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DiaSorin, Inc.
1951 Northwestern Ave – Stillwater, MN 55082 – USA
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®
LIAISON Estradiol (310400)
1. FINALIDAD DEL ENSAYO
El ensayo LIAISON® Estradiol es un inmunoensayo (CLIA) por quimiluminiscencia, que debe utilizarse con el
LIAISON® Analyzer, y cuya finalidad es la determinación cuantitativa de estradiol en suero y plasma humanos
(EDTA). Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos clínicos y de laboratorio para ayudar en el
diagnóstico y tratamiento de estados que denoten exceso o deficiencia de estradiol.
2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DEL TEST
1
El estradiol (estradiol-17, E2) es el estrógeno más potente que secreta el ovario, y circula predominantemente
ligado a la globulina fijadora de hormonas sexuales (SHBG). Aunque se produce principalmente en los ovarios,
también se produce en la corteza suprarrenal y, durante el embarazo, en la placenta. En los varones, el principal
productor de estradiol son los testículos. Los niveles anormalmente altos de esta sustancia en el hombre pueden ser
3
indicativos de tumores testiculares y ginecomastia.
La principal función del estradiol en las mujeres es regular la función sexual, preparando la mucosa uterina para la fase
progestacional. En las mujeres no embarazadas los niveles de estradiol son cíclicos y alcanzan su valor máximo poco
antes de la ovulación.2
El patrón de estradiol durante el ciclo menstrual suele evaluarse clínicamente junto con la FSH, la LH y la progesterona. El
estradiol inhibe la producción de la hormona foliculoestimulante (FSH) y estimula la liberación de la hormona luteinizante
1
(LH) preovulatoria desde la pituitaria. Los niveles preovulatorios son indicativos de la maduración folicular. Junto con los
1
ultrasonidos, el aumento inicial de los niveles de estradiol en suero sirve para detectar el embarazo. Las concentraciones
de estradiol también son útiles para evaluar varias disfunciones menstruales, la feminización en niños y los tumores
productores de estrógenos. El estradiol también puede ser elevado en casos de ginecomastia y cirrosis. Con frecuencia se
mide en las terapias de fertilidad, siendo sus principales aplicaciones el diagnóstico diferencial de la amenorrea y la
monitorización de la inducción a la ovulación.
3. PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO
El método para la determinación cuantitativa del estradiol es el inmunoensayo competitivo directo por
quimiluminiscencia. El ensayo LIAISON® Estradiol es un inmunoensayo por quimiluminiscencia modificado en dos
pasos que permite determinar la presencia de estradiol en suero y plasma humanos. Se une anticuerpo específico
de estradiol a partículas magnéticas (fase sólida), y se combinan tampón de ensayo y controles, calibradores o
muestras de paciente para la incubación inicial. Durante la incubación, el estradiol se disocia de la proteína de unión
y se une al estradiol de la muestra. Después se agrega estradiol marcado, que compite por los sitios de unión del
anticuerpo. Tras la incubación, el material no unido se elimina en un ciclo de lavado. A continuación se agregan los
reactivos Starter que inducen una reacción de quimioluminiscencia instantánea. La señal luminosa se mide en
unidades lumínicas relativas con un fotomultiplicador y es inversamente proporcional a la concentración de estradiol
presente en calibradores, controles o muestras de paciente.
4. MATERIALES SUMINISTRADOS
Integral reactivo
Partículas magnéticas
Partículas magnéticas recubiertas con anticuerpos anti-estradiol, tampón fosfato,
(2,3 ml)
surfactante y azida sódica al 0,09%.
Conjugado
Estradiol conjugado con un derivado de isoluminol en tampón MES con surfactante y
(2 ml)
Proclin® 300 al 0,1%.
Tampón de ensayo
Tampón citrato-fosfato con desplazador, surfactante y Proclin® 300 al 0,1%.
(12 ml)
Diluyente de muestras
Suero humano sin hormonas, Proclin® 300 al 0,2%.
(14 ml)
suficiente diluyente para 37 diluciones (80 µl de muestra + 320 µl de diluyente)
Número de ensayos
100
Todos los reactivos suministrados están listos para su uso.
Incluidos con el integral reactivo (2 frascos por kit)
Calibrador 1
Suero humano sin hormonas, Proclin® 300 al 0,2% y estradiol.
(3,5 ml)
volumen suficiente para 5 calibraciones
Calibrador 2
Suero humano sin hormonas, Proclin® 300 al 0,2% y estradiol.
(3,5 ml)
volumen suficiente para 5 calibraciones
ProClin ® 300 es una marca comercial registrada de Rohm and Haas Co
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1
Material necesario no suministrado
LIAISON® Module (319130)
LIAISON® Starter Kit (319102)
LIAISON® Light Check (319101)
LIAISON® Wash/System Fluid (319100)
LIAISON® Waste Bags (9450003)
LIAISON® Clearing kit (310990)
Material adicional recomendado
LIAISON® Estradiol Control Set (310401)
5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Para uso en diagnósticos in vitro
Reactivos con material de origen humano
Trátense como potencialmente infecciosos.
Todas las unidades de suero/plasma usadas en la preparación de este producto se han comprobado mediante un
método aprobado por la FDA estadounidense, demostrando no ser reactivas a HBsAg, anticuerpos de VHC y
anticuerpos de VIH1/2. Aunque estos métodos son altamente precisos, no garantizan la detección de todas las
unidades infectadas. Este producto también puede contener otros materiales de origen humano para los cuales no
existe prueba homologada. Dado que ningún método de prueba conocido puede garantizar plenamente la ausencia
del virus de la hepatitis B, de la hepatitis C (VHC), del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) o de otros agentes
infecciosos, con todos los productos que contengan material de origen humano se deberán utilizar prácticas de
laboratorio correctas y adoptar las precauciones adecuadas que se describen en “Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories”, 4ª ed., 1999 o actual, para centros de control de enfermedades e institutos nacionales de
salud y prevención.
Algunos reactivos contienen azida sódica como conservante. Dado que la azida sódica puede dar lugar a la
formación de azidas explosivas de cobre o plomo en las tuberías, se recomienda limpiar los desagües con
abundantes descargas de agua después de eliminar soluciones que contengan esta sustancia.
Los reactivos que contienen ProClin® 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas aplicables:
R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel.
S 24 - Evítese el contacto con la piel.
S 37 - Úsense guantes adecuados.
S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos.
6. NORMAS DE SEGURIDAD

