Guia Nº 2 i. Determinación de Características Lipídicas:

Guia Nº 2
Determinación de Biomoléculas II : LÍPIDOS , proteínas y ACTIVIDAD Enzimática.
i. Determinación de Características Lipídicas:
Los lípidos son un grupo general de sustancia orgánicas insolubles en solventes polares como el agua, pero
que se disuelven fácilmente en solventes orgánicos no polares, tales como el cloroformo, el éter y el benceno.
Típicamente, son moléculas de almacenamiento de energía, usualmente en forma de grasa o aceite, y
además cumplen funciones estructurales, como en el caso de los fosfolípidos, glucolípidos y ceras. Algunos
lípidos, sin embargo, desempeñan papeles principales como mensajeros químicos, tanto intra como
intercelular.
Las propiedades físicas de una grasa, como por ejemplo su punto de fusión, están determinadas por las
longitudes de sus cadenas de ácidos grasos y dependen también de si las cadenas son saturadas o no saturadas.
En los grasos insaturados, los dobles enlaces provocan que las cadenas se doblen; esto tiende a separar las
moléculas, produciendo un líquido como el aceite de oliva o de girasol.
ii. Determinación de Proteínas y Actividad Enzimática
Las proteínas son polímeros formados por monómeros (unidades básicas de construcción) de aminoácidos. La
estructura de las proteínas se puede describir a diferentes niveles de organización, cada uno representado por
una estructura y cada uno dependiente de diferentes tipos de interacciones. Se describen 4 niveles: estructura
primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. Dichos niveles pueden verse alterados por factores como
aumento de temperatura y variaciones de pH, induciendo el proceso de denaturación protéica (pérdida de
estructuras superiores a estructuras simples y por ende pérdida de la funcionalidad de la proteína).
Las Proteínas, son macromoléculas que ejecutan prácticamente todas las actividades de la célula.
Como enzimas las proteínas aceleran la velocidad de las reacciones metabólicas; como fibras estructurales,
suministran apoyo mecánico a nivel celular y extracelular; también presentan funciones como hormonas,
factores de crecimiento y activadores de genes, etc.
Objetivos
• Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lípidos, algunas de las cuales pueden servirnos para su
identificación
• Reconocimiento de lípidos en solución
• Reconocer macromoléculas orgánicas presentes en las células
• Reconocer la presencia de proteínas en diferentes soluciones
• Analizar y observar el proceso de denaturación de las proteínas
• Analizar la actividad enzimática frente a diferentes factores
ACTIVIDADES PARA DESARROLLAR EN EL PRÁCTICO
i. Reconocimiento de Lípidos
• Disponer en una gradilla dos tubos de ensayo, colocando en ambos 2 ml de aceite de comer
• Añadir a uno, 4 o 5 gotas de solución alcohólica de Sudán III. Al otro tubo añadir 4−5 gotas de tinta roja.
Agitar ambos tubos y dejar reposar
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• Registre sus observaciones
II. Solubilidad de Lípidos
• Tomar 4 tubos de ensayo y poner en cada uno de ellos
• TUBO A 3 ml de agua , TUBO B 3 ml de éter, TUBO C 3ml de acetona y TUBOD 3ml (1,5 ml acetona y
1,5 ml éter)
• Añadir a cada tubo 1ml de aceite de oliva y agitar fuertemente. Observar la formación de gotitas o micelas
y dejar en reposo.
• Registre sus anotaciones
• Reconocimiento de Proteínas
3.1 Test de Biuret
• Coloque en un tubo de ensayo 3 ml de albúmina y en otro 3 ml de almidón.
• Agregue igual volumen de reactivo de Biuret (la coloración púrpura indica reacción positiva).
• ¿En qué tubo hay reacción positiva?.
• ¿Qué grupos químicos reaccionan para establecer un enlace peptídico?.
• ¿Qué reacción química ocurre entre el reactivo utilizado y las proteínas?.
3.2 Denaturación de Proteínas
• Por variación de la temperatura
• En un tubo de ensayo coloque 2 ml. de albúmina de huevo y sométalo a la llama del mechero.
• ¿Qué sucedió con la albúmina?.
• ¿Qué enlaces se rompieron?.
• ¿En qué consiste la denaturación proteica?.
• Por variación del pH
• A 2 ml de albúmina agregue, escurriendo por las paredes del tubo, 2 ml de ácido nítrico.
• En otro tubo, coloque 2 ml de albúmina y deje escurrir 2 ml de hidróxido de sodio 20%.
• ¿Qué cambios observó?, ¿A qué se debe esto?.
• ¿Qué semejanzas y diferencias existen con el tipo de denaturación anterior?.
• ¿Qué otros tipos de agentes (y cómo funcionan) pueden causar denaturación proteica?.
• Compare el fenómeno de denaturación proteica con el de hidrólisis proteica.
• Características de las Enzimas
Coloque 25 ml. de saliva en un vaso precipitado de 250 ml. y diluya hasta 50 ml. con agua destilada y agite.
De esta solución stock reparta 15 ml. a cada grupo para utilizarla en los experimentos siguientes:
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• Rotule tres tubos de ensayo y coloque en cada uno de ellos 2 ml. de saliva. Al primer tubo póngale hielo
• Al segundo, en un baño a 37°C
• Al tercero, a la llama del mechero
• Agregue 0,5 ml. de almidón a cada uno, espere 15 minutos y luego reconozca la presencia de almidón en
los tres tubos.
• ¿Cómo explica estos resultados?.
• ¿Qué característica de las enzimas se pone aquí de manifiesto?.
• Señale y explique los conceptos de:
• saturación enzimática.
• Km.
• Velocidad máxima.
• ¿Qué características presentan los inhibidores enzimáticos de tipo competitivos y no competitivos?.
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