dejar enfriar hasta acidez). Con la solución acuosa acida de realiza el ensayo añadiendo 3 gotas del reactivo de dragendorff. Resultados: (+): Opalescencia 43 (++) Turbidez definida (+++) Precipitado c).Ensayo de Shinoda: Se realizó un extracto vegetal o acuoso Extraer la alícuota, determinar si del extracto vegetal o acuosa para proceder (alcohol). Diluir con 1 mL de ácido clorhídrico concentrado Añadir un pedazo de cinta de magnesio metálico. Esperar 5 minutos y añadir 1 mL de ácido amílico Mezclar las fases y dejar reposar hasta que se separen. Resultados: Positivo: Cuando el alcohol amílico se colorea (amarillo, naranja o rojo) intensos d).Ensayo de Liberman-Buchard Para triterpenos y/o esteroides, debe poseer un núcleo del androstano Si la alícuota no se encuentra en cloroformo debe evaporarse el solvente en baño de aguay el residuo re disolverse en 1 mL de cloroformo. Se adiciona 1 mL de anhídrido acético y se mezcla bien. Por la pared del tubo de ensayo se deja resbalar 2-3 gotas de ácido sulfúrico concentrado sin agitar. Un ensayo positivo se tiene por un cambio rápido de coloración. 44 Resultados: Rosado-azul muy rápido Verde intenso-visible aunque rápido Verde oscuro-negro final de la reacción e). Ensayo de Borntrager Si la alícuota no está en cloroformo debe evaporarse el solvente en baño de agua y el residuo re disolverse en 1 mL de cloroformo. Se adiciona 1 mL de hidróxido de sodio, hidróxido de potasio o amonio al 5%. Se agita mezclando las fases y se deja en reposo hasta su ulterior separación. Resultados: El ensayo es positivo cuando la fase acuosa alcalina se colorea de rosado, en este caso se reporta (++) o rojo, para lo cual se reporta (+++). f). Ensayo de Baljet Si la alícuota de la muestra a probar no está en alcohol, debe evaporarse el solvente en baño de agua y re disolverse en 1 mL de alcohol. Seguidamente, se añade 1 mL del reactivo. 45 Resultados: La prueba es positiva, cuando aparece una coloración o precipitado de color rojo (++) y (+++) respectivamente. g). Ensayo de Espuma Si la alícuota se encuentra en alcohol, se diluye con 5 veces su volumen en agua Se agita la mezcla fuertemente durante 5-10 min. Resultados: Se considera positivo si aparece espuma en la superficie del líquido de más de 2 mm de altura y persiste por más de 2 min. h). Ensayo de cloruro férrico A una alícuota del extracto alcohólico se le adiciona 3 gotas de una solución de tricloruro férrico al 5 % en solución salina 0.9%. Si el extracto es acuoso se añade acetato de sodio para neutralizar y 3 gotas de una solución de tricloruro férrico al 5 % en solución salina 0.9%. Resultados: Un ensayo positivo puede dar: Coloración rojo-vino compuestos fenólicos general. Coloración verde intensa, taninos de tipo pirocatecólicos. Coloración azul, taninos tipo pirogalotánicos. 46 i). Ensayo de Fehling Si la alícuota del extracto no se encuentra en agua, debe evaporarse el solvente en baño de agua y el residuo re disolverse en 1-2 mL de agua. Se adiciona 2 mL del reactivo y se caliente en baño de agua 5-10 min la mezcla. Resultados: Se considera positivo si la solución se colorea de rojo o aparece precipitado rojo. j). Ensayo de Mucilagos Una alícuota del extracto de agua se enfría a 0-5°C. Resultados: - 2.2. Si la solución toma una consistencia gelatinosa el ensayo es positivo. Resultados Características macro morfológicas organoléptica e identificación botánica de la planta zorrilla (Petiveria alliacea). La evaluación macro morfológica es uno de los aspectos esenciales dentro del análisis de droga, puesto que ayuda a identificar posibles falsificaciones en el material vegetal. Los resultados obtenidos se presentan en el cuadro1 y 2. 47 Cuadro 1 Características macro morfológica de las hojas de la planta Zorrilla Ensayo Resultado Hojas Simples con filotaxia alterna Forma del contorno Elíptica a Oblanceolada, Ápice Apiculado Textura Membranosa Base Redondeada , peciolada Margen o borde Ondulado , de 7 a 9 cm de largo, 2 a 6 cm de ancho Inflorescencias Racimos delgados, 10–35 mm. Flores Subsésiles o en cortos pedicelos Sépalos Blanco-verduzcos Condición Fresca Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez ,2016. Cuadro 2 Características organolépticas de la planta Zorrilla. Ensayo Resultado Color Verde intenso Olor Fuerte olor aliáceo. Sabor Amargo Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez ,2015. 48 a). Características microscópicas La hoja presenta venación cerrada reticulada de tipo broquidódroma. Imagen 2 Tipo de venación de la hoja de la planta Zorrilla Fuente: Laboratorio de Biología, Universidad Técnica de Ambato, Facultad de Ciencias Agropecuarias. . Elaborado por: Cortez ,2015 Tipo de venación de la hoja de, materia fresca. (1): vena primaria; (2): venación cerrada; (3): venas secundarias; (4): venación reticulada. En el corte transversal del mesófilo, se observa que la epidermis es una estratificada, en ambas caras, aunque las células de la epidermis adaxial son más altas que las de la epidermis abaxial y presentan irregularidad en su estructura (Imagen 3 y 4). 