Absténgase de comer, beber, fumar y utilizar cosméticos en el laboratorio de ensayos.

No distribuya soluciones con la pipeta en la boca.

Evite el contacto directo con todos los materiales potencialmente infecciosos mediante el uso de
indumentaria protectora, como batas de laboratorio, gafas protectoras y guantes desechables. Lávese las
manos después de cada ensayo.

Evite las salpicaduras y la formación de aerosoles. Los reactivos derramados deben lavarse con una
solución de hipoclorito al 5% y eliminarse como si se tratara de material potencialmente infeccioso.

Todas las muestras, reactivos biológicos y materiales utilizados en el ensayo deben considerarse
transmisores potenciales de agentes infecciosos. Por consiguiente, su eliminación debe efectuarse de
conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicción
sobre el laboratorio, y con las leyes vigentes en cada país. Asimismo, es preciso incinerar los materiales
desechables y descontaminar los residuos líquidos con una solución de hipoclorito sódico al 5%
(concentración final) durante al menos media hora.
7. PREPARACIÓN DEL INTEGRAL REACTIVO
Antes de quitar el sello, es fundamental agitar suavemente y con cuidado el integrador de reactivos en sentido
horizontal (sin formar espuma). Quite el sello y gire la rueda pequeña del compartimiento de partículas magnéticas
hasta que la suspensión adopte un color marrón. Este procedimiento inicia la suspensión de las partículas
magnéticas. Coloque el integrador de reactivos en la zona de reactivos del LIAISON® Analyzer y déjelo reposar
durante 30 minutos antes de utilizarlo para asegurar la completa agitación y resuspensión de las partículas.
Destapone los calibradores, colóquelos en la gradilla tipo “L” del LIAISON® Analyzer con el código de barras
®
orientado hacia fuera y deslice la gradilla hacia el interior de la del área de muestras del LIAISON Analyzer. Siga las
instrucciones del manual del analizador para cargar las muestras e iniciar el ensayo. El número de lote de los
calibradores y del integral de reactivos corresponde a un lote específico. No utilice calibradores asociados con un lote de
reactivos diferente en el mismo ensayo.
8. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL REACTIVO
Para facilitar la resuspensión de las partículas magnéticas, el integral reactivo debe guardarse en posición vertical
cuando se reciba. Si se almacena sin abrir, el integral reactivo permanece estable a 2-8 °C hasta la fecha de
caducidad. No lo congele. El integral reactivo no debe utilizarse después de la fecha de caducidad indicada en el
equipo y en las etiquetas correspondientes. Después de utilizarse, el integral reactivo debe almacenarse en el
LIAISON® o volverse a guardar a 2-8 °C. Una vez abierto, puede utilizarse durante cuatro semanas si se almacena
correctamente.
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2
9. OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Puede utilizarse suero o plasma EDTA humanos. Es recomendable tomar la muestra en ayunas, pero no es
imprescindible. La sangre debe extraerse asépticamente por punción venosa y dejarse coagular; el suero ha de
separarse del coágulo lo antes posible. Para mantener la integridad de la muestra no se requieren aditivos ni
conservantes. Antes del ensayo es posible que haya que depurar las muestras con materia particulada, material en
suspensión, lipemia o restos de eritrocitos mediante filtración o centrifugación. No deben analizarse las muestras
muy hemolizadas o lipémicas, ni las que contengan partículas o presenten una evidente contaminación microbiana.
Antes del ensayo, compruebe si hay burbujas de aire y elimínelas. Si el ensayo se efectúa durante los 5 días
siguientes a la recogida de la muestra, ésta debe almacenarse a 2-8 °C; en caso contrario debe congelarse (-20 °C o
menos). Las muestras pueden almacenarse en tubos de vidrio o plástico. El volumen mínimo necesario es 400 µl de
muestra para la primera prueba y 200 µl más por cada prueba de estradiol. Si las muestras se guardan congeladas,
mézclelas bien antes del ensayo cuando las descongele. Evite ciclos repetidos de congelación-descongelación.
10. CALIBRACIÓN
Cada integral reactivo de estradiol tiene una etiqueta de código de barras con información específica sobre la
calibración del lote de integral de que se trate. Es obligatorio repetir la calibración por triplicado siempre que se dé al
menos una de estas condiciones:

Con cada lote nuevo de reactivos (integral reactivo o reactivos Starter)

Cada tres días

Después de una tarea de reparación o mantenimiento del LIAISON® Analyzer

Si los resultados del control de calidad están fuera del rango aceptable.
Rango de medida. En el ensayo LIAISON® Estradiol de DiaSorin se miden valores comprendidos entre 12 y
1100 pg/ml. El valor mínimo que puede determinarse es 12 pg/ml. Los valores inferiores a 12 pg/ml deben
expresarse como <12 pg/ml. El valor más alto notificable sin dilución es 1100 pg/ml. Todas las muestras superiores
al rango presentable deben diluirse usando el diluyente cargado. (Consulte la sección 15, Dilución de las muestras,
si el resultado excede de 1100 pg/ml.)
11. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
Para asegurar el resultado correcto del ensayo, siga estrictamente las instrucciones de funcionamiento del LIAISON®
Analyzer. Cada parámetro del ensayo se identifica con un código de barras en el integral reactivo. Si se produce un
fallo de funcionamiento en el lector de código de barras, los datos pueden introducirse manualmente. Para obtener
®
más información, consulte el Manual del usuario LIAISON .
Las funciones del analizador son las siguientes:
1. Dispensar la muestra, el calibrador o el control en el módulo de reacción.
2. Dispensar el tampón y las partículas magnéticas en el módulo de reacción.
3. Incubar durante 21 minutos.
4. Dispensar el conjugado en el módulo de reacción.
5. Incubar durante 4 minutos.
6. Lavar con líquido del sistema.
7. Agregar los reactivos Starter y medir la emisión de luz.
Los resultados del inmunoensayo pueden verse afectados por los cambios de temperatura. Los usuarios deben
tener en cuenta las variaciones en el entorno del laboratorio; puede que sea necesario utilizar los controles con más
frecuencia y realizar la recalibración subsiguiente. Controle la temperatura del laboratorio entre el momento de la
calibración del ensayo y el de la obtención de los resultados de la muestra. La temperatura no debe cambiar más de
+/- 2 °C. La temperatura del laboratorio no debe ser superior a 28 °C.
12. CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad debería realizarse cada día de trabajo o conforme a lo estipulado en las normas y requisitos de
los reglamentos locales o de entidades autorizadas. Se recomienda consultar la documentación de CLSI C24-A y 42
CFR 493.1256 para conocer las prácticas de control de calidad adecuadas.
Los controles LIAISON® permiten detectar cualquier síntoma importante de deterioro del reactivo. El intervalo de las
concentraciones para cada control está impreso en el certificado de análisis e indica los límites definidos por
DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables. Siempre que los resultados de control queden
fuera de los rangos previstos, será necesario repetir la calibración y volver a analizar los controles y las muestras.
13. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
El analizador LIAISON® calcula automáticamente la concentración de estradiol en la muestra. Esta concentración se
expresa en pg/ml. Para convertir los resultados a unidades del SI: 1 pg/ml = 3,67 pmol/l.
14. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Para obtener resultados fiables son imprescindibles una técnica especializada y el estricto cumplimiento de
las instrucciones.

La contaminación bacteriana de las muestras o los ciclos repetidos de congelación-descongelación pueden
afectar a los resultados del ensayo.
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3



