INFORME DE INTERNADO REALIZADO EN SERVICIO MÉDICO LEGAL COMO PARTE DE LOS REQUISITOS PARA OPTAR AL TÍTULO DE QUÍMICO-FARMACÉUTICO LUGAR DE REALIZACIÓN: SERVICIO MÉDICO LEGAL (SML) DE SANTIAGO FECHA INICIO: 09/09/2013 ECHA TÉRMINO: 28/03/2014 TUTOR DEL INTERNADO: Q.F. SYLVIA MIRANDA ARISMENDI, PERITO DE LA UNIDAD DE TOXICOLOGÍA PROFESOR RESPONSABLE: PROF. CAROLINA MANOSALVA MARÍA ELENA SOTO RAMOS VALDIVIA, ABRIL 2014 1. Índice 1. Índice……………………………………………………………………..……….... Pág. 2 2. Glosario………………………………………………………………………….…. Pág. 4 3. Abreviaturas…….……………………………………………………………...…... Pág. 9 4. Resumen……………………………………………………………………………Pág. 11 5. Introducción…………………………………………………...………………..… Pág. 12 5.1 Reseña histórica de la Institución………………………………...……….. Pág. 12 6. Organigrama Servicio Médico Legal……………………………………………....Pág. 13 6.1. Subdirección Medica……………………………………………….………Pág. 14 6.2. Subdirección Administrativa………….………….……….……...………..Pág. 15 7. Objetivo de la institución ( Misión, visión y principios)….………………………..Pág. 16 8. Desarrollo del Internado……………………………………..……………………. Pág. 18 8.1. Tareas realizadas durante el Internado……………..…………………….Pág. 18 8.2. Descripción de las tareas más relevantes realizadas en el Internado....…Pág. 19 8.2.1. Unidad de Alcoholemia……...…………………...……….……..Pág. 19 8.2.2. Unidad de Unidad de recepción de Muestras………...…......…...Pág. 25 8.2.3. Unidad de Bioquímica y Criminalística…...…...……...…..….....Pág. 34 8.2.4. Unidad de Toxicología………..………..……………...….……..Pág. 44 9. Análisis Foda del papel actual del Químico Farmacéutico en SML…......………..Pág. 57 10. Proyección ideal del Químico Farmacéutico en SML………..………...………...Pág. 61 ~2~ 11. Conclusión………..…….………………….………………………...…………… Pág.63 12. Bibliografía………..……………………………………………………….……. Pág. 64 13. Anexo…...………………………...…………………………………………...….Pág. 67 ~3~ 2. Glosario 1. Servicio Médico Legal (SML): Es una entidad pública, dependiente del Ministerio de Justicia, cuyo objetivo es asesorar técnica y científicamente al Ministerio Público y a los Tribunales de Justicia del país, en materias médico legales, ciencias forenses y otras propias de su ámbito. 2. Alcoholemia: Cantidad de alcohol en sangre expresada en gramos por litro u otra unidad de medida equivalente. 3. Perito: Es una persona que cuenta con una experticia en un área de conocimiento derivado de sus estudios o especialización profesional, del desempeño de ciertas artes o el ejercicio de un determinado oficio. Considerado un Profesional experto responsable de la realización de los análisis de las muestras. 4. Papel filtro: Papel constituido por derivados de la celulosa que tiene como fin filtrar impurezas insolubles y permitir el paso a la solución a través de sus poros. En este caso, se utiliza como medio de fijación de la mancha de sangre, para identificar la identidad de la persona con la muestra. 5. Lista de alcoholemia: Conjunto de 30 boletas numeradas e forma correlativa correspondiente a aquellas muestras de alcoholemia que ingresan a la Unidad de Recepción de Muestras (URM) y son remitidas al Laboratorio. 6. Número de informe de alcoholemia: Es un número correlativo asignado por la Unidad de Recepción de Muestras (URM) para identificar las muestras que ingresar diariamente, comenzando cada año desde el N° 00001 en adelante, siendo registrado en el frasco, boleta de alcoholemia, nomina y en el informe de alcoholemia respectivo. 7. Solución de Germekil®: Disolución preparada de Germekil®, desinfectante de superficies, desinfecta, limpia y desodoriza en una sola operación. No provoca vapores irritantes. ~4~ 8. Viales: Es un recipiente hecho de vidrio o plástico, que se utiliza como recipiente de muestras en presentaciones liquidas, en dispositivos de cromatografía analítica. 9. Tórulas: Es una malla de polímero, cuyo material es celulosa de algodón. En la superficie de la tórula queda atrapado el espermatozoide. Además posee la característica de arrastrar la muestra, por las propiedades de ser áspera y poseer un tamaño adecuado, dándole la particularidad es que es hidrofílica y puede absorber hasta 100 µl de fluido seminal. 10. Tinción Árbol de Navidad: Provee excelentes detalles morfológicos y una buena discriminación entre los espermatozoides y las células epiteliales. Esta técnica conocida también como Kernechtrol- Picroíndigocarmín (KPIC) se utiliza en forma corriente como tinción identificativa de células espermáticas. Este método se caracteriza por discernir principalmente espermatozoides completos o cabezas de espermatozoides de células no espermáticas, bien células epiteliales o levaduras, que regularmente están presentes en las muestras procedentes de una agresión sexual 11. Anamnesis: Historia y datos asociados a cada resultante de la encuesta clínica. 12. NUE: El uso del número único de especie, tiene por objetivo la identificación de las muestras/ evidencias, a través de un numero único. 13. Rotulo- Formulario Único de Cadena de Custodia: (R-FUCC) Documento de registro del historial de la muestra y/o evidencia, que posee un numero que no se repite (NUE) y se inicia al momento de la toma o levantamiento de esta, la cual la acompañara en todo momento. El uso del R-FUCC tiene como objeto acompañar las muestras y/o evidencias, como también a las personas que intervienen en cada eslabón y salvaguardar la integridad de las muestras y/o evidencias a ser periciadas al interior del SML, dejando constancia de su estado en cada uno de los hitos relacionados con la custodia; esto es desde el ingreso al SML o bien, toma de la muestra producto de la realización de una pericia, hasta su ~5~ eliminación o reintegro a quien haya solicitado el peritaje sobre dicha muestras y/o evidencias. 14. Código de Muestra: Número que genera un usuario, en Sistema OSSAN, que permite individualizar la muestra y consiste, de una Letra- Número/ Año. 15. Memorándum: Es un escrito breve por el que se intercambia información entre diferentes departamentos de una organización para comunicar alguna indicación, recomendación, instrucción o disposición. 16. Recepción Administrativa: Módulo que comprende a la atención misma del paciente y la recepción de toda documentación que este debe presentar relacionada con el caso del curso. Comprende desde la generación del Acta de toma de muestras hasta la entrega de las muestras a Recepción Técnica. 17. Acta de Recepción de Muestras Externas: Documento que es generado por un usuario, en el Sistema OSSAN, que consigna los datos personales del donante y del caso para el laboratorio. Este documento indica los datos de la causa, detalles de la muestra y nombre firma del funcionario quien realizo la operación. 18. Recepción técnica: Documento con número correlativo generado por un usuario en el sistema OSSAN, el cual se consigna lista de muestras codificadas para el laboratorio 19. Sistema Informático OSSAN: Software de Gestión del Departamento de Laboratorios que permite la operatividad y gestión de las muestras y documentación. 20. Formulario de revisión de antecedentes: Documento que es generado por un administrativa/o, que se adjunta a la cara de la carpeta con el caso; y (mejor punto seguido) consiste en una lista para hacer un chequeo rápido de la documentación que acompaña al caso, la que es firmada por el técnico que codifica y el supervisor que la revisa. ~6~ 21. Rótulo: Número de recepción único, aparece en el acta de Recepción de Muestras, que se asigna a cada muestra ingresada. Este dato está compuesto por Código de sede SML en Letras-número de muestra/Año. 22. Tarjeta FTA: Papel filtro tratado químicamente con reactivo FTA, permitiendo que el ADN del material biológico depositado sobre él, sea protegido del daño por degradación enzimática, radicales libres, luz UV y agentes microbianos 23. Sobre Metalizado: Papel de aluminio que permite la conservación de la muestra por un tiempo prolongado, evitando su degradación. 24. Número de Paternidad: Número que se asigna por usuario, en el Sistema OSSAN, que permite agrupar una determinada cantidad de muestras, para generar un caso. Este dato está compuesto por Número de Caso/ Año- F. 25. Gamma Semino proteína (p30): La proteína P30 es una glicoproteína característica del semen y cuyas características coindicen, exactamente, con aquellas del antígeno prostático especifico, no obstante lo cual será designado con el nombre de la técnica original [1] 26. Antígeno Prostático Especifico (PSA): Este marcador consiste en una glicoproteína intracelular (PM 34.000 dalton), sintetizada exclusivamente por la glándula prostática, siendo, un componente normal del plasma seminal. Para su estudio pueden emplearse diferentes metodologías, entre las cuales, el kit comercial ofrece buenos resultados, siendo además el método más práctico y rápido. Se trata de un ensayo inmunocromatotográfico, el cual emplea una única combinación de conjugado colorante- anticuerpo monoclonal y anticuerpo policlonal en fase sólida, permitiendo así identificar el antígeno con un aceptable grado de sensibilidad (limite de detección 4ng/ml). De este modo, el antígeno se combina con el anticuerpo monoclonal, fluye por la placa por capilaridad y se combina con los anticuerpos anti- PSA fijos, originando un complejo coloreado visualizado en forma de banda , que indicara una reacción positiva. ~7~ 27. Extracción en Fase Sólida (SPE): Es una potente y simple técnica de limpieza de muestras que es, al mismo tiempo, rápida y económica. Una columna SPE consiste en un lecho de adsorbente de partícula gruesas mantenido entre dos discos porosos en un tubo desechable. La SPE permite la preconcentración de la muestra con un riesgo mínimo de pérdida o contaminación de la misma. El componente de interés resulta retenido en una fase sólida mientras que los contaminantes de la matriz se eluyen. 28. Análisis enzimático competitivo: El análisis enzimático competitivo es considerado cualitativo y es usado generalmente para la detección de moléculas de alto peso molecular con pocos grupos funcionales que se unen a los anticuerpos. Los anticuerpos están unidos a las regiones específicas de ensayo (REE) en la superficie del Biochip. En la ausencia de una muestra negativa de drogas de abuso, el analito marcado enzimáticamente se une al lugar del anticuerpo en la superficie del biochip y finalmente se efectúa la adición del Reactivo de señal (Luminol 1:1), la luz emitida es proporcional a la concentración de analíto marcado. 29. Dispositivo acoplado por carga (DAC): La cámara DAC es usado en el sistema de Evidence Investigator, capturando las imágenes con bajos niveles de luz debido a su alta sensibilidad, entregando una respuesta lineal a los fotones detectados, amplia gama dinámica y alta resolución espacial, al mismo mantiene un buen rendimiento de la muestra. 30. Evidence Investigator: Es un sistema o software procesador de imagen, usado para cuantificar y validar la señal (emisión de luz). Por lo tanto el grado de emisión de luz se puede cuantificar basado en la fuerza de la señal eléctrica generada. ~8~ 3. Abreviaturas 1. SML: Servicio Médico Legal 2. URM: Unidad de Recepción de Muestras, Unidad del Servicio Médico Legal encargada de recibir, ingresar y entregar muestras y evidencias a las secciones de Laboratorio e Toxicología, Biología Molecular, Histopatología y Alcoholemia del SML de Santiago. 3. CV: Coeficiente de variación, medida de error relativo al valor promedio. 4. PBS: Fosfato Buffer Salino 5. PDI: Policía de investigación de Chile 6. RPM: Revoluciones por minutos 7. N.U.E.: Numero Único de Evidencia. 8. UBQ: Unidad de Bioquímica y Criminalística 9. UGF: Unidad de Genética Forense 10. R.I.T: Rol Interno de Tribunal, es un código asignado en el tribunal de Origen. 11. R.U.C: Rol Único de la Causa, es un código asignado por el Tribunal de Origen. 12. ROL: Identificación de la Causa asignada por el Tribunal pertinente. ~9~ 13. OSSAN: Sistema Informático de Departamento de Laboratorio que permite el ingreso y respaldo de datos, además del control y distribución de las muestras y antecedentes de los casos. 14. REE: regiones especificas de ensayo 15. DAC: Dispositivo acoplado por carga 16. R-FUCC: Rotulo- Formulario Único de Cadena de Custodia 17. SPE: Extracción en Fase Solida. ~ 10 ~ 4. Resumen El internado consistió en la permanencia en un Laboratorio Toxicológico Forense, bajo la tutoría de un Químico Farmacéutico Legista Sylvia Miranda Arismendi. Se realizo de lunes a viernes por un promedio de 9 horas diarias durante 6 meses. Asumiendo la jornada laboral de los profesionales de dicho establecimiento. El Internado comenzó el 9 de Septiembre del 2013 en el SML (Servicio Médico Legal), ubicado en Avenida La Paz # 1012, Santiago, Región Metropolitana. Dentro del establecimiento se realizaron pasantías por las distintas unidades del SML, conociendo desde cerca el quehacer farmacéutico en dicha área de la profesión. Esta actividad se inicio en la Unidad de Alcoholemia, prosiguió en la Unidad de Recepción de Muestras y luego en la Unidad de Bioquímica y Criminalística, durante un tiempo de un mes en cada unidad. Finalmente, el internado fue concluido en la Unidad de Toxicología, donde la estudiante permaneció tres meses en dicha unidad. Durante el internado, se asistió a un juicio oral, donde se pudo conocer como el perito expone el análisis realizado de la muestra del acusado. Además, se realizo una visita a la Unidad de Registro Nacional de ADN, donde se conoció a grandes rasgos la labor de los Químico Farmacéuticos y Bioquímicos para consolidar el registro de ADN de condenados, imputados, victimas, evidencias, personas desaparecidas, y etc. La estudiante participó en una autopsia pedagógica, donde el Médico Tanatólogo, daba sus argumentos de la causa de muerte del fallecido y los criterios de la elección de las muestras que escogía para respaldar su peritaje con los análisis toxicológicos y bioquímicos. En la Unidad de Toxicología se colaboro en la segunda ronda de muestras biológicas que se envían de Naciones Unidas para el control de las técnicas analíticas que son utilizadas en el Departamento. Para aquello se analizan cuatro muestras de orinas liofilizadas, que son enviadas de Austria, para la identificación y cuantificación de drogas de abuso, bajo estándares que ellos envían durante los años anteriores. Por lo que se tuvo que asistir al Instituto de Salud Publica para realizar los trámites necesarios para realizar el ingreso de los estándares a Chile. ~ 11 ~ 5. Introducción 5.1. Reseña Histórica de la Institución Los orígenes de la actividad médico legal en nuestro país se remontan a la primera mitad del siglo XIX, cuando al ser creada la Escuela de Medicina de la Universidad de Chile, considero en su currículum un curso teórico de la medicina legal. Hasta entonces, y desde el punto de vista práctico, los “médicos de ciudad” de la capital se encargaban de la realización de las autopsias, en la morgue situada en calle Teatinos, Santiago, a un costado de la cárcel pública. El 30 de agosto de 1915 comienza a funcionar la sede actual de la institución, ubicada en Avda. La Paz N° 1012, Santiago, cuyas dependencias fueron oficialmente inauguradas el 1 de octubre de 1926, producto de la vasta labor desarrollada por el Dr. Carlos Ybar de la Sierra, creador y organizador del Servicio Médico Legal en Santiago y en algunas provincias. Al día de hoy el organismo forense cuenta con 40 sedes a lo largo del país, 15 instaladas en capitales regionales y 21 en provincias. Por otra parte, en octubre de 2009 el SML firmó un convenio con la Subsecretaria de Justicia y la Subsecretaria de Redes Asistenciales en que esta última se compromete a gestionar la incorporación de unidades básicas médico- forense, de acuerdo a los requerimientos específicos regionales, en los hospitales que se construyan a nivel nacional, situación que actualmente está en desarrollo. ~ 12 ~ 6. Organigrama de la Institución Imagen: Representa el organigrama general del SML de Santiago ~ 13 ~ 6.1. Organigrama de la Subdirección Médica Imagen: Representa el organigrama de la Subdirección Médica del SML de Santiago ~ 14 ~ 6.2.Organigrama de la Subdirección Administrativa Imagen: Representa el organigrama de la Subdirección Administrativa del SML de Santiago ~ 15 ~ 7. Objetivos de la Institución El Servicio Médico Legal es una entidad pública, dependiente del Ministerio de Justicia, cuyo objetivo es asesorar técnica y científicamente al Ministerio Público y a los Tribunales de Justicia del país, en materias médico legales, ciencias forenses y otras propias de su ámbito. Además, desarrolla investigación científica, docencia y extensión relacionados con estos temas. El organismo se rige por la ley 20.065 de Modernización, Regulación Orgánica y Planta del Personal del Servicio Médico Legal, la que establece las funciones de la institución, su organización, sus atribuciones y las disposiciones generales que norma se desempeño. Misión Otorgar un servicio altamente calificado en materias médico legal y forense a los órganos de la administración de justicia y la ciudadanía en general, a través de la realización de pericias médicos legales, garantizando calidad, confiabilidad, oportunidad, imparcialidad y trato digno a mujeres y hombres. Desarrollando, asimismo, la investigación científica, docencia y extensión en materias propias de la competencia. Visión Ser como institución del Estado el principal referente científico- técnico en materias médico legales y forenses, con un accionar de calidad, eficiente, oportuno e imparcial. Estructurado, organizado y altamente valorado por la comunidad, aportando a una mejor administración de justicia. Declaración de principios Política de Calidad: El Servicio Médico Legal, entidad encargada de otorgar un servicio altamente calificado en materias Médico Legales y Forenses a los organismos de la administración de justicia y a la ciudadanía, se compromete a mantener y desarrollar su ~ 16 ~ Sistema de Gestión de la calidad para satisfacer a sus clientes y mejorar continuamente la eficacia del Sistema y de sus procesos. Política de privacidad: SML.CL es un Sitio del Gobierno de Chile, administrado por el Servicio Médico Legal. La entrega de datos personales a este sitio es totalmente voluntaria. Si en razón de consultas o peticiones efectuadas por los usuarios, estos entregan datos personales al Portal, éste se entenderá autorizado para su tratamiento en el marco establecido en la Ley 19.628 sobre protección de la vida privada. Tales datos serán protegidos de acuerdo a la ley, y podrán ser utilizados y trasmitidos única y exclusivamente a otros organismos o dependencias públicas, con el objeto de entregar posteriormente la información solicitadas o dar respuesta a las consultas o peticiones hechas por los usuarios a través de él (los) formularios (s). Los datos personales de los usuarios serán utilizados para el cumplimiento de los fines indicados en el formulario correspondiente y siempre dentro de la competencia y atribuciones del Servicio Médico Legal. ~ 17 ~ 8. Desarrollo del internado 8.1. Tareas realizadas durante el Internado En la Unidad de Alcoholemia: 1. Se determinó cuantitativamente la concentración de alcohol en sangre por Cromatografía Gaseosa- Head Space. 2. Se realizó el procedimiento de colección de manchas de sangre sobre papel filtro de las muestras de alcoholemia que fueron analizadas en la unidad para el respaldo del perfil genético. En la Unidad de Recepción de Muestras: 1. Recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística, las cuales son enviadas del Departamento de Clínica. 2. Recepción y entrega de muestras y documentación a la Unidad de Genética y Forense. 3. Se colaboró en la elaboración de procedimientos para la toma de muestras y para la recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística. En la Unidad de Bioquímica y Criminalística: 1. Se identificó cualitativamente la presencia de espermatozoides en una muestra problema por el microscopio. 2. Se determinó cualitivativemente la presencia de diatomeas en una muestra por el microscopio. En la Unidad de Toxicología: 1. Se colaboró en el proceso de extracción de Cocaína en Sangre por fase solida. 2. Se identificó cualitativamente las drogas de abuso a través del panel de drogas en muestras biológicas (orinas). 3. Se auxilió en el inmunoanálisis de las muestras que son ingresadas a la unidad de toxicología, para la identificación de drogas de abuso 4. Se realizó la digestión de vísceras para posteriormente realizar la extracción del toxico. ~ 18 ~ 8.2.Descripción de las tareas más relevantes realizadas en el internado 8.2.1. Unidad de alcoholemia Laboratorio de alcoholemia, que determina la presencia de alcohol y volátiles en la sangre y otros fluidos biológicos. Procedimiento de análisis de alcohol por Cromatografía Gaseosa- Head Space. Objetivo: Determinar cuantitativamente la concentración de alcohol en las muestras biológicas (Sangre, humor vítreo, músculo, bazo o hígado), recepcionadas en la unidad de alcoholemia. Procedimiento: I. El perito revisará la concordancia de la numeración y rotulación entre frasco y boleta de cada muestra, si no hay concordancia y no se ha enviado oficio, deberá comunicarlo a la URM. II. Una vez que este todo correcto, el perito comenzará a cargar las muestras de la siguiente manera: a) El perito agitará manualmente el tubo, para luego abrirlo y tomar 200µl de cada muestra de sangre, en el caso de disponer de poca muestra, cargar 50 µl o 100 µl, considerando el factor a aplicar en la lectura del resultado, por la dilución realizada. Se comenzará por la primera ubicada a la izquierda de la primera corrida, teniendo en consideración que el capilar de la micropipeta este totalmente llena y sin burbujas. b) Depositar la muestra en el vial correspondiente. c) Correr la muestra ya cargada un lugar hacia la izquierda. d) Limpiar el capilar con papel, teniendo el embolo de la micropipeta empujado hasta el fondo, de modo de limpiar el teflón, antes de cargar la muestra siguiente. III. Luego se procederá a adicionar, a cada uno de los viales 1 ml del estándar interno Terbutanol (a temperatura ambiente y previamente agitado), eliminando las burbujas de ~ 19 ~ aire que están en la válvula del dispensador de volumen. Esta acción la puede operar el auxiliar técnico, o el perito. IV. Posteriormente se pondrá el tapón y sobre este el sello metálico presionándolo con la selladora. Una vez terminado el proceso de cargar, el perito debe asegurar que las muestras estén bien tapadas y resguardadas hasta la obtención de los resultados. V. Antes de iniciar el análisis en el Cromatógrafo el perito debe verificar las condiciones del método, el cual se debe introducir las condiciones crormatograficas y Head Space para determinación de Alcohol. VI. El perito o el auxiliar técnico procederá a revisar las boletas de Alcoholemia incluidas en la lista, anotando en el libro de repeticiones de cada lista el código de la muestra que tengan apreciación clínica diferente de sobrio. Con este listado el auxiliar técnico procederá a preparar la cantidad de viales necesarios para cargar las muestras, las cuales corresponden las repeticiones. VII. Un perito distinto del que efectuó la carga inicial de las Listas, procederá a revisar que las muestras ya ordenadas coincidan con el listado y procederá a cargar la(s) muestra(s) en los viales. VIII. Luego el perito ejecutor (encargado de la Lista) Introducirá las muestras a procesar en el Cromatógrafo activando la secuencia de análisis (Set-Up), realizada a partir de la “Creación de una Secuencia”. IX. Registrar las muestras a procesar en el cromatógrafo, en el cuaderno habilitado para estos fines, indicando: Fecha, N° de lista, N° muestras, Repeticiones e iniciales del perito ejecutor. X. La extracción de los resultados se hará de acuerdo al instructivo de trabajo “Summary: obtención de resultados desde una secuencia” XI. El perito ejecutor deberá revisar los cromatogramas de la(s) pericias realizadas, además verificar que no exista(n) otros componentes distintos a etanol, en esos casos deberá informar y cuantificar si corresponde lo detectado. XII. El perito ejecutor transcribirá los valores del análisis al reverso de la boleta de alcoholemia, con lápiz permanente de color rojo, anotando todos los valores obtenidos, incluyendo repeticiones y rezagadas. Los valores de los análisis se promedian (descartándose aquellos alejados o mayores al 6% de C.V.) y se anota el resultado en el ~ 20 ~ frente de la boleta. Se deberá repetir el análisis de las muestras en que sus resultados sean mayores al 6 % de C.V, estas muestras son denominadas como rezagadas. XIII. El perito debe apagar el equipo en cual consiste en; retirar los viales del autosampler, dejar el carrusel del Head-Space en posición de inicio y apagar, apagar el cromatógrafo, impresora y computador y cerrar las válvulas de gases (hidrogeno, aire, nitrógeno). XIV. Finalmente el perito deberá reservar las manchas de sangre para ADN de las muestras analizadas. Rol del Químico Farmacéuticos en dichos procedimientos: Verificar si la muestra corresponde a la boleta indicada. Realizar el método analítico correspondiente, ejemplo: a. Controlando que las presiones de lecturas de los manómetros se encuentren dentro de los parámetros de trabajo determinados (entre 60 y 90 psi de Nitrógeno, Aire y Hidrogeno). b. Encender el equipo (Cromatógrafo de gases, Head- Space, computador con el software a trabajar y impresora) al inicio de la jornada, de modo para ser usado cuando las muestras estén lista para ser analizadas. Posteriormente apagar el equipo cuando se terminen todos los análisis. c. Controlar la curva de calibración semanalmente con los estándares certificados. d. Mantener las muestras y los estándares certifica dos refrigerados, conservando de esta manera la cadena de frio. Analizar y registrar los resultados obtenidos. Criterio para la repetición de los exámenes. Criterios estadísticos Elaborar controles de calidad diarios, los cuales son soluciones de concentraciones conocidas de etanol, basados en estándares certificados, de esta manera se verifica que la serie analítica este dentro de la incertidumbre aceptada en cuanto a la exactitud y precisión de la muestra. Ingresar los resultados. Archivar las boletas. Eliminar las muestras ~ 21 ~ Por último la emisión de los informes; los cuales deben ser firmados por el perito encargado del análisis analítico, el encargado de la unidad de alcoholemia y la jefa del laboratorio. Rol de otros Profesionales Técnicos y demás Personal en dichos procedimientos: El auxiliar técnico: Debe tener todo el material necesario y las condiciones de trabajo adecuado para la elaboración de las soluciones de control de calidad diario de etanol. Debe verificar que el material de vidrio a utilizar se encuentre limpio, seco y en buen estado. Preparar las bandejas a utilizar para cargar las muestras por los peritos. Esta operación se realiza según las muestras de la lista, las cuales normalmente son 30 muestras en cada lista. Se rotulan los viales de 1 al 30 y los controles diarios los cuales son 4, esta rotulación se realiza de distinto color. Luego se procede en colocar los viales en las bandejas de acero inoxidable dejando el primer espacio y último espacio vacío de cada corrida, por lo que quedan 10 viales en cada una de las corridas de la bandeja. Al concluir el trabajo diario el auxiliar deberá limpiar con Germekil® las áreas de trabajo, mesones, áreas de cromatografía, etc. Realizar tareas administrativas como: 1. Anotar las repeticiones de cada lista en el libro de las repeticiones 2. Anotar los datos (numero lote, fecha de elaboración, fecha que se utilizo etc.) de los controles diarios en el libro correspondiente. Colaborar en el peritaje, como: 1. Auxiliar al perito en la eliminación de las muestras correspondiente a la fecha de eliminación. 