ALTERACIONES PATOLOGICAS EN EL EPITELIO RUMINALDE BOVINOS INDUCIDAS POR ÁCIDOS GRASOS DE CADENA CORTA Granja Salcedo, Yury Tatiana: Estudiante de Maestria en Produccion animal de la Faculdade de CiênciasAgrárias e Veterinárias dela Universidade Estadual Paulista "Júlio de MesquitaFilho", Jaboticabal – SP, e-mail: [email protected] ,Bolsista FAPESP. Introducción La fermentación microbiana y la producción de ácidos grasos volátiles (AGV) en el rumen son eventos nutricionalmente importantes para los rumiantes, ya que aproximadamente el 70% de la exigencia energética de esos animales puede ser atendida por acetato, propionato y butirato (Bergman, 1990). Un alta tasa de producción como de absorción de AGV es necesaria para suplir los nutrientes requeridos para un satisfactorio desempeño en rumiantes. Sin embargo la ingestión de dietas ricas en carbohidratos rápidamente fermentables en el rumen, podría resultar en el acumulo excesivo de AGV en el liquido ruminal desencadenando un cuadro de acidosis (Barker et al., 1995). La acidosis ruminal puede afectar negativamente el desempeño y la salud animal mediante efectos deletéreos sobre la motilidad ruminal(Crichlow& Chaplin, 1985), la fermentación de la fibra (Grant&Mertens, 1992; Krajcarski-Hunt et al., 2002),el consumo de alimentos (Elliot et al., 1995; Krajcarski-Hunt et al., 2002) y la morfología de la pared ruminal (Ahrens, 1967). Estimular la capacidad de absorción ruminal de AGV mediante la manipulación nutricional de la morfología papilar puede ser una estrategia formidable en vacas lecheras, buscando la alta absorción de energía sin inducir el acumulo excesivo de AGV en el contenido ruminal. El tipo de AGV presente en el contenido del rumen puede afectar la respuesta en crecimiento de las células del epitelio ruminal. El propionato y el butirato parecen ser más estimuladores del crecimiento papilar que el acetato. Sin embargo la alta producción de butirato es indeseable desde el punto de vista de la integridad y actividad metabólica de la pared ruminal, debido a los efectos directos indeseables de ese acido sobre la proliferación y queratinización de las células epiteliales (Gálfi et al., 1993). El efecto de directo del butirato sobre el epitelio ruminal parece ser inhibidor de mitosis e inductor de diferenciación celular. El propionato parece ser el AGV responsable por el crecimiento de las papilas metabólicamente activas. El acumulo ruminal de lactato puede ocurrir por inducción experimental de acidosis aguda en rumiantes (Hungate et al., 1952; Crichlow& Chaplin, 1985; Harmon et al., 1985). Sin embargo vacas lecheras que reciben dietas de alto contenido energético presentan concentraciones plasmáticas de D-Lactato mucho más bajas que las observadas en esos experimentos (Oetzel et al., 1999; Pereira et al., 1999). El papel del lactato y de otros AGV en el papel etiopatogenia de la acidosis en vacas lecheras aun no ha sido completamente aclarado. Alteraciones microscópicas en el proceso de queratinización son observadas en bovinos con disturbios en los miembros locomotores (Nilsson, 1963; MacLean, 1971; Andersson& Bergman, 1980; Singh et al., 1992). Disturbios de queratinización pueden actuar como factor predisponerte al aparecimiento de infecciones en el casco por alterar la morfología y dureza (Baggott et al., 1988; Hendry et al., 1999). Daños morfológicos en el tejido epitelial del rumen y de los cascos pueden tener los AGV como causa común. Metodología Se utilizaron 40 becerros de 45 días de edad, alimentados exclusivamente con leche integral, para evaluar el efecto de la infusión intraruminal de butirato (B), lactato (L), propionato (P) o solución salina (S) por 40 