Los resultados del ensayo deben utilizarse junto con otros datos clínicos y de laboratorio para ayudar al
médico a decidir qué tratamiento aplicar a cada paciente.
Los anticuerpos heterófilos presentes en suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los
reactivos o con otro material de los reactivos e interferir en los inmunoensayos in vitro.
Los pacientes expuestos de forma rutinaria a animales, a productos con suero animal o a otros productos
inmunogénicos que puedan suscitar la producción de anticuerpos heterófilos contra los reactivos del ensayo
pueden ser propensos a este tipo de interferencias y presentar valores anómalos.
15. DILUCIÓN DE LAS MUESTRAS
Las concentraciones superiores al intervalo del ensayo pueden diluirse con el diluyente de muestras suministrado y
volverse a analizar. La dilución recomendada para las muestras que sobrepasen este intervalo es de 1:5 (es decir,
80 µl de muestra + 320 µl de diluyente de muestras). El mínimo total necesario para una muestra diluida es de
400 µl.
16. VALORES ESPERADOS
Intervalos observados:
Población (N)
Hombres (134)
Mujer normal
Fase folicular
(75)
Período periovulatorio (30 +/-3 días)
Fase lútea (75)
Posmenopáusicas no tratadas (48)
Posmenopáusicas HRT (52)
Anticonceptivos hormonales (55)
Promedio estradiol
23 pg/ml
Intervalo observado 95%
*nd-56 pg/ml
45 pg/ml
111 pg/ml
70 pg/ml
14 pg/ml
117 pg/ml
29 pg/ml
*nd-112 pg/ml
36-251 pg/ml
31-136 pg/ml
*nd-45 pg/ml
25-406 pg/ml
*nd-95 pg/ml
*nd-no detectable
Estos límites deben considerarse meramente orientativos. Cada laboratorio debe establecer sus propios
intervalos de referencia.
17. CARACTERÍSTICAS DEL ENSAYO
17.1 Sensibilidad analítica: La sensibilidad analítica, definida como la dosis mínima detectable que puede
distinguirse de cero con 2 desviaciones estándar, es de <12 pg/ml.
17.2 Precisión: La precisión se evaluó según el EP5 del CLSI. Para determinar la repetibilidad y reproductibilidad
del ensayo (es decir, la variabilidad intra e interensayo), se analizaron por duplicado seis muestras con
concentraciones diferentes de analito dos veces al día durante veinte días de trabajo.
Repetibilidad
Número de determinaciones
Media (pg/ml)
Desviación estándar (pg/ml)
Coeficiente de variación (%)
1
80
55
5,0
9,1
2
80
82
3,8
4,6
3
80
149
7,9
5,3
4
80
274
9,5
3,5
5
80
462
43,8
9,5
6
80
825
63,1
7,6
Reproducibilidad
Número de determinaciones
Media (pg/ml)
Desviación estándar (pg/ml)
Coeficiente de variación (%)
1
80
55
8,1
14,7
2
80
82
7,8
9,5
3
80
149
10,1
7,0
4
80
274
15,1
5,5
5
80
462
41,4
9,0
6
80
825
82,7
10,0
Precisión (continúa): Para determinar la repetibilidad y reproductibilidad del ensayo (es decir, la variabilidad intra e
interensayo), se diluyeron automáticamente y analizaron por cuadruplicado seis muestras con concentraciones de
analito superiores a 1100 pg/ml durante cinco días de trabajo.
Repetibilidad
Número de determinaciones
Media (pg/ml)
Desviación estándar (pg/ml)
Coeficiente de variación (%)
1
20
1408
109,5
7,8
2
20
2808
224,5
8,0
3
20
3935
343,9
8,7
4
20
1480
107,4
7,3
5
20
2538
149,1
5,9
6
20
4537
427,9
9,4
Reproducibilidad
Número de determinaciones
Media (pg/ml)
Desviación estándar (pg/ml)
Coeficiente de variación (%)
1
20
1408
103,6
7,4
2
20
2808
310
11
3
20
3935
375,9
9,6
4
20
1480
175,7
11,9
5
20
2538
312,9
12,3
6
20
4537
645,3
14,2
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4
17.3 Correlación de pacientes:
Se analizó un total de 259 muestras clínicas con LIAISON® Estradiol y otro método automatizado, y se obtuvo la
comparación siguiente. Las muestras de <1100 pg/ml se probaron sin diluir, mientras que las muestras de entre
®
1100 pg/ml y 5500 pg/ml se diluyeron (1:5) automáticamente y se calcularon. LIAISON = 0,83 (Imm) -0,9; r = 0,98.
Correlación - Todas las muestras (N=259)
5000
4500
y = 0.83x - 0.93
R=0.98
4000
LIAISON
