BIOTECNOLOGