DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. Dra. María Guadalupe Galindo Mendoza Dr. Carlos Contreras Servín Dr. Moisés Roberto Vallejo Pérez MC. Luis Olvera Vargas RESUMEN El área citrícola de la zona Media de San Luis Potosí es la más importante debido a la producción de fruta fuera de temporada que coincide con una ventana comercial y equivale al 46% del valor estatal de la producción. La zona presenta los rendimientos y producción más altos de naranja, emplea personal local y foráneo, siendo generadora de empleo y derrama económica y abastece de naranja a 10 Estados de la república, durante los meses de junio, julio y agosto. Esta zona citrícola es un nodo de concentración de actividad antrópica y flujo comercial, en la cual existen condiciones altamente favorables para la reproducción del insecto vector (D. citri) y rápido contagio debido a la continuidad espacial de huertos susceptibles. Los costos potenciales por efecto del ingreso del HLB podrían ascender a 54 millones (MXP) en un lapso de 3 años, causando incremento del grado de vulnerabilidad de la zona. Con base en lo anterior, el presente documento corresponde a un análisis y propuesta metodológica para la rápida detección y delimitación del HLB, mediante el uso de tecnologías basadas en sensores remotos montados en vehículos aéreos no tripulados “VANTs” (aerofotomosaicos georeferenciados, imágenes satelitales) espectroradiometria de campo y uso de espectrómetros Raman, este último que analiza la composición química de los tejidos con base en el análisis de la dispersión inelástica de la luz a partir de una fuente monocromática (laser). ANALISIS PREVIO Informes generados por LaNGIF desde 2014, sugerían la importancia de mantener y fortalecer la vigilancia en las áreas citrícolas de la zona Media del estado de San Luis Potosí, ante la cercanía de casos positivos de HLB en material vegetal y psílidos infectivos de los Estados circunvecinos. El primer análisis fechado el 20 de agosto de 2014 (simulacro epidemiológico) que incorporó información obtenida por la aplicación de tecnologías geoespaciales para el manejo del riesgo del HLB (http://langif.uaslp.mx/documentos/link_archivos/Analisis_SLP_Vfinal.pdf) y que consideró variables ambientales, hospedantes susceptibles, movilización humana (migración de 2,500 jornaleros) y movilización comercial (2,090 reportes de carga equivalentes a de 22,000 ton) (Figura 1 a, b) mostró un escenario de alto riesgo principalmente en la periferia de la zona urbana y las parcelas cercanas a caminos o carreteras (Figura 2). DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. Figura 1. Índice de movilidad a) comercial y b) humana Figura 2. Resultado del modelo de riesgo potencial integrado – agosto 2014 DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. Posteriormente, el 28 de enero de 2015 (Of. LaNGIF-SINAVEF No. 007/15) se presenta un segundo análisis que justificaba la permanencia de Áreas Regionales de Control de HLB y PAC (ARCOs) en la zona Media de San Luis Potosí, y se ratifica la importancia de mantener e incrementar la vigilancia en dicha zona debido a su vulnerabilidad al ingreso del Huanglongbing. Dicho análisis consto de dos enfoques de los cuales el propuesto por LaNGIF (geográfico-epidemiológico) que consideró las variables relieve, movilidad comercial y antrópica, importancia económica, fluctuación poblacional del PAC y condiciones ambientales óptimas (incluyendo variables climáticas y fenómeno del NIÑO) (http://langif.uaslp.mx/documentos/link_archivos/ARCOs_2015_SLP_LaNGIF_Feb 2015.pdf). Los resultados indicaron que la zona Media presenta riesgo alto y muy alto en más del 63% de la superficie citrícola y según el simulacro de Monte Carlo (@Risk®) se pronostica que en un lapso de tres años se presentarían pérdidas de $43.72 millones para Ciudad Fernández y 10.9 millones para Rio Verde (Figura 3). Figura 3. Resultado del modelo de riesgo basado en condiciones óptimas – febrero 2015 DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. ACCIONES A IMPLENTAR MEDIANTE SENSORES REMOTOS Y ESPECTROSCOPIA RAMAN, PARA DELIMITAR ZONAS DE CONTINGENCIA Implementación del “Protocolo para la detección temprana del Huanglongbing de los cítricos (Candidatus Liberibacter spp.) mediante espectroscopia Raman”. Antecedentes: En