06_Alternativas al uso de formaldehído
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Alternativas al uso de formaldehido Dr. Miguel Ángel Carrasco Jefe de Servicio de Anatomía Patológica Hospital General de Catalunya. Hospital Universitari Sagrat Cor. Clínica del Vallés Jornada FormalCat. Barcelona 5 nov 2015 Puntos fuertes del formol • Fijador “gold standard” en Anatomía Patológica: • Estudios histopatológicos • Estudios inmunohistoquímicos y moleculares • Kits de farmacodiagnóstico FDA, EMA CH2O 2 Peligros del formol • Vapores irritantes • Sensibilizante cutáneo • Cancerígeno grupo 1, 2011 IARC 3 PROBLEMAS INCLUSIÓN FORMOL 4 R.D. 665/1997 HOSPITAL GENERAL DE CATALUNYA • 2002 Comité Seguridad y Salud • Substitución formol • Fijador basado en glioxal (Glyo-fixx) 2014. Servicio de Anatomía Patológica • Servicio transversal • 26.786 muestras de biopsia y piezas quirúrgicas • 58% HGC • 34% HUSC • 8% CDV • Todo tipo de biopsias y piezas quirúrgicas Uso de fijadores tisulares • FIJACIÓN MIXTA. ¿Por qué no todo? • Glyo-fixx. 70% • Greenfix. 10% • Formol. 20% 8 Glyo-fixx • Concentrado. Garrafas de 3,8 lt (Shandon Thermo Fisher Scientific) • Agua destilada 70-75 %, Etanol absoluto 5-10 % , Glioxal 15-25 %, Ácido acético 3-5 % • Dilución: • 11,6 l agua destilada y 3,5 l etanol absoluto • Solución de trabajo 18,9 l: • 75-77 % agua destilada, 20-22 % etanol y 3-4% glioxal • HGC y HUSC C2H2O2 Fijadores empleados • Greenfix (DiaPath) • Botes prellenados de 50 cc • 15-20% etanol absoluto, 1-3% etandial (glioxal) i 7080% agua destilada • Logística y costes: CDV • Formol 4% • HGC, HUSC y CDV Glyo-fixx. GreenFix • Relación fijador/tejido similar a formol • Tiempo fijación similar • Fijación a temperatura ambiente • No son buenos conservantes del tejido a medio plazo Principios fijación mixta • Patología tumoral: Formol • Patología no tumoral: Fijador alternativo ESTRATEGIA FIJACIÓN MIXTA • Reducir la fijación con formol • Mínimo de biopsias • Mínimo posible de la pieza quirúrgica. Evitar trabajar sobre superficies impregnadas de formol • Relación consumo fijadores alternativos/formol: 7-9/3-1 Fijación mixta en piezas quirúrgicas • Las piezas se reciben en fresco: • Tejido en perfectas condiciones • Mínima manipulación de formol en quirófanos • Fijación mixta • Formol: Tumor una porción o todo • Fijador alternativo: Resto del tejido Fijación mixta en piezas quirúrgicas Adenocarcinoma colon Leiomiosarcoma uterino Fijación mixta en piezas quirúrgicas Carcinoma de mama Colitis isquémica 16 Ahorro de formol 17 Fijación mixta muestras pequeñas • Biopsias de tumores o sospechosos siempre formol • Mama • Colon • Pulmón • SNC... • Lesiones inflamatorias piel y enfermedades por eosinófilos formol. En revisión cambio a Greenfix • Resto de biopsias: No formol 19 Sala de inclusión macros en HGC 20 21 Zona macros de recepción de botes 22 Glyo-fixx. Macroscopía • Aspecto macroscópico de los tejidos parecido al formol aunque con el paso de los días los vuelve oscuros • No endurece tanto los tejidos Glyo-fixx. Macroscopía • Disección ganglionar • Identificación visual más fácil. Color blanquecino • Identificación por tacto más difícil • No buen conservante de tejidos en periodos largos. Tiempo inclusión autopsias similar piezas. Opción de conservación posterior tejidos en formol Glyo-fixx. Macroscopía • Excelente calidad (nuclear y citoplasmática) de los tejidos teñidos con HE Se pierde la granularidad eosinófila en eosinófilos Glyo-fixx. Inmunohistoquímica • Buenos resultados • Dependiente plataforma inmuno: Dako, Ventana, Leyca. • Protocolos diferentes de formol • Marcadores nucleares