ACIDO SULFHIDRICO APLICACIÓN: Es útil para la ID de bacterias

ACIDO SULFHIDRICO
APLICACIÓN:
Es útil para la ID de bacterias de los géneros Salmonella, Campylobacter, y
Brucella, permite diferenciar entre especies de Proteus.
OBJETIVO:
Determinar la capacidad bacteriana de producir H S (Ac. Sulfhídrico)
MEDIOS Y REACTIVOS:
Se utilizan medios que contengan aa sulfurados o peptonas adicionadas con sales
de azufre (S), como el tiosulfato de sodio. Ej: SIM, Triple Azúcar Hierro (TSI) y
agar bismuto sulfito.
COAGULASA
APLICACION:
Diferenciar Staphylococcus aureus de algunas otras especies de Staph y también de
Micrococcus.
MECANISMO:
Algunas bacterias reducen aa sulfurados hasta ac sulfhídrico, que se transforma
en sulfito de fierro formando un precipitado negro.
OBJETIVO:
Demostrar la capacidad de S. aureus para coagular el plasma sanguíneo, x acción
de una enzima similar a la protrombina.
SIEMBRA:
-SIM (semisólido) se siembra x picadura
-TSI (sólido en tubo) se siembra x picadura y estría
-Agar bismuto sulfito (sólido en caja) se siembra x estría
MEDIOS Y REACTIVOS:
El plasma ideal para realizar la pba es el de conejo o de humano. El plasma debe
ser heparinizado y conservado en congelación.
MECANISMO:
La coagulasa es una enzima bacteriana extracelular que posee una actividad
parecida a la protrombina, que es capaz de convertir el fibrinógeno en fibrina. Esta
reacción da como resultado la coagulación del plasma sanguíneo.
INCUBACIÓN:
24 A 48 hrs a 37°C
RESULTADOS:
Pba + se manifiesta x la aparición de un precipitado negro a lo largo de la
picadura en los medios en tubo o sobre las colonias en el medio en caja.
*Nota: Existe una variante más sensible para la detección de H S, consiste en colocar una
tira de papel filtro impregnada con acetato de plomo (solución saturada al 20% y se deja
secar) o en adicionar el acetato de plomo al medio de cultivo (en este caso se adiciona al
0.5%). Cuando se utilizan las tiras de papel filtro, se sujetan internamente en los tubos
mediante el tapón de rosca y no deben tocar el medio. Este método se considera 10 veces
más sensible que el de las pbas en agar. El resultado se manifiesta x la aparicón de un
precipitado negro sobre la tira de papel o sobre las colonias, en el caso de que el reactivo se
haya adicionado al medio.
TESTIGOS:
(+) Proteus vulgaris
(-) E. coli
SIEMBRA:
La coagulasa puede estar presente en 2 formas; libre o unida a la cell bacteriana;
cada una tiene diferentes propiedades y x lo tanto su detección se lleva a cabo
mediante pbas separadas.
-FACTOR DE AGREGACIÓN (coagulasa fija o pba rapida en portaobjetos)
1.
Se coloca una gota de agua destilada en el porta
2.
Se toma una colonia de la cepa y se suspende en la SSF para hacer una
mezcla homogénea.
3.
Se adiciona una gota de plasma y se mezcla bien con el asa x 10 seg.
RESULTADOS:
(+) Formación de grumos en forma inmediata
(-) No forma grumos
*Nota: Es importante realizar al mismo tiempo un testigo negativo en el mismo porta y que las
CATALASA
APLICACIÓN:
Diferenciar estreptococos de estafilococos y micrococos, ya que los estrepto no
producen la enzima.
OBJETIVO:
Determinar la producción de la enzima catalasa
MEDIOS Y REACTIVOS:
Se utiliza como reactivo el peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) al 3%
MECANISMO:
El peróxido de hidrógeno en presencia de catalasa reacciona liberando oxígeno,
dejando el H O.
SIEMBRA:
Colocar una gota de agua oxigenada al 3% en una laminilla, tomar con el asa
una de las colonias y colocarla en la gota de agua oxigenada.
RESULTADOS:
Se produce un burbujeo como resultado del desprendimiento de O .
*Nota: si la pba se realiza a partir de colonias crecidas en medios adicionados con sangre,
pueden presentarse reacciones falsas positivas, ya que la sangre reacciona con el agua
oxigenada, x lo que al tocar la colonia que se va a probar se debe evitar enfriar el asa
enterrándola en el agar.
TESTIGOS:
(+) Staphylococcus spp
(-) Streptococcus spp
colonias a probar no provengan de medios con sustancias inhibitorias (ej. El agar manitol sal
contiene una elevada concentración de NaCl)
-COAGULASA LIBRE (Pba en tubo)
1.
Se coloca 0.5 ml de plasma en un tubo de cultivo estéril
2.
Se inocula el plasma con una asada del cultivo problema
3.
Se incuba a 37°C y se hace lectura a las 2, 4, 6, 12 y 24 hrs debido que
algunas cepas pueden producir inicialmente la enzima coagulasa y
después producen fibrinolisinas que destruyen el coágulo previamente
formado, dando como resultado falsos negativos a las 24 hrs de
incubación.
RESULTADOS:
(+) Presencia de un coágulo
(-) El plasma permanece líquido
TESTIGOS:
(+) S. aureus
(-) S. epidermidis
PRODUCCIÓN DE INDOL
APLICACION:
Diferenciar a E. Coli de Enterobacter y Klebsiella, y a Proteus mirabilis de otras
especies de Proteus.