2. Almacenar las muestras en sus respectivas gradillas según el orden de la lista correspondiente. 3. Adicionar el estándar interno a la muestra analizar 4. Realizar el sellado de los viales con las muestras correspondientes. 5. Mantener el lugar limpio y realizar el aseo del área cuando corresponda. ~ 22 ~ Secretaría administrativa Encargadas de emitir los informes de alcoholemias cuando correspondan, colocando los datos personales de la persona la cual se le analizo la muestra. Posteriormente el despacho de los informes si es que son solicitados por fiscalías o por otras autoridades. Procedimiento colección de manchas de sangre sobre papel filtro para su respaldo. Objetivo: El objetivo de este procedimiento es establecer la reserva de mancha de sangre en papel filtro de todas las muestras analizadas de en la unidad de alcoholemia, para su posterior utilización en el Laboratorio de Genética Forense, en futuras confirmaciones de identidad. Procedimiento: 1) Verificar el orden de las muestras en su gradilla, con el orden dado en la tarjeta de papel filtro, la cual fue diseñada por el técnico de la unidad. 2) Luego agitar manualmente el tubo que contiene la muestra y abrirlo. 3) Con la punta de la micropipeta tomar 50 µL aproximadamente de sangre del tubo que se está realizando el peritaje, luego extender la muestra al cuadro que corresponda al número de la muestra, de manera tal que forme un circulo. 4) Esto se debe repetir hasta completar toda la lista. Se debe cambiar la punta de la micropipeta cada vez que se cambie de muestra, posteriormente depositar las puntas utilizadas en el recipiente de eliminación correspondiente. 5) Una vez cargado toda la lista, dejar secar la tarjeta de papel filtro a la sombra, por un periodo de 24 horas, para asegurar su completo secado. 6) Una vez que terminado el proceso de secado, guardar las tarjetas ya secas en sobres de papel café, identificando fuera del papel el número de la lista que corresponde la tarjeta. 7) Agrupar mediante el uso de elásticos, 10 listas y almacenarla en su caja correspondiente para el resguardo manchas ADN alcoholemia. 8) Finalmente limpiar la campana de extracción y toda superficie que haya sido expuesta a las muestras de sangre. Esta limpieza se realiza mediante el uso de Germekil®. Además se debe guardar todos los materiales que fueron utilizados. ~ 23 ~ Observaciones: El procedimiento es aplicable a las muestras de sangre que ingresan a la unidad de Alcoholemia para peritajes y que podrían ser derivadas a la unidad de ADN, para determinar el perfil genético de la persona. Esta colección de sangre deberá efectuarse previo al proceso de carga de las muestras respectivas para así asegurar la no contaminación de las mismas. Las muestras reservadas para este fin serán guardadas por 5 años, para confirmaciones de identidad con gran posterioridad. Tras los 5 años podrán ser eliminada Rol del Químico Farmacéuticos en dichos procedimientos: Asegurar que las muestras que fueron analizadas tengan efectuada las manchas de sangre sobre el papel filtro. Programar los insumos necesarios que serán requeridos para la ejecución del ensayo y definir las funciones que cumplirán los técnicos que trabajan en la Unidad. Rol de otros Profesionales técnicos y demás Personal en dichos procedimientos: El auxiliar técnico: Diseñar las tarjetas para la colección de manchas de sangre como lo establece la Institución. Colaborar en el procedimiento al perito, sin embargo los peritos encomiendan realizar el procedimiento al técnico, debido a la carga laboral de peritaje. Guardar las tarjetas del día anterior con la mancha de sangre para su respaldo genético. Limpiar y ordenar el lugar donde se realizado la colección de manchas. ~ 24 ~ 8.2.2. Unidad de Recepción de Muestras (URM) La unidad de Recepción de muestras junto con la toma de muestra, es aquella que realiza, recibe, codifica, custodia y distribuye muestras y/o evidencias. Procedimiento para la recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística. Objetivo: Establecer las acciones para ejecutar la recepción de muestras y los fundamentos bajo condiciones que aseguren calidad, identidad, integridad, resguardo y privacidad, tanto de las muestras, como de su respectiva información y documentación. Procedimiento: 1. Recepción de la muestra a) Las muestras deben ser recibidas por el técnico de laboratorio o el encargado de la Unidad. b) Las muestras para análisis Bioquímico y Criminalística son recibidas en la URM, las cuales son derivadas de: Departamento de Clínica (Unidad Sexología Forense) Departamento de Tanatología (Unidad sala de autopsia) Fiscalía o Tribunales de Justicia PDI ( Policía de investigaciones de Chile) Carabineros SML de Regiones. c) Una vez recibidas las muestras se procede a verificar si corresponden a las muestras enviadas; para esto se realiza lo siguiente: I. La muestra debe venir acompañada de la Cadena de Custodia (N.U.E). Además se debe revisar si esta se encuentra con todos sus datos correspondientes; como por ejemplo, la descripción de la muestra que acompaña, la firma del que levantó la evidencia, los nombres y firmas de las personas que han manipulado la muestra, ya sea en su traslado, custodia o peritaje; etc. ~ 25 ~ II. Revisar si la muestra se encuentran en buen estado, cumpliendo con las condiciones correspondientes de almacenamiento (dependerá del tipo de matriz) y su rotulación de acuerdo al contenido. III. Luego revisar si viene con el Oficio del Tribunal (R.I.T., R.U.C. y R.O.L.) y la boleta interna del SML, detallando el análisis a realizar, el cual debe estar correctamente completa por el profesional a cargo. Si la muestra no cumple con algún punto escrito anteriormente, esta no será recepcionada y será devuelta a la unidad de origen para su corrección. Por el contrario si la muestra cumple con todos los requisitos, esta será recepcionada firmando el Registro solicitado de la entrega y la Cadena de Custodia como receptor 2. Ingreso de la muestra al sistema: El Técnico procede a ingresar la muestra en el Sistema Informático OSSAN: a) Eso lo hace a través de un servidor institucional. b) Una vez ingresado al OSSAN se dirige a “Actas de recepción”, aquí se completa la ficha del donante de la muestra. c) Terminado de completar los datos se genera el documento “Acta de Recepción Muestras Externas”, el cual se imprime en duplicado. Este documento debe estar firmado por el técnico de laboratorio responsable. d) Finalmente se realiza la entrega de muestra a recepción técnica en el Sistema Informático. 3. Codificación de la Muestra y armado de carpeta con los antecedentes: a) Se codifican las muestras con los códigos de las muestras entregados por el sistema en la Recepción Técnica. Esto se procede de la siguiente manera: I. Para las muestras se adhiere una etiqueta con el código de la muestra impreso y se refuerza con una cinta adhesiva trasparente. II. Para la documentación (carpeta del caso y el acta de recepción de la muestra), se escribe con lápiz de color rojo el número de codificación en la muestra. b) Posteriormente en una carpeta se colecta todos los antecedentes de cada caso: I. “Acta de Recepción Muestras Externas” en duplicado y firmado por el técnico encargado. II. Oficio solicitud del tribunal, Fiscalía o documento interno ( boleta del médico) ~ 26 ~ III. Formulario Único de Cadena de Custodia (N.U.E), el cual debe estar correctamente firmado. c) El técnico al término de codificar las muestras procede a firmar las cadenas custodia para hacer la entrega al encargado de la unidad. d) Luego en el sistema OSSAN se genera “La Carpeta de Bioquímica”, el cual además arroja el número de la carpeta a periciar. Este número se coloca manualmente en la tapa de la carpeta. e) Una vez terminado el proceso de ingreso de todas las muestras a recepcionar durante el día, se prosigue a generar en el OSSAN la lista de entrega de URM a la Unidad Bioquímica y Criminalística (UBQ). f) Antes de realizar la entrega a la UBQ el Encargado debe revisar cada una de las muestras que fueron codificadas y todos los documentos que acompañan la muestra con la lista que fue arrojada en el sistema OSSAN. g) Se debe procurar que la última persona que firma la Cadena de Custodia es el encargado de la entrega de la muestra h) Una vez que estos todos correcto se procede a entregar las muestras a la UBQ, con una caja cerrada con sello enumerado junto con la hoja de la lista de muestras enviadas al laboratorio de Bioquímica y Criminalística, la cual está firmada con el encargado de la URM. Las carpetas de los casos es entregado a la coordinadora del laboratorio, quien designara las carpetas a los peritos de la UBQ. i) Por último, se debe enviar devuelta al área la lista firmada de las muestras que fueron enviadas a la UBQ, como prueba de confirmación de la recepción conforme de las muestras. Este procedimiento es aplicable a todas las muestras y antecedentes que ingresen a la unidad de Recepción de Muestras del SML Santiago, para análisis Bioquímico y Criminalística. ~ 27 ~ Procedimiento para la recepción y entrega de muestras y documentación para la Unidad de Genética y Forense (UGF) Objetivo: Establecer acciones y metodología para recepcionar, ingresar, preparar, revisar, y distribuir muestras y antecedentes de exámenes de ADN Paternidad que se que se realizan en la Unidad de Genética Forense del SML de Santiago y son requeridos por los Juzgados. Procedimiento: 1. Descripción del proceso: a) La unidad de URM se encargara de recibir, ingresar y distribuir las muestras y antecedentes de exámenes de ADN Paternidad, que sean solicitados por los juzgados. La manipulación de las muestras será solo externa, es decir, que la unidad hará una revisión de los datos que estén a la vista y no abrirá, ni alterará sobres, frascos, recipientes o cualquier contenedor de las muestras. b) Las muestras y antecedentes serán enviados desde la Sub-Unidad de Toma de Muestra y los SML Regionales a la URM, con documento de presentación (Memorándum, Ordinario, Oficio, Reservado, Etc.) Y la orden de trasporte, estos son considerados como requisitos mínimos para el ingreso a la Unidad. 2. Recepción de Muestras/ Caso en FTA de SML Regionales, para ADN Paternidad: a) La administrativa (encargada de ingresar las muestras al sistema) ingresa la encomienda, procurando con anterioridad que venga todo lo mencionado en la orden de trasporte. Para realizar el ingreso, se debe ingresar el número de orden de trasporte, el documento de presentación, el laboratorio de destino, la fecha de envio, la fecha de llegada y el funcionario que realiza el ingreso en el Sistema OSSAN. b) Luego, la administrativa deja las muestras de las encomiendas ingresadas en una caja que dice Abrir Paternidad, se encuentra en el refrigerador. c) Posteriormente la administrativa/o tomar de la caja Abrir Paternidad, los casos que se disponen a ser revidados para su posterior ingreso. d) Revisar los casos de paternidad, verificando que estos cumplan con la Política de aceptación y rechazo de la Unidad de Genética Forense del SML Santiago. ~ 28 ~ e) En detalle la muestra o el Caso debe tener la siguiente documentación: I. Oficio remisor (Memorándum, Ordinario, Oficio, Reservados, ect.) detallando el caso con el timbre y la firma del emisor. II. Boleta de Paternidad, para muestras del SML Regionales u otros servicios. III. Acta de Recepción y Envió de Muestras. Para muestras de SML Regional. IV. Orden del Juzgado. V. Fotocopia de cedula de identidad de los donantes. Verificando que los datos del donante (nombre y número de cedula) sean los mismos en la Boleta de Paternidad y en el oficio del juzgado y, que a su vez, este toda la información de la documentación, que individualiza la causa y los donantes, correspondan entre sí. VI. Fotografías de donantes presuntos (Padre, Madre, Abuelos en representación del rol presunto) y de bebes y niños menores de 10 años. VII. VIII. Cartola de huellas dactilares del Presunto Padre Cadena de Custodia con o sin NUE, correctamente llenada, es decir, indicando la Descripción de la Muestra, Rotulo, Número de Causa, los datos de quien toma la muestra y todos quienes se involucren en los procesos de esta. f) Las Muestras que han sido tomadas en la Unidad de Toma de Muestras en el SML de Santiago No contarán con Boleta de Paternidad, ya que esta es reemplazada por el Acta de Toma de Muestras. g) El sobre metálico debe tener: Iniciales del nombre completo del donante a quien corresponde la muestra. Número de Folio de la Tarjeta FTA. Vínculo del Donante. Rótulo. Firma del Donante Nombre y Firma del Técnico de Enfermería que tomo la Muestra y del Supervisor de URM. h) Corroborando los datos de la documentación del caso con el Acta de Recepción y Envió de Muestras. Una vez que este todo correcto el operador firma, timbra y coloca la fecha de recepción al Acta de Recepción. ~ 29 ~ i) Confirmando que todo este correcto, se firma la cadena de Custodia para luego ingresarlo en la base de datos en que se registran las muestras de ADN Paternidad en el OSSAN. Los casos que no cumplan con todos los requisitos serán devueltos y/o rechazados. 