practica 6

PRACTICA 6
COPROPARASITOSCOPICO EN FRESCO
Y TINCIONES TEMPORALES
OBJETIVO DE LA PRACTICA.
Para fines para diagnósticos el alumno debe ser capaz de diferenciar los
parásitos (formas biológicas) presentes en un examen directo, de formas no
biológicas (artefactos), y que desarrolle tinciones temporales.
INTRODUCCION.
Un examen coproparasitoscópico es el estudio de material fecal, para la búsqueda
e identificación de formas parasitarias intestinales. Puede ser cualitativo o
cuantitativo. Las muestras fecales son seriadas con un mínimo de tres y deben
colocarse en frascos de boca ancha, guardados en lugares frescos, mientras se
analizan, pues con el calor se aceleran los fenómenos de degradacion por
bacterias y con el frío se pueden destruir los quistes y trofozoítos de protozoos. Los
métodos químicos permiten la conservación durante un tiempo más prolongado,
sin correr el riesgo de que los parásitos se deformen o se destruyan, por ejemplo
con soluciones que contienen formol, yodo-mertiolate, etc.
Examen microscópico directo: En este tipo de estudio, el material fecal más
utilizado es el recién obtenido por expulsión natural del paciente, ya sean heces
bien formadas o evacuaciones disminuídas de consistencia, con moco y/o sangre.
Los exámenes directos de heces son la forma más rápida de hacer diagnóstico
de parasitosis. Es importante tomar en consideración algunas recomendaciones
que permitan tener éxito en la búsqueda de parásitos. Con estas técnicas
podemos observar trofozoitos o quistes de protozoarios, lo mismo que larvas o
huevos de helmintos, sin embargo, las diferencias importantes entre los tipos de
muestra establecen las diferentes resultados. Una muestra líquida diarreica o
una muestra de moco en exudado vaginal nos puede mostrar trofozoitos en
cambio una muestra de materia fecal formada mostrara quistes.
Un detalle importante es el tiempo de procesamiento de la muestra después de
emitida. Una muestra aun fresca con menos de una hora de haberse tomado
puede conservar trofozoitos móviles, por ejemplo de E. histolytica. Si la muestra
tiene un tiempo mayor de haber sido emitida ( ej. 2 horas)es probable que
requiera aplicar un poco de calor, lo que es llamado “platina caliente”.
Para realizar un examen directo el tiempo es importante por lo que la muestra
debe mantenerse a 37 grados centígrados y procesarse en la siguiente hora.
Este método es de gran utilidad para la detección en fresco de trofozoítos. En la
suspensión teñida con lugol se pueden identificar con facilidad quistes de
protozoarios como Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, asi
como de huevos de helmintos.
- El examen directo (en fresco) es sencillo, rápido y económico, pues requiere poco
material.
- Es excelente para la búsqueda de trofozoítos y protozoarios.
- Es eficaz en la búsqueda e identificación de quistes, huevos y larvas.
- Sin embargo, la muestra utilizada es muy pequeña y poco representativa.
- Los montajes en solución salina tienen la ventaja de que retienen la movilidad de
los trofozoitos, sin embargo, es difícil la observación de las estructuras internas,
pues con frecuencia son poco definidas.
- El Yodo se emplea para destacar las estructuras internas de los parásitos
presentes, pero inmoviliza los trofozoítos.
MATERIALES Y METODOS
- Cada alumno debe trabajar por lo menos con dos especímenes diferentes, una
muestra debe ser propia del alumno y una segunda puede ser de otra persona.
- Se debe observar una muestra control positiva, proporcionada por el profesor.
*Las heces son potencialmente infectantes. Se deben extremar las precauciones
durante todo el procedimiento.
Procedimiento.
1.
Con un aplicador de madera se toma una pequeña cantidad de materia
fecal y se coloca en el centro de un portaobjetos limpio, enseguida se le adiciona
una gota de solución salina fisiológica y con el mismo aplicador se hace una
mezcla lo más homogénea posible.
2. Hecha la mezcla, procurando que no hayan restos muy gruesos, se coloca un
cubreobjetos sobre ella, cuidando que no queden burbujas y de ser necesario, se
adiciona más reactivo por un lado del cubreobjetos para no dejar secar la
preparación. Se puede sellar con barniz de uñas alrededor del cubreobjetos, para
evitar que se seque y prolongar el tiempo para la observación.
3. Se observa al microscopio a 10 X y después a 40 X. Con ayuda de un atlas de
Parasitología, se aprende a diferenciar a los parásitos de los diferentes tipos de
residuos fecales (artefactos).
4. En otro portaobjetos se procede de la misma manera que los puntos 1 a 3,
substituyendo la solución salina por Sol de yodo (Lugol). Los parásitos y sus
estructuras se tiñen de amarillo o de café.
5.
En otro portaobjetos se procede de la misma manera que los puntos 1 a 3
substituyendo la solución salina por colorante de azul de metileno (colorante de
Nair), observando a los parásitos de color azul.
NOTA:
En el caso de E. histolytica, se cuenta con técnicas inmunodiagnósticas
comercialmente disponibles, como las de ELISA (inmunoensayo-enzimático)
para detección de antígenos fecales, para el diagnostico de la amibiasis
intestinal. El organismo patógeno E. histolytica y el no-patógeno Entamoeba
dispar son morfológicamente idénticos cuando se observan l microscopio. En
dicha técnica se utilizan anticuerpos monoclonales que detectan la proteína de
adherencia que es inhibida por la galactosa en el patógeno E. histolytica. El
requisito para esta prueba es que las heces sean frescas sin conservadores.
RESULTADOS, DISCUSION Y CONCLUSIONES.
- Haga dibujos detallados de los parásitos encontrados en las heces
estudiadas.
- Hay posibilidad de que encuentren protozoarios y helmintos
- Compare con la literatura para identificarlos.
- Concluya cuales parásitos identificó.
- Discuta las dificultades de la técnica y dibuje los parásitos encontrados.
BIBLIOGRAFIA
DPDx Selection of Standard Techniques for Examination of Fecal Specimens
http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/CEUs/Lab_tech_ceu.asp?body=Lab_Tech/body_l
abtech_stand7.htm
S.L. Marks, 2006. What Constitutes a Proper Fecal Examination?
BVSc, PhD, Dip. ACVIM (Internal Medicine, Oncology), Dip. ACVN
University of California, Davis, School of Veterinary Medicine
Davis, California, USA