66 DESCRIPCIÓN DE TRES NUEVAS ESPECIES DE Microphallus (TREMATODA: MICROPHALLTDAE) PARÁSITAS DE Hypolobocera reflexífrons (DECAPODA) DEL RÍO MARAÑÓN, AMAZONAS, PERÚ* NICANOR IBÁÑEZ** Y CÉSAR JARA*** RESUMEN Se describen metacercarias de Microphallus naquirai sp. n.., M. cordovai sp. n. y M. carmena sp. n. (Digenea: Microphallidae) encontradas en Hypolobocera reflexifrons (Ortmann) (Decápoda: Potamonidae) capturados en tributarios del río Marañon, en las localidades de Numpatkcm y Kumpin entsa, en el distrito de Imaza (Departamento de Amazonas, Perú), entre enero y febrero de 1995. M. naquirai se distingue de otras especies de Micropliaüus por la forma ovalada que tiene la metacercaria enquistada y por el mayor tamaño y distinta forma de la papila genital. Por su parte, M. cordovai se parece en su aspecto general aM.fonti Overstreet et al, 1992 y a M. oblonga Ching, 1965, pero posee, en lugar de dos o tres lóbulos, múltiples de ellos con espinas en toda su dimensión. Mientras que M. carmenas es semejante a M. szidali Martorelli, 1986, si se compara la prefaringe, que es inconspicua en ambas, el tamaño en general y de los principales órgano internos y en la forma de la papila genital; no obstante, se distingue notablemente porque, en detalle, la papila deM. carmenas tiene más lóbulos y porque la metacercaria enquistada se halla rodeada de una impresionante capa mucosa que permite su detección con cierta facilidad. PALABRAS CLAVE: Microphalus, cangrejos, Amazonas. SUMMARY Three new species of digeneans metacercariae: Microphallus naquirai, M. cordovai anclM. cariñenas, are described from the freshwater crabs, Hypolobocera reflexifrons (Decápoda: Potamonidae) from the Marañon river tributarles (Imacita, Amazonas-Peru). M. naquirai appears most similar to M. gracilis Baer, 1943, al though clearly differs from this in the constitulion of genital papillae. Likewise, the male copulatory complex of M. cordovai resembles those of M. fonti Overstreet et al, 1992, but il differs from this in the presencc of conspicuos espines in the genital papillae. While, M. carmenas shows morphological affinities wiih M. íz/Wa/iMarlorelli, 1986, al though clearly differs from this in theshape of male genital papillae. KEY WORDS: Microphalus, Crabs, Amazonas. INTRODUCCIÓN La fauna helrnintológica de los cangrejos de agua dulce del Perú está compuesta por pocas especies. Se sabe que solamente tres géneros son los representati* Trabajo financiado por CONCYTEC y por la Universidad Privada Antenor Orrego (UPAO) ** UPAO. Trujillo. Perú. *** Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional de La Libertad, Trujillo. Perú. vos, ellos son: Microphallus, con su especie M. garciai Ibáñez, 1973; Megalophalloides, con su especie M. apanhorayi Lei e Ibáñez, 1976; y Temnocephala. Las dos primeras fueron halladas en Hypolobocera gracilignata capturados en el departamento de Cajamarca y Temnocephala fue detectado en cangrejos del género Trychodactylus capturados en el río Utcubamba, en el departamento de Amazonas (Ibáñez, 1979). 67 Teniendo en cuenta que los cangrejos de agua dulce son segundos huéspedes intermediarios de miembros de la familia Microphallidae, digeneos muy extendidos en la naturaleza, y que los decápodos se hallan ampliamente distribuidos en cuerpos de agua de distintas zonas del Perú, se propuso una investigación orientada a la búsqueda de microfalidos en cangrejos de zonas distintas a las de Cajamarca. Producto de ella se hallaron abundantes metacercarias en Hypolobocera reflexifrons, habitante del río Amazonas, de cuyo estudio se dedujo que se trataba de nuevas especies para la ciencia. En este informe se presentan las descripciones de ellas. MATERIAL Y MÉTODOS Se examinaron 83 especímenes de H. reflexifrons (Ortmann) (Decapoda: Potamonidae) capturados en tributarios del río Marañon, en las localidades de Numpatkem y Kurnpin entsa, en enero y febrero de 1995. La determinación sistemática de los cangrejos se hizo con la ayuda de la clave propuesta por Chirichigno(1970). La búsqueda de parásitos se hizo en el hepatopáncreas de cada cangrejo, luego de que éste fuera inmovilizado por punción, con un estilete en la parte ventral, a la altura de la cadena nerviosa ganglionar, y que su caparazón se levantara para exponer dicho órgano. El análisis se hizo fraccionadamente colocando porciones del hepatopáncreas entre láminas portaobjetos y observándolos con ayuda de una lupa estereoscópica. Las metacercarias detectadas fueron extraídas con ayuda de pipetas Pasteur, conectadas a chupones de goma, y transferidas a placas Petri que contenían solución salina fisiológica (SSF). Parte de ellas fueron estudiadas «in vivo» inicialmente enquistadas, tal como fueron halladas, y luego liberadas del quiste mecánicamente con ayuda de finos estiletes. Para ello, los digeneos fueron colocados entre lámina y laminilla, y observados con ayuda de un microscopio compuesto. Tanto las metacercarias enquistadas como las desenquistadas fueron fijadas, previo prensado entre lamina y laminilla, con formol-acético al 5% para su posterior coloración supravital. Las coloraciones se hicieron con carmín clorhídrico alcohólico, el montaje en bálsamo de Canadá; las mediciones con un ocular micrométrico Bausch and Lomb y las gráficas, con ayuda de una cámara lúcida Cari Zeiss. Las medidas están dadas en mm y representan el promedio de los especímenes estudiados de cada especie. RESULTADOS Microphallus naquirai sp. n. (Figs. 1 y 2) Descripción. (Basada en el estudio «in vivo» de cuatro especímenes y de otros 16 coloreados, asimismo de nueve metacercarias enquistadas) Metacercaria enquistada. Tiene la forma ovalada y mide 0,220 de largo y 0,048 de ancho a nivel ecuatorial. Posee doble pared y dentro de ella se encuentra la metacercaria doblada sobre sí misma lográndose apreciar claramente algunos órganos, como las glándulas vitelinas, ventosa ventral y ciegos intestinales (Figl). Metacercaria liberada del quiste. Cuerpo piriforme de 0,465 de largo y 0,372 de ancho máximo (a nivel de la zona testicular). Ventosa oral subterminal con abertura ventral, mide 0,052 de largo y 0,060 de ancho. Acetábulo de 0,043 de largo y 0,045 de ancho. La faringe es musculosa de 0,050 x 0,027, ésta se continúa con el esófago que mide 0,112 de longitud y dos ciegos intestinales, cada uno de 0,023. Los testículos, de ubicación ligeramente postacetabular y marginal, tienen forma redondeada y son lateralmente alargados. Poseen distinto tamaño, siendo el izquierdo de 0,058 de largo y 0,113 de ancho, y el derecho, de 0,060 x 0,122. La vesícula seminal es ovalada y preacetabular, mide 0,054 de longitud y 0,220 de ancho. La papila genital es redondeada, dextral al acetábulo, mide 0,113 de largo y 0,128 de ancho. Rodeando a la papila genital se observa un lóbulo accesorio multisegmentado. El ovario es ovalado y sinextral, ubicado en campo coincidente con el acetábulo, mide 0,054 de longitud y 0,101 de ancho. Las glándulas vitelinas se disponen en dos grupos, el del lado derecho posee siete folículos y el del lado izquierdo sólo seis, ambos grupos tienen ubicación inmediatamente postesticular. La vesícula excretora tiene la forma de «Y», algo ancha y sin distensiones laterales. El poro excretor es terminal, aunque en algunos especímenes coloreados se observa algo subterminal (Fig. 2). 