3. Ingreso de muestras de Regiones y generación de Acta de Toma de muestras (Recepción Administrativa): a) Se ingresan las muestras enviadas desde los SML Regionales, para su posterior envio a la UGF. b) La administrativa recoge las muestras, de los casos que se disponen a ser ingresados. c) Terminado el ingreso de los casos ingresados en el sistema, debe imprimir dos copias del “Acta de toma de muestras” y firmarlas. En el acta está presente el Numero de Recepción, que será el Rótulo de la muestra. d) Luego, la administrativa debe registrar el Rótulo en el sobre metálico que contiene la FTA con la muestra y firmar la Cadena de Custodia. e) Finalmente, dejar todas las muestras y casos, ya ingresados, junto con la lista en el refrigerador (ubicado en el Área de Trabajo de Muestras). En este momento las muestras están listas para ser codificadas. 4. Codificación de muestras en FTA de SML Regiones (Recepción Técnica): a) Se codifican las muestras enviadas desde los SML de Regiones, para su posterior envió a la UGF. b) El Técnico recopila todos los casos ingresados, junto con la lista que lo acompaña. Esto se ubica en el refrigerador en el lugar de trabajo. c) El Técnico separa las muestras de los antecedentes, dejando la Cadena de Custodia adosada a la muestra. d) Finalmente se chequea que los antecedentes del caso tengan toda la documentación necesaria para el ingreso a la UGF. Para esto se adjunta en la cara de la carpeta el Formulario de revisión de antecedentes, que facilita la revisión de los antecedentes que acompañan al caso de una manera rápida y visible. Una vez revisado con el formulario el técnico procede a firmar y colocar la fecha que se realizo la revisión. ~ 30 ~ e) Además se debe verificar que el Rótulo que aparece en el Acta de Recepción sea el mismo que aparece en el sobre metalizado que le corresponde y luego se procede a firmar la Cadena de Custodia. f) Las muestras/casos que se encuentren aptas para codificar, se debe generar la Recepción Técnica. Si en la lista hay muestras que no cumplen los requisitos de administrativos o técnicos, el destino es Rechazo. g) Luego de generar la recepción técnica, aparece el documento de la recepción técnica, con un número correlativo, con las muestras ingresadas de la recepción Administrativa. Esta lista presenta el Rótulo, Código de la muestra, Lugar de destino (Laboratorio) y Nombre del Destino (ADN paternidad). h) Generar la tira adhesiva con los Códigos de Paternidad, la lista de Recepción Técnica y las muestras según listado, pegarle el código a la muestra según se haya asignado por número de rotulo. i) El código correspondiente a la muestra deber ser escrito de color rojo en la cadena de custodia, en el Acta de Recepción, en la Boleta de Paternidad y en el rotulo de la carpeta. j) Luego dejar las muestras, con sus respectivas Cadenas de Custodias, fuera de las carpetas pero junto al grupo de carpetas que le corresponden, en el refrigerador ubicado dentro del Área de Trabajo de Muestras, para su posterior supervisión. k) Tomar la o las listas de Recepción Técnica, que se hayan generado durante la jornada y dejarlas archivadas en el Archivador Recepción Técnica 2013, que se encuentra en la Sala de Archivo de la URM. 5. Supervisión y generación de la lista con muestras para envió a UGF: En este paso las muestras junto con los casos serán revisados por última vez, para luego ser enviado a UGF. a) El encargado (Químico Farmacéutico) de la Unidad toma todos los casos codificados del refrigerador ubicado dentro del Área de Trabajo de Muestras, los cuales esperan la revisión. b) Revisar que los antecedentes del caso tengan toda la documentación necesaria para el envió a la UGF. Para esto el formulario de revisión de antecedentes; servirá de apoyo para la confirmación de los antecedentes que acompañan al caso. Una vez que este ~ 31 ~ todo correcto el Supervisor (Químico Farmacéutico) debe firmar si están todos los documentos que solicita la normativa. c) Luego revisar los datos contenidos en el Acta de Recepción con todos los antecedentes: Datos del donante. Datos de la muestra. Número de causa. Nombre del Juzgado. Etc. Rotulo (Número de Recepción), verificando que sea el mismo que aparece en el Acta de Recepción con que aparece en el sobre metalizado que le corresponde. d) Una vez que este todo revisado, se procede a firmar la cadena de Custodia. e) El Supervisor debe disponer de una caja con número y un sello para Generar la Lista de Muestras para envió a la UGF. f) Una vez generada la lista, colocar las muestras que están en la lista en una caja y cerrar la caja con el sello correspondiente, en que está escrito en la lista creada. g) En este momento el grupo de muestras están listo para ser entregado, procurando firmar la lista generada por el Supervisor y colocándole la fecha y hora de la entrega a UGF. h) El Químico farmacéutico separa las muestras de los antecedentes, ya que siguen distintas vías en el envió. Las muestras se agrupan en una lista para envió a la UGF y los antecedentes en otra lista para la entrega a la coordinación. 6. Armado de Casos completos, generando el número de Paternidad y entrega a la coordinación: En este punto se les asigna un número de paternidad los casos, el cual se agrupan las muestras relacionadas, según el número de la causa. a) El Farmacéutico debe tomar todos los casos que fueron revisados, los que se ubican en el Área de Trabajo del Supervisor. b) El Supervisor debe buscar en el Sistema Informático las muestras y/o antecedentes existentes para buscar el caso. ~ 32 ~ c) Si el caso cuenta con las muestras necesarias para realizar el examen, debe generar un Número de Paternidad. El cual debe estar escrito en el rotulo de la carpeta. d) Finalmente se genera una lista de entrega de casos a la coordinación para la distribución a peritaje. Rol del Químico Farmacéutico en dichos procedimientos: Coordinar y supervisar las actividades y funciones que se realizan en la URM Planificar e informar las actividades de los funcionarios de la Unidad. Coordinar actividades de contingencia en casos especiales o de emergencia. Abastecer de los recursos necesarios para garantizar el funcionamiento de las actividades, del personal, de los materiales e insumos. Preocuparse del almacenamiento correcto de las muestras, mientras están en custodia en URM o de traslado a otra unidad. Rol de otros Profesionales técnicos y demás Personal en dichos procedimientos: El auxiliar técnico: Recibir, revisar, ingresar y codificar las muestras y documentación necesaria para la recepción de los casos que son enviados al laboratorio. Rechazar casos que no cumplan con los requisitos técnicos. Realizar rechazo de los casos, que hubieran pasado la recepción Administrativa, mediante Recepción Técnica. Administrativo: Revisar y recibir muestras y documentación necesaria para el ingreso de los casos del laboratorio. Rechazar casos que no cumplan los requisitos administrativos. Realizar devolución de los casos mediante Memorándum interno indicando el motivo del rechazo. ~ 33 ~ 8.2.3. Unidad de Bioquímica y Criminalística El Laboratorio de Bioquímica y Criminalística, realiza análisis de fluidos corporales, los cuales sirven de apoyo a peritajes de agresiones sexuales, entre otros. Además esta unidad está encargada de la detección de espermatozoides en tórulas y prendas. También realiza la observación de Plancton pulmonar, del agua del sitio del suceso, detección de diatomeas en medula ósea. Procedimiento identificación de espermios en diversas especies Objetivo: Identificar espermios en tórulas, prendar de vestir, y diversas especies que ingresen al laboratorio de Bioquímica y Criminalística del Servicio Médico Legal de Santiago. Este procedimiento se aplica a todas las evidencias de delitos sexuales, procedentes de Fiscalía, Tribunales de Familia, Sexología Forense y Tanatología tanto de Santiago como de Regiones. Procedimiento del tratamiento de muestras en la Unidad de Bioquímica: 1. Recepción de la muestra a) Recepción de la caja de seguridad desde URM, la cual debe llegar con su respectiva documentación. b) Posteriormente se abre la caja de seguridad, la cual contiene las muestras; verificando cualquier anomalía que pudiera haber, y que afecte la calidad de la muestra. Aquí las tórulas se separan y se dejan en el secador. c) Una vez que el estado de la muestra este correcto el perito ejecutor procede a reunir toda la información relacionada para formar la carpeta. 2. Recopilación de la información a) Cada muestra debe estar acompañada de su respectiva carpeta con la siguiente información: Anamnesis, la cual es solicitada a la Unidad de Sexología Forense. Acta de recepción de muestras. Boleta de Ginecología Forense o Boleta de Teratología. Parte policial. ~ 34 ~ Cadena de custodia. Oficio revisor de Fiscalía y Tribunales. 3. Tratamiento de las muestras a) Todas las muestras deben ser revisadas y deben corresponder a los códigos de las muestras con la información recibida. b) Luego se procede a sacar la tórula de su envase y colocarla en gradilla, para evitar confusión, este acto es realizado cuando las muestras son recepcionadas, independiente de si estén o no asignadas. c) Finalmente dejarlas secar por un periodo de una o dos horas antes de comenzar con el peritaje. 4. Observación: Las tórulas que llegan al laboratorio pueden extraerse en: Contenido bucal Contenido vaginal Contenido rectal. Todas las muestras y evidencias encontradas en la víctima que puedan ser derivadas al Servicio Médico Legal deben ir claramente caratuladas (rotuladas), en cajas selladas (esto incluye prendas) adjuntando el informe médico legal y la orden del fiscal o tribunal en tal sentido. [2] Antes de realizar la identificación de espermatozoides en las muestras se realiza la detección de fluido seminal; para esto se realiza la reacción de confirmación de la GammaSeminoproteina (p30) con la técnica inmunocromatográfica ABAcard® p30. Luego de realizar esto se procede a la técnica específica de espermatozoides por observación microscópica previa tinción Árbol de Navidad. Procedimiento para la detección cualitativa del Antígeno Prostático Especifico, conocido también como anti p30 1) Permitir que la muestra alcance temperatura ambiente, en caso de haber estado congelada 2) Luego realizar la extracción de la p30 de la mancha, se debe efectuar con 750 microlitos de la solución salina amortiguada durante dos horas. ~ 35 ~ 3) Remover el Kit comercial y el cotero de sus empaques sellados. 4) Rotular el dispositivo con el numero del registro del caso analizar. 5) Luego pasado las dos horas agregar 8 gotas (aproximadamente 200 µl) del macerado de la mancha o del sobrenadante. 6) Luego se dejan caer en el sector de la placa destinado a tal efecto. Finalmente se esperan unos 10 minutos. 7) Cuando hayan trascurrido los 10 minutos se lee el resultado. Un resultado positivo puede leerse después de tan solo un minuto, esto dependerá de la concentración de la p30 y para un resultado negativo el tiempo o de espera máximo es de 10 minutos. 8) La aparición de dos bandas de color rosas (una en el área de aprueba “T” y la otra en el área de control “C” indicaran una reacción positiva (indicando que el nivel de p30 es mayor a 4ng/ml) mientras que la aparición de una sola banda rosa(en el área de control) indicará un resultado negativo, es decir, no se encuentra el p30 en concentraciones mayor a 4ng/ml 9) Observaciones: Esta prueba es inválida si no existe la línea rosa visible en el área de control. Además la presencia de dosis elevada puede dar resultados falsos negativos, esto puede ocurrir en fluidos seminal sin diluir. Imagen: Representa el kit comercial, el cual es utilizado para la detección cualitativa del antígeno prostático especifico (p30). Procedimiento para la identificación de Espermios en tórula a) Rotular los tubos Eppendorf, con el número correlativo interno que la Unidad de Recepción de Muestras le dispone a las torulas al ser codificadas. Los tubos Eppendorf tienen en su interior la solución PBS (Fosfato Buffer Salino), el cual es similar a la osmolaridad del medio biológico que se encuentran los espermatozoides en los genitales. Antes de rotular los tubos de Eppendorf se deben colocar a baño María ~ 36 ~ para descongelar el fosfato, ya que estaban en el refrigerador. Los tubos con la solución PBS en su interior so preparadas anteriormente por el técnico de la Unidad. b) Luego con un bisturí se procede a cortar una punta de la cabeza de algodón de la tórula a periciar. Aproximadamente se corta el 3% de la muestra c) Posteriormente se deposita la muestra en un tubo Eppendorf que contenga 300 µl de PBS en su interior. d) A continuación se deja reposar la muestra una hora. Agitando manualmente cada 30 minutos. Como medida de control, cada vez que se corta una tórula, se elimina el bisturí y el soporte. e) Luego de haber cumplido la hora de espera, se procede con un instrumento adecuado, previamente esterilizada, se toma e trozo de algodón con muestra, y se comprime en contra de las paredes del tubo Eppendorf, con la finalidad de extraer la máxima cantidad de muestra biológica adherida al algodón de la tórula. Posterior a esto se desecha el trozo de tórula. f) Posteriormente se centrifuga el contenido, por un tiempo de 10 minutos. g) Luego con la ayuda de una micropipeta, se extrae todo el material biológico ubicado en el fondo del tubo Eppendorf, para luego sembrarlo en un portaobjeto. Cabe destacar que el portaobjeto debe ser rotulado de la misma manera que se opero en el rotulado del tubo Eppendorf , es decir, con el número correlativo interno de la muestra. h) Una vez sembrado todas las muestras en los portaobjetos, se colocan en la placa calefactora, hasta secar el portaobjeto con las muestras biológicas sembradas. i) Terminado el proceso de secado, se debe fijar a siembra, para esto se agrega cantidad suficiente de fijador (Alcohol: Éter 1:1) como para cubrir el espacio de la siembre. Posterior dejar