PERICIA BIOLOGICA:ADN CHRISTIAN RIVERA SALAZAR BIOLOGO DE LA DML II AMAZONAS ALGUNOS PRINCIPIOS BÁSICOS DE LA IDENTIFICACIÓN GENÉTICA - - Su UNIVERSALIDAD (se encuentra presente en el ADN de todas las células). Su DIVERSIDAD (es idéntico en todas las células de un mismo individuo) Alta REPRODUCIBILIDAD y fiabilidad ya que los resultados que se obtienen deben ser el mismo en cualquier laboratorio del mundo. Transmisibilidad hereditaria (procede en partes iguales de padre y madre). ADN NUCLEAR :LA HERENCIA COMPARTIDA DE LOS PADRES La molécula de ADN(ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO) :BICATENARIA NUCLEO NUCLEOTIDOS(BASE NITROGENADA) . Existen cuatro tipos de bases Adenina ,Guanina , Timina y Citosina ., cuya ordenación a lo largo de la cadena será lo que determine la información genética La cantidad total de ADN de una célula es alrededor de 3000 millones de nucleótidos (bases nitrogenadas) Un gen es un segmento de ADN (cuyo tamaño puede variar entre 3000 a 100000 nucleótidos )que contiene la información para la síntesis de una proteína. Se estima que el numero de genes es de 30000 , siendo desconocida en la actualidad la función de mas del 50% de estos . Bases nitrogenadas totales:3000`de bases nitrogenadas Un gen tiene 3000 -100000 bases nitrogenada(2% del ADN total) Ha y 30000 genes Los seres humanos son en 99.9% genéticamente idénticos, es decir solo el 0.1% difiere entre un individuo y otro(3 millones de base). Estas variaciones se denominan POLIMORFISMO , los que nos permite establecer una huella genética inequívoca. Estas huellas son utilizadas para resolver casos de filiación y vincular material genético en la escena de la investigación criminalística con los sospechosos. ANTECEDENTES MESA REDONDA 291 desaparecidos en Lima ANTECEDENTES Febrero 2002 LABORATORIO DE ADN Gerencia de Laboratorio Biomolecular y de Genética INSTITUTO DE MEDICINA LEGAL MINISTERIO PUBLICO LABIMOG Biología Molecular y Genética CHICLAYO – LIMA - AREQUIPA - AYACUCHO COBERTURA • TUMBES • PIURA • LAMBAYEQUE • LA LIBERTAD • CAJAMARCA • AMAZONAS • SAN MARTIN • HUANUCO MISION • Asesorar a los operadores de justicia, sobre las pautas del tramite para realización oportuna y eficaz de la recepción, toma de muestras biológicas provenientes de personas vivas o cadáveres, para el correspondiente análisis de ADN en el Laboratorio de Biología Molecular y de Genética. • Actualmente los Laboratorios Descentralizados de Biología Molecular y Genética , recepcionan, procesan y analizan casos de Paternidad utilizando tecnología moderna y adecuada, con un sistema automatizado contribuyendo así al examen medico legal y a la administración de justicia, con responsabilidad y calidad de trabajo. VISION • Proyectarnos a ser un ente imprescindible de asesoramiento especializado en Biología Molecular y Genética, brindando a la administración de justicia y sociedad, un servicio de excelencia que se refleje en la calidad y confiabilidad de los peritajes emitidos. ETAPAS DE LA PRUEBA DE ADN Toma de Muestras Extracción y Purificación Amplificación Análisis INFORMACION INTERESADO Juez - Fiscal Particular DML I y II DML-III-Lambayeque Medico Responsable DML-III-Lambayeque ADN Coordinador Responsable ADN COORDINACION Fecha de Toma de Muestra