BIOTRANSFORMACIÓN DE ANILINAS SUSTITUIDAS, MEDIANTE ISOENZIMAS PRODUCIDAS POR PHANEROCHAETE CHRYSOSPORIUM INMOVILIZADO Sergio Caffarel M. (1), Adriana Martínez G.(1), Inés Moreno C.(1) y Alma Delia Luna Martínez (1) (1)Laboratorio de Ingeniería Bioquímica, Sub. de Investigación, Tecnológico de Estudios Superiores de Ecatepec. Av. Carlos Hank González s/n Esq. Valle del Mayo Col. Valle de Anáhuac, Ecatepec de Morelos, Edo de Mex. México. C.P. 55210. Tel. (55) 57104560 ext. 307. Fax. (55) 57838235. E-mail: [email protected]. Introducción: Las anilinas sustituidas, como la 2,4-dinitroanilina (2,4-DNA), son compuestos que se utilizan para la fabricación de colorantes “azo”, los cuales representan aproximadamente el 50% de los utilizados en el ramo industrial relacionado. Se ha detectado, como consecuencia de la manipulación de estos compuestos, concentraciones considerables en las aguas residuales que se descargan a la red de alcantarillado. Por la naturaleza aromática de su estructura, los derivados de la anilina presentan tasa de mineralización poco significativas, razón por la cual son considerados recalcitrantes a la biodegradación bajo condiciones normales en un tratamiento biológico convencional. Los hongos con actividad ligninolítica como Phanerochaete chrysosporium tienen la capacidad de degradar compuestos aromáticos, debido a que producen complejos enzimáticos extracelulares con elevado potencial de oxidación. Para el esquema de contacto se plantea la inmovilización del hongo en una membrana de hule silicón; puesto que una propiedad importante de ella es su rechazo a especies inorgánicas y agua; permitiendo la concentración del toxico por partición favorecida a la fase no polar, aumentando de esta manera la disponibilidad del compuesto para su transformación. Objetivo: En el presente proyecto se pretende determinar la factibilidad técnica de transformar a la 2,4-DNA mediante el complejo multienzimático producido por el basidiomicete P. chrysosporium aclimatado e inmovilizado en una membrana hidrofóbica. Metodología:1. Propagación del hongo P. chrysosporium en medio sólido. 2. Propagación del hongo P. chrysosporium en medio líquido. 3. Aclimatación de P. chrysosporium a la degradación de 2,4-DNA. 4. Caracterización de la membrana hidrofóbica en términos de su partición al equilibrio. 5. Inmovilización del hongo P. chrysosporium en una membrana hidrofóbica. 6. Monitoreo y cuantificación de la concentración de la 2,4-DNA que recircula por la membrana. Resultados: Se propagó P. chrysosporium en medio sólido (sobre agar papa-dextrosa) y posteriormente se llevó a cabo su propagación en un medio líquido similar al propuesto por Kirk y col., aclimatándolo paulatinamente a diferentes concentraciones de 2,4-DNA. Más adelante se propició su inmovilización sobre una membrana de hule silicón permeable a compuestos no polares, en una configuración de biorreactor que operó por lote. Se llevaron a cabo ensayos a una concentración de 2,4-DNA de 30 ppm, en un medio como el descrito por Kirk con una fuente suplementaria de carbono para sustentar el crecimiento microbiano. Conclusiones: a) De acuerdo a los resultados obtenidos experimentalmente, es factible transformar a la 2,4-Dinitroanilina (2,4-DNA) mediante el complejo multienzimático producido por el basidiomicete P. chrysosporium aclimatado e inmovilizado en una membrana hidrofóbica. b) El uso de un biorreactor de membrana presenta ciertas ventajas con respecto a uno convencional, ya que sólo el toxico es capaz de difundir a través de la membrana, lo cual nos permite por un lado la extracción de la 2,4-DNA a la fase hidrofóbica y por otro mantener al hongo en un medio independiente del agua residual a tratar. Bibliografía: Eaton, D.C. (1985) Enzyme Microb. Technol. 2, 11; Kirk, T.K., Nakatsubo, F. (1987) Annu. Rev. Microbiol. 41, 465; Venkatadri, R., e Irvine, R.L. (1993) Appl. Envioron. Microbiol. 56, 1284 Agradecimientos: Se agradece al TESE y al Cosnet (proyecto 2973-P) el apoyo financiero prestado.