secar en placa calefactora. j) Luego de finalizar el proceso de fijación, se procede con la etapa de tinción Kernechtrot - Picroindigocarmin conocida como Tinción Árbol de Navidad. La Tinción Árbol de Navidad se realiza de la siguiente manera: k) La Coloración con Nuclear Fast Red: Se agrega una cantidad suficiente de solución de Nuclear Fast Red (intercalante) al portaobjeto, es decir, cubriendo el lugar de sembrado. Luego dejar actuar por un tiempo máximo de 20 minutos. Una vez ~ 37 ~ finalizado el tiempo controlado por un timer, se debe lavar el portaobjeto con agua destilada. l) La Coloración con Picroindigocarmina: Con el portaobjeto lavado, post Coloración Nuclear Fast Red, se procede agregar una cantidad suficiente del colorante Picroindigocarmina en el lugar de sembrado, por un tiempo de 2 minutos. Luego de pasar los 2 minutos controlados por un timer, se debe lavar el portaobjeto con etanol. m) Finalizado el proceso de coloración con ambas tinciones se efectúa colocar todos los portaobjetos analizados en la placa calefactora para su secado. a) Posterior a esto, se realiza al montaje de la muestra, para esto se agrega cantidad suficiente de medio de montaje (agregando gotas de Eukitt) para su fijación definitiva cubriendo con un cubreobjeto. b) Dejar secar en el manto calefactor, y luego proceder a observar las muestras en el microscopio. c) De ser positivo para semen, se observa las cabezas espermáticas de color rojo carmín brillante, y las colas espermáticas las que deben ser observadas de color verde- azulado. Los criterios de morfología de espermatozoides: Tamaño aproximado de cabeza 5 µm de alto x 2µm de ancho. La cabeza del espermatozoide es de color rojo carmín brillante y la cola del espermatozoide es de color verde- azulado. Bitonalidad, rojo intenso cercano a la cola (caudal) y rojo claro hacia la zona apical. (acrosoma) Presencia de cola. (no excluyente). Se debe guardar la tórula con el resto de la muestra, ya sea, para eliminarla o bien para ser enviada a la Unidad de Genética y Forense; siempre y cuando resulte positiva. Microscopio ideal para detección de espermatozoides: Iluminación LED que asegure estabilidad de color y potencia suficiente para el uso con objetivos de gran aumento. Objetivos de tipo N plan o equivalente para 4x, 10x y 100x Objetivo Plan Apocromático 40x, el más usado para discriminar visualmente os espermatozoides y para la documentación de imágenes. ~ 38 ~ Cámara CCD o CMOS con conexión Firewire o USB 3, de lo menos 3 Mega píxeles. La visualización microscópica de espermatozoides sigue siendo considerada la prueba definitiva para la demostración de esperma en los laboratorios de biología forense. [3] Procedimiento para la identificación de Espermios en prendas: a) Cortar un pedazo pequeño de prenda en los lugares donde se observe fluorescencia, color blanco grisáceo que va tornando color amarillento o que posea una consistencia apergaminada. Cabe destacar, que se debe marcar con un número el lugar donde se realizo el corte de la prenda, de esta manera si se requiere otro peritaje para confirmar la identidad de la víctima se sabe el lugar donde correspondió el corte de la prenda analizada. Anterior al corte de la prenda se procede a fotografiar la prenda, dejando un respaldo de la muestra antes del análisis. b) Luego se deposita el pedazo cortado de la prenda en un tubo de Eppendorf que contenga PSB. Recordar que el tubo de Eppendorf debe estar rotulado con el número del lugar donde se corto la prenda analizada. c) Posteriormente se deja reposar durante una hora. d) Finalmente se deja reposar una hora la muestra. e) Una vez cumplido la hora de espera, con un instrumento adecuado esterilizado, se toma el trozo de tela con muestra, y se comprime en contra de las paredes del tubo Eppendorf, con el fin de extraer la máxima cantidad de muestra. f) Posterior a esto se centrifuga el contenido, por un tiempo de 10 minutos. g) En seguida con una micropipeta, se extrae todo el material biológico ubicado en el fondo del tubo Eppendorf, para luego sembrarlo en un portaobjeto. h) Una vez sembrado y rotulado con el número correspondiente a la ubicación de cada corte de la prenda analizar, se procede al secado en la placa calefactora. i) Terminado el secado se lleva a cabo los siguientes pasos de la misma forma que en el procedimiento de identificación de espermios en tórulas; en cuanto a: fijación en el portaobjeto, tinción del árbol de navidad, montaje. ~ 39 ~ Cabe destacar, que se debe realizar un secado en la placa calefactora en cada uno de estos pasos anteriores. j) Una vez efectuado todos los pasos anteriores, se realiza la identificación de espermatozoides por el microscopio del peritaje ejecutado. Imagen: Visualización en microscopio de luz visible de espermatozoides (Objetivo: 40x) Procedimiento para la preparación de frotis para la observación en medula ósea Objetivo: Identificar diatomeas en medula ósea (esternón, costilla, fémur) pulmón, hígado, sangre la cual es enviada de tanatología de Santiago como de Regiones y por último agua del sitio del suceso el cual es entregado por la Policía de Investigaciones de Chile (PDI) o Carabineros de Chile, las cuales ingresadas a el laboratorio de Bioquímica y Criminalística del Servicio Médico Legal de Santiago. Procedimiento: a) Se debe revisar toda la documentación que acompaña la muestra, antes de realizar el peritaje correspondiente. De modo de asegurarse que todo este de manera correcta. ~ 40 ~ Los documentos que acompañan a la muestra son: Cadena de custodia (con todas las firmas de los usuarios que participaron en la recopilación de la evidencia) Boleta correspondiente a la orden del médico Acta de recepción Informe de la autopsia (si es solicitado, solamente). b) La preparación del frotis: 1) Lavar la muestra con abundante agua destilada, para eliminar los restos de impurezas (Lo ideal es repetir este paso unas tres veces.) 2) Luego usando la sierra o tijera, según sea la necesidad, se realiza un corte transversal del hueso para exponer la medula. 3) Posteriormente raspar con un bisturí la medula y colocar el raspado en un tubo falcón. 4) Luego de depositar la muestra en el tubo de falcón, se le debe agregar 25 ml de Ácido Nítrico. 5) Dejar reposar por toda la noche a temperatura ambiente con tapa sobrepuesta. 6) Al otro día se debe calentar a baño maría por 45 minutos a 90 grados Celsius en la placa calefactora. 7) Una vez pasado los 45 minutos, dejar enfriar. 8) Luego agregar 2.5 ml de hexano y a continuación agitar en el vortex por 2 minutos. 9) Posteriormente centrifugar 10 minutos a 3500 RPM. Terminado de centrifugar, retirar y descartar el sobrenadante, dejando alrededor de 1 ml de sedimento. Esto se bebe repetir a lo menos 3 veces. 10) Luego al sedimento, agregar 10 ml de agua destilada, agitar en el vortex por 2 minutos y centrifugarlo por 10 minutos a 3500 RPM. Esto se debe repetir a los menos 3 veces 11) Retirar y descartar el sobrenadante dejando alrededor de 20 µl de sedimento. 12) Finalmente resuspender y montar en portaobjeto. 13) Dejar secar en placa calefactora, agregando una gota e Entellan o Eukit. Luego colocar el cubreobjeto, dejando secar por 30 minutos. 14) Finalmente se procede a observar en el microscopio la muestra bajo luz blanca y polarizada. ~ 41 ~ Microscopio ideal para observación de plancton pulmonar, agua del sitio del suceso, diatomeas en medula ósea: Iluminación LED que asegure estabilidad de color y potencia suficiente para uso con objetivos de gran aumento. Objetivos de tipo N plan o equivalente para 4x, 10x y 100x de contrate de fase. Dispositivo para luz polarizada para discriminar estructuras ópticamente activas (cristales, fibras) de silicatos amorfos, tales como las diatomeas. Cámara CCD o CMOS con conexión firewire o USB 3, de a lo menos 3 mega pixeles. Imagen: Visualización en microscopio de luz visible de Diatomeas Neidium 200 Rol del Farmacéuticos en dichos procedimientos: Asistir a juicios orales, cuando es solicitado por el Juzgado de Garantía o el Tribunal Oral en lo penal. Aquí el perito deberá en forma verbal en estrados, dar a conocer su análisis, como medio de prueba pericial. Efectuar los informes escritos, sobre los peritajes analizados cada mes. Llevar a cabo los análisis de la identificación de espermios y diatomeas en diversas matrices. Enviar tórulas positivas (con presencia de espermios) a la Unidad de Genética forense para determinar si un patrón de ADN encontrado en el indicio proviene del imputado, de un tercero o corresponde a la propia víctima. Ejecutar los procedimientos de los análisis realizados para la acreditación de la Unidad. ~ 42 ~ Rol de otros Profesionales técnicos y demás Personal en dichos procedimientos: El auxiliar técnico: Preservar en custodia las muestras que han sido analizadas por los peritos, en el lugar correspondiente a reservas. Realizar la recepción de la caja de seguridad desde URM, la cual debe estar con la documentación respectiva. Aquí el técnico debe revisar cada una de las muestras con su documentación y ver si coindicen con la hoja con el listado de muestras y numero de sello de la caja de seguridad. Sin embargo cualquier anomalía sobre la recepción de las muestras; debe proceder a comunicarlo al encargado de la Unidad. Conservar adecuadamente el almacenamiento de las muestras a analizar: Las prendas de vestir que tengan manchas de semen o sangre, deben ser secadas al aire, a fin de evitar la proliferación de hongos u otros microorganismos que interfieran en el análisis. Las tórulas deben estar embebidas en suero fisiológico (no sumergido) y colocadas en un tubo de ensayo seco y rotulado que debe conservarse refrigerado. Preparar los reactivos correspondientes para el análisis de identificación de diatomeas y espermatozoides. Ejemplos de los reactivos a preparar en el caso de el análisis de espermios: Tinción Árbol de Navidad (Picroindigocarmina y Nuclear Fast Red) Ayudar al perito a realizar los peritajes a solicitud del perito. ~ 43 ~ 8.2.4 Unidad de Toxicología e Instrumental En el laboratorio de Toxicología, se encarga de la detección de presencias de drogas o abuso de medicamentos y tóxicos en general. En el laboratorio de Instrumentación, se confirma y cuantifica la cantidad de sustancias químicas halladas. Procedimiento para el proceso de extracción de Cocaína en Sangre por fase solida (SPE) Objetivo: Cuantificar Cocaína a partir de una matriz biológica (sangre). Esto se realiza a través de una Extracción en Fase Solida (SPE), la cual es una técnica preparativa que el analista utiliza para limpiar la muestra previa a la cuantificación y/o para futura concentración del analito que está presente en la muestra. El término” extracción en fase solida” es debido a que el material de soporte utilizado es un sólido, a través del cual pasa un líquido o un gas. Los analitos son absorbidos en el soporte y luego eluidos de acuerdo a sus diferentes afinidades entre el material absorbente y la fase móvil utilizada. Procedimiento: 1. Dilución de las muestras y Adicción de Estándar Interno a) Tomar un tubo de centrifuga de 15 ml y adicione 0,5 ml de sangre y verifique el rotulo con la hoja de trabajo de los casos que fueron entregados al perito. Esto se realiza bajo campana de extracción. b) Adicione 8,0 ml de solución tampón dihidrogenofosfato de potasio 0,1M (KH 2PO4). c) Adiccione a la muestra 15 µl de estándar interno de Cocaina-D3 (10µg/ml) y/o estándar interno de Benzoilecgonina -D3 (20 µg/ml). d) Además se beben preparar bajo las mismas condiciones los controles y el blanco sangre. e) Luego se debe homogeneizar por medio de agitador horizontal durante 10 minutos y luego centrifugar a 3500 rpm durante 10 minutos. ~ 44 ~ 2. Etapa de Activación y Acondicionamiento en la extracción en fase sólida a) La Activación, es el primer paso en la que se utilizan solventes orgánicos para humidificar la fase. En este procedimiento no es necesario la activación de las columnas, ya que hay algunas marcas de columnas que ya vienen activadas, como por ejemplo las Waters Oasis® MCX b) Luego se procede Acondicionamiento de la columna (sin vacio), el cual se acondiciona con el mismo solvente de la matriz, permitiendo alinear la fase estacionaria lejos de la superficie de la sílice, accediendo la interacción entre el analito y la fase estacionaria. Cualquier solvente orgánico residual se elimina en esta etapa, asegurando que los compuestos de interés sean retenidos en la parte superior de la columna. c) En la etapa de acondicionamiento de la columna Waters Oasis ® MCX se utiliza 2 ml de Metanol y 2 ml de Agua desionizada. 3. Aplicación de la Muestra a) Agregar el sobrenadante, que resulto de la homogenización de la muestra. La aplicación de la muestra es a una velocidad de 1ml/min b) En la Retención, las interacciones entre las moléculas de la muestra y la fase estacionaria controlan la retención en el absorbente de SPE. Para minimizar las interacciones la muestra debe cargarse con el absorbente de SPE aproximadamente 3 ml/min, este caudal puede ser controlarse mediante una válvula en la estación de vacío. Los analitos son retenidos en el absorbente de SPE mientras que la matriz y los contaminantes deben eluirse y descartarse. c) Durante las etapas de Activación, Acondicionamiento y Retención el absorbente de SPE debe mantenerse húmedo siempre, puesto que el secado del mismo puede acarrear una pérdida de la muestra. 4. Etapa de Lavado de Columna, aplicando vacio a 1ml/min, en la extracción en fase solida a) Se debe agregar; 2,0 ml de agua desionizada. 2,0 ml ácido clorhídrico 0,1N. 3,0 ml de diclorometano/ metanol, en la razón de 70:30. ~ 45 ~ 3,0 ml de hexano. Finalmente secar las columnas al vacio por 10 minutos. b) Eliminar interferencias, usando un solvente o una serie de solventes de fuerza creciente los contaminantes pueden eliminarse del absorbente de SPE hasta que solo lo analitos de interés queden atrapados. 