Glosario de cinética enzimática 2010 Gran parte de la historia de la bioquímica es la historia de la investigación enzimática. Actualmente la actividad enzimática es indicador de la calidad de la reacción y del proceso que se lleva a cabo. En este trabajo se presentan los términos básicos para comprender todo lo referente al tema, y así desarrollar un concepto completo de cinética enzimática. Flores Herrera María Teresa INTRODUCCIÓN Las enzimas constituyen la clase de proteínas más amplia y más altamente especializada. Catalizan los millares de reacciones químicas que, colectivamente, constituyen los intermediarios de las células. La actividad de las enzimas fue reconocida en estudios iniciales de la digestión en el estomago durante el periodo de1780 y 1825. La primera enzima aislada fue en forma cristalina pura fue la ureasa, obtenida de los extractos de Cannavalia enzyformis, por J.B. Summer en 1926, quien demostró que los cristales se encontraban compuestos por proteína, llegando a sugerir que todas las enzimas eran proteínas. Sus puntos de vista no fueron aceptados inmediatamente, sin embargo y no fue hasta el periodo de 1930, durante el cual J. Northrop aisló las enzimas digestivas pepsina, tripsina y quimotripsina en forma cristalina, cuando quedo firmemente establecida la naturaleza proteica de las enzimas. Las enzimas son catalizadores específicos. Muy a menudo, los grupos funcionales de la enzima son complementados con cofactores. Hay diversos factores químicos que pueden justificar las altas velocidades alcanzadas por las enzimas en las condiciones de pH y temperatura propias de las células. La complementariedad de la enzima con la geometría del estado de transición de la reacción es la causa más notable de su poder catalítico. Para medir la actividad de una enzima es necesario partir de un tejido o material que lo contenga, lo que generalmente se hace es romper las células del tejido mediante diversos procedimientos en un medio líquido a temperatura entre 0° y 4° con objeto de evitar la desnaturalización de las proteínas. A este proceso se le llama homogeneización, y al licuado resultante homogeneizado, el cual constituye ya una preparación que permite medir la actividad de la enzima. A partir del homogeneizado es posible separar partículas subcelulares, como núcleos, mitocondrias, partículas del retículo endoplásmico, membranas, etc. En cualquier tipo de preparación enzimática que se use, se mide su actividad en igual forma Página 2 El mecanismo de cinética enzimática más sencillo es el representado por la ecuación de Michaelis-Menten. Esta hipótesis supone la formación de un complejo específico entre enzima y sustrato, que explica el fenómeno de saturación. Ciertas sustancias rebajan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas, y pueden actuar de manera reversible o irreversible. Entre los mecanismo cinéticos de inhibición reversible tenemos la inhibición competitiva, la acompetitiva y la mixta. y que, con frecuencia contiene una vitamina como elemento estructural. Glosario: ACTIVIDAD ESPECIFICA: Número de unidades de enzima por miligramo de proteína. Medida de la pureza de la enzima y llega a ser máxima y se mantiene constante cuando la enzima se halla en estado puro. APOENZIMA: Proteína parte del sistema enzimático responsable de sus especificidad CENTRO ACTIVO: región tridimensional a la que se une el sustrato, y los cofactores, si participan, formada por una composición de grupos funcionales que determinan la afinidad, la especificidad y la capacidad de transformación química del sustrato por la enzima. CENTRO ALOSTERICO: Es el centro de unión para el modulador y es altamente especifico para el mencionado metabolito. COCIENTE Kcat/ Km: Equivale a una constante cinética aparente de segundo orden para la reacción entre la enzima libre y el sustrato libre. También denominada constante de especificidad, permite comparar el grado discriminación de una enzima por sustratos diferentes que pueden competir. COENZIMA: Molécula orgánica compleja localizada en la enzima que se necesita para comenzar la actividad. Cofactor orgánico requerido para la actividad de ciertas enzimas COFACTOR: Sustancia inorgánica u