abril y mayo de 2014 se colectaron muestras vegetales sintomáticas y asintomáticas, de árboles de naranja dulce (Citrus sinensis), lima persa (Citrus latifolia) y lima mexicana (Citrus aurantifolia) cultivados en zonas con presencia del Huanglongbing y zonas aparentemente libres; los municipios fueron Coquimatlán, Tecoman y Armeria en el estado de Colima y los municipios de San Martin Hidalgo, Ameca y Cocúla en Jalisco, Martínez de la Torre (Veracruz) y Ciudad Fernández (San Luis Potosí), dichas muestras que fueron colectadas con el apoyo de los Comités Estatales de Sanidad Vegetal, correspondientes. Las muestras fueron analizadas en el laboratorio del ENECUSAV, para confirmar su condición fitosanitaria por qPCR, mismas que también fueron analizadas por espectroscopia Raman que es una técnica óptica no invasiva, de fácil manejo, de instrumentación que puede ser muy compacta y en consecuencia puede ser portátil y que además, permite detectar cambios moleculares y bioquímicos sutiles en los tejidos ya que mide las frecuencias de dispersión inelástica (Raman) de la luz a partir de una fuente monocromática (laser), proveyendo información de la composición química por medio del registro de las vibraciones moleculares. Los resultados preliminares demostraron que es posible diferenciar entre arboles sanos y enfermos del HLB con un precisión del 89.2 %, dicha investigación ya han sido presentada en el IV International Research Conference on Huanglongbing. (Orlando, Florida) y XVI Congreso Internacional y XLI Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana de Fitopatología (http://www.irchlb.org/files/e1acb2ad-667f-4e7f-9.pdf) (http://infit.org.mx/socmexfito/suplemento/docs/Volumen322014/Resumen/SUPL32 14RESUMENESORALES.pdf)). Actividades a Implementar: Análisis de zonas con procesos activos de dispersión: 1. Considerando al insecto vector como principal diseminador de la enfermedad, se delimita un área de influencia conforme a los datos obtenidos in situ. Adicionalmente, se identifica radiométricamente las zonas potenciales a ser analizadas por espectroscopia Raman, previamente escalados en imágenes satelitales MODIS y que considera la presencia de cítricos en la proximidad de zonas de contagio activo y plantas con características espectrales sospechosas al HLB. DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. 2. Visualmente serán identificadas las plantas de cítricos dentro del epifoco de 0.2 km, mismas que serán analizadas mediante espectroscopia Raman (ER). 3. Posteriormente se procede a colectar muestras vegetales según las indicaciones del “Protocolo de actuación para la detección del Huanglongbing” emitido por la Dirección General de Sanidad Vegetal e instrucciones del “New Pest Response Guidelines: Citrus Greening Disease” emitido por el Departamento de Agricultura de Estados Unidos de Norteamérica; con algunas modificaciones según el presente protocolo (Anexos). Las muestras son analizadas in situ con un espectrómetro Raman y los espectros son almacenados para su preprocesamiento y análisis matemático. (Figura 4) Figura 4. Procedimiento para la obtención de espectros Raman y zonas de interés. DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. 4. Los espectros resultantes son analizados inmediatamente con base en Análisis de Componentes principales y Discriminante, lo cual permite diferenciar de manera automatizada las plantas enfermas de las sanas según el Software diseñado en la Coordinación para la Innovación y Aplicación de la Ciencia y Tecnología (CIACYT-UASLP) que ha sido incorporado a un Espectrometro Raman construido en su totalidad dentro del CIACYT por el Laboratorio Nacional de Ciencia y Tecnología en Terahertz (Figura 5). 