Cultivo de Bacterias y Hongos in vitro

Practica 2
CULTIVO DE BACTERIAS Y HONGOS IN VITRO
Cultivo in vitro:
-Las bacterias son necesarias recuperarlas del hábitat natural donde se encuentran y
hacer que proliferen en medios artificiales que les proporcionen sus requerimientos
nutricionales.
-Bacterias y Hongos necesitan para su metabolismo de fuentes de energía, carbono,
nitrógeno, minerales y factores de crecimiento, además de agentes fisicoquímicos
como Temp., pH, humedad relativa y atmósfera de incubación.
Nutrientes:
-Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, minerales y factores de crecimiento.
Factores fisicoquímicos: pueden afectar el crecimiento de bacterias y hongos.
Temp:
Psicrofílicas.- menor de 10ºC
Psicrófilas .- 10 - 20ºC
Mesófilas .- 21 – 40 ºC
Termófilas.- mayores a 41ºC
pH:
Bacterias patógenas pH de 6.0 a 8.0
Hongos patógenos pH de 5.5 a 5.7
Humedad Relativa:
70% a 80%
Atmósfera:
-Anaerobios obligados.- medios bajos de oxido-reducción. Oxigeno es letal.
Ej. Clostridium, Bacteroides, Fusobacterium.
-Anaerobios aerotolerantes.- condición optima para desarrollo es la anaerobiosis.
Pueden permanecer en 02 . Ej. Clostridium perfringens.
-Aerobias facultativas.- capaces de crecer en anaerobiosis y aerobiosis.
Ej. enterobacterias.
-Aerobias obligadas.- O2 es indispensable para su desarrollo.
Ej. Mycobacterium y la mayoria de los hongos.
-Microaerofilicas.- rquieren de baja tensión de O2 y de 5 a 10% de CO2.
Ej. Campylobacter.
Características Físicas de los Medios:
-Medios Líquidos:
Son envasados en tubos, botellas y matraces.
Se siembra por agitación del asa, por medio de pipetas o depositando una porción
de la muestra. El crecimiento se manifiesta por turbidez.
La utilidad de estos medios es aumentar las posibilidades de crecimiento, diluir los
efectos tóxicos y para la observación de motilidad en preparaciones húmedas.
-Medios Semisólidos:
Medios que contienen 0.5 a 0.75% de agar.
Son envasados en tubos. Se siembran por picadura.
El crecimiento se observa por turbidez en el sitio de inoculación en bacterias no
móviles y turbidez a los lados de la línea de inoculación en bacterias móviles.
La utilidad es observar la motilidad bacteriana, la cual se confirmará con una
preparación húmeda a partir de medios en caldo y para conservar cepas bacterianas.
-Medios Sólidos y Duros:
Los primeros contienen 1.5% de agar y los ultimos de 3 a 7%.
Pueden envasarse en cajas de petri, botellas o tubos.
La utilidad de estos medios es el aislamiento de colonias de bacterias o levaduras,
para la realización de pruebas de susceptibilidad a quimioterapéuticos y para
guardar cepas bacterianas y micóticas. Los medios duros se utilizan para disminuir
el crecimiento invasivo de algunos mo.
Clasificación de los medios de cultivo con base en su utilidad diagnóstica
-Medios de Cultivo Básicos o Generales:
Desarrollo de bacterias y hongos poco exigentes.
Contienen los mínimos requerimientos nutricionales.
Utilizados para análisis cuantitativos, conservación de cepas y muestreo del medio
ambiente o superficie.
Ej. agar nutritivo, agar tripticasa soya (TSA), caldo nutritivo y agar Sabouraud
dextrosa (SDA)
-Medios Enriquecidos:
Suplementan con factores de crecimiento para el desarrollo de bacterias y hongos
de requerimientos nutricionales exigentes.
Generalmente contienen uno o mas de los sig. Ingredientes : sangre, suero, líquido
ascítico, huevo, carne, vitaminas y aa específicos entre otros.
Ej. agar sangre, agar Sabouraud con ac. Nicotínico, agar Lowenstein-Jensen, caldo
infusión cerebro corazón, etc.
-Medios Selectivos:
Contienen sustancias inhibitorias para suprimir parcial o totalmente el desarrollo de
mo no deseados.
Las sustancias utilizadas con mayor frecuencia son: colorantes, sales inorgánicas,
sales biliares, antibióticos y detergentes.
Tienen una gran utilidad para el aislamiento de gérmenes patógenos a partir de
muestras clínicas que contengan microfolora normal.
Ej. agar MacConkey (McC), verde brillante (VB), micobiotic, manitol sal agar
(MSA), etc.
-Medios Diferenciales:
Contienen indicadores que permiten diferenciar géneros o especies de algunos mo
por el aspecto característico de sus colonias.
La mayoria de los medios selesctivos son también diferenciales.
Ej. McC, B, MSA, Níger, Biggy, PPLO con acetato de talio y penicilina.
-Medios de Enriquecimiento:
Son líquidos y poseen efectos inhibitorios sobre ciertos géneros bacterianos,
favoreciendo al mismo tiempo el desarrollo de otros que se encuentren en menor
proporción en la muestra.
Medios muy utilizados para el enriquecimiento de Salmonella.
Ej. Caldo tetrationato y caldo selenito.
-Medios de Transporte:
Utilizados para el transporte de las muestras clínicas desde el lugar de su colección
hasta el laboratorio.
Su finalidad es preservar la viabilidad de los mo cuyo asilamiento va intentarse
posteriormente.
Ej. Stuart, Campy-thio, Carry –Blair, SSF.
Mofología de Colonias:
Para su descripción debe de tomarse en cuenta las sig. caract.: tiempo de
crecimiento, tamaño, color, borde, superficie, pigmentación, hemólisis y estructura
interna.