49 Imagen 3 Estructura microscópica del Corte transversal del mesófilo de la hoja de la planta Zorrilla Fuente: Laboratorio de Biología, Universidad Técnica de Ambato, Facultad de Ciencias Agropecuarias. . Elaborado por: Cortez ,2015 Corte transversal del mesófilo de la hoja de. (1): Epidermis adaxial; (2): parénquima lagunoso; (3): parénquima en empalizada; (4): tricomonas; Aumento: 40X. Imagen 4 Estructura microscópica del corte transversal del mesófilo de la hoja de la planta Zorrilla Fuente: Laboratorio de Biología, Universidad Técnica de Ambato, Facultad de Ciencias Agropecuarias. . Elaborado por: Cortez ,2015 50 Corte Transversal de la hoja de. Estructura de la hoja (1): células de epidermis adaxial; (2): células irregulares del mesófilo en empalizada. (3): Azul de metileno. Aumento: 40X b). Identificación botánica Se realizó en el Herbario Nacional del Ecuador. Los resultados se muestran en el cuadro 3. Cuadro 3 Identificación taxonómica de la planta Zorrilla Reino: Plantae Subreino: Tracheobionta División: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Subclase: Caryophyllidae Orden: Caryophyllales Familia: Phytolaccaceae Género: Petiveria Especie: Alliacea Fuente: Herbario Nacional del Ecuador Elaborado por: Cortez, 2015. c). Parámetros físicos químicos Este procedimiento se realizó en materia vegetal cruda y se obtuvo los siguientes resultados: 51 Tabla 1 Determinación de los parámetros físico-químicos de la planta Zorrilla Ensayo Resultado Porcentaje permitido USP # 28 Porcentaje de Humedad 9,90% Hasta 14% 10,42% Hasta 14% Porcentaje de Cenizas totales Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez ,2015. Los resultados expresados en la Tabla 1 nos indican que los valores obtenidos en porcentaje de humedad y cenizas, son adecuados dentro de las USP # 28, por lo que en porcentaje de humedad nos indica que las condiciones de almacenamiento son idóneas para evitar crecimiento bacteriano y degradación de metabolitos de la planta, además en el porcentaje de cenizas totales nos indica una buena recolección de la muestra. Estudio químico cualitativo d). Tamizaje fitoquímico Se realizó el tamizaje fitoquímico para determinar los principales grupos de metabolitos presentes en la especie. Los resultados se expresan en el cuadro 5, 6 y 7. 52 Cuadro 4 Análisis Fitoquímico (Extracto Etéreo) de las hojas de la planta Zorrilla Metabolitos Ensayo Extracto Etéreo Aceites y grasas Ensayo de Sudan Negativo Alcaloides Ensayo de Mayer Opalescencia (+) Alcaloides Ensayo de Wagner Opalescencia (+) Triterpenos –Esteroides Ensayo de Liebermann- Verde intenso - visible Buchard aunque rápido Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez ,2016. Cuadro 5 Análisis Fitoquímico (Extracto alcohólico) de las hojas de la planta Zorrilla. Metabolitos Ensayo Extracto alcohólico Azucares Reductores Ensayo de Fehling Positivo Alcaloides Ensayo de Mayer Opalescencia (+) Alcaloides Ensayo de Wagner Opalescencia (+) Triterpenos –Esteroides Ensayo de Liebermann- Verde intenso visible Buchard aunque rápido Ensayo de Cloruro Verde intenso Fenoles y taninos Férrico Resinas Ensayo de Resinas Negativo Saponinas Ensayo de espumas Positivo Quinonas Ensayo de Borntrager Negativo Cardenólidos Ensayo de Kedde Negativo Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez ,2016. 53 Cuadro 6 Análisis Fitoquímico (Extracto Acuoso) de las hojas de la planta Zorrilla Metabolitos Ensayo Extracto acuoso Azucares Reductores Ensayo de Fehling Positivo Alcaloides Ensayo de Mayer Opalescencia (+) Alcaloides Ensayo de Wagner Opalescencia (+) Flavonoides Ensayo de Shinoda Positivo Mucilagos Ensayo de Mucilagos Negativo Saponinas Ensayo de espumas Positivo Principios Amargos Ensayo de Principios Positivo Amargos Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez ,2016. 54 2.4. Conclusiones parciales del Capítulo II La planta zorrilla (Petiveria alliacea) fue recolectada en el centro cultural UNI-SHU de la comuna de Chiguilpe de Santo Domingo de los Tsáchilas y se verifico en el herbario nacional del Ecuador que la planta en estudio pertenecía a la especie alliacea y al género Petiveria de ahí se le dio el nombre científico Petiveria alliacea. Se elaboró diferentes ensayos y pruebas para obtener los metabolitos secundarios de las hojas de la planta zorrilla, comenzando con un estudio fitoquímico el cual consiste en la recolección, la comprobación taxonómica, la identificación de características organolépticas, microscópicas y la determinación del contenido de humedad y cenizas, posteriormente el tamizaje fitoquímico de la planta en estudio que consiste en la secado, macerado, posteriormente la marcha fitoquímica en la cual se realizó la identificación de los secundarios haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación. Finalmente se determinó que la planta Zorrilla contiene principios activos como alcaloides, taninos, flavonoides, azucares reductores saponinas lo que hace que tenga propiedades anestésicas, antisépticas, antibacteriana y antidiabéticas, mediante estas propiedades se derivó un jarabe natural principalmente hipoglucemiante, además se hizo el control de calidad del jarabe para evaluar su inocuidad. 55 CAPITULO III EVALUACIÓN DE RESULTADOS DE SU APLICACIÓN 3.1. Tema ELABORACIÓN DE UN JARABE HIPOGLUCEMIANTE A PARTIR DEL EXTRACTO DE LAS HOJAS DE LA PLANTA ZORRILLA (PETIVERIA ALLIACEA). 