68 Habitat: Hepatopáncreas Intensidad de infección. Se halló una intensidad promedio de infección (número de metacercarias halladas dividido por el número de cangrejos examinados) de 19,0 en las hembras y 12,7 en los machos de Numpatkem, y 11,0 en las hembras de Kumpin entsa. Holotipo. Colección Helmintológica de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo. N° 46.5 (a-e). Etimología. Esta especie es nombrada en honor al Dr. César Náquira Velarde, eminente parasitólogo peruano, por sus contribuciones al desarroUp de la Parasitología en el Perú. Microphallus cordovai sp.n. (Figs. 3 y 4) Descripción: (Basada en el estudio «in vivo» de cuatro ejemplares de metacercarias liberadas del quiste y de otras 14 coloreadas, asi como de 11 metacercarias enquistadas). 69 De la metacercaria enquistada. El cuerpo es redondeado, de 0,75 de diámetro. Posee tres capas claramente separadas, siendo la externa la más ancha de 0,033 de espesor. Internamente, se puede notar claramente que la larva está doblada sobre sí misma y muestra nítidamente algunas estructuras como los ciegos intestinales y las glándulas vitelinas (Fig 3). Metacercaria liberada del quiste. Cuerpo piriforme de 0,401 de largo y 0,336 de ancho máximo. La superfice del cuerpo está cubierta por pequeñas espinas que se extienden de la región anterior hasta la zona acetabular. La ventosa oral anterior y subterminal mide 0,071 de largo y 0,101 de ancho. El acetábulo es postecuatorial, de 0,073 x 0,070. La faringe mide 0,030 de largo y 0,015 de ancho, ésta se continúa con el esófago que alcanza una longitud de 0,036. Los ciegos intestinales son iguales en tamaño, preacetabulares, y miden 0,133 de largo. 70 Los testículos son ovalados, postacetabulares, ligeramente laterales, el derecho mide 0,054 de largo y 0,099 de ancho y el izquierdo, 0,056 de largo x 0,077 de ancho. La vesícula seminal se halla situada justo por debajo de la bifurcación de los ciegos intestinales, pero por encima del acetábulo, mide 0,045 de largo y 0,102 de ancho. La papila genital, de 0,073 de largo y 0,066 de ancho, presenta una serie de espinas, la pars prostética posee pequeñas células prostéticas. La papila genital tiene la forma de campana y se muestra musculosa y de similar tamaño que la ventosa ventral. El ovario ovalado, de 0,056 de largo y 0,092 de ancho, está ubicado a la derecha del acetábulo, posee bordes enteros. Las glándulas vitelinas están compuestas por ocho a nueve folículos grandes, ubicados postacetabularmente por encima de los testículos, a cada lado del cuerpo. La vesícula seminal tiene la forma de «Y», con brazos anchos que desaparecen a la altura de las glándulas vitelinas. El poro excretor es terminal (Fig. 4). Habitat: Hepatopáncreas Intensidad de infección. Las hembras capturadas en Numpatken presentaron una intensidad promedio de infección de 203,9, mientras que los machos sólo de 25,4. Por su parte, las hembras extraídas en Kumpin entsa presentaron una intensidad media de infección de 295,1 y los machos de 319,7. Holotipo. Depositado en la Colección Helmintológica de la Universidad Nacional de Trujillo, con el N° 466 (a-f) Etimología. Con la denominación de esta especie se ha querido perennizar el nombre del Dr. Eleazar Córdova Benzaquén, distinguido profesor de la Universidad Nacional San Agustín de Arequipa, en mérito a su contribución al conocimiento de la Fauna Helmintológica del Perú. Microphx|üus carmenae sp.n. (Figs. 5 y 6) Descripción. (Basada en el estudio «in vivo» de seis especímenes liberados del quiste y de otros 16 coloreados; asimismo, de 13 metacercarias enquistadas) Metacercaria enquistada. La metacercaria enquistada es ligeramente ovalada. Si se mide con la descomunal masa gelatinosa y transparente que la rodea, alcanza a medir fácilmente 1,3 mm de diámetro; de lo contrario, la metacercaria solo mide 0,43 x 0,54. Posee también tres capas, siendo la externa la de mayor espesor midiendo 0,25. Al igual que en otras metacercarias, al observar el interior se logri detectar con claridad algunos órganos, en