orgánica de bajo peso molecular, cuya presencia es necesaria para actividad de una enzima, pero no sufre una alteración permanente en la reacción. La mayor parte de las coenzimas derivan metabólicamente de las vitaminas. Puede ser un metal como Mg, Mn, Zn o Fe. Estable frente al calor. COMPLEMENTARIEDAD GEOMETRICA: Establecida entre enzima y sustrato y determina el numero y la direccionalidad de estos enlaces y, en última instancia, es la causa de la especificidad y la afinidad de la unión. CONSTANTE CATALITICA (Kcat): También conocido como número de recambio. Representa el máximo número de moléculas de sustrato que son convertidas en producto por centro activo y por unidad de tiempo. CONSTANTE DE MICHAELIS (Km): Concentración de sustrato a la que una enzima determinada alcanza la mitad de su velocidad máxima. Detalla la relación cuantitativa entre la concentración del sustrato y la Vmax para diferentes enzimas. En muchos casos es una medida inversa de la afinidad de la enzima por su sustrato; cuanto menor sea la Km mayor será la afinidad. CONSTANTE DE VELOCIDAD: En relación con las reacciones químicas, una constante que relacione la velocidad de una reacción concreta con las concentraciones de sustratos ECUACIÓN DE LINEWEAVER-BURK: Se utiliza en el estudio de inhibición enzimática. Es una ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN: Con esta ecuación se puede calcular la velocidad de reacción a una concentración cualquiera de sustrato. Ecuación que, en una enzima, relaciona la velocidad con la concentración del sustrato ENERGÍA DE ACTIVACIÓN: Cantidad de energía (expresada en calorías) necesaria para que todas las moléculas de un mol, a una temperatura determinada puedan alcanzar dicho reactivo. ENZIMA: Catalizadores específicos y potentes que posibilitan la coexistencia de un elevado número de reacciones química dentro de la célula. En la mayoría de los casos son de naturaleza proteica pero se conocen algunas que son RNA GRAFICA DE LINEWEAVER-BURK: Representación que permite calcular la constante de velocidad kcat y la constante de Michaelis-Menten para una reacción catalizada por una enzima. Se construye midiendo la velocidad de reacción inicial V a diversas concentraciones de sustrato [S], y representando gráficamente los valores en un grafico 1/V frente a 1/[S]. GRUPO PROSTETICO: Cofactor unido íntimamente a la porción proteica de la enzima. HIDROLASAS (ENZIMAS): Reacciones de hidrólisis. Añaden agua a través de los enlaces, hidrolizándolos. HIPÓTESIS DEL ESTADO ESTACIONARIO: La concentración del complejo enzima-sustrato es pequeña y constante a lo largo de la reacción. Por tanto, la velocidad de formación del complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociación (v2+ v3): v1 = v2 + v3 INHIBICION ACOMPETITIVA: Se une solamente al complejo ES en sitios distintos al catalítico. La unión del sustrato modifica la estructura de la enzima, haciendo posible la unión del inhibidor. La unión no puede revertirse por el sustrato ENZIMAS ALOSTERICOS: Enzimas cuya actividad catalítica viene modulada por la captación de un metabolito específico, que se fija en un lugar distinto del centro catalítico, se denomina también enzimas reguladoras. ENZIMA REGULADOR (ALOSTERICO): Enzima que ejerce una función reguladora, por su capacidad de experimentar cambios de sus actividad catalítica, al captar un metabolito modulador especifico ESTADO DE TRANSICIÓN: Estado rico en energía de las moléculas interactuantes, en la cima de la barrera de activación. Velocidad de reacción química es proporcional a la La inhibición acompetitiva es poco frecuente en las reacciones de un solo sustrato, pero es corriente en las reacciones de dos sustratos. La Vmax disminuye Km disminuye, INHIBIDOR BASADO EN EL MECANISMO: Inhibidor enzimático cuya acción depende del 4 concentración de las especies del estado de transición. La temperatura y catalizador aumenta la velocidad de la reacción. Página trasformación algebraica de la ecuación de Michaelis-Menten INHIBICIÓN COMPETITIVA: Sustancia que inhibe una reacción catalizada por una enzima compitiendo con el sustrato por el lugar activo, depende de la concentración relativa del inhibidor y del