5. Etapa de Elusión; sin vacio inicial, en la extracción en fase solida a) Se debe agregar; La adicción 2,0 ml de diclorometano/ 2-propanol/ amoniaco, en la razón 78:20:2 Trasvasijar el eluato obtenido a un frasco ambar. Finalmente secado mediante corriente de nitrógeno a 40 -50 °C. b) La elución de los analitos se efectúa mediante un eluyente adecuado y a un caudal de 1 ml/min. El absorvente de SPE y las interacciones analito-adsorvente determinan el eluyente final de elución 6. Etapa de detección por el Cromatografo de gases detector de masas. a) Una vez terminado esto; se debe realizar la derivatización química, la cual consiste en adicionar al extracto seco 65 µl de MSTFA/TMCS y mantener durante 30 minutos a 80 °C b) Trasferir el extracto derivatizado a un microvial de 300 µl. Para que posteriormente sea detectado mediante la Técnica Analítica de Cromatografía Gaseosa acoplada al detector de espectrometría de masas. c) En los reportes extraídos de los análisis de las muestras por el equipo; se puede observar en las muestras; la Cocaína, Benzoilecgonina, Cocaetileno (consumo de cocaína mas alcohol, el cual tiene un efecto estimulante en el Sistema Nervioso Central.) d) Finalmente al tener la curva de calibración de lo analitos analizados (Cocaína, Cocaetileno, Benzoilecgonina), se calcula de relación de área de cada muestra, la cual puede tener Cocaína, Cocaetilieno, Benzoilecgonina con respecto al estándar (CocainaD3) utilizado y se calcula la concentración de cada uno. e) Observación: Se debe realizar una curva de calibración de 5 puntos por lote de trabajo para evitar una segunda extracción, sin embargo, esto dependerá del criterio del perito debido a la causa de muerte que indique el protocolo del paciente o fallecido. ~ 46 ~ Procedimiento para el método Inmunoanálisis de membrana para orina. Objetivo El test Panel de drogas de abuso (ACON Multidrogas) 10 de un solo paso, es un inmunoanálisis competitivo, rápido y que sirve para la detección cualitativa de las siguientes drogas de abuso, fármacos y sus metabolitos respectivos en orina: Zona Test Tipo de Droga Sensibilidad (ng/ml) 1 AMP Anfetamina 1000 2 COC Cocaína 300 3 THC Marihuana/ Tetrahidrocannabinol 50 4 BZO Benzodiazepinas 300 5 TCA Antidepresivos Tricíclicos 1000 6 BAR Barbituratos 300 7 MET Metanfetamina 500 8 MOP Morfina 300 300 9 MTD Metadona 300 10 MDMA Éxtasis 500 Tabla: Especifica el tipo de droga que analiza el panel de drogas y la sensibilidad que tiene el análisis. Es considerado como un screening para orientar el peritaje de la muestra, ya que, al detectar la droga en cuestión, se comienza con el análisis de la extracción de la muestra a periciar. Metodología: Durante el análisis, la(s) droga(s) contenida(s) en la muestra, compite(n) con el conjugado de la droga (droga marcada químicamente, impregnada en la membrana de reacción), por los sitios de enlaces limitados del anticuerpo marcado con un colorante (anticuerpo–colorante) respectivo, que al ser especifico a los independientes de 10 drogas con una sola muestra. La mezcla de orina y anticuerpo- colorante se mueve a los largo de una membrana absorbente. Si la concentración de la droga está bajo el límite de detección del test, el anticuerpo-colorante no unido se unirá al antígeno respectivo pegado en la membrana, dando una banda de color rosado en la Zona Test, dando resultado negativo. ~ 47 ~ Por el contrario, cuando la droga está en o sobre el límite de detección, ocupa todos los sitios del anticuerpo-colorante formando un complejo antígeno/anticuerpo- colorante, que yo no tendrá sitios libres para competir con el conjugado que esa sobre la membrana, dando como consecuencia, ausencia de color en la Zona Test respectiva, dando un resultado positivo. La banda el Control (C) debe aparecer siempre coloreada, tato para un test negativo como para uno positivo. Procedimiento: a) Llevar las muestras y el Cassette Test (ACON) antes de abrirlo, a temperatura ambiente (esto último, para evitar la condensación de la humedad sobre las membranas). b) Sacar el Cassette Test de su envase. c) Agregar 2-3 gotas de orina en cada orificio de Muestra y dejar mover la muestra por la membrana. d) Leer los resultados dentro de 5 a 10 minutos, no más allá. Observaciones: (de la Muestra a analizar) Orina fresca y recolectada en un envase limpio y seco. La estabilidad de la muestra es de 48 horas a 2-8 ° C o un mes congelada. Composición del reactivo: Cada bolsa metalizada sellada contiene un Cassette Test y un desecante. La estabilidad del Cassette Test es hasta la fecha de expiración, hasta una temperatura de 28°C dentro de su estuche. Interpretación de los resultados Negativo: La presencia de una banda de color rosada en cualquier zona test dada (1-10) indica un resultado negativo para la droga correspondiente. Positivo: La ausencia de una banda de color rosado en cualquier zona test dada (1-10) indica un resultado positivo para la droga correspondiente. Error: Si no aparece ninguna banda de color en la Zona de Control (C), el test debe considerarse nulo; ya sea por error o por deterioro del mismo. En este caso el ensayo debe repetirse. ~ 48 ~ Limitaciones: El análisis está diseñado para trabajar con orinas humanas solamente. Un resultado positivo indica la presencia de la droga o un metabolito, pero no el grado de intoxicación Existe una posibilidad de que el mal procedimiento u otras sustancias puedan interferir con el análisis y producir resultados falsos. Imagen: Panel de drogas de abuso (10). Inmunoanálisis de membrana de un solo paso para orinas Procedimiento para el método de inmunoanálisis Quimioluminiscencia Objetivo Son inmunoensayos enzimáticos competitivos para la determinación semi- cuantitativa de la droga de abuso, fármacos (Cocaína, Anfetamina, Benzodiazepinas, Marihuana, Antidepresivos Tricíclicos, Barbitúricos, Metanfetamina, Opiáceos, Metadona, Éxtasis, Fenilciclidina (PCP) y Buprenorfina) y sus metabolitos en sangre humana. Los resultados de las drogas de abuso en sangre por The Evidence Investigator™ por el Randox ®, aportan un resultado analítico preliminar cualitativo y solamente para uso forense, no es de uso en los análisis de diagnostico. Para esto se debe acompañar de un método alternativo mas especifico para el análisis, obteniendo un resultado analítico confirmatorio, esto puede ser, utilizando la Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas. Metodología: El análisis está basado en técnicas estandarizadas de inmunoensayo competitivo para el ensayo en el Biochip. En el panel de ensayo de cada Biochip, los anticuerpos se unen a la ~ 49 ~ superficie del Biochip y los analítos de las muestras se unen a ellos. La metodología adoptada es Paneles- específica (regiones específicas de ensayo) y depende del peso molecular del objeto a analizar. Cuando la muestra contiene el analito de interés este se acopla al anticuerpo competiendo analíto marcado enzimáticamente. Esto reducirá el número de analítos marcados unidos, por lo tanto, reduce la señal de emisión de luz .La señal de emisión de luz en un ensayo competitivo es inversamente proporcional a la concentración de analíto presente en la muestra. La detección se basa en la emisión de luz de las reacciones de quimioluminiscencia, tomando lugar en las regiones específicas de ensayo (REE) en la superficie del biochip, es detectada y cuantificada usando una cámara con dispositivo acoplado por carga (DAC) Procedimiento: La matriz (DOA I WB P BiOCHIP) que utiliza está diseñada para su uso con sangre entera humana. La matriz del biochip, es un sustrato solido que contiene anticuerpo inmovilizado en las regiones de prueba. 1. Controles En cada análisis se deben realizar 2 controles, los cuales presentan la curva control para el análisis, estos se deben hidratar con un ml de sangre, y están listos para la aplicación en el Biochip. 2. Tratamiento de la muestra analizar La muestra de sangre se debe diluir 4 veces en diluyente de muestras (DOA I WB P DIL SPE), es decir, 50 de muestra más 150 diluyente de muestra antes del análisis. a) Tomar una alícuota de 50 µl de sangre, humor vítreo o sangre control al tubo Eppendorf. b) Luego al tubo Eppendorf con la muestra, adicionar 150 µl de diluyente y vortear 5 segundos. En este caso el diluyente contiene tampón fosfato a pH: 7,2, detergentes y preservantes. c) Una vez que la muestra está diluida, esta lista para la aplicación con el Biochip. Observación: En el caso de los 2 controles y 9 calibradores se debe pipetear 50 µl para cada calibrador y 50 µl para cada control. ~ 50 ~ 3. Tratamiento del Biochip, para su aplicación a) Se debe humectar el Biochip con 120 µl de DOA I WP DIL ASY; el cual contiene 20 nM de tampón fosfato a pH: 7,2, con proteínas, detergentes y preservantes. b) Agregar 120 µl de conjugante (DOA I WP CONJ) sobre el Biochip, en esta etapa no exceder los 10 minutos. Para homogenizar el conjugante en el pocillo, se agita el borde de la bandeja de manipulación. El conjugante contiene Tampón Tris 20 mM a pH: 7,0, proteínas, preservantes y peroxidasa de rábano- derivados de fármaco marcado. Observación: la adicción de reactivos se lleva a cabo con la micropipeta hacia el borde frontal del Biochip, teniendo cuidado de no tocar la superficie del biochip con la puntas de la micropipeta. 4. Cargar la muestra al Biochip. a) Cargar 50µl de la sangre, humor vítreo o sangre control diluida al Biochip. b) Fije la bandeja de manipulación en la base de la placa termo – coctelera. Incubar durante 30 minutos a 25°C por 330 rpm. c) Después de la incubación, retirar la bandeja de manipulación de la placa termococtelera. d) Una vez retirada la bandeja de manipulación, deseche los reactivos a los residuos mediante una fuerte sacudida a la bandeja de manipulación. 5. Proceso de lavado a) Inmediatamente realizar 6 ciclos de lavado rápido y 6 ciclos de lavado lentos, es decir, dejar los biochips en remojo con tampón de lavado durante 2 minutos. En cada uno de los lavados sacudir suavemente durante 10 a 15 segundos aproximadamente los bordes de la bandeja de manipulación, obteniendo que, se liberen todos los reactivos atrapados debajo del biochip. b) El lavado contiene 32 ml de BUF WASH (concentrado) con 68 ml de agua. El BUF WASH, está compuesto por Tris 20 mM de solución salina buffer a pH: 7,4, tensioactivo y preservantes. c) Observación: Tener precaución de no llenar demasiado los pocillos durante el lavado, esto es con el fin de reducir la posibilidad de contaminación del pozo a pozo. 6. Agregar la mezcla de luminol y peróxido ~ 51 ~ a) Agregar 250 µl de mezcla luminol y peróxido, en la relación de 1:1. Esta solución se debe preparar 10 minutos antes de usar. Una vez colocada la mezcla se debe dejar en una cubierta protegida de la luz. El envase que contiene el Luminol es LUM-EV 841 y el envase que contiene el Peroxido es PX b) La Quimioluminiscencia potenciada ofrece alta sensibilidad para una pequeña región de ensayo sobre la superficie del Biochip. 7. Lectura en Evidence Investigator ™ a) Realizar la secuencia en el software del equipo para esto se anota los 9 puntos de la curva de caibracion, los dos controles y las muestras analizar b) Colocar el carrier en el portador de Evidence Investigator™ después de exactamente 2 minutos (± 10 segundos) de haber colocado la mezcla del luminol y peróxido. c) Finalmente el programa entrega los resultados de las muestras analizadas, entregando un resultado negativo o positivo de las drogas de abuso y fármacos buscados en la biblioteca del software y el rango en los cuales se encuentra. d) EL resultado positivo es orientativo y debe ser confirmado por una técnica analítica. Métodos de extracción para investigaciones toxicológicas en vísceras y fluidos biológicos Objetivo: Realizar la extracción de tóxicos, drogas y medicamentos desde matrices biológicas, como estomago, hígado, riñón, huesos, cerebro, encéfalo, contenidos gástricos muy densos, etc. Los métodos de extracción de tóxicos, drogas y medicamento desde matrices biológicas se elegirán considerando los siguientes puntos: Antecedentes sobre tóxicos o medicamentos que se dispongan en el caso en estudio. Causa de muerte indicada en el protocolo de autopsia. Solicitud de investigación de algunos en particular por parte del médico que practico la autopsia. Tipo de muestra que se disponga para el examen. La cantidad de muestra recibida. ~ 52 ~ Como norma general, la cuantificación de droga y medicamentos detectados en los análisis toxicológicos se hará en sangre, ya que las concentraciones de esta o los niveles plasmáticos, se correlacionan con sus efectos sobre el organismo, ya sea en niveles terapéuticos, tóxicos o letales. Procedimiento para la digestión con sulfato de amonio: Este método sirve para vísceras y contenidos gástricos que estén muy densos y sean abundantes. a) Pesar 5 gramos de hígado, y someterlos a molienda en la homogeneizadora. b) El homogenizado de hígado, colocarlos en un vaso precipitado de 250 ml. c) Luego al homogenizado agregar 15 ml de Ácido Fosfórico al 10 por ciento. d) Además agregar 60 ml de Solución saturada de Sulfato de Amonio. e) Una vez agregado el Sulfato de Amonio, calentar en Baño María Hirviendo durante 20 minutos. Pasado los 20 minutos, dejar enfriar, para luego filtrar y recibir a los menos 20 ml. Cada 4 ml de filtrado equivalen apropiadamente a 5 gramos de víscera o de contenido gástrico. Formación del Extracto Ácido: 1) Tomar 5 ml del filtrado y llevar a pH: 4 con acetonitrilo .Luego completar hasta 20 ml con tampón 4. 