días. Una hora después del amamantamiento los animales recibieron diariamente infusiones ruminales con 500 ml de solución salina o el mismo valor conteniendo propionato (Acido propiónico 99%), lactato (Acido láctico 85%) o butirato (Acido butírico 99%) el pH de estas soluciones fue ajustado a 6.1 con la adición de Hidróxido de Sodio. A los 89 días de vida los animales fueron pesados y sacrificados, las siguientes variables morfológicas fueron evaluadas: peso del rumen-reticulo, peso de la mucosa y del restante de la pared celular, nº de papilas por centímetro cuadrado de la mucosa de la pared ruminal, altura y área de las papilas ruminales, aéreas del epitelio total y de queratina en los epitelios del rumen y del plano naso labial y características histologías del epitelio ruminal. Resultados y discusión Todos los AGV indujeron aumento, proporcionalmente mayor en el peso del rumenretículo que en el peso del omaso, siendo el butirato aparentemente más estimulador da masa del estomago a glandular que propionato e lactato (TABLA 1). Tabla 1 Peso de los compartimientos que componen el estomago de becerros mantenidos en dieta exclusivamente liquida y recibiendo infusiones intraruminales de butirato, lactato, propionato o solución salina. Butirato Rumen-retículo Omaso Abomaso Estomago Total 718 154 217 1150 Rumen-retículo Omaso Abomaso Estomago Total 1,40 0,30 0,55 2,24 Rumen-retículo Omaso Abomaso 62,40 13,30 24,30 Lactato Propionato PESO (gramos) 599 642 109 118 303 255 1010 1015 % Del peso vivo 0,97 1,28 0,18 0,23 0,50 0,51 1,64 2,03 % Del estomago 59,30 63,00 10,80 11,70 29,90 25,30 S.Salina 419 93 278 791 0,79 0,18 0,53 1,50 52,70 12,00 35,30 El hecho de pocos AGV llegar al abomaso (Barcroft et al,. 1994) y de no haber sido observado efecto del tratamiento sobre la masa del estomago glandular posiblemente indica que la respuesta en el peso estomacal ocurrió apenas en los compartimientos del órgano donde hubo absorción de AGV.La infusión de AGV aumento el peso e la proporción del epitelio y conjuntivo subepitelialen la pared del rumen (TABLA 2). El butirato presento un efecto significativo sobre la mucosa del saco craneal. Aunque los AGV hayan aumentado la masa de la mucosa ruminal (TABLA 2), redujeron el numero de papilas por cm2 de la pared ruminal (TABLA 3).En relación a otros estudios, las papilas ruminais fueron menores proporcionalmente a la edad de los animales Tabla 2 Peso de los fragmentos circulares de mucosa de 1 cm de diámetro, retirados en las regiones saco craneal y extremidad craneal del saco ventral del rumen de becerros mantenidos en dieta exclusivamente liquida y recibiendo infusiones intraruminales de butirato, lactato, propionato o solución salina. Butirato Saco craneal Extremidad craneal del saco ventral 0,46 0,21 Lactato Propionato Peso de la mucosa (gramos) 0,22 0,3 0,15 0,22 Saco craneal Extremidad craneal del saco ventral 54 25 Mucosa (%) de la pared ruminal 36 39 27 25 S.Salina 0,2 0,11 30 22 El número de papilas por cm2 fue cerca de 1,5 veces mayor en el tratamiento control que en los tratamientos con AGV; sin embargo, la masa de mucosa ruminal fue de dos a tres veces inferior en ese tratamiento (TABLA 3).El mayor número de papilas por cm2en el tratamiento control puede haber sido el resultado de laconcentración de papilas en una menor área de pared ruminal. Juzgándose por ese parámetro, los AGV fueron estimuladores de desarrollo papilar.La infusión de butirato fue incapaz de inducir aumento en el área o altura de las papilas ruminales.El propionato, además de haber sido menos inhibidor del número de papilas por cm2 que el butirato y que el lactato, también tendió a aumentar el tamaño papilar en el