5. Finalmente se emite informe preventivo indicado la posición de las plantas probablemente enfermas por el HLB según los resultados por Espectroscopia Raman; además, se actualizará el mapa de riesgo en zonas potenciales para posteriores acciones de delimitación y control del insecto vector y erradicación de plantas enfermas. Figura 5. Espectrómetro Raman diseñado y construido por el Laboratorio Nacional de Ciencia y Tecnología en Terahertz (C2T2) de la Coordinación Para la Aplicación de la Ciencia y Tecnología (CIACYT-UASLP). DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. Implementación del “Protocolo para la detección temprana del Huanglongbing mediante Vehiculos Aereos no Tripulados (VANTs) y espectroradiometría de campo”. Antecedentes: En abril de 2013 se tomaron datos radiométricos en 17 parcelas de limón mexicano (Citrus aurantifolia) cultivados en zonas con presencia del Huanglongbing y zonas aparentemente libres, en el municipio de Tepalcatepec, Michoacán; dichos datos fueron colectados con el apoyo del Comité Estatales de Sanidad Vegetal del estado. Se obtuvieron 1,320 firmas espectrales con un radiómetro multiespectral modelo CROPSCAN®-MRS85 que mide reflectancias del dosel en cinco regiones del espectro electromagnético (485, 560, 660, 830, 1650 nm). Las firmas fueron categorizadas de acuerdo al estatus fitosanitario de cada árbol medido en Libre (no infectado), Sospechoso (presenta síntomas, pero no ha sido confirmado en laboratorio), Infectado con HLB y Síntomas de Moteado (Planta confirmada como positiva para HLB en laboratorio y que presenta síntomas de moteado). Los resultados preliminares demostraron que es posible diferenciar entre arboles sanos y enfermos del HLB, con una precisión del 80% por clase, dicha investigación ya ha sido presentada en la XX reunión nacional Selper –México. Adicionalmente, el LaNGIF ha adquirido dos Vehículos Aéreos No Tripulados con sensores que capturan imágenes en infrarrojo y visible (650 a 1200 nm) a una resolución de 2 cm, con lo cual se tendrá la capacidad de escalar los datos radiométricos sobre imágenes ortorectificadas. (http://langif.uaslp.mx/selper/documentos/CD_SELPER_2013/MEMORIAS_SELPE R_PDF/Monitoreo/ID_097.pdf) Actividades a Implementar: Análisis de zonas con procesos activos de dispersión: 1. El lugar de las mediciones se realizarán conforme lo establece la actividad 1 y 2 del “Protocolo para la detección temprana del Huanglongbing de los cítricos (Candidatus Liberibacter spp.) mediante espectroscopia Raman”, antes mencionado. 2. Se harán mediciones radiométricas en los árboles donde se hagan las colectas de muestra vegetal. Se medirá en tres repeticiones, se obtendrá una imagen en nadir de la copa del árbol, según el “Manual de radiometría de campo para la vigilancia y protección fitosanitaria” emitido por el Laboratorio Nacional de Geoprocesamiento e Información Fitosanitaria (Figura 6). DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. 3. Posteriormente, se realizará un vuelo con VANT, siguiendo los “Requerimientos para operar un sistema de aeronaves pilotadas a distancia” emitido por la Secretaria de Comunicaciones y Transportes, para las zonas urbanas se realizará un vuelo sólo en nadir a 200 m de altura y en áreas rurales se planeará el vuelo en toda la parcela muestreada (Figura 6). Figura 6. Procedimiento para la obtención de firmas espectrales y ortomosaicos con VANTs 4. Los resultados serán procesados en Sistemas de Información Geográficas y programas especializados, del cual se obtendrá informes preventivos de la identificación de plantas probablemente positivas al HLB. Dicho procedimiento ya ha sido validado para el estudio de otros problemas fitosanitarios (Figura 7) y por lo tanto, también será implementado para la delimitación oportuna de zonas de contingencia y detección de árboles sospechosos al HLB. CONCLUSIONES El principal objetivo de los ARCOs es prevenir que los arboles sean infectados por el Huanglongbing y mientras exista una incidencia en árboles enfermos inferior al 1% por año, será posible mantener la situación contralada y siempre que todos los productores realicen las actividades preventivas y de control de la enfermedad de manera organizada, incluyendo aquellos productores reticentes. Una vez superado el 1% de incidencia, el método de control más eficiente será el genético a través de variedades tolerantes a la enfermedad (Bové, 2015, IRCHLB, Orlando Fl.). Las tecnologías basadas en sensores remotos, son una alternativa viable para la detección temprana de árboles enfermos a costos bajos (LaNGIF, 2015, IRCHLB, Orlando Fl.). DETECCION DEL HUANGLONGBING ASISTIDO POR SENSORES REMOTOS PARA LA DELIMITACION OPORTUNA DE LA ENFERMEDAD CASO: ZONA MEDIA, S.L.P. Imagen 7. Análisis de la incidencia y severidad de síntomas asociados a presencia de VTC, acorde al análisis de información espectral obtenida mediante VANTs.