especial las ventosas, ciegos intestinales, vesícula seminal y glándulas vitelinas (Fig. 5). Metacercarias liberadas del quiste. Parásitos pequeños, de cuerpo transparente, piriforme, miden 0,487 de largo y 0,361 de ancho máximo (a nivel de la zona testicular), la cutícula es muy fina y lleva pequeñas espinas conspicuas en la parte anterior. La ventosa oral es subterminal, se abre ventralmente y mide 0,113 de largo y 0,080 de ancho; el acetábulo, se ubica a una altura aproximada entre el 55 y 60%, en la parte ligeramente posterior del cuerpo. La prefarínge no se observa en los especímenes estudiados, la faringe es redondeada, musculosa, de 0,040 de largo y 0,022 de ancho; el esófago mide 0.071 de largo y se bifurca en los dos ciegos intestinales que alcanzan el mismo tamaño de 0,145. Los testículos tienen la forma irregular, son simétricos, lateralmente alargados pero de distinto tamaño. El testículo derecho mide 0,081 de largo y 0,153 de ancho, mientras que el izquierdo mide 0,087 de largo y 0,098 de ancho. La vesícula seminal es ovalada, muy ensanchada, ubicada por encima del acetábulo, mide 0,065 de largo y 0,117 de ancho y se halla repleta de esperma. Los vasos eferentes se desplazan hacia el nivel acetabular antes de juntarse y formar el vaso deferente que colinda con el borde de la vesícula seminal. La pars prostética es poco visible, y también las células prostéticas, pero se halla encerrada por una membrana conjuntamente con la vesícula seminal. La papila genital es campaniforme, fuertemente musculosa con formaciones dentiformes internas, inerme, y de grandes dimensiones (0,073 x 0,100). El ovario es redondeado, dextral al acetábulo y colindante con el testículo derecho. Este órgano mide 0,042 de largo y 0,100 de ancho. Las glándulas de Mehlis y el ootipo se ubican en la zona intertesticular. Las glándulas vitelinas están representadas por 6 a 10 folículos grandes, ubicados por encima del borde posterior de los testículos y en la zona postesticular. 71 La vesícula excretora tiene la forma de «Y», con un pequeño soporte, antes de terminar en el poro excretor que es terminal (Fig 6). ron una intensidad promedio de 34,7 y los machos de 32,5. Habitat. Hepatopáncreas Holotipo. Se halla depositado en la Colección Helmintológica de la Universidad Nacional de Trujillo, con el N° 467 (a-e) Intensidad de infección. Se determinó que las hembras procedentes de Numpatkem presentaron una intensidad media de infección de 16,2 y los machos de 41,8, en tanto que las hembras de Kumpin entsa tuvie- Etimología. Se ha denominado así a esta especie en honor a la Dra. Carmen Villanueva, en mérito a su contribución a la Parasitología en el Perú. 72 DISCUSIÓN Usualmente, las descripciones de especies de digeneos se hacen por el estudio de las formas adultas; sin embargo, en este informe se hace lo propio pero en base al estudio de las metacercarias. La razón de ello es que ambas formas evolutivas, metacercaria y adulto son muy parecidas, tanto, que lo único que no tienen las metacercarias es el útero con huevos, siendo por ello aceptadas las descripciones de muchas especies de Microphallus, con sólo el estudio de las metacercarias (Deblock, 1971). Incluso dentro de los microfalidos se ha descrito una metacercaria progenética, es decir con rasgos totales de una forma adulta y por ello denominada M. progeneticus (Sogandares-Bernal, 1962). Siguiendo la clasificación otorgada por Deblock (1971), los parásitos hallados han sido ubicados en el subgénero Microphallus dentro del género Microphallus^Naxá, 1901. Asimismo, siguiendo el mismo esquema, se ha desestimado lo propuesto por Caballero (1958) en considerar al género Carneophallus Cable y Kuns, 1951 como distinto de Microphallus, sino más bien como sinónimos como lo señala el mismo Deblock, Head