OBJETIVO:
Determinar la habilidad de la bacteria para producir triptofanasa y oxidar el
triptofano con producción de indol.
MEDIOS Y REACTIVOS:
1.
Método estándar de KOVAC´S. Se utiliza el medio de SIM, al cual
después del desarrollo bacteriano se le agrega el reactivo de Kovac´s
(150 ml de alcohol isoamílico, amílico o butílico con 10 gr de p-dimetil
amino benzaldehído, a los que se adicionan 50 ml de ácido clorhídrico
concentrado)
2.
Método rápido en cultivo: Se utiliza caldo triptofano, al cual se le
agrega el reactivo de Kovac´s una vez que hay desarrollo bacteriano.
3.
Prueba directa rápida: se utiliza papel filtro y reactivo de Kovac´s
MECANISMO:
La triptofanasa hidroliza el triptofano con la liberación de anillos indólicos. La
adición del reactivo de Kovac´s detecta estos anillos indólicos libres y por lo
tanto, indirectamente la producción de la enzima tripotofanasa x parte de la
bacteria
2. Método rapido en cultivo: Sembrar 1ml de caldo triptofano con un inóculo
generoso del cultivo problema e incubar a 37°C durante 2 hrs.
3. Pba directa rápida: Impregnar la bacteria problema en un trozo de papel filtro.
SIEMBRA:
1.
Método de Kovac´s: Inocular el SIM x picadura con asa recta (2/3
partes del tubo), incubar 24 a 48 hrs a 37°C.
RESULTADOS:
1.
Kovac´s: Agregar al tubo de SIM unas gotas del reactivo
(+) Anillo Rojo en la superficie
(-) Anillo de cualquier otro color
2.
Método rápido en cultivo: Agregar al caldo unas gotas del reactivo de
Kovac´s
(+) Anillo rojo en la superficie
(-) Anillo de cuarlquier otro color
3.
Método rápido directo: Agregar una gota del reactivo de Kovac´s al
papel filtro impregnado con la colonia.
(+) Color rosa en 3 – 5 seg; rojo a los 2 min y después café
(-) Color amarillo a los 2 min y después café
TESTIGOS:
(+) E. Coli
(-) Enterobacter cloacae
Fermentación tormentosa. Clostridium perfringens
Sin actividad. Proteus vulgaris
OXIDASA
APLICACIÓN:
Pba auxiliar en la id de Neisseeria, Aeromonas, Pasteurella, Pseudomonas y
enterobacterias.
Pba para todos los Bacilos Gram –
??
OBJETIVO:
Determinar la prod de la enzima citrocromo oxidasa (indofenol oxidasa))
MEDIOS Y REACTIVOS:
Se impregna un trozo de papel filtro con 2 o 3 gotas de solución acuosa al 1% de
diclorhidrato de tetrametil p-fenil-diamina. No dejar que el papel seque
completamente.
MECANISMO:
Las bacterias que producen oxidasa son capaces de oxidar el reactivo, con la
consecuente aparición de color
RESULTADOS:
1.Utilizando un asa de platino o un asa de vidrio tomar colonias del mo a probar
2.Frotar las colonias sobre la superficie del papel filtro
2.
La aparición de un color púrpura intenso en 10 seg indica una pba +.
Reacciones tardías deben ser ignoradas. Una pba negativa estará
indicada x cualquier otro color o ausencia de color.
TESTIGOS:
(+) Pseudomonas aeruginosa
(- ) E. coli
LECHE TORNASOLADA
APLICACIÓN:
Id de Clostridium perfringens
OBJETIVO:
Observar el mo sobre la caseina y la lactosa de la eche
MEDIOS Y RECTIVOS:
Leche descremada adicionada con una solución etílica de tornasol en cantdad
suficiente para que la leche tome un color púrpura grisáceo
MECANISMO:
1.Acidificación. X fermentaciónd e lactosa
2.Grumos ácidos. X fermentación de lactosa con la prod de ac láctico que
precipita la caseína y forma un coágulo firme que no se retrae y es disuelto x la
adición de un álcali.
3.Alcalinización. X digestión de la caseína
4.Grumos coagulados. Coágulo suave que se retrae y libera un fluido grisáceo
que es formado x la actividad de diferentes proteasas. Gralmente hay alcalinidad
en el medio.
5.Reducción. X la prod de reductasas que eliminan el 02 del medio
6.Fermentación tormentosa. Cuando la bacteria fermenta la lactosa y además
del ac. láctico se produce gas que rompe el coágulo ácido.
SIEMBRA:
Agitación del asa
INCUBACIÓN:
De 1 a 14 dias a 37°C. Examinar diariamente y anotar cualquier cambio que se
presente.
RESULTADOS:
Acidificación. = Rosa
Grumos ácidos. Coágulo firme de color rosa no retraído y que se disuelve al
agregar un álcali.
Alcalinización = Azul intenso o morado
Grumos coagulados. Coágulo suave, retraído que libera un fluido grisáceo. Es
insoluble en álcali.
Reducción = Blanco
Fermentación tormentosa. Coágulo rosa, destruido x la producción de gas.
TESTIGOS:
Acidificación. E. Coli
Grumos ácidos. Streptococcus pneumoniae
Alcalinización. Alkaligenees faecalis
Grumos coagulados. Streptococcus del grupo E
Reducción. Streptococcus faecalis