3.2. Introducción El Anamú es una planta originaria de la selva amazónica, pero que también crece en áreas de América Central, el Caribe y África. Esta planta puede tener un olor similar al ajo en sus raíces por lo que algunas personas le llaman hierba de ajo, tiene efectos positivos sobre los niveles de glucosa en sangre, contribuyendo a disminuir sus niveles, sin embargo, se debe emplear con precaución para este fin, ya que su efecto no debe combinarse con el de fármacos para disminuir los niveles de glucosa en sangre sin consultarlo con su médico previamente, la diabetes es una enfermedad crónica que aparece cuando el páncreas no produce insulina suficiente o cuando el organismo no utiliza eficazmente la insulina que produce. La causa principal de la diabetes es el cambio en los estilos de vida y muy especialmente la obesidad. Las cifras que posee la OMS, sobre el número de personas que tienen diabetes en el mundo llegan hasta los 200 millones de afectados, este problema de salud pública obliga a la búsqueda de nuevas alternativas naturales para mejorar la calidad de vida de las personas que lo padecen, como el jarabe a partir del extracto de las hojas de la planta Zorrilla 56 (Petiveria alliacea), el mismo que contiene principios activos con efectos hipoglucemiantes. 3.3. Objetivos Objetivo General Elaborar un jarabe hipoglucemiante a partir del extracto de las hojas de la planta zorrilla (Petiveria alliacea). Objetivos específicos - Mejorar la calidad de vida de la población con altos niveles de glucosa en sangre. - Brindar un producto seguro bajo costo accesible. 3.4. Identificación del problema En el Ecuador existe un bajo número de formas farmacéuticas naturales que disminuyan los niveles de glucosa en sangre, por lo que existe la necesidad de la elaboración de un jarabe a base de la planta Zorrilla, las misma que contiene efectos hipoglucemiantes, lo cual ayudara a disminuir los niveles de glucosa en sangre de las personas diabéticas, mejorando así la calidad de vida de estas personas. 3.41. Tipo de estudio Está investigación está dirigida a todas las personas que contienen altos niveles de glucosa en sangre principalmente a personas diabéticas. 57 3.4.2. Lugar de desarrollo y aplicación de la propuesta. En el laboratorio físico químico de la Universidad Regional Autónoma de los Andes “UNIANDES”. 3.4.3. Metodología empleada Se utilizó Tecnología farmacéutica para hacer formas farmacéuticas. 3.4.4. Secuencia de procedimientos 3.4.4.1. Desarrollo de la propuesta 3.4.4.1.1. Elaboración del jarabe Elaboración del Jarabe a base de extracto de la planta Zorrilla (Petiveria alliacea). 3.4.4.1.2. Procedimiento Una vez obtenida el extracto de la planta Zorrilla (Petiveria alliacea), previamente dosificada, procedemos a elaborar el jarabe de la siguiente manera: - Calentar agua (300cc) hasta llevarla a ebullición y colocar sobre el recipiente hojas de Stevia que contiene la muestra, dejar en reposo por 20 minutos y filtrar - Colocar Carboximetil celulosa (agente endulzante) a baño maría con una parte del preparado anterior y mezclar bien , luego adicionar el resto y calentar aproximadamente por 30 minutos hasta conseguir un punto de jarabe bajo constante agitación. - Preparar una solución de ácido cítrico al 5 % y adicionar a la mezcla anterior, colocar 1 gota de saborizante (naranja). - Finalmente enfriar, envasar. 58 3.4.4.1.3. Control de calidad del jarabe a). Características organolépticas Se tomó una alícuota de 5mL del jarabe y se colocó en un vaso de precipitación, para determinar el análisis sensorial de: color, olor, aspecto transparencia.. b).Densidad - Lavar cuidadosamente el picnómetro y secar bien, colocar en la estufa durante una hora. Pesar el picnómetro. Enrasar el picnómetro con agua destilada, secarlo y pesarlo - - Vaciar el contenido del picnómetro y llenarlo nuevamente, pero esta vez con la muestra (Jarabe). - Enrasar el picnómetro con el jarabe, secarlo y pesarlo. Expresión de resultados: D= (M1-M) / (M2-M) ×〖(M2-M)/(M1-M)〗 M1=peso del picnómetro en g. con agua destilada M2=peso del picnómetro en g. con la muestra de ensayo M = peso del picnómetro vacío c).pH Se mide en el pH metro previamente calibrado con soluciones tampón, sacamos el electrodo del tampón lavar con agua destilada y secar con papel filtro. En otro envase donde está la muestra, se introduce el electrodo limpio, homogenizar y determinar el pH. 59 3.4.4.1.4. Análisis microbiológico a).Método de conteo de Aerobios Mesófilos - Pesar 25g de materia vegetal en un Erlenmeyer estéril - Agregar 250mL de agua peptonada al 0.1% estéril y homogenizar; de este modo se obtiene una dilución de 10-1 .Dejar reposar 1 hora. - De esta dilución tomar 1mL y mezclar con 9mL de agua peptonada 0.1% y obtener una dilución de 10-2. De este modo realizar otras diluciones. - Se preparan tubos de ensayo tapa rosca con 15mL de medio de cultivo PCA - A cada tubo con agar se adiciona 1mL de la dilución preparada en el agua peptonada al 0.1%. - Homogenizar y el contenido de cada tubo verter en cajas petri. - Incubar a 35+/-2ºC por 48 horas. - Transcurrido este tiempo, realizar la lectura - Contar las colonias que se desarrollan y se anotan el resultado de las placas con mayor número de colonias. b).Mohos y levaduras - Tomar 10.0 mL del jarabe y adicionarlos en un frasco que contiene 90.0 mL de solución buffer (dilución 1:10). - Tomar 10.0 mL de la dilución anterior y adicionarlos en un frasco que contiene 90.0 mL de solución buffer (dilución 1:100). - Tomar 10.0 mL de la dilución anterior y adicionarlos en un frasco que contiene 90.0 mL de solución buffer (dilución 1:1000). 