2) Luego colocar el filtrado que esta a pH: 4 en las Columnas Elut (que contienen tierra de diatomeas) de fase solida. 3) Una vez colocado el filtrado en la Columna de Elut se debe esperar 15 minutos. 4) Luego extraer el contenido de la Columna Elut con 10 ml de Cloroformo y Alcohol Isopropilico (70:30).Esto se repite tres veces, con una espera de 15 minutos en cada paso. Formación de Extracto Básico 1) Tomar 5 ml del filtrado y llevar a pH: 9 con una pisca de cloruro de amonio mas unas 6 gotas de amoniaco concentrado. Luego completar hasta 20 ml con tampón 9. 2) Luego colocar el filtrado que esta a pH: 9 en las columnas Elut de fase solida. 3) Una vez colocado el filtrado en la Columna de Elut se debe esperar 15 minutos. ~ 53 ~ 4) Luego se extrae el contenido de la Columna Elut con 10 ml de Cloroformo y Alcohol Isopropilico (70:30). Esto se repite tres veces, con una espera de 15 minutos en cada paso. Evaporar ambos extractos separadamente a sequedad en la placa calefactora en una capsula. Una vez secos, reconstituir con el solvente de extracción, los extractos de la capsula y trasvasijarlos a frascos ámbar de 5 ml y luego evaporar en la placa calefactora los frascos hasta su sequedad. Realizar el screening de las muestras: a) Agregar a cada frasco con el extracto seco, 150 microlitros con micropipeta, del mismo solvente empleado en la extracción de cada uno. b) Luego sembrar en la placa fina cada una de las muestras que están rotuladas en el frasco ambar .En este paso se utilizan 4 placa fina, para pasarlo por los 3 eluyentes, los cuales son TC, TA y barbitúricos. Posterior a esto se revelan las placas con el reactivo de barbitúricos, FPN, dragendorff y Yodoplatinato. De esta manera se ve la corrida de las muestras con el patrón utilizado en cada una de las placas sembradas. c) La técnica de Cromatografía en capa fina se utiliza para reacciones de identificación de Barbitúricos, Fenotiazínicos, Benzodiacepinas, Antidepresivos, Alcaloides (Cocaína, Estricnina, etc.) y fármacos d) También Se realiza la lectura en la Cromatografía Planar de Alta resolución con detector UV. Rol del Farmacéuticos en dichos procedimientos: Llevar a cabo la extracción por fase solida o liquida de los analitos presentes en la muestra Interpretar los reportes de los distintos equipos de instrumentación ( CAMAG, Cromatografía gaseosa con NPD,ECD y MS) Efectuar curvas de calibración de los casos trabajados Ejecutar las concentraciones de los estándares para la cuantificación Realizar los informes toxicológicos Ir a los juicios orales dependiendo el peritaje realizado. ~ 54 ~ Rol de otros Profesionales técnicos y demás Personal en dichos procedimientos: El auxiliar técnico: Ejecutar la homogenización en vísceras, para su posterior análisis. Ayudar al perito en el peritaje de los casos Llevar a cabo los distintos revelados de las placas sembradas. Realizar los reactivos necesarios para la extracción en fase solida y liquida Lavar el material sucio. Efectuar el despacho de los casos terminados a coordinación ~ 55 ~ 9. Análisis FODA del papel actual del Químico Farmacéutico en el SML El análisis FODA es una herramienta necesaria en el proceso de descripción de cargos en el proceso de planificación estratégica de una institución, proporcionando la información necesaria para la implementación de acciones, medidas correctivas y generación de nuevos proyectos en el futuro de la organización Tanto las fortalezas y las debilidades son internas de la organización, por lo que se puede actuar directamente sobre ellas. En cambio las oportunidades y las amenazas son externas, y solo puede haber cambios modificando los aspectos internos del establecimiento. A continuación se analizará las fortalezas y debilidades del profesional Químico Farmacéutico dentro del SML Dentro de la organización Fortalezas Debilidades Asesorar al Medico Tanatólogo en la recolección de las muestras Juicios orales ( defensa del peritaje) Aumento de número de SML a nivel regional Impartir docencia Recursos limitados en el mercado Poco conocimiento en la Medicina Legal Forense. Poca libertad de acción Excesiva carga laboral Fortalezas: Asesorar al médico tanatólogo en la recolección de muestras: La selección de las muestras adecuadas para el análisis y su correcta conservación son requisitos indispensables en una investigación Toxicológica Forense. Las muestras para el análisis toxicológico deben recogerse teniendo en cuenta las condiciones particulares de cada caso y las referentes a la distribución y metabolismo de las diferentes drogas. Las muestras usadas con mayor frecuencia entre otros son: Contenido gástrico, Orina, Sangre, Hígado, Bilis, Cerebro, Riñones Humor vítreo, Grasas, Hueso, Pelo, Uña. Una vez recogida la muestra deben estar bien envasadas, preservadas con su cadena de Frio y rotuladas con su respectiva Cadena de Custodia. ~ 56 ~ Juicios orales: Su función profesional durante las diferentes instancias de Juicio Oral es aportar el conocimiento de la ciencia que profesa, para coadyuvar a que se comprenda con objetividad la carga informativa y probatoria de cada uno de los elementos recopilados en el proceso y que se perciba adecuadamente su impacto en el conocimiento de la verdad objetiva y en la probanza de los argumentos esgrimidos por cada una de las partes del proceso. Aumento de número de SML a nivel regional (Descentralización del SML): La creación de otros SML a nivel regional, ha proporcionado una ampliación del campo laboral del Químico Farmacéutico, incrementando la posibilidad de ejercer la profesión. Impartir docencia: Colaborar en el desarrollo estratégico de la medicina legal y ciencias forense a través del instituto Dr. Carlos Ybar, ampliando el trabajo en conjunto con organismos nacionales e internacionales en los ámbitos de la investigación, docencia y extensión. Debilidades: Recursos limitados en el mercado: Para realizar las labores en el laboratorio se requieren de ciertos estándares, los cuales no existen en el mercado nacional, debiendo ser importados. Esto, sin duda, repercute en la entrega de resultados a la Fiscalía, y a su vez, repercutiendo en el tiempo de entrega de la pericia. Poco conocimiento en la Medicina Legal Forense: a pesar del conocimiento toxicológico adquirido en la malla curricular, el Químico Farmacéutico carece de estudios de medicina legal forense, debido a que los estudios que se imparten se dictan a nivel internacional como en el caso de España y Argentina. Poca libertad de acción: El Químico farmacéutico al ser un cliente del ministerio público (Fiscalía) y tribunales, está limitado a las funciones que realiza en la institución no pudiendo realizar mayor peritaje de lo ordenado por los organismos judiciales. ~ 57 ~ Excesiva Carga laboral: El Químico Farmacéutico tiene una excesiva carga laboral, no permite que profundice o analice una muestra, ya que, debe cumplir con metas periciales. A consecuencia de esto, la calidad del informe pericial refleja la falta de tiempo. A continuación se analizará las oportunidades y amenazas del profesional Químico Farmacéutico fuera del SML. Fuera de la organización Oportunidad Amenazas Sistema de control de calidad Trabajar en instituciones como Labocar. Educación y especialización en la manipulación de la muestra. Actualizarse en la especialidad forense Trabajar en Instituciones privadas Forenses que tenga la confianza del ministerio Público Competir profesionalmente con carreras técnicas como Criminalística Forense. La labor que realiza el Químico Farmacéutico sea reemplazada por Analistas químicos. Oportunidades: Sistema de control de Calidad: Su enfoque de estandarización de procesos le ha permitido trabajar con calidad implementando un Sistema de Gestión de Calidad para los procesos realizados dentro del laboratorio. Todo esto Certificación de la Unidad de Recepción de Muestras para el proyecto de y acreditación de los laboratorios de Toxicología, Alcoholemia y Bioquímica y Criminalística. Trabajar en instituciones como Labocar (Organismo pericial): El Químico Farmacéutico al tener la experiencia laboral en el SML, le permite a futuro trabajar y asesorar en esta Institución. No cabe duda que el profesional podría realizar Peritajes Criminalísticas, a partir de pruebas científicas que se aplican en las evidencias que son obtenidas en el sitio del suceso. Además aprender la labor que realiza esta unidad especializada y servir de apoyo a los Tribunales de Justicia ~ 58 ~ Educación y especialización en la manipulación de la muestra: El Químico Farmacéutico al especializarse en la manipulación de la muestra mejora la calidad de las pericias y abre un campo de desarrollo a nivel nacional, en el cual no se ha incursionado y que puede marcar la diferencia en la certeza y precisión de los resultados informados a nivelándolos con estándares internacionales. Actualizarse en la especialidad forense: La especialización y participación del Químico Farmacéutico en la Medicina Forense, formando equipo directamente con el médico optimiza tiempo y precisión de los analizados realizados, generando informes irrevocables que pueden marcar la diferencia a nivel legal. Trabajar en Instituciones privadas Forenses que tenga la confianza del ministerio Público: La creación de instituciones privadas forense, permite al Químico Farmacéutico ampliar campo laboral y generar competencia con la Entidad Publica Legal, viendo esto último en la obligación de mejorar y actualizar sus estándares de trabajo. Amenazas: Competir profesionalmente con Carreras Técnicas de Criminalista Forense: La labor que realiza el Químico Farmacéutico sea reemplazada por Técnicos Criminalistas Forenses. Esto sin duda en el área Toxicología, no se justifica, ya que el Químico Farmacéutico posee un alto conocimiento científico sobre medicamentos en cuanto a farmacología, farmacocinética, farmacodinamia y toxicología, los cuales son indispensables en la interpretación de los resultados de los exámenes toxicológicos. Por otro lado las unidades como alcoholemia, Bioquímica Criminalística y Recepción de Muestra la función del Químico Farmacéutico pudiese ser reemplazado por alguno profesional técnico educado específicamente para esa función La labor que realiza el Químico Farmacéutico sea reemplazada por Analistas Químicos: Este hecho pudiera ser una amenaza en el campo laboral del Químico Farmacéutico, ya que, para abaratar costos, contrataran a Analistas Químicos para realizar los análisis de los peritajes que se realizan en el laboratorio. Sin embargo en su ~ 59 ~ preparación, ellos poseen las bases de las Químicas y la Instrumentación, pero el análisis de muestras biológicas con incidencias legales requerirá siempre de un criterio más amplio que solo una buena manipulación de muestras, por lo tanto, en este es imprescindible la presencia de un Químico Farmacéutico. Que pueda ser el mismo que firme o autorice los informes de los analistas en el resto de los ámbitos analizados cerrando cargos actualmente ocupados por nuestros futuros colegas. ~ 60 ~ 10. Proyección ideal del Químico Farmacéutico Respecto al Sistema del Control de Calidad, el Químico Farmacéutico, se abre un campo para mejoramiento certificación de los procesos logrando la acreditación de los laboratorios en que integran. Para lograr esto, se debiera crear el cargo para el profesional de dedicación exclusiva en este ámbito, de esta forma se garantiza la certificación de los procesos y el avance en la acreditación y la permanencia de esta en la validación de los procesos, de esta forma, llegaríamos a presentar estándares internacionales. El Químico Farmacéutico al tener la experiencia laboral del SML, le permite trabajar y colaborar con Organismos Periciales. Sin embargo la creación de este cargo en Labocar con el perfil de participación directa en el sitio del suceso, aprovechando de esta maneras las evidencias para posterior análisis y resolución más efectiva y certera de los casos involucrados. En cuanto a la educación y especialización en la manipulación de la muestra, con la especialidad necesaria del Química Farmacéutico en el área forense, debiese existir la posibilidad de apertura del cargo de profesional Forense, pueda dedicar su tiempo a la educación de los profesionales pertinente en la toma de muestra de los distintos centros de Salud Públicos y Privados del País. Además el farmacéutico bebiera presenciar y participar en conjunto con el Médico Tanatólogo Forense, en las autopsias correspondiente a intoxicaciones o temas inherentes a la rama farmacéutica. Si bien la actualización de la especialidad forense es recurrente en este texto, es necesario hacer hincapié en la profesionalización de la rama, ya que tiene una proyección y desarrollo importante, marcando la diferencia en la calidad y precisión de las pericias realizadas, influyendo en las decisiones del poder judicial. No obstante el número de profesionales a que absorbe el área es volumen menor a las otras áreas de desarrollo, incidencia social desde alto interés público y profesional. ~ 61 ~ La proyección de la creación de instituciones privadas Forenses con profesionales con experiencia en el ámbito público, genera la posibilidad de perfeccionamiento y de competencia entre instituciones Públicas y Privadas, lo que obliga al mejoramiento de la calidad de las pericias en ambos sectores, para contar con la confianza del poder judicial. Dentro del Sistema Judicial, el servicio Médico Legal, tiene como objetivo, mejorar los tiempos de respuesta y la calidad de los informes, lo que incide directamente en la cantidad de profesionales Químicos Farmacéuticos especializados en el tema , que se requiere para el cumplimiento de estos, abriendo un campo de desarrollo profesional hasta el minuto poco explorado. En la determinación de causas de