SOLICITA APOYO Medico o Biólogo Prof. Salud ENVIO DE MATERIAL DILIGENCIA • • • • • • Oficio Actas de Consentimiento (03) Acta de la Diligencia Copias de DNI - Partida - Ficha Reniec Muestras Cadena de Custodia Toma de Muestra DML I y II URGENTE: FAX (Gasa e Hisopo) COMO SOLICITAR LA PRUEBA • La autoridad respectiva ( Juez / Fiscal) y/o Particulares, soliciten la Prueba de ADN, a nuestro Laboratorio mediante un oficio dándonos la hora y fecha determinada. La diligencia se llevara a cabo en el mismo Juzgado o en nuestro Laboratorio. • Se envía la cartilla de requerimientos en la cual se indica determinados requerimientos según se trate el caso: Civil Penal Particular TOMA DE MUESTRA Requisitos respecto a la obtención de las muestras • Las muestras deberán estar siempre completamente identificadas y acompañadas del consentimiento Informado pertinente. • Respecto a los adultos: no deberá realizarse ningún análisis si no consta por escrito su consentimiento informado. • Respecto a los menores: es necesario el consentimiento de los titulares para realizar la prueba biológica. El menor deberá ser informado según su grado de madurez y, necesariamente, por imperativo de la ley a partir de los doce años. Deberá obtenerse también el consentimiento del propio menor si tuviese suficiente juicio y, en todo caso, a partir de los dieciséis años. ACTA DE CONSENTIMIENTO DE TOMA DE MUESTRA PROCEDIMIENTOS PARA LA TOMA DE MUESTRAS SANGRE e HISOPADO BUCAL Células del Epitelio Bucal Sangre Periférica TARJETAS FTA HISOPADO BUCAL MUESTRA DE SANGRE TIPOS DE MUESTRA Muestra Tradicional Muestra No Tradicional MUESTRAS TRADICIONALES SANGRE E HISOPADO BUCAL MUESTRAS NO TRADICIONALES GENETICA FORENSE - ADN HEMATOLOGIA ESPERMATOLOGIA TRICOLOGIA UNCOLOGIA ervicio de iología orense HEMATOLOGICO • • • • ORIENTACIÓN SANGUÍNEA CERTEZA SANGUÍNEA ( TIPO MANCHA : PINTURA) DETERMINACIÓN DE ESPECIE HUMANA COMPARACIÓN GENÉTICO POR ADN UNCOLOGICO Muestra: Uñas Primero Examen Uncologico: .- Presencia de células .- Recién pedir ADN TRICOLOGICO • Realizar Examen biológico .- Determinar de animal o artificial o Humano Evidencias (mínimo de tres) LA TOMA DE MUESTRA HEMATOLOGICO Hincar dedo Depositar en gasa estéril Colocar en sobre rotulado HEMATOLOGICOCO Si es cadáver fresco: Nato, No Nato, Adulto, etc. Extraer con jeringa Depositar en gasa. UNCOLOGÍCO Estudio en las uñas, para observar los restos orgánicos que pudieran haber, como consecuencia de la defensa o lucha que la victima pudo tener con su agresor. Uncologico Agresiones violaciones etc Cortar las uñas depositarlas en sobre o bolsa ziplot Se tomo muestra del implicado Se tomo muestra de sarro ungueal IMPUTADO El implicado se había lavado las manos Con ayuda de un hisopo estéril y SSF se extrajo muestra VICTIMA TRICOLOGICO Cabello con bulbo Mínimo 3 cabellos pinza Extraer resulta traumático Toma de muestra de pelos de persona (Victima y Sospechoso) Entre dedos de cadáver arrancados Encontrados sobre MUESTRAS OSEAS MUESTRAS OSEAS Técnico necropsiador Fetos extraer huesos de piernas Limpiarlas Colocarlas dentro de sobre ESTOMATOLOGIA Odontologo forense Extraccion TEJIDOS Feto – Cordón Umbilical – Biopsias Colocarlo dentro de frasco con agua Congelarlo totalmente y enviarlo con cadena de frío