60 - Pipetear 1.0 mL de cada dilución por duplicado, y colocarlo en placas de petri estériles debidamente identificadas con el número de muestra, fecha y dilución. - Adicionar, prontamente, a cada una de las placas 15 – 20 mL de agar papa dextrosa acidificado con ácido tartárico al 10%, que ha sido previamente fundido y llevado a 450C. - Mezclar la muestra con el agar rotando las placas suavemente en forma de ocho. - Invertir las placas e incubar a 25ºC durante 7 días. - Contar las colonias que han crecido en cada placa y expresar el resultado como Unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/mL). c). Escherichia coli - Adicionar 10.0 mL de jarabe a un tubo que contiene 90.0 mL de agua de peptona y mezclar suavemente. - Incubar a 37ºC durante 24 - 48 horas. - Examinar si el medio presenta crecimiento (turbidez). - Si hay crecimiento, mezclar suavemente e inocular, con ayuda de un asa bacteriológica estéril, porciones del medio sobre la superficie del agar Mac Conkey. - Incubar la placa invertida a 37ºC durante 24 horas. - Si después de la incubación sobre la superficie del medio hay colonias de color rosado oscuro con una zona de precipitación alrededor, es porque hay presencia de Escherichia coli. 61 3.4.5. Resultados 3.4.5.1. Resultado del control de calidad del jarabe. Análisis sensorial Se efectúo un análisis exploratorio de aprobación final con 30 estudiantes de tercero “A” de la carrera de Medicina de la Universidad Autónoma de los Andes “UNIANDES”; para ello se efectúo una catación en la cual se evalúo los siguientes parámetros: Color, aroma y sabor del jarabe. La determinación del jarabe se la hizo en dos muestras: 1. Stevia, extracto de la planta, ácido cítrico, agua destilada y saborizante (Naranja). 2. Stevia, extracto de la planta, ácido cítrico, agua destilada, CMC y saborizante (Naranja). Determinación de color, aroma y sabor del jarabe, como se muestra en las tabla 2. 62 Tabla 2 Resultado de evaluación sensorial: Atributo del color, aroma, sabor del jarabe Análisis sensorial Color Muestras Muestra 1 Muestra 2 Verde - - Verde claro - 30 Transparente 2 - Amarillo 28 - Anaranjado - - Aroma Muestra 1 Muestra 2 Aromático 1 - Suave 29 30 Vegetal - - Penetrante - - Frutal - - Sabor Muestra 1 Muestra 2 Suave 30 - Dulce - 30 Amargo - - Acido - - Astringente - - Fuente: Cortez, 2016. Con estos resultados del análisis sensorial (color, aroma y sabor), se concluyó que la muestra 2 se considera aceptable en comparación de la muestra 1 , debido a que la muestra 2 contiene Carboximetil celulosa, lo que se considera como un agente espesante para esto ayudar a llegar a un punto de jarabe con ayuda de las hojas de Stevia, debido a que este jarabe se lo utilizará como hipoglucemiante natural por sus componentes y principalmente por el extracto de la planta ya que contiene principios activos, los mismos que tienen actividad hipoglucemiante, como se observa en la tabla 8. 63 Tabla 3 Características organolépticas del jarabe a partir del extracto de hojas de planta Zorrilla Parámetro Resultado Color Verde claro Olor Suave Sabor Dulce (Naranja). Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez, 2016. Tabla 4 Determinación de pH y densidad. Parámetro pH Densidad Valor determinado 4.0 1.03 g/ml Límites máximos permitidos USP # 35 3.8 - 4 1.0-1.8 g/ml Fuente: Laboratorio Físico- químico UNIANDES. Elaborado por: Cortez, 2016. En la Tabla 4 se muestra el uso de pH y densidad según la USP # 35 en donde el jarabe es ligeramente acido, y presenta una densidad cercana a la densidad del jarabe simple 1,32.g/ml, el pH obtenido indica adecuadas condiciones higiénicas debido a su valor inhibe la multiplicación de agentes patógenos. 64 3.4.5.2. . Resultados del Análisis microbiológico Tabla 5 Control microbiológico del jarabe a base del extracto de las hojas de la planta Zorrilla Análisis Límites Resultados (UFC/g) Microbiológicos Permisibles ·USP # 28 (UFC/g) Conteo total de ≤ 100 Ausencia ≤ 10 Ausencia ≤ 10 Ausencia anaerobios mesófilo Conteo total de hongos y levaduras E. Coli Fuente: Laboratorio de Microbiología UNIANDES. Elaborado por: Cortez, 2016. En la Tabla 5 se muestra el uso de los diferentes métodos para el análisis microbiológico establecido por las USP # 28 para el recuento de anaerobios mesófilos, observarse hogos y levaduras, E coli sin ningún crecimiento microbiológico lo cual nos indica que el producto ha cumplido con las normas de calidad. 3.5 Material para apoyar la difusión - Hojas volantes - Etiqueta del jarabe 65 3.6 Beneficios que ofrece la propuesta - Mejorar la calidad de vida de las personas que sufren de diabetes. - Bajar los niveles de glucosa en sangre. - Búsqueda de nuevas alternativas de formas farmacéuticas naturales con efectos hipoglucemiantes. 3.7 Esquema de la propuesta Imagen 5 Esquema de la propuesta Fuente: Cortez, 2016. 66 3.8. Conclusión parcial del Capítulo III Se elaboró un jarabe natural a partir del extracto de las hojas de la planta Zorrilla, con efectos hipoglucemiantes para disminuir los niveles de glucosa (azúcar) en sangre mejorando así la calidad de vida de los pacientes con diabetes. Se fabricó un jarabe natural a base del extracto de las hojas de la planta Zorrilla la misma que mejorará la calidad de vida de las personas con altos niveles de glucosa en sangre mediante la elaboración del jarabe debido a que este contienes efectos hipoglucemiantes lo que hace que disminuya la glucosa en sangre ayudando así a las personas a tener una mejor calidad de vida. Brindamos un producto seguro y de bajo costo debido a que este jarabe, es un producto seguro puesto que contiene un control de calidad eficaz, además este producto está hecho con componentes químicos naturales lo que le hace que sea un producto de bajo costo y accesible para todas las personas. 