difíciles p16 CD3 PR HER2 Ki67 26 Glyo-fixx. Patología molecular • Kit HER2 CISH pharmDx™ Dako. Adecuación protocolos especialmente en tiempo de digestión enzimática • Estudio deleciones cromosomas 1p y 19q en oligodendrogliomas • RAS en neoplasia colon • EGFR en neoplasia pulmón • Necesidad de estudios para validación 27 Prevención y eliminación residuos • Guantes nitrilo y gafas protección • No necesidad de mascarillas ni vitrinas aspiración en macros • Residuos • Biodegradable • Planta de residuos biológicos 28 Toxicidad Glioxal 40% • Glyoxal is listed on Annex I of Directive 67/458/EEC in the EU chemical legislation (since 26th – 28th ATP; Annex I Index# 605-016-007) with a classification as: • Xn; Muta. Cat. 3; R68 • Xi; R43 May cause sensitization by skin contact. Concentration limit for labelling 1% • Xn; R36/38 Irritating to eyes and skin. Concentration limit for labelling 10% 29 Toxicidad glioxal • Ingesta de hasta 10 mg/día • Alimentos: Café, tostadas, fritos y asados de carnes, pescados, setas, salchichas, aceite, salsa de soja, cerveza, brandis, productos lácteos y verduras fermentadas… • Productos cosméticos hasta 100 ppm • Humo del tabaco 30 Problemas Glyo-fixx • Eosinófilos, hematíes, Paneth • Tinciones de Warthin (HP) • No conserva bien los tejidos a medio plazo • Alternativas para larga conservación: • Solución alcohólica de Glyo-fixx (60% etanol). Ausencia de estudios de validación de tiempos. • Formol como fijador secundario 31 Problemas Inmuno e HIS con Glyo-fixx • Marcadores nucleares: Ki 67, TTF1, PMS2 • Comportamiento diferente de los monoclonales según plataforma: • Ventana, Dako, Leyca • SISH HER 2 Ventana vs. CISH HER 2 Dako • Algunos protocolos Glyo-fixx diferentes formol 32 Fijación Greenfix • Componentes fórmula similares a Glyo-fixx • Comportamiento tinciones similar a Glyo-fixx • Visualización de eosinófilos, hematíes, Paneth • Buen comportamiento en inmunohistoquimia 33 Coste fijadores alternativos • Coste de compra superior a formol • Menor coste si compra en formato concentrado • Pocos fijadores se ofrecen concentrados (Glyo-fixx) • Manipulación tejidos formol. Coste superior • • • • Mesas tallado con aspiración Recambios filtros y mantenimiento mesas Eliminación residuos 10-20 minutos aseo diario del personal 34 Ventajas fijadores alternativos • Escasa peligrosidad para la salud y medio ambiente • Fijación adecuada de las piezas • Muy buena calidad en HE, histoquimia e inmunohistoquimia con adecuación de protocolos • No precisan de protección respiratoria • Eliminación del producto menos peligrosa para el personal • Coste final inferior al formol 35 Desventajas fijadores alternativos • Pérdida granulación en eosinófilos. Glyo-fixx • Conservación mala de los tejidos para largos períodos si no es alcohólico. Conservación posterior en formol. • Marcadores nucleares en inmuno algo más débiles 36 Desventajas fijadores alternativos • Técnicas farmacodiagnóstico no estandarizadas • Técnicas biología molecular no estandarizadas • Dificultad interconsultas con otros centros 37 Fijadores alcohólicos • 60-70% etanol • Glyo-fixx alcohólico • Greenfix plus • Finefix • Inflamables • Armarios para inflamables 38 Detectores niveles de formol • Lecturas cruzadas entre formol y alcoholes,… 39 Conclusiones • Formol y bacon cancerígenos grupo I • Substitución del 100% formol. Hoy no es posible • La fijación mixta permite reducir consumo formol a mínimos aceptables • Fijadores alternativos: • • • • Glyoxal Alcohólicos Técnicas no estandarizadas Problemas interconsultas 40 Muchas gracias Dr. Miquel Àngel Carrasco Tel 935047940 [email protected] 41
