• Introducción • Objetivo • Procedimiento • Resultados

• Introducción
Trabajo Práctico Nº 5
• Objetivo
• Procedimiento
INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES EN EL CRECIMIENTO MICROBIANO
• Resultados
• Conclusiones
• Bibliografía
INTRODUCCIÓN
Las diferentes especies de microorganismos pueden
crecer en los más diversos ambientes. El tipo de microorganismo que se encuentra en un ambiente dado
y la velocidad a la que ellos pueden crecer puede ser
influenciada por una variedad de factores, tanto físicos como bioquímicos.
En este trabajo práctico determinaremos la influencia
que tienen los factores físicos, tales como: temperatura, oxígeno, pH y concentración de sales sobre el
crecimiento de algunas especies de bacterias.
OBJETIVO
Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en
capacidad de:
Comprender el efecto de la temperatura, el oxígeno,
el pH y la concentración de sales sobre el crecimiento
de los microorganismos.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
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TEMPERATURA
La temperatura tiene un efecto muy importante sobre el crecimiento de los microorganismos. Cada microorganismo tiene una temperatura óptima a la cual su
crecimiento es más rápido, una temperatura mínima por debajo de la cual no crece
y una temperatura máxima por encima de la cual el crecimiento no es posible, a
estas tres temperaturas se les denomina temperaturas cardinales y son características de cada microorganismo.
En este trabajo práctico se determinará el rango de temperatura en que diferentes
microorganismos pueden crecer y se hará una estimación de la temperatura óptima, para ello se le dará a cada estudiante un cultivo puro de un microorganismo.
PROCEDIMIENTO
1. Inocular cuatro (4) tubos de agar nutritivo inclinado, utilizando el filamento y
haciendo un solo trazo a lo largo del bisel, teniendo cuidado de que el inóculo
no sea muy abundante porque dificultaría la interpretación de los resultados.
2. Incubar cada tubo a la temperatura correspondiente, por 24 horas:
•
4ºC
•
25ºC
•
32,5ºC
•
55ºC
RESULTADOS
Anotar el crecimiento y la abundancia relativa del mismo, colocando un signo negativo (-) para la ausencia de crecimiento y la presencia de crecimiento indicarla
con un signo positivo (+). La abundancia relativa será indicada con el número de
signos positivos por ejemplo; +++ para el máximo crecimiento, ++ para el crecimiento intermedio y + para el mínimo crecimiento.
Microorganismo: ____________________________________________________
Crecimiento
4°C
25ºC 32,5ºC
Resultado
5.2
55ºC
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
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Dibujar lo observado
Comparar los resultados con los de otros estudiantes que hayan utilizado microorganismos diferentes.
CONCLUSIONES
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REQUERIMIENTOS DE OXÍGENO
Los requerimientos de oxígeno de las bacterias van desde los aerobios estrictos
que no pueden vivir sin él, hasta los anaerobios estrictos que mueren en presencia
de oxígeno, entre estos extremos están los facultativos, los aerotolerantes y los
microaerofílicos.
Cuando se quiere identificar una bacteria es importante determinar sus requerimientos de oxígeno, esto puede hacerse usando el medio líquido de tioglicolato ya
que éste está diseñado de manera de permitir, a lo largo del tubo, diferentes concentraciones de oxígeno. Los microorganismos crecerán en el tubo de acuerdo
con el nivel de oxígeno que requieran. El medio contiene tioglicolato y cisteína para bajar el potencial de óxido-reducción y el colorante resazurina para indicar la
presencia de oxígeno (en presencia de oxígeno el colorante se vuelve rosado).
Como la tensión de oxígeno es siempre mayor cerca de la superficie del medio,
éste estará rosado en la parte de arriba y mantendrá el color original del medio de
cultivo en la zona central y en el fondo del tubo. El medio contiene también una
cierta cantidad de agar que lo hace más viscoso, ayuda a localizar los microorganismos y tiende a favorecer la anaerobiosis en el fondo del tubo.
5.3
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
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PROCEDIMIENTO
1.
Examinar los tubos de tioglicolato. Si más de un tercio del medio está rosado,
colocar los tubos en un baño de agua hirviendo por unos minutos para expulsar el oxígeno disuelto, enfriarlos en un baño de agua fría. Evitar agitar los
tubos después del calentamiento para prevenir la reabsorción de oxígeno.
