presentación

Cómo montar un
laboratorio de Patología
Molecular
ENRIQUE DE ALAVA
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA-CSIC
Motivaciones
• Casi 5000 enfermedades tienen una base genética
conocida
• Alta sensibilidad y especificidad de la mayoría de
tests= utilidad diagnóstica
• Potencialidad para la automatización y la
estandarización
• Cada vez hay más técnicas y kits disponibles
(infecciosos y cáncer)
• Se combina fácil con la morfología
• Los precios están cayendo
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Papel en el diagnóstico clínico
Integración
Papel del laboratorio de Patología
Molecular
• Diagnóstico
• Cáncer
• Enfermedades infecciosas
• Enfermedades de fuerte base genética
• Inmunología clínica
• Patología Forense
• Investigación
JANO
Problemática concreta en
PM Diagnóstica
Enf. genéticas
Aspectos éticos
Repercusiones familiares
Requerimiento de CI específico
Datos de carácter personal / familiar
Complejidad en el riesgo / beneficio
Enf. oncológicas
Muchos tipos de entidades
Muchos tipos de muestras
• Parafina, congelado, SP, otros
Integración de disciplinas
Enf. infecciosas
Gran volumen de determinaciones
Plataformas tecnológicas automatizadas
Alto costo de los kits comerciales
Tests de cuantificación
¿Qué hace falta en un laboratorio de
Patología Molecular Diagnóstica?
Integración
Recursos
Habilidades
Experiencia médica, científica y
técnica
Instalaciones, equipos y personal
Organización, administración,
gestión, comunicación
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cartera de servicios. ¿Cuál?

Necesidad clínica.

Requerimientos institucionales

Competencia del laboratorio:

Capacidad tecnológica

Experiencia

Viabilidad económica: Análisis de costes

Centros de referencia
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Diseño del laboratorio
Instalaciones
Equipamiento
Personal
Laboratorio de Patología Molecular
Ahorro en fungible (30%), equipos,
espacio y personal
Hospital
Patología
Microbiología
Hematología
Microbiología
Mejor integración
Cortesía Dr. M. Morente
Otros
Separación física de las áreas prePCR y post-PCR
– Área pre-PCR (Zona limpia o área de preamplificación)
• Recepción de muestras, Extracción de ácidos nucleicos y Preparación de las
reacciones de PCR (cabina + UV)
– Área post-PCR (Zona sucia o área de post-amplificación)
• Amplificación por PCR, Análisis de productos
– El ideal: diferentes habitaciones con:
• Flujo de aire separado (filtros en el área pre-PCR)
• Diferentes presiones ( Positiva en la pre-, negativa en la post-)
• Al menos, separarlas lo más posible y cuidar el trafico de personas.
– Área neutra:
• Preparación de reactivos ( o duplicar para cada área)
• Proceso de datos (también válido en el área post-PCR)
Separación física de las áreas prePCR y post-PCR
Sentido común
– Duplicar equipos, pipetas, etc. No pasar de post- a pre– Agua destilada estéril para reactivos y soluciones
– Reactivos estériles o esterilizados
• Excepto primers, dNTPs y enzimas.
– Alicuotar reactivos
– Controles negativos y negativos
– Extremar las medidas de precaución en el manejo de la muestra
primaria.
– Guantes, cuchillas desechables, etc.
– Pipetear adecuadamente
– LIMPIEZA (Alcohol, …)
Equipamiento
Equipamiento
• Depende de la cartera de servicios
• A menudo está diseñado o fabricado para
investigación
• Necesita un plan de mantenimiento
• Asegurarse del servicio post-venta
Ojo a los
detalles
El equipamiento pequeño es
tan importante como los
grandes equipos
Por ejemplo: calibración de
pipetas, etc.
Equipamiento
Extracción de ác. nucleicos
PCR
Post PCR
Hibridación
Equipamiento
Extracción de ác. nucleicos
Manual
PCR
Termociclador
Post PCR
Electroforesis
Hibridación
Placa caliente
Equipamiento
Manual
Termociclador
Electroforesis
Placa caliente
Equipamiento
Plataformas informáticas:
– Software de gestión
– Software de producción (licencias)
– Base de datos con datos personales... LOPD
• Seleccionar al personal
• Capacitar al personal
– Legal
– Funcional
– Calidad
• Fidelizar al personal
Cómo poner a punto un nuevo
método diagnóstico
1. Antes de comenzar
• Considerar la necesidad clínica, el coste,
la facilidad y los beneficios esperables de
la prueba antes de invertir el tiempo
necesario para diseñarla
• Seleccionar la técnica más adecuada
• Volumen de casos
• ¿Realizarla o derivarla?
2. Diseñar el método
• Seleccionar muestras referencia
(controles) positivos y negativos
• Reactivos que hace falta reconstituir o
adquirir
• Calibrar o programar los aparatos
• Formar al personal
3. Validar el método
• A través de un grupo de muestras de
características conocidas respecto al
parámetro que se va a medir.
• Calcular sensibilidad /especificidad
4. Ya se puede usar…
• Debe haber protocolo escrito para el
personal implicado
• Debe haber un formulario para la
realización de informes
• Explicar indicaciones de la prueba a los
clínicos que las van a solicitar (‘usuarios’)
5. Métodos diagnósticos ya
validados
• Sistemas para monitorizar variaciones
entre lotes de un mismo reactivo.
• Establecer en qué tiempo debe quedar
informada una prueba.
• Sistema para evaluar resultados
discordantes con parámetros clínicos
relevantes.
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Dos herramientas logísticas
de apoyo
Para el diagnóstico
Y la investigación
Análisis de imagen
(=confianza en los números)
BIOBANK
-An establishment that manages
-A collection of biological samples-Plus clinical information
-Organized as a service
-With a clear design, and quality ethical criteria
-For biomedical research.
BIOBANK
-An establishment that manages
-A collection of biological samples-Plus clinical information
-Organized as a service
-With a clear design, and quality ethical criteria
-For biomedical research
-and diagnosis.
Clinical/image data
Biopsy/excision/cytology
Gross examination
Take for
EM or
cell culture
EM
Metaphase
cytogenetics
Paraffin
-embedded
tissue
H&E,
IHC
FISH
Diagnosis
Frozen
tissue/cells
RT-PCR
-omics
FISH
Banking
Cell suspensions
1. From liquid tumors
2.
From solid tumors
Cell Preservation
Slow freezing and
Quick unfreezing
Current situation (October 2007)
•
Regional:
– Castilla y León
– Cataluña
– Andalucía
– Asturias
•
CNIO:
– 24 Centers in 9
CCAA.
– Madrid
– Canarias
– Galicia
• Other networks.
Blood is an
excellent
source of DNA
National DNA Bank
Biobanks: Research and Diagnosis
SAMPLE
BIOBANK
MOLECULAR
ANALYSIS
TRANSLATIONAL
RESEARCH
PATIENT
LABORATORY
MOLECULAR
DIAGNOSTIC &
THERAPEUTICS
MARKERS
PROFILING
EXPERIMENTAL
RESULTS
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Legislación de referencia
Ley Orgánica 15/1999 de
Protección de datos de carácter
personal -LOPD
Ley 41/2002 de Autonomía del
paciente
Dx Genético
Dx Patológico
Ley 14/2007 de Investigación
Biomédica
Bioseguridad, instalaciones,
transporte de muestras, laboral
Desarrollos autonómicos
Legislación de referencia
Dx Genético
Dx Patológico
Ley 14/2007 de
Investigación
Biomédica
Artículos 44 - 57 … Análisis genéticos
“Análisis genético”: procedimiento destinado a
detectar la presencia, ausencia o variantes de
uno o varios segmentos de material genético, lo
cual incluye las pruebas indirectas para detectar
un producto génico o un metabolito específico
que sea indicativo ante todo de un cambio
genético determinado. (Artículo 3)
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Calidad. Definiciones