67 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES Conclusiones Se identificó la taxonomía de la planta Zorrilla, en el Herbario Nacional del Ecuador, en donde se verificó que la planta pertenece a la familia Phytolaccaceae y a la especie Petiveria alliacea, por lo que se le da el nombre científico. Mediante el tamizaje fitoquímico de los extractos etéreos, alcohólico y acuoso se determinó que la planta Zorrilla contiene alcaloides, taninos, flavonoides, azucares reductores saponinas lo que hace que tenga propiedades anestésicas, antisépticas, antibacteriano y antidiabéticas. Mediante la manifestación de la presencia de azucares reductores se demostró el uso ancestral de la planta Zorrilla (Petiveria alliacea), hipoglucemiante que ayuda a reducir los niveles de glucosa en sangre. Se elaboró un jarabe a base del extracto de las hojas de la planta Zorrilla, estableciendo sustancias químicas y naturales que no afecten la salud de los pacientes, asimismo el control de calidad del jarabe como análisis sensorial, color , olor, sabor, pH densidad y finalmente el análisis , microbiológico de Aerobios mesófilos, Mohos y levaduras y E. Coli en donde no existe crecimiento microbiano demostrando así la inocuidad del producto natural, el cual mejorará la calidad de vida de las personas con diabetes elevada. 68 Recomendaciones Al finalizar el trabajo de investigación se recomienda: Seguir con el estudio de esta planta porque contiene otros compuestos que le otorgan propiedades farmacológicas. Realizar estudios de toxicidad de la planta. Valorar el conocimiento ancestral de la planta Zorrilla, ya que facilita mucho su estudio, y posterior utilización como fitomedicamento. Realizar la valoración de la forma experimentación. 69 farmacéutica en animales de Bibliografía ABAD, J. C. (Enero de 2014). El estudió de la actividad antioxidante y antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de (Peperpubinervulum C.DC) proveniente de Macas Ecuador. Recuperado el Viernes 27 de Noviembre de 2015, de El estudió de la actividad antioxidante y antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de (Peperpubinervulum C.DC) proveniente de Macas Ecuador: http://www.dspace.ups.edu.ec/bitstream/123456789/6631/1/UPSQT04523.pdf ALARCÓN, J. (2011). Plantas Aromáticas y Medicinales Enfermedades de importancia y sus usos terapéuticos - Medidas para la temporada invernal. Bogota-Colombia: Produmedios. BONIER, G., & Polanco, S. (Noviembre de 2012). 06_3379pdf. Recuperado el 15 de Enero de 2016, de 06_3379pdf. BURGER., H. (1979). 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UNIVERSIDAD REGIONAL AUTÓNOMA DE LOS ANDES “UNIANDES” FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA PERFIL DE TESIS PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE BIOQUÍMICA FARMACÉUTICA TEMA: “ELABORACIÓN DE UNA FORMA FARMACÉUTICA A PARTIR DEL EXTRACTO DE HOJAS DE LA PLANTA ZORRILLAQUE DISMINUYA NIVELES DE GLUCOSA EN SANGRE, PLANTA NATIVA DEL CENTRO CULTURAL UNI-SHU DE LA COMUNA CHUIGUILPE DE SANTO DOMINGO DE LOS TSÁCHILAS” AUTORA: MARCIA ARACELLY CORTEZ VILLARROEL ASESORA: DRA. VIVIANA BASABANTES AMBATO-ECUADOR 2015 1.- ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN Abad J. Cabezas D. (2014), en su trabajo realizado “El estudió de la actividad antioxidante y antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de (Peper pubinervulum C.DC) proveniente de Macas Ecuador”, manifiesta que la actividad antioxidante del aceite esencial de las hojas de (Piper pubinervulum) proveniente de Macas, Ecuador. Utilizó los métodos de inhibición del radical libre DPPH y ABTS se obtuvo un IC50 igual a 20,399 µg / y 0,416 µg / mL respectivamente, que al compararlos con los IC50 del aceite de (Thymus vulgaris) con 0,414 µg / mL y 0,231 µg / mL, demuestra una actividad antioxidante menor del aceite en estudio. Además realizaron el método de foto quimioluminiscencia con una capacidad antioxidante de 1,8 μmol Trolox / g. También se determinó la actividad antimicrobiana por el método de difusión en agar con discos. Entre las bacterias ensayadas,(Escherichia coli) ATCC 8739 y (Staphylococcus Aureus sub sp. Aureus)ATCC 6538P fueron las más susceptibles al presentar una MIC de 6,08 y 3,09 mg / mL respectivamente y entre las levaduras ensayadas, (Candida albicans) ATCC 10231 fue la más susceptible al presentar una MIC de 0,3909 mg / mL. Mediante el método de TLC – DPPH y autobiográfico determinó que las sustancias que poseen actividad antioxidante y antimicrobiana que al compararlos con la investigación de Coronel y Piedra (2014) de la que se adoptó la metodología de las placas TLC, concluyeron que los compuestos son: Elemicin, nerolidol, gammaassaron, assarone e, dimethoxy 5 vinyl 1,2 benzodioxide 4-6, bisabolol, geranyllinalool, Isoeugenolmetil éter, Beta-Caryophyllene, alpha-Humulene, (+)beta-Selinene y Bicyclogermacrene. Santander S. Urueña Cl. Castañeda D. Cifuentes Cl. Aristizabal F. Cordero Cl. Florentino S. (2010), en su estudio “Influencia del tratamiento de (Petiveria alliacea) en la expresión diferencial de genes en células tumorales, nos dice que el estudio del perfil de expresión génica en las células eucariotas es una herramienta importante en el entendimiento de las huellas moleculares generadas en respuesta a un estímulo farmacológico. A partir de (Petiveria