2.
Marcar los tubos con su número de equipo y la fecha e inocular con el asa,
tomando una pequeña porción del cultivo que le suministre el profesor, hasta
el fondo del tubo. Agitar cuidadosamente el tubo o rotarlo entre las palmas de
las manos para obtener una buena dispersión del inóculo.
3.
Incubar por 48 horas a 32,5 +/- 2,5ºC.
4.
Después de la incubación, observar los tubos inoculados y comparar el crecimiento en los tubos con la figura siguiente.
Aerobios estrictos
Microaerofílicos
Aerotolerantes y facultativos
Anaerobios estrictos
Zonas de crecimiento en medio de tioglicolato
RESULTADOS
Anotar los resultados
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________________________________________________________________
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5.4
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
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Dibujar lo observado
Comparar los resultados obtenidos con los diferentes cultivos suministrados a los
estudiantes y discutir los resultados
CONCLUSIONES
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pH
La acidez o alcalinidad de un medio de cultivo se expresa por su pH. Para la mayoría de las bacterias el pH óptimo de crecimiento está entre 6,5 y 7,5 aun cuando
algunas pocas especies pueden crecer en los extremos del rango de pH. Las levaduras y los mohos pueden crecer a valores de pH más bajos.
En este trabajo práctico se determinará el efecto que tiene el pH sobre el crecimiento de diferentes microorganismos.
PROCEDIMIENTO
1. Inocular con el asa de platino, usando como inóculo el microorganismo que le
suministre el profesor, cada uno de los medios siguientes:
a.
b.
c.
d.
Caldo nutritivo pH 3.0
Caldo nutritivo pH 5.0
Caldo nutritivo pH 7.0
Caldo nutritivo pH 9.0
2. Incubar a 37°C por 24 horas.
5.5
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
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RESULTADOS
Anotar la presencia de turbidez en el medio como crecimiento + y la ausencia de
turbidez como crecimiento Microorganismo: ____________________________________________________
Medio de cultivo
Caldo nutritivo pH 3.0
Caldo nutritivo pH 5.0
Caldo nutritivo pH 7.0
Caldo nutritivo pH 9.0
Crecimiento
Dibujar lo observado
Comparar con los resultados obtenidos con los de otros estudiantes que hayan
utilizado microorganismos diferentes.
CONCLUSIONES
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5.6
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
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CONCENTRACIÓN DE SALES
Los requerimientos o la tolerancia a diferentes concentraciones de sales varía en
los diferentes microorganismos.
En este trabajo práctico se determinará el efecto que tienen diferentes concentraciones de cloruro de sodio sobre el crecimiento de diferentes microorganismos.
PROCEDIMIENTO
1. Inocular con el asa de platino, usando como inóculo el microorganismo que le
suministre el profesor, cada uno de los medios siguientes:
a.
b.
c.
d.
Agar nutritivo (normalmente contiene 0,8 % de NaCl)
Agar nutritivo (suplementado con 1 % de NaCl)
Agar nutritivo (suplementado con 5 % de NaCl)
Agar nutritivo (suplementado con 10 % de NaCl)
2. Incubar a 32,5 +/- 2,5ºC por 24 horas.
RESULTADOS
Anotar el crecimiento como + o – según el caso.
Microorganismo: ____________________________________________________
Medio de cultivo
Agar nutritivo (normalmente contiene 0,8 % de NaCl)
Agar nutritivo (suplementado con 1 % de NaCl)
Agar nutritivo (suplementado con 5 % de NaCl)
Agar nutritivo (suplementado con 10 % de NaCl)
Dibujar lo observado
5.7
Crecimiento
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES
__________________________________________________________________
Comparar con los resultados obtenidos con los de otros estudiantes que hayan
utilizado microorganismos diferentes.
CONCLUSIONES
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BIBLIOGRAFÍA
Benson H. J. 1979. Microbiological Application. A Laboratory Manual in General
Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company Publishers. Dubuque, Iowa
Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales. Segunda edición. Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.
Seeley, H.W.I, Jr and P.J. Van Demark 1972. Microbes in Action. W.H. Freeman
and Company.
Prof. Magaly Pedrique de Aulacio
Prof. Sofía Gutiérrez de Gamboa
Noviembre 2001
Revisión 2008
5.8