sustrato (ej. Succinato-deshidrogenasa, cataliza la eliminación de dos átomos de hidrogeno a succinato y rinde fumarato). INHIBIDOR SUICIDA: Inhibidor enzimático sobre el cual la enzima puede actuar catalíticamente, pero que altera de manera irreversible el lugar activo de la enzima en el proceso. ISOENZIMAS O ISOZIMAS: Formas diferentes pero relacionadas de una enzima que catalizan la misma reacción. A menudo difieren tan solo en unas pocas sustituciones de aminoácidos. Formas múltiples de una enzima que interfieren en su afinidad por el sustrato o en su actividad máxima. ISOMERASAS (ENZIMAS): Reacciones de isomerización. LIASAS (ENZIMAS): Adición de dobles enlaces. Añaden agua, amoniaco o dióxido de carbono a través de enlaces dobles, o remueve estos elementos para producir enlaces dobles. LIGASAS (ENZIMAS): Formación de enlaces con ATP. SITIO ACTIVO: Lugar de una molécula enzimática al que se une el sustrato y donde se facilita la reacción, a menudo es hendidura o bolsillo situado en la superficie de la enzima. OXIDO-REDUCTASAS: Reacciones de trasferencia electrónica. Actúan sobre La inhibición es reversible por el sustrato Km aumenta, por la [S] que se requiere para llegar a la mitad de la actividad máxima de la reacción Vmax permanece constante. INHIBICIÓN DEL PRODUCTO FINAL (FEED BACK): Inhibición de la primera enzima (regulador) de una secuencia multienzimatica, por el producto final de la secuencia, que funciona como modulador alosterico. INHIBICIÓN IRREVERSIBLE: Se produce cuando un grupo funcional que es necesario para la actividad resulta destruido o modificado (ej. inhibidor irreversible fluorofosfato de diisopropilo, que inhibe la enzima colinesterasa) INHIBICIÓN NO COMPETITIVA: Inhibidor de una reacción catalizada enzimáticamente, que actúa uniéndose a un lugar de la enzima distinto del lugar activo y reduciendo la eficiencia catalítica de la enzima (ej. Acido 5 iodoacetico, inhibe la conversión de la glucosa a acido láctico en el musculo. El incremento de la concentración del sustrato no invierte la reacción. Vmax disminuye proporcionalmente a la concentración del inhibidor Km permanece constante. Página mecanismo catalítico de la enzima, habitualmente es un análogo del sustrato que modifica de manera irreversible la enzima en un paso concreto del ciclo catalítico. muchos grupos químicos para añadir o retirar átomos de hidrogeno. BIBLIOGRAFIA: pH ÓPTIMO: pH al cual la actividad es máxima por encima o por debajo de este pH la actividad desciende, pH en el cual la enzima muestra su máxima actividad catalítica. RESIDUOS CATALITICOS: Residuos que participan directamente en la formación y la ruptura de enlaces químicos. SUSTRATO: Sustancia sobre la que se actúa. Compuesto sobre el que actúa una enzima de un modo especifico. TRANSFERASAS (ENZIMAS): Trasferencia de grupos funcionales entre moléculas aceptoras y donadoras. Las cinasas son transferasas especiales que regulan el metabolismo al transferir fosfatos desde el ATP a otras moléculas. UI: Unidades internacionales de actividad enzimática, representación de la cantidad de enzima, una unidad de cualquier enzima es la cantidad que cataliza la trasformación de un micromol de sustrato por minuto. También la actividad de una enzima se puede expresar en Katal, que es la cantidad de enzima que convierte 1mole de sustrato por segundo, entonces Lehninger, Albert. Curso breve de bioquímica. Ediciones Omega S.A. Barcelona 1981, pp 7188 Christopher k. Mathews. Bioquímica. Mcgraw-Hill, interamericana, Segunda edición, España 1998, pp. 398-492,1239 Blanco. Química Biológica, 2000 http://books.google.com.mx/books?id=TRD1 12Ay7IUC&printsec=frontcover&dq=related:I SBN8481747351#v=onepage&q&f=false = fundamentos de bioquímica http://books.google.com.mx/books?id=EFUP 472dyEMC&printsec=frontcover&dq=bioquim ica&cd=2#v=onepage&q=bioquimica&f=false Bioquímica. ´Peña, editorial Limusa. VELOCIDAD INICIAL: cuando la cantidad de sustrato es aun insignificante en relación con el total presente en la mezcla. Se acepta como velocidad inicial la determinada antes que el consumo de sustrato haya alcanzado el 20% del total originalmente presente. Página 6 1 U = 1/60 micro katal = 16.67 nano katal.