alliacea), una de las plantas colombianas con actividad antitumoral, obtuvieron la fracción FAST 8 7:3, en la cual encontraron diferentes compuestos, como el trisulfuro de dibencilo, uno de los componentes antitumorales más potentes reportados para la planta. Esta fracción también posee actividad cito tóxica sobre la línea de células tumorales K562 e induce cambios en el perfil de expresión de genes, que podrían estar relacionados de alguna forma con la actividad antitumoral tradicional reportada para esta planta. Esta actividad puede ser ejercida, en parte, por la presencia del trisulfuro de dibencilo y por la actividad de los otros componentes de la fracción. Utilizaron el ADNc-AFLP como herramienta útil en la tamización del perfil de genes transcritos en las células tumorales y, también, como herramienta útil para el descubrimiento de nuevos fármacos antitumorales. Salmerón R. (2012), en su trabajo “Utilización de la planta Anamú (Petiveria alliacea) en el tratamiento de la mastitis caprina en la finca Santa Rosa de la Universidad Nacional Agraria (UNA)”, utilizó un diseño completamente al azar (D.C.A) el que está compuesto por un lote de 14 cabras en ordeño, divididas en 2 grupos, cada grupo formado por 7cabras, seleccionadas al azar y sometidas a tratamientos distintos. Tratamiento I: Mastoxin20% (Solución de Anamú 20%) y Tratamiento II: Candela Mastivet. (Cloxacilinasódica200mg). Los resultados muestran que el cuarto derecho (CD) el 19 % reaccionaron positivos y 81% reaccionaron negativos, el cuarto izquierdo (CI) el 16 % reaccionó positivo y 84 % reaccionaron negativos. El tratamiento 1 Mastoxin 20%, (Solución de .Anamú 20%), alcanza su mayor efectividad a partir de los 21 días y el tratamiento 2 Candela Mastivet, (Cloxacilina sódica 200mg), alcanza su mayor efectividad a partir de los 28 días. El tratamiento alternativo (I) a base de (Solución de Anamú 20%) mostró factibilidad económica y terapéutica. Delgado B. (2011), en su investigación “Propiedades entomotóxicas de los extractos vegetales de azadirachta indica, (Piper auritum) y (Petiveria alliacea) para el control de (Spodoptera exigua)”, manifiesta que se evaluó el efecto anti alimentario y la toxicidad de los extractos de Azadirachta indica, (Piper auritum) y (Petiveria alliacea) en larvas de (S. exigua)en condiciones de laboratorio y en un cultivo orgánico de tomate uva var. Santa a campo abierto. Este trabajo lo realizaron con los extractos hexánico y metanólico de semillas de (A. indica)y hojas de (P. auritum) y (P. alliacea) aplicados en diferentes concentraciones en larvas 4to instar de S. exigua. Las variables que se evaluaron fueron índice disuasión alimentaria (FDI), porcentaje de mortalidad y CL50. Realizaron un análisis de varianza (ANOVA) y una prueba de comparación de medias de LSD Fisher. El mayor efecto disuasivo alimentario encontraron en el extracto metanólico de (Neem), seguido por el de (P. auritum) y el menor efecto en el extracto de (P. alliacea). Los porcentajes de mortalidad para (A. indica), (P. auritum)y(P. alliacea)fueron 38.88, 28.8, 21.22 %, respectivamente, en condiciones de laboratorio, la misma tendencia se encontró en campo. La CL50 mostró que el extracto metanólico de (A. indica) fue el más tóxico (4.03 ppm), le siguió en efectividad el de (P. auritum) (42.08 ppm). En campo, la CL50 de los extractos metanólico de (A. indica, P. auritum y P. alliacea) fueron 9.61, 21.21 y 104.1 ppm, respectivamente. En el presente estudio encontraron que son marcadas las diferencias que existen entre las variaciones de toxicidad por especie y el tipo de extracto. ANTECEDENTES LEGALES CONSTITUCIÓN DE LA REPÚBLICA DEL ECUADOR En el Art. 14.-Se reconoce el derecho de la población a vivir en un ambiente sano y ecológicamente equilibrado, que garantice la sostenibilidad y el buen vivir, suma kawsay El Art. 385.- Señala que el sistema nacional de ciencia, tecnología, innovación y saberes ancestrales, en el marco del respeto al ambiente, la naturaleza, la vida, las culturas y la soberanía, tendrá como finalidad: 1. Generar, adaptar y difundir conocimientos científicos y tecnológicos. 2. Recuperar, fortalecer y potenciar los saberes ancestrales. 3. Desarrollar tecnologías e innovaciones que impulsen la producción nacional, eleven la eficiencia y productividad, mejoren la calidad de vida y contribuyan a la realización del buen vivir. En el Art 395.- La Constitución reconoce os siguientes principios ambientales: 1) El Estado garantizará un modelo sustentable de desarrollo ambientalmente equilibrado y respetuoso de la diversidad cultural, que conserve la biodiversidad y la capacidad de regeneración natural de los ecosistemas, y asegure la satisfacción de las necesidades de las generaciones presentes y futuras. En el Art. 363.- El Estado será responsable de: 4.-Garantizar las prácticas de salud ancestral y alternativa mediante el reconocimiento, respeto y promoción del uso de sus conocimientos, medicinas e instrumentos. 7.