Protocolo de extracción de ADN de cualquier se vivo

Liceo Manuel Barros Borgoño
Dpto. de Biología
Curso: 2º medio
Protocolo de extracción de ADN de cualquier ser vivo.
El ADN es una doble cadena de polinucleótidos, las cuales se encuentran unidas por fuerzas llamadas puentes
de hidrógeno, que se establecen entre las bases nitrogenadas de ambas cadenas.
Esta biomolécula está presente tanto en Procariontes como en Eucariontes. Sin embargo, en estos últimos se
encuentra dentro de un compartimento, el núcleo celular, que es delimitado por una doble membrana que recibe
el nombre de carioteca. Sin embargo, el ADN no se encuentra libre, pues se asocia a proteínas básicas
denominadas histonas, las que permiten su compactación. Esta asociación entre proteínas y ADN recibe el
nombre de cromatina, la cual es visible en el núcleo interfásico.
En este protocolo se usarán semillas de arvejas (2n= 14). Como todas las semillas, sus células contienen muy
poca agua, por lo que el ADN está muy concentrado, de modo que con pocas arvejas es posible obtener una
gran cantidad de este ácido nucleico.
Este protocolo sirve para la extracción de ADN de cualquier ser vivo, siempre y cuando exista una cantidad
considerable de ADN, de lo contario no tiene utilidad. Así por ejemplo, no sería útil si se deseara extraer el
ADN de una escena de un crimen, puesto que, normalmente, la cantidad de ADN presente es baja. En esas
circunstancias, se ocupan otros protocolos, que requieren materiales más sofisticados como centrífugas de
laboratorio.
La extracción de ADN es importante, porque a menudo es el primer paso para la identificación de cuerpos,
análisis de evidencia forense, pruebas de paternidad y la obtención de genes de interés, entre otros campos de
aplicación.
Materiales.
-Licuadora
-Agua fría
- Detergente (Quix)
-Arvejas (también
puede ser plátano)
-Sal de mesa
-Colador
- Jugo de piña natural
-Alcohol desnaturalizado
frío
-2 Gotarios
-Vaso precipitado
(o un vaso normal)
- 3 tubos de ensayo
-Palo de brocheta
Método.
Paso 1.
Pongan en una licuadora:
 ½ taza de arvejas
 ⅛ de una cucharadita de sal
 1 taza de agua fría
Luego, licuen a alta potencia durante unos 15 segundos. Asegúrese que la
mezcla obtenida sea opaca, es decir, que no pueda ver a través de ella.
Paso 2.
Viertan el contenido resultante en un vaso precipitado (o un vaso normal),
haciéndolo escurrir a través de un colador. En seguida, añadan 2 cucharaditas de
Quix y agiten la mezcla para que se homogenice. Dejen reposar la mezcla durante
10 minutos. Finalmente, viertan la mezcla en 3 tubos de ensayo hasta completar
más o menos ⅓ de su capacidad.
Paso 3.
Añadan 5 gotas de jugo de piña a cada uno de los tubos de ensayo y agiten SUAVEMENTE. ¡Tengan
cuidado! Si lo agitan demasiado fuerte, romperán el ADN, por lo que será difícil de ver.
Paso 4.
Inclinen un tubo de ensayo y viertan LENTAMENTE, con la ayuda de un
gotario, el alcohol etílico frío, dejándolo escurrir por la pared del tubo de ensayo,
de manera que forme una capa en la parte superior de la mezcla que contiene las
arvejas. Viertan el alcohol hasta que tenga aproximadamente la misma cantidad
de alcohol en el tubo como la mezcla de arvejas. En la interfase agua-alcohol
busque una sustancia blanca fibrosa: ¡ESE ES EL ADN! (NOTA: el alcohol es
menos denso que el agua, por lo que flotará en la parte superior).
Paso 5.
Introduzcan un palo de brocheta hasta el lugar donde se encuentra el ADN y, lentamente, jálenlo hacia la capa
de alcohol, tal como lo muestra la figura adjunta.
Informe escrito.
En la fecha indicada por su profesor, deberá presentar de manera grupal (3 o 4 integrantes), un informe escrito.
El informe escrito debe presentar una portada con todos los elementos que esta contiene. No se le pedirá las
secciones que forman parte de un escrito científico, porque lo que realizó no fue un experimento propiamente
tal, sino la ejecución de una técnica. Sólo se le pedirá los fundamentos de este método de extracción de ADN.
Para ello deberá investigar y responder las siguientes preguntas:
1. ¿Para qué sirve la sal en este método de extracción?
2. ¿Por qué el agua fría es mejor que el agua a temperatura ambiente para la extracción del ADN?
3. ¿Por qué deben licuarse las arvejas?
4. ¿Por qué se agrega un detergente líquido en este protocolo?
5. ¿Cuál es la importancia del jugo de piña en este método de extracción?
6. ¿Cuál es el propósito de agregar alcohol?
7. ¿Se obtuvo ADN de forma pura?
Adicionalmente, en la parte final de su trabajo deberá presentar fotografías que demuestren que efectivamente
realizó el trabajo práctico. A continuación se muestra la pauta con la que serán evaluados.
PAUTA DE EVALUACIÓN
Criterio
Puntaje
/2 ptos
/2 ptos
/2 ptos
/2 ptos
/1 pto
/2 ptos
/2 ptos
/1 pto
/1 pto
/5 ptos
¿Presenta un trabajo limpio y ordenado?
¿El trabajo presenta una portada con la todos los elementos que ésta debe contener?
Respuesta pregunta 1.
Respuesta pregunta 2.
Respuesta pregunta 3.
Respuesta pregunta 4.
Respuesta pregunta 5
Respuesta pregunta 6.
Respuesta pregunta 7.
¿Presenta fotografías que avalan la realización el trabajo práctico en casa?
NOTA
PUNTAJE TOTAL
/20