muerte, el análisis toxicológico, presenta un área de desarrollo del profesional farmacéutico, amplio en la creación y validación de técnicas para las distintas sustancias existentes, para la que no hay estándares actualmente vigentes. Por otro lado la inclusión de nuevos fármacos y drogas de abuso, nos amplia el área de desarrollo manera casi infinita. ~ 62 ~ 11. Conclusión Al realizar el Internado en el Servicio Médico Legal, se abrió una puerta, en donde se conoció la verdadera labor que realiza el Químico Farmacéutico en el área forense, la cual, hay ha sido poco experimentada, actualmente a nivel nacional. Cabe destacar que el Químico Farmacéutico contribuye un rol indispensable en los análisis y en la conservación de las muestras, y el cual es reconocido no solo por sus Colegas, sino por Médicos Tanatólogos; ya que la mayoría de las veces los Médicos piden el asesoramiento de la elección de las muestras para análisis puntuales de tóxicos que pudieron ser los causantes de muerte del fallecido. Además gracias a los informes de los análisis que emiten los Químicos Farmacéuticos, los Médicos se apoyan en la causas de muerta de fallecidos en la que su muerta ha sido indeterminada. No solamente los Médicos Tanatólogos reconocen sus capacidades y conocimientos de la formación profesional, sino que también los Fiscales confían en los análisis que el Profesional Químico Farmacéutico realiza. EL Servicio Médico Legal contribuye en la Formación Profesional del Químico Farmacéutico, realizando estudios y capacitación en países extranjeros, en donde hay mayor conocimiento de la Medicina Legal Forense. Entregando de esta manera informes periciales con igual calidad de los países internaciones; sin embargo la ciencia avanza y la mayoría de los equipamientos de instrumentación han sido creados para la industria farmacéutica, por lo que la toxicología forense los adapta a las técnicas post mortem. Es por eso, que para los peritos que trabajan en esta área, ha sido un desafío, para realizar los análisis en matrices poco experimentadas, bajo técnicas de instrumentación que han sido publicadas para los analitos en estudio. Finalmente realizar el internado en la institución, constituyo una gran experiencia laboral, ya que permitió establecer relaciones laborales y humanas con futuros colegas y demás funcionarios del SML. ~ 63 ~ 12. Bibliografía [1] Giannuzzi. L, Ferrari L. 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Anexos Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística ~ 67 ~ Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 1 de 10 PR-URTM-0001/001 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal 1. Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 2 de 10 OBJETIVO Establecer las acciones que realiza el personal de la Unidad de Recepción de Muestras para ejecutar la recepción de muestras; bajo condiciones que aseguren calidad, identidad, integridad, resguardo y privacidad, tanto de las muestras, así como también su respectiva información y documentación. 2. ALCANCE Aplica a todas las muestras y antecedentes que ingresan a la unidad de Recepción de Muestrea del SML Santiago, para análisis Bioquímico y Criminalística 3. RESPONSABILIDADES Responsable Actividad Coordinar y Supervisar la labor realizada en la Unidad. Planificar las actividades de la Unidad y en base a ello solicitar los recursos necesarios para el buen funcionamiento de la misma (Humanos, insumos, materiales y equipos). Coordinar actividades de contingencia en casos especiales o de emergencia. Encargado/a de Unidad Recibir y revisar muestras y documentación necesaria para el ingreso de los casos para laboratorio Bioquímicos Técnico/a ( Señorita Mitzi) 4. EQUIPOS Y MATERIALES Equipos y Materiales comunes Uniforme institucional Guantes de látex o vinilo Etiquetas autoadhesivas Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal 5. Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 3 de 10 REFERENCIAS Y FUNDAMENTOS 5.1 Manual uso de Formulario: “Rótulo – Formulario único de Cadena de Custodia” y sellos de Evidencia. Versión 1, Dirección Nacional Servicio Médico Legal, Res. Ex nº7389 del 24 noviembre 2006. 5.2 Manual de uso de Sistema informático OSSAN 5.3 Resolución Exenta N° 5211 de fecha 27 de abril de 2011, que Aprueba documento sobre política general de seguridad de la información del Servicio Médico Legal. 5.4 Resolución exenta Nº 9487 de fecha 12 de Noviembre de 2010, que. Aprueba guía técnica pericial sobre agresiones sexuales. 6. DEFINICIONES 6.1 Recepción Administrativa: Documento con número correlativo que es generado por un usuario, en sistema OSSAN, que consigna una lista de muestras ingresadas para Unidad de Bioquímica y Criminalística (UBQ), para ser codificadas. 6.2 Recepción Técnica: Documento con número correlativo que es generado por un usuario, en sistema OSSAN, que consigna una lista de muestras codificadas para UBQ. 6.3 Acta de Recepción Muestras Externas: Documento que es generado por un usuario, en sistema OSSAN, que consigna los datos personales del donante y del caso para UBQ. 6.4 Rotulo: Número de Recepción único, aparece en el acta de Recepción de Muestras, que se asigna a cada muestra ingresada. Este dato está compuesto por Código de sede SML en Letras-numero de muestra/Año, Ejemplo RM1L-2883/013 6.5 R.I.T: Rol Interno de Tribunal, es un código asignado en el Tribunal de Origen. 6.6 R.U.C: Rol Único de la Causa, es un código asignado por el Tribunal de Origen 6.7 ROL: Identificación de la Causa asignada por el Tribunal pertinente. 6.8 OSSAN: Sistema informático de Departamento de Laboratorio que permite el ingreso y respaldo de datos, además del control y distribución de las muestras y antecedentes de los casos. Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal 6.9 Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 4 de 10 Rotulo-Formulario Único de Cadena de Custodia (NUE): Documento de Registro del historial de la muestra y/o evidencia, que posee un numero que no se repite (NUE) y se inicia al momento de la toma o levantamiento de esta, la cual la acompañara en todo momento. 6.10 Código de Muestra: Número que genera un usuario, en sistema OSSAN, que permite individualizar la muestra y consiste, de una Letra-Numero/Año, para este caso corresponde la letra B. (Ej. B-1258/13). 7. 8. INDICADOR DE GESTIÓN INDICADOR CRITERIO DE ACEPTACIÓN PERIODICIDAD DE MEDICIÓN % de muestras entregadas a coordinador 100 % Diaria REGISTROS ASOCIADOS Identificación Responsable Acta de Recepción Lista de Entrega URM Bioquímica N° URM-UBQxxx/xx-1 Tiempo Almacenamiento Medio de Lugar y Soporte Responsable Disposición Técnico permanente Digital/ Papel Servidor- Unidad de Servidor/ Informática/ Archivo Archivador - Encargado permanente Digital/ Papel Servidor- Unidad de Servidor/ Informática/ Archivo Archivador - Técnico permanente Digital Servidor- Unidad de Servidor Informática Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal 9. Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 5 de 10 DESCRIPCION DEL PROCESO Las muestras para análisis Bioquímico y Criminalística son recibidas en la Unidad de Recepción de Muestra (URM), las cuales son derivadas de: Departamento de Clínica (Unidad Sexología Forense), Departamento de Tanatología (Unidad sala de autopsia), de fiscalía o tribunales de justicia, PDI, Carabineros, o SML de Regiones. 9.1 Recepción física de Muestras. Las muestras que llegan a la unidad puedes ser enviada por correo o directamente traídas por un encargado del departamento del servicio y/o institución externa, el cual solicita una firma de recepción. Las muestras deben ser recibidas por el técnico o encargado de la unidad. Las muestras que llegan de instituciones externas al servicio deben ser recibidas exclusivamente por el encargado de la unidad. Para la recepción correcta de las muestras se debe verificar lo siguiente: La muestra siempre debe venir acompañada de la Cadena de Custodia, el cual a su vez, debe cumplir cabalmente los requisitos estipulados en “Rótulo-Formulario Único de Cadena de Custodia (N.U.E)”. se debe procurar que la última persona que firma la Cadena de Custodia es el encargado de la entrega de la muestra. El buen estado de la muestra, esto es, en su envase correspondiente sin deterioro, en las condiciones ambientales exigidas al tipo de muestra y correctamente rotuladas de acuerdo a su contenido y Cadena de Custodia. Oficio del tribunal o fiscalía que detalle la muestra y el examen a realizar o en su defecto la boleta interna del SML correctamente completada por el profesional a cargo. Si la muestra no cumple con algunos de los requisitos arriba estipulado, esta no será recepcionada y será devuelta para su corrección. Si la muestra cumple con todos los requisitos, esta será recepcionada firmando el registro solicitado por el encargado de la entrega (si este lo requiere) y la Cadena de Custodia como receptor. Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 6 de 10 9.2 Ingreso de la Muestra al sistema. El Técnico procede a ingresar la muestra en el Sistema informático OSSAN: Ingreso al Sistema informático OSSAN: Para ingresar al Sistema informático OSSAN ubicado en servidor institucional, se dirige a la siguiente dirección: http://10.130.33.9/proyectos/sml_laboratorio. Una vez en el Sistema se dirige a “Acta de Recepción” y se completa la ficha del donante de la muestra siguiendo lo indicado en el “Manual de uso de Sistema Informático OSSAN” Una vez completado los datos se genera el documento “Muestras Externas - Acta de Recepción”, el cual se imprime por duplicado. Ver Anexo 1 Por cada donante se debe generar un duplicado del Acta y este debe ser firmado por el técnico responsable. Finalmente, se realiza “La entrega de muestra a recepción técnica “en el sistema informático. 9.3 Codificación de la Muestra y armado de carpeta con los antecedentes. Una vez realizado lo anterior, se codifica cada una de las muestras con los códigos entregados por el sistema en el ítem “Recepción Técnica”. La codificación se realiza de la siguiente manera: o Para las muestras se adhiere una etiqueta con el código impreso y se refuerza con cinta adhesiva transparente o Para la documentación, se escribe manualmente el código con lápiz color Rojo tanto, en la tapa de la carpeta con los antecedentes como también en la esquina superior derecha del Acta de recepción y en la Cadena de Custodia. Posteriormente en una carpeta se colecta todos los antecedentes de la causa y la(s) muestra(s), esto es: o Muestras Externas - Acta de Recepción, en duplicado y firmado o Oficio solicitud del Tribunal, Fiscalía o documento interno. o Formulario Único de Cadena de Custodia (N.U.E). correctamente firmada. En el sistema informático OSSAN se genera “La carpeta de bioquímica” (siguiendo lo indicado en el Manual Sistema Informático OSSAN). Al generar esta carpeta el sistema arroja un número, con la clave BIO-XXXX/AA-1. Este número se coloca manualmente en la tapa de la carpeta. Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 7 de 10 Por último, al termino del ingreso de todas las muestras recepcionada durante el día se procede a generar en el OSSAN la “Lista de Entrega URM Bioquímica N° URM-UBQ-xxx/xx-1” Para entregar las carpetas de antecedentes a la Coordinadora del departamento. 9.4 Entrega de muestras a la unidad de Bioquímica y Criminalística. Una vez terminado el punto anterior, el técnico hace entrega de las capetas con toda la documentación junto a la Lista de Entrega URM Bioquímica correctamente firmada y las muestras a periciar al Encargado de la Unidad de Recepción de Muestras para la verificación final. El encargado de URM debe recibir cada una de las muestras con sus respectivas carpetas, y verifica que coincidan todos los datos del “Acta de Recepción” con las muestras, cadena de Custodia y los documentos restantes. Junto a esto debe firma la Cadena de Custodia donde se consigne la recepción y la entrega de la muestra a periciar. Finalmente en el sistema informático OSSAN el encargado de URM genera en duplicado la “Lista de Muestra enviadas a Laboratorio de Bioquímica y Criminalística” con el cual se entrega la muestra a la Unidad de Bioquímica en caja cerrada con sello enumerado. Una Copia de la “Lista de Muestra enviadas a Laboratorio de Bioquímica y Criminalística” debe ser devuelta al área firmada con la confirmación de la recepción conforme de las muestras. Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 8 de 10 10.- ANEXOS Anexo 1: Formato Acta de Recepción Área de consentimiento de Toma de muestra. Numero de recepción del Donante, el cual será el Rotulo de la Muestra. Área de certificación de la recepción de la muestra. Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 9 de 10 Anexo 2: Formato Lista de Entrega URM Bioquímica Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20 Procedimiento para recepción de muestras de Bioquímica y Criminalística Procedimiento De Unidad de Recepción y Toma de Muestras Servicio Médico Legal Código: Fecha: PR-URTM-0001/001 15-10-2013 Página 10 de 10 Anexo 3: Formato de “Lista de Muestra enviadas a Laboratorio de Bioquímica y Criminalística” Indica la fecha y hora de la entrega a Bioquímica, el número de caja donde se trasportaron las muestras y el número de sello utilizado en la caja trasportadora y el número de muestras en su interior HISTORIA E IDENTIFICACIÓN DE LOS CAMBIOS Versión 01 Preparado por Revisado por Aprobado por Cambios Efectuados María Elena Soto Ramos Adolfo Gálvez Cristian Chacana Ximena Godoy Versión Inicial Estado del Documento: Preparación PREPARADO POR: Soto Ramos, María Gálvez Palma, Adolfo REVISADO POR: APROBADO POR: xxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 xxxxxxxxxxxxxxxxxxx 15-10-2013 15-10-20