-Garantizar la disponibilidad y acceso a medicamentos de calidad, seguros y eficaces, regular su comercialización y promover la producción nacional y la utilización de medicamentos genéricos que respondan a las necesidades epidemiológicas de la población. En el acceso a medicamentos, los intereses de la salud pública prevalecerán Sobre los económicos y comerciales. INTRODUCCIÓN El Ecuador ha desarrollado la medicina natural y muchas de las plantas son utilizadas para curaciones como problemas de próstata, cardiovasculares, entre muchas otras. En la Región Costa, en las comunas de Tsáchilas la planta zorrilla es utilizada como anti cancerígena, energética, en curaciones Shamánica de sus habitantes, y es conocida con distintos nombres en diferentes países del Centro y Sur América, el Caribe y África. Es una hierba perenne de tallo recto, poco ramificado de 0,5 a 1 m de alto, con hojas alternas de forma elíptica y de 6 a 19 cm de largo. Sus flores son pequeñas de color blanco y el fruto es una baya cuneiforme que presenta cuatro ganchos doblados hacia abajo (Ferrer 2010). La planta se ha utilizado desde los tiempos remotos con fines medicinales y ritos mágicos religiosos. Actualmente, se utiliza como medicamento herbolario para diferentes enfermedades y se comercializa por varias firmas como suplemento nutricional o como inmunomodulador. Esta planta ha motivado mucho interés en países fuera del área amazónica debido principalmente a sus posibles efectos antitumorales (Ruffa 2010). El presente trabajo de investigación, establecerá la relación que existe entre las aplicaciones tradicionales la planta zorrilla y sus principios activos mediante ensayos experimentales y clínicos en la planta y también la forma farmacéutica. 2.-SITUACIÓN PROBLÈMICA La diabetes se está convirtiendo en una epidemia mundial relacionada con el rápido aumento del sobrepeso, la obesidad y la inactividad física. Se calcula que las muertes por diabetes aumentarán más de un 50% en los próximos 10 años. En los países desarrollados la mayoría de los diabéticos han superado la edad de jubilación, mientras que en los países en desarrollo el grupo más afectado es el de 35 a 64 años (OMS, 2014). El tratamiento de la diabetes puede ser por medicina tradicional y fitoterapia que poco a poco ha tomado bases científicas más sólidas, que ayuda durante las primeras etapas de la enfermedad, existiendo evidencia acerca de la eficacia en el empleo de fitomedicamentos o suplementos alimenticios a base de plantas, con menos efectos secundarios(Castro, Villa, Ramírez, Mosso , 2014). En Ecuador, el uso y conocimiento de plantas medicinales se desarrolló en las culturas prehispánicas y se acentúa esta práctica por 3 razones: la atención a sus enfermedades, la extensa flora, la amplitud en número de grupos indígenas que conservan sus propias tradiciones. El Ecuador presenta las condiciones óptimas para el cultivo, la identificación de plantas que podrían ser la base para el desarrollo de fitofármacos para el tratamiento de la diabetes. Determinándose así la necesidad de crear una forma farmacéutica de origen natural a partir del extracto de las hojas de la planta zorrilla para reducir los niveles de glucosa en sangre que ayudará a la población a mejorar su calidad de vida. 3.-PROBLEMA CIENTÍFICO ¿Cómo ayuda los principios activos de planta zorrilla, a bajar los niveles de glucosa en sangre? 4.-OBJETIVO DE LA INVESTIGACIÓN Y CAMPO DE ACCIÓN 4.1.-OBJETIVO DE LA INVESTIGACIÓN - Fitomedicamentos 4.2.-CAMPO DE ACCIÓN - Farmacognosia - Tecnología Farmacéutica - Fitofarmacia 4.3.-IDENTIFICACIÒN DE LASLÌNEAS DE INVESTIGACIÓN - Farmacología y Gestión Farmacéutica 5.-OBJETIVOS 5.1.-Objetivo General - Elaborar una forma farmacéutica a partir del extracto de las hojas de la planta zorrilla, que disminuya niveles de glucosa en sangre. 5.2.-Objetivos Específicos - Identificar taxonómicamente la planta zorrilla. - Determinar cualitativamente los principios activos que posee la planta zorrilla. - Comprobar la acción de la forma farmacéutica elaborada a base del extracto de las hojas de la planta zorrilla sea efectiva para la diabetes. 6.-IDEA A DEFENDER La forma farmacéutica a base del extracto de las hojas de la planta zorrilla es efectiva para disminuir los niveles de glucosa en sangre. 7.-VARIABLES DE LA INVESTIGACIÒN 7.1.-Variable Dependiente - Niveles de glucosa en sangre. 7.2.-Variable Independiente - Forma farmacéutica. 8.-METODOLOGÌA A EMPLEAR a) Modalidad - Cualitativa: porque se determinará las características botánicas, organolépticas, micro morfológico e histológico y sus principios activos. - Cuantitativa: se realizará los análisis físicos, químicos y microbiológicos y se comprobará la eficacia de la forma farmacéutica. TIPO DE INVESTIGACIÓN POR SU DISEÑO Y POR SU ALCANCE. Por su diseño Tipos de diseño experimentales - Diseño experimental puro: se identificará los principios activos de la planta. - Diseño Cuasi experimental: se elaborará una forma farmacéutica a base de los principios activos de la planta y se validará su eficacia. TIPO DE DISEÑOS NO EXPERIMENTALES - Diseño transversal: se recolectará los datos de los principios activos, para corroborar su acción farmacológica. Tipo de investigación por su alcance. - Investigación exploratoria: se familiarizará con los principios activos que contiene la planta, análisis físico- químico y microbiológico. - Investigación descriptiva: se identificará las características y propiedades predominantes de la planta como su taxonomía, principios activos y las características físico- químicas de la forma farmacéutica. - Investigación explicativa: brindara la sociedad una nueva forma farmacéutica natural y medicinal que ayude a la diabetes. MÉTODOS TÉCNICAS E INSTRUMENTOS - Se realizará la revisión bibliográfica en libros, artículos científicos, revistas, en la cual se consultará la información teórica que llevará a la realización de la teoría de la investigación. MÉTODOS DEL NIVEL EMPÍRICO DEL CONOCIMIENTO - Observación científica:se observará cual es el habitad natural de las plantas, sus usos, composición físico-química y aplicación en una forma farmacéutica. - Experimento: se determinará el control físico- químico y microbiológico de la materia prima y la forma farmacéutica. MÉTODOS DEL NIVEL TEÓRICO DE CONOCIMIENTO - Histórico- Lógico: empleado en el marco teórico e investigación. - Hipotético- Deductivo: observación del fenómeno a estudiar, y verificación de la verdadera acción farmacológica de la planta zorrilla. POBLACIÓN Y MUESTRA - Para la extracción de los principios activos las plantas se recolectan en el Centro Cultural UNI-SHU de la Comuna Chiguilpe de Santo Domingo de los Tsáchilas. 