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
0
1000
2000
3000
4000
5000
Método de quimioluminiscencia
17.4 Veracidad La veracidad del ensayo se comprobó mediante el test de dilución.
Test de dilución. Se diluyeron y analizaron muestras de seis pacientes. Los resultados se analizaron mediante la
regresión lineal de los valores esperados en función de los valores observados. El resultado de la ecuación de
regresión es el siguiente: Observado = 1,1 (esperado) + 2; R = 0,98.
Linealidad de dilución
1000
Concentración observada
900
y = 1.1x + 2
R=0.98
800
700
600
500
400
300
200
100
0
0
200
400
600
800
1000
Concentración esperada
es310400; 39284 1/13
5
17.5 Especificidad
Los datos de reacciones cruzadas del antisuero utilizado en este ensayo se han obtenido añadiendo la posible
sustancia provocadora de reacciones cruzadas y procediendo a su análisis. Las reacciones cruzadas observadas se
indican a continuación.
Compuesto ensayado
Mesterolona
DHEA-S
Etisterona
11-Cetotestosterona
Estriol
Norgestrel
Estrona
Androstenediona
Danazol
Testosterona Decanoato
Dexametasona
Corticosterona
Progesterona
17-Hidroxiprogesterona
Cortisol (hidrocortisona)
Cortisona
5a- Dihidrotestosterona
Etiocolanolona
Testosterona
DHEA
Estriol-3-sulfato (sal de sodio)
Prednisona
11-Desoxicorticosterona
Pregnenolona
Androstenediona
17a- Estradiol
Etinilestradiol
17a- metil-19-nortestosterona
Pregnanetriol
Equilina
17a-Estriol-3-sulfato (sal de sodio)
17B-Estradiol-3B-D-glucuronida
17B-Estradiol-17(B)-D-glucuronida
17B-Estradiol-3B-D-propionato
Noretindrona
17B-Estradiol-3-sulfato-17-glucuronida
19-Nortestosterona
Estrona-3-glucuronida
(D)Equilenin
Sulfato de sodio de estrona
17B-Estradiol-17-valerato
Aldosterona
Androstenediol
es310400; 39284 1/13
Concentración analizada (ng/ml)
50000
50000
500
500
50
50
5
100000
100000
100000
100000
100000
100000
100000
100000
10000
10000
10000
10000
10000
10000
10000
10000
10000
1000
1000
1000
1000
1000
100
100
100
100
100
100
100
100
100
10
10
10
10000
10000
6
Reacción cruzada
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
-0,8%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,0%
0,1%
0,0%
0,0%
0,0%
0,1%
0,1%
-0,2%
0,6%
0,0%
0,0%
0,0%
17.6 Recuperación
Se escogieron seis muestras clínicas o preparadas de alta concentración y seis muestras clínicas de baja
concentración con volumen suficiente para permitir la mezcla y múltiples análisis. Estas muestras se analizan sin
diluir en series repetidas de al menos cuatro.
Las muestras utilizadas para determinar el porcentaje de recuperación se preparan mezclando proporciones
definidas de las muestras de alta y baja concentración y realizando análisis en series de cuatro, como mínimo.
Concentración
esperada (pg/ml)
Alta sin diluir
2H:1L
1H:1L
1H:2L
Baja sin diluir
Prom. muestra
Alta sin diluir
2H:1L
1H:1L
1H:2L
Baja sin diluir
Prom. muestra
Alta sin diluir
2H:1L
1H:1L
1H:2L
Baja sin diluir
Prom. muestra
Alta sin diluir
2H:1L
1H:1L
1H:2L
Baja sin diluir
Prom. muestra
Alta sin diluir
2H:1L
1H:1L
1H:2L
Baja sin diluir
Prom. muestra
Alta sin diluir
2H:1L
1H:1L
1H:2L
Baja sin diluir
Prom. muestra
Concentración
observada (pg/ml)
593
405
287
195
55
415
324
232
Recuperación (%)
98
89
84
90
499
374
250
742
517
419
285
7,3
451
344
237
660
539
467
336
28,5
349
262
175
517
393
350
257
7,3
349
262
175
777
456
288
177
15,4
415
317
223
602
383
280
183
37,2
104
112
114
110
119
136
142
132
113
134
146
131
87
73
66
75
92
88
82
87
Promedio de
recuperación
104
17.7 Sustancias interferentes
Los estudios controlados sobre la interferencia de otras sustancias demuestran que el resultado del ensayo no se ve
afectado por colesterol (hasta 1.000 mg/dl), hemólisis (hasta 600 mg/dl), bilirrubina (hasta 10 mg/dl) ni triglicéridos
(hasta 200 mg/dl).
DiaSorin Inc.
1951 Northwestern Avenue
P.O. Box 285
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