FLUIDOS SEMEN MUCOSIDAD SALIVA LIQUIDO AMNIOTICO SUDOR EVIDENCIAS TES DE MANCHAS EN PRENDAS U OBJETOS Tiene por objeto, analizar evidencias de naturaleza u origen biológico, en muestras de diferente índole (hematológicos, espermatológicos, tricológicos, ADN, etc.) EN OBJETOS En armas blancas o de fuego o cualquier otro objeto utilizado para perpretar el delito Zapatos, botellas etc. MUESTRA INCRIMINADA EVIDENCIA HISOPO EXTRAER CON SSF MUESTRA DE CUALQUIER SUPERFICIE PIEDRA SUELO PARED TIPOS DE MUESTRAS EVIDENCIA AGRESION SEXUAL VICTIMA SOSPECHOSO EVIDENCIAS ESPERMATOLOGÍA FORENSE Caso de Violación hisopo positivo a espermatozoides Se solicita a Biología Forense remita la muestra del hisopo al Laboratorio de ADN para su Homologación HISOPADO ORAL HISOPADO VAGINAL HISOPADO ANAL ESPERMATOLOGÍA FORENSE tTOMA DE MUESTRA: –SABANAS –ROPA INTERIOR –OTRAS ROPAS –MANCHAS EN PISO ETC. –OTROS CUIDADOS A TENER EN CUENTA CUIDADOS A TENER EN CUENTA No enviar sangre en tubos o frascos o jeringas CUIDADOS A TENER EN CUENTA Cabello cortado no sirve Recibimos mechones cortados donde no hay bulbo CUIDADOS A TENER EN CUENTA No tejidos, órganos No formol CUIDADOS A TENER EN CUENTA Lugares donde se ha utilizado luminol El luminol degrada el ADN A veces es mejor tomar dos muestras de hisopo O tomar un extremo de la muestra CUIDADOS A TENER EN CUENTA Sustancias químicas detergentes etc • CUERPOS CALCINADOS Casos desastres Huesos quemados calcinados Solo se toma muestra de dientes Muestras Oseas mezcladas Antropólogo forense Restos de fosas mezclados Precauciones generales • Evitar la contaminación accidental de las muestras • Usar guantes y material estéril • No guardar en bolsa plástica • Las muestras recolectarlas en gasa o hisopo estéril • No agregar ningún conservante, evitar el formol y toda sustancia química. • Cada representante legal debe completar y firmar el formulario de Acta de Consentimiento de toma de muestra. • Rotular y enviar con cadena de custodia Uno mismo contamina la muestra Recepción de muestras Las tarjetas se registran • Cuaderno de Custodia • Registro fotográfico • Ingresa a Base de Datos EXTRACCION Extracción de Sangre Extracción de Hisopado Limpiar el Harry Micropunch Extracción de Sangre (10 punch x tubo) Extracción de Hisopado (10 punch x tubo) PURIFICACION Colocar los punch en tubos de 1.5ul rotulados Repetir con 200 ul Llevar al Vortex 3 veces lapsos de 2-3 minutos Extraer 300ul de FTA y agregar al tubo Micropipeta de 1000ul Extraer todo el liquido y desecharlo AMPLIFICACION Rotulo tubos de 02 o 200 ul con los códigos de muestra • Agrego 15 ul de mix a cada tubo • Completo con 10ul de agua nanopura El volumen final debe ser 25 ul ANALISIS PERICIA CP-002-M CP-003-PP CP-001-H INDICE DE PATERNIDAD MADRE PRESUNTO PADRE 7 9.3 7 9 8 11 11 12 11 12 10 12 16 16 16 17 15 16 16 17 25 25 26 26 11 12 11 11 9 9 11 13 11 11 10 11 12 12 12 16 11 12 10 12 16 18 14 15 29 31.2 29 32.2 19 24 20 23 14 15 14 15 X X X Y Probabilidad de paternidad 8 PROBABILIDAD DE EXCLUSIÓN DE PATERNIDAD8 HIJA 7 8 10 16 16 25 11 9 10 12 10 15 31.2 23 14 X 7 7 12 11 17 17 26 11 13 11 16 12 18 32.2 24 15 X 99.9999999964 % 99.999990 % 1.487 4.753 2.165 2.32 3.119 14.493 2.555 4.916 1.824 20.747 3.167 3.021 3.867 4.394 2.214 MUCHAS GRACIAS