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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
DETERMINACION DE COMPONENTES COLINERGICOS EN LINFOCITOS DE
TILAPIA NILOTICA (Oreochromis nilóticus) EXPUESTA A PLAGUICIDAS
ORGANOFOSFORADOS.
Ma. Ángeles López Jara, Ing. Bioquímica Instituto Tecnológico de Tepic, [email protected].
Asesor Dr. Manuel Iván Girón Pérez. Laboratorio de inmunotoxicología, Universidad Autónoma de
Nayarit, [email protected].
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Los plaguicidas organofosforados (POF) son ampliamente utilizados como insecticidas y
son relativamente solubles en agua, su mecanismo de acción es a través de la inhibición
de la enzima acetilcolinesterasa (AChE). Se ha reportado que las células del sistema
inmune tales como linfocitos, tienen componentes colinérgicos como acetilcolina (ACh),
receptores muscarínicos y nicotínicos, colina-acetiltransferasa y AChE.
El mecanismo de toxicidad de los POF conlleva la inhibición de la AChE,
interaccionando con el grupo OH de la serina del centro activo de la enzima, provocando
así la acumulación excesiva de ACh. Los POF contaminan ambientes acuáticos
especialmente en zonas donde las corrientes de agua, como lluvia y riego, pueden llevar
los POF a ecosistemas acuáticos; por lo tanto los organismos acuáticos como los peces,
pueden verse afectados por estas sustancias. La tilapia nilótica (Oreochromis nilóticus)
es un pez dulce acuícola ampliamente distribuido en el mundo, por lo que representa un
modelo adecuado para estudiar los mecanismos de inmunotoxicidad de los POF en
organismos vertebrados. Por lo que el objetivo del presente trabajo fue determinar la
actividad AChE y concentración ACh, en linfocitos de bazo de tilapia nilótica expuesta de
manera aguda a diazinón.
METODOLOGIA
Se expusieron in vivo, peces de 190 - 250g a concentraciones 0.97, 1.95 y 3.9 ppm de
diazinón (POF) durante 12 horas. Transcurrido el tiempo de exposición, se extrajo el
bazo y se disgregó mecánicamente en buffer salino de fosfato (PBS), posteriormente las
células mononucleares se separararon a través de un gradiente de densidad con
histopaque-1077, éstas se resuspendierón y homogenizaron mecánicamente en Buffer
(Tris-HCl) y PBS, para medir proteínas mediante método Bradford, posteriormente se
determinó la concentración de ACh con el kit comercial Amplex Red mediante
fluorometría; la actividad de AChE se determinó mediante el Método Ellman.
CONCLUSIONES GENERALES
Los niveles de ACh en los linfocitos de peces expuestos a diazinón fueron superiores en
comparación con los linfocitos de peces control, mientras que la actividad de AChE se
mostró disminuida.
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Agosto 2014