9.-NOVEDAD CIENTÌFICA En el centro cultural UNI-SHU de la Comuna Chiguilpe de Santo Domingo de los Tsáchilas se realizara un estudio fitoquímico de los principios activos de la planta zorrilla, dónde se va a identificar compuestos propios de la especie lo cual ayudara a la elaboración de una forma farmacéutica para tratar enfermedades la misma que ayudara al mejoramiento de la salud y calidad de vida de las personas. 10.-APORTE TEÓRICO Para la presente investigación integrara los conceptos: - A NIVEL TEÓRICO Fortalecer los conocimientos de una forma farmacéutica a partir del extracto de hojas de la planta zorrilla la misma que posee propiedades curativas para disminuir los niveles de glucosa en sangre lo que servirá de sustento para crear nuevas hipótesis para futuras investigaciones. - A NIVEL CIENTÍFICO Comprobar los principios activos de la planta zorrilla mediante tamizaje fitoquímico basado en reacciones de coloración y precipitación y su posterior elaboración de una forma farmacéutica para la diabetes. 11.-ESQUEMA DE CONTENIDOS Este trabajo de investigación realizara un análisis teórico de los siguientes temas: - Fitomedicamento - Autentificación de la especie botánica empleada - Partes de la planta que son utilizadas - Especificaciones del producto final -Farmacognosia - Principios activos -Tecnología Farmacéutica - Densidad - pH -Forma farmacéutica - Clasificación de formas farmacéuticas DIABETES. - - - - Causas. - Sintomas. - Prevencion. PLANTA ZORRILLA. - Origen y distribucion. - Caracteristicas botanicas. - Caracteristicas organolépticas. - Composición quimica. - Propiedades terapeuticas. - Analisis estructural. CONTROL DE CALIDAD DE LA PLANTA - Contenido de humedad. - Cenizas. EXTRACTO VEGETAL - Metodos de extraccion. - - - Obtencion del extracto. - Principios activos. TAMIZAJE FITOQUÍMICO DEL EXTRACTO DE LA PLANTA - Ensayo de Drangendorff, Mayer o Wagner (Alcaloides). - Ensayo de Shinoda (Flavonoides). - Ensayo de Liberman-Buchard (Triterpenos y/o Esteroides). - Ensayo de Borntrager (Quinonas). - Ensayo de Baljet (Cumarinas). - Ensayo de espuma (Saponinas). - Ensayo de Cloruro Férrico. - Ensayo de Fehling (Azúcares reductores). - Ensayo de Mucilagos. FORMA FARMACÉUTICA - - Maceración. Elaboración de la forma farmacéutica. ANALISIS MICROBIOLÓGICO 12.-SIGNIFICANCIA PRÀCTICA El presente trabajo es de gran importancia debido a que servirá para futuras investigaciones y creación de nuevas formas farmacéuticas. 13.-BIBLIOGRAFÍA - ABAD J. Cabezas D.2014. Estudió de la actividad antioxidante y antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de (Peper pubinervulum C.DC) proveniente de Macas Ecuador. Disponible en:http://www.dspace.ups.edu.ec/bitstream/123456789/6631/1/UPSQT04523.pdf. - CASTRO C, VILLA N, RAMÍREZ S, MOSSO CL, 2014 Uso medicinal de plantas antidiabéticas en el legado etnobotánica oaxaqueño. Disponible en:http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S102847962014000100012 - DELGADO B. 2011.Propiedades entomotóxicas de los extractos vegetales de azadirachta indica,( Piper auritum y Petiveria alliacea) para el control de (Spodoptera exigua)Disponible en:http://www.google.com.ec/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1 &cad=rja&uact=8&ved=0CBsQFjAAahUKEwiCruHZ34rIAhXFth4KHaQkB9U &url=http%3A%2F%2Fportal.chapingo.mx%2Frevistas%2Fphpscript%2Fdo wnload.php%3Ffile%3Dcompleto%26id%3DMjA3Ng%3D%3D&usg=AFQjC NHOpPxaSYYEfp9v4K6ym6FsvKRLjw&bvm=bv.103073922,d.dmo. - FERRER J. 2010.Principales referencias entomológicas sobre el anamú, Revista CENIC Ciencias Biológicas, Vol. 38, No. 1, Ciudad de La Habana, Cuba. - OMS, 2014 Diabetes Disponible en:http://www.who.int/features/factfiles/diabetes/facts/es/index8.html. - RUFFA M.J, 2010. 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ANEXO B FOTOGRAFÍAS Anexo B 1Recolección de la muestra e identificación taxonómica de la planta Zorrilla (Petiveria alliacea). RECOLECCIÒN DE LA MUESTRA Centro cultural UNI.- SHU Muestra de la planta Recolección de datos Fuente: Cortez, 2016. Anexo B 2 Identificación taxonómica de la planta Zorrilla IDENTIFICACIÓNTAXONÓMICA DE LA PLANTA Herbario Nacional del Ecuador Secado de la muestra Anexo B 3Tamizaje fitoquímico de la planta Zorrilla Tamizaje Fitoquímica de la planta Zorrilla (Petiveria alliacea). Secado de la planta Estufa Planta seca Maceración Anexo B 4 Elaboración del jarabe y control microbiológico. Elaboración del jarabe Materiales Proceso Control microbiologico Agares Fuente: Cortez, 2016. Control de calidad Anexo B 5 Etiqueta y Hoja volante del jarabe Diseño de la etiqueta y hoja volante del jarabe. Fuente: Cortez, 2016.