y Overstreet, 1983 y otros. M. naquirai es semejante aM. gracilis Baer, 1943, aM. capellae (Yamaguti, 1939), aM. turgidus (Leigh, 1958) y a M. muellhaupti (Coil, 1956), por el tamaño relativo del cuerpo y los testículos, aunque se distingue de las dos primeras porque la faringe de la especie en estudio es notablemente más grande, en cambio las glándulas vitelinas que son mayores en las dos últimas. También se ha encontrado semejanza con M. szidati Martorelli, 1986, porque en ambas la prefarínge es inconspícua, no obstante el tamaño general de esta especie es evidentemente mayor que el de la especie presentada aquí. Pero lo más claro, y eso es lo que los distingue de todas las especies hasta hoy descritas, es la gran dimensión que tiene la papila genital y la distinta forma, con un sinnúmero de denticiones, y la forma totalmente ovalada que tiene la metacercaria. M. naquirai se constituye en la tercera especie de Microphallus descrita en huéspedes en el Perú, después de M. quechasensis Caballero e Ibáñez, 1970 y de M. garciai Ibáñez, 1973. M. cordovai, mientras tanto, es semejante a M. vaginosus Deblock y Pearson, 1969, M. hoffmanni Rebecq, 1964, M. limuli Stunkard, 1951 yM. enhydrae Raush y Locker, 1951, por la concordancia en ciertas medidas, por ejemplo, tamaño relativo del cuerpo, ovario y testículos. Pero difiere de ellas porque sus ventosas son de mayor dimensión que las de las nombradas. También se ha observado semejanza con M. oblonga Ching, 1965 y M.fonti Overstreet et al, 1992, por la forma aproximada de la papila genital, aunque a diferencia de ellas, la especie aquí presentada tiene numerosas espinas en toda su extensión. Más bien, M. garciai Ibáñez, 1973 también posee espinas en la papila genital, aunque ésta tiene forma redondeada, a diferencia de la especie en estudio que tiene la papila piriforme. Basados en el tamaño del cuerpo, faringe y ventosa oral, M. carmenas aparece con mayor similitud a M. szidati Martorelli, 1986 y por la forma de la papila genital también a M. szidati, a M. pachygrapsi Deblock y Prevot, 1968, a M. caribbensis Deblock y Cable, 1966 y a M kenyensis Canaris, 1971. Sin embargo, se distingue de todas ellas por la conformación de la papila genital, que tiene numerosas digitaciones y sólo dos prominencias musculosas; y por el tamaño del acetábulo que es de mayor tamaño; asimismo, se distingue de las otras, porque la metacercaria es ligeramente ovalada y rodeada de una masa mucilaginosa abundante que supera fácilmente el tamaño de la metacercaria y que la hace fácilmente detectable. M. cordovai y M.carmenae se constituyen en la cuarta y quinta especie de Microphalus, respectivamente, descritas en el Perú. AGRADECIMIENTO Al Dr. S. Deblock, por facilitarnos la bibliografía y al biólogo Edgar Marín Sánchez, profesor de Microbiología y Parasitología de la Universidad Privada Antenor Orrego de Trujillo, por la preparación de los esquemas que acompañan a este trabajo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Caballero, E. 1958. Helmintos de la República de Costa Rica III. Descripción de una nueva especie de tremátodo digeneo Carneophallus skryabini nov. sp. Anales de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas. IX (1-4): 77-83. 73 2. Caballero, E. y N. Ibáñez. 1970. Estudios Helmintológicos de la República del Perú. I. Dos especies de tremátoda de la familia Microphallidae Travassos, 1920 que paras i tan a aves. An. Inst. Biol. Univ. Nal. Antón. México 41. Ser. Zoología. Núin. Único: 29-38. 3. Canaris, A. 1971. Some Microphallids collected in Kenya. Parasitology 62: 53-61 Ching, H. L. y N. Ibáñez. 1976. Description of Megalophalloides apanhorayi gen et sp. n. (Tremátoda: Microphallidae) from mice and freshwater crabs of Pem. 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