saco craneal del rumen.A pesar de la respuesta positiva en el crecimiento papilar a la infusión de lactato, en todas las regiones de todos los cortes histológicos, el epitelio tenia degeneración hidrópica; demostrando que el epitelio fue completamente dañificado por ese AGV, y gran parte del área epitelial fue compuesta por vacuolas y células vacuolizadas.Degeneraciones hidrópicasfueron relatadas en novillas sujetas a la inducción experimental de acidosis láctica después de la infusiónintraruminal de lactato (Ahrens, 1967). cm2 Tabla 3 Peso área y altura de las papilas y numero medio de papilas por en las regiones del saco craneal y craneal y extremidad craneal del saco ventraldel rumen de becerros mantenidos en dieta exclusivamente liquida y recibiendo infusiones intraruminales de butirato, lactato, propionato o solución salina. Butirato Saco craneal Extremidad craneal del saco ventral 219,71 24,17 Saco craneal Extremidad craneal del saco ventral 568 195 Saco craneal Extremidad craneal del saco ventral 328 257 Lactato Propionato Area (µm) 428,7 770,18 79,26 76,85 950 484 Altura (µm) 1323 379 Numero de papilas por cm 291 392 338 375 S.Salina 204,84 165,11 581 353 2 519 426 Ninguna área evaluada de los epitelios del rumen de animales que recibieron infusiones de AGV fue considerada normal, debido a la presencia de lesiones celulares, las cuales surgieron de procesos degenerativos; en el tratamiento con propionato las lesiones fueron clasificadas como leves o moderadas. En el saco craneal y en la extremidad craneal del saco ventral de rumen de uno de los becerros que recibieron propionato, fue observada una desproporción entre las capas de la pared ruminal en comparación al tratamiento control. En dos de los animales infundidos con butirato se visualizaron cambios muy serios en el saco ventral y en el saco ciego caudo-ventral, el epitelio mostró desproporción entre las capas celulares, grandes vacuolas intracitoplasmáticas, infiltrado inflamatorio y zonas de erosión. En algunas regiones, las células mostraron núcleos más pequeños y condensados (picnóticos) o fragmentados (cariorrexis), o incluso anucleados (cariolisis). Estos cambios fueron diagnosticados como ruminitisquímica ulcerosa asociada con necrosis. En todos los animales infundidos con solución salina, la mucosa ruminal integra y con papilas de contorno regular, los análisis histológicos del epitelio ruminal no mostraron cambios en las capas celulares, con una fina capa de células queratinizadas. Conclusiones La presencia de AGV en el rumen induce el crecimiento anatómico del estomago a glandular sin necesidad del trabajo mecánico de la digestión. El butirato y el lactato son los mayores inductores de alteraciones patológicas en el epitelio ruminal, mientras que el propionato es el AGV responsable por el crecimiento fisiológico de papilas metabólicamente activas. Agradecimientos A la Facultad de ciencias Agropecuarias y Veterinarias de La Universidad Estadual Paulista "Júlio de MesquitaFilho" y a la Fundacion de Amparo a la Pesquisa del Estado de Sao Paulo FAPESP. CITACIONES AHRENS, F. A. Histamine, lactic acid, and hipertonicity as factors in the development of rumenitis in cattle.American Journal of Veteterinary Research, Schaumburg, v. 28, n. 126, p. 1335-1343, 1967. AHRENS, F.A. Histamine, lactic acid, and hipertonicity as factors in the development of rumenitis in cattle. Am. J. Vet. Res., v.28, p.1335-1343, 1967., ANDERSSON, L.; BERGMAN, A. Pathology of bovine laminitis especially as regards vascular lesions.Acta Veterinarian Scandinavian, Uppsala, Sweden, v. 21, n. 4, 559-566, 1980 BAGGOTT, D. G. , BUNCH, K. 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