1. CALIDAD
“Grado en el que un conjunto de características
inherentes de un producto, proceso o sistema CUMPLE
con los requisitos”
POBRE
BUENA
EXCELENTE
2. SISTEMA GESTIÓN CALIDAD
Gestión de calidad. Definiciones
“SISTEMA DE
GESTIÓN
para
dirigir y
controlar una organización con respecto a
la CALIDAD”
“Parte del Sistema General de Gestión de una organización
que pretende garantizar la CALIDAD de los productos y/o
servicios suministrados”
Objetivo de calidad en PM
• Ofrecer diagnósticos reproducibles y
fiables
• Mejora continua de las actividades del
laboratorio
• No necesariamente la certificación
– Personal cualificado
– Normativa de calidad
Mejora de la calidad
• Conjunto de procedimientos para mejorar
la fiabilidad
– Evaluación de la calidad de los resultados
– Comunicación óptima de los resultados
– Capacitación y formación del personal
– Resolución de problemas
Para tener en cuenta al implantar
un sistema de gestión de calidad
• Una herramienta para mejorar nuestra
gestión
• Nuestra labor es que la herramienta
funcione y que la gestión mejore
• Un sistema mal diseñado generalmente
entorpece la labor diaria, especialmente
cuando sólo se busca la certificación.
Dos preguntas
• ¿Qué razones nos llevan a implantar un
sistema de gestión de calidad?
• ¿Qué referencias, o modelo de gestión,
necesitamos para lograr nuestros
objetivos?
Gestión de la información
• Almacenamiento en el sistema informático
• Alimentación ininterrumpida
• Volcado de información a sistemas
nuevos
• Sistema integral de información del
laboratorio (Instrumentos, aplicación de
gestión de AP, idem del BT, etc.)
Ley Orgánica de protección de
datos de carácter personal (LOPD)
• Seguridad de los datos (Art. 9)
• Deber de secreto (Art.10)
• Acceso de los datos por cuenta de terceros (Art. 12)
• Derechos de las personas: acceso, rectificación,
cancelación y oposición (Arts. 15 y 16)
• Creación, modificación o supresión de ficheros.
Notificación e inscripción registral (Arts. 20, 25 y 26)
Cumplir la LOPD puede significar
• redacción de documentos de seguridad
• funciones y obligaciones del personal
• registros de incidencias,
• control de acceso, identificación y autenticación,
• gestión de soportes, gestión de copias de
respaldo
• medidas para el control de acceso físico al
laboratorio, etc.
¿Consentimiento informado?
• Para cualquier análisis genético
• Consentimiento explícito y escrito
• Consentimiento para determinaciones
concretas
• Anteproyecto de Ley sobre pruebas
genéticas y biobancos
Control de riesgos laborales
• Bioseguridad muestras recibidas
• No exposición a agentes infecciosos (no
comer, beber o almacenar comida)
• No pipetear con la boca
• Protección (guantes, bata, mascarillas).
• Campanas de extracción adecuadas,
• …
Auditoría interna de los resultados
Dos preguntas
• ¿Qué razones nos llevan a implantar un
sistema de gestión de calidad?
• ¿Qué referencias, o modelo de gestión,
necesitamos para lograr nuestros
objetivos?
LABORATORIO DE PATOLOGÍA MOLECULAR
Ha decidido implantar …
SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD
Según los requisitos …
NORMA ISO 9001:2000
Y pretende lograr la …
CALIDAD TOTAL
CERTIFICACIÓN/ACREDITACIÓN DEL
LABORATORIO
Gestión de calidad
2. SISTEMA GESTIÓN CALIDAD
Mejora Continua
A
P
CICLO DE DEMING
•Plan
•Do
C
D
•Check
•Act
NORMA ISO 9001:2000
¿Qué no es y qué es ISO 9001:2000?
 No es un texto de ley.
 No es un texto que imponga los medios aplicables para
el cumplimiento de sus requisitos.
 No es un texto que exija la implantación de un
sistema documental complejo y difícil de gestionar.
 Es un instrumento de adhesión voluntaria.
 Es un texto aplicable a cualquier tipo de organización
independientemente de cual sea su tamaño y su grado
de implantación en el mundo.
 Es un texto que exige compromisos.
La norma ISO 9001:2000
• Es de aplicación a cualquier tipo de organización.
• Proporciona un modelo de gestión de calidad. Su
implantación es un medio para demostrar que se
proporcionan de forma coherente productos que
satisfacen los requisitos del cliente y los reglamentarios
aplicables.
• El reconocimiento a este modelo de gestión es la
certificación, que se obtendrá por parte de las empresas
registradoras (certificadoras) que son autorizadas por
ENAC para llevar a cabo esta actividad.
La norma UNE-EN-ISO/IEC 17025
• Es de aplicación a los laboratorios de ensayo y
calibración (químicos, generalmente no clínicos).
• Basada en el esquema de la norma ISO 9001, es el
medio para garantizar la competencia técnica de las
actividades de ensayo y/o calibración.
• El cumplimiento de los requisitos de esta norma implica
el cumplimiento de los requisitos de la norma ISO 9001,
pero no viceversa. Da por tanto un paso más que la
anterior para el caso de los laboratorios.
• El reconocimiento a esta norma es la acreditación, que
se obtiene por parte de ENAC.
La norma UNE-EN-ISO 15189
• Es de aplicación a los laboratorios diagnósticos (p.ej. de
análisis clínicos)
• Proporciona los requisitos particulares relativos a la
competencia técnica y calidad de los análisis que
proporcionan información para el diagnóstico,
prevención, o tratamiento de enfermedades en los seres
humanos.
• Este sistema implica el cumplimiento del modelo ISO
9001 (pero no al revés)
• El sistema implantado según esta norma es acreditado
por ENAC.
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Lab. PMD-BT
Teresa Hernández
Verónica Iglesias
Montse Arroyo
Susana Fraile
NEO-BNADN
Juan Manuel Sánchez
Lab. PMS
Ana Pastora Otero
Ana Sofía Martins
Carlos Mackintosh
Daniel Osuna
David Herrero
Gemma Caballero
José Luis Ordóñez
Juan Madoz
Victoria Sevillano
Universidad de Salamanca