Evaluación de la Inhibición de la Enzima convertidora de Angiotensina por Proantocianidinas extraídas de la Uva País Negra (Vitis Vinífera L.) Gonzalo Eriz, Verónica Sanhueza, Marlene Roeckel, Katherina Fernández Departamento de Ingeniería Química, Universidad de Concepción Edmundo Larenas s/n, Casilla 160-C, Correo 3, Concepción, Chile, fono 56-41-2204534, [email protected] La hipertensión arterial es uno de los principales problemas de salud pública en todo el mundo y se estima que afecta a un tercio de la población occidental, siendo ésta una condición clave para el desarrollo de enfermedades coronarias e infartos. En los últimos años, se ha incrementado el interés por la búsqueda de compuestos naturales en alimentos con potenciales características profilácticas o terapéuticas en el tratamiento de la hipertensión arterial. Las proantocianidinas (PAs) o taninos condensados, son oligómeros y polímeros de flavan-3-oles, que contienen catequinas como subunidades y su estructura depende de la fuente vegetal de la que son extraídas. Varias propiedades bioctivas relacionadas al consumo de alimentos ricos en PAs tales como: antioxidantes, anti-cancerígenos, antihipertensivos, etc. han sido encontradas; sin embargo, su efecto inhibidor sobre ciertas enzimas ha sido menos estudiado. La Enzima Convertidora de Angiotensina es una dipeptidil-carboxipeptidasa (ECA, peptidil-dipeptidasa A, EC 3.4.15.1) que tiene un importante papel en la regulación de la presión arterial en mamíferos. ECA cataliza la conversión del decapéptido Angiotensina I que no posee bioactividad, al octapéptido Angiotensina II, un potente vasoconstrictor. ECA participa también en la degradación del nonapéptido Bradiquinina un vasodilatador, lo que también contribuye a un aumento de la presión arterial. El propósito de este estudio fue evaluar la influencia de dos tipos de extractos ricos en PAs -de piel y semillas- de uva País Negra Vitis Vinífera L. del valle del Itata, Octava Región, Chile, extraídas en distintas etapas de maduración1., en la inhibición de la actividad de la ECA mediante un método de cromatografía líquida de alta precisión en fase inversa (Hitachi-Merk LaChrom L7000 series, Japón), con una columna LiChroCART (150 mm x 3 mm, 5 µm Purospher STAR RP-18) y usando gradiente isocrático de 0,1 %v/v Ácido Trifluoro Acético (TFA) en (75:25, % v/v) Agua/Acetonitrilo. La actividad de ECA, fue determinada por el seguimiento de la hidrólisis de la Hipuril Histidil Leucina (HHL), para dar como producto Ácido Hipúrico (HA) y su detección con HPLC2. Pruebas preliminares verificaron la completa separación de HA (tR: 1,3560 ± 0,0009 min; lineal en rango 0,05 1,00 mM, r2=0,9957) con HHL (tR: 2,5405 ± 0,0865 min; lineal en rango 0,075 - 1,00 mM, r2=0,9956) usando estándares puros (Sigma-Aldrich). Se evaluó la actividad inhibitoria (AI) de las PAs de piel y pepa de Vitis vinífera L. sobre ECA y se calculó la concentración de PA que produce una inhibición del 50% (CI50) correlacionándola con la fecha de maduración y con el tipo de PA. Además, se evaluó el efecto del tamaño molecular de las PAs (expresado como mean degree of polymerization, mDP) sobre la inhibición de ECA. Un resultado esperado es que las PAs de la uva Vitis vinífera L. tengan distintos grados de inhibición en la ECA, los que estarían relacionados con el tiempo de maduración de la uva. De esta forma se espera encontrar una fecha en la que la interacción PA-ECA sea máxima, lo que según bibliografía se explica porque el contenido máximo de PAs se encuentra en la etapa cercana a la coloración de la uva (véraison), punto desde el cual la concentración de PAs disminuye a medida que avanza la maduración por ser susceptibles a la oxidación1 Por último, de acuerdo a lo expuesto en la literatura se espera que el efecto inhibitorio aumente junto con el peso molecular (i.e. mDP) de las PAs y con el número de grupos hidroxilos que constituyen las subunidades poliméricas, siguiendo esta idea, se espera que las PAs de piel tengan valores de CI50 menores (mayor actividad inhibitoria) a los de PAs extraídas de pepa; debido a que en general, estas últimas poseen un menor grado de polimerización y ausencia de unidades galoiladas ricas en grupos hidroxilos3. Agradecimientos: FONDECYT 11080001 1 Kennedy, J.A. et al; . J. Agric. Food Chem. 2001, 49: 5348- 5355. Cushman, D.W. et al; Biochem. Pharmacol.1971, 20: 1637-1648. 3 Actis-Goretta, L. et al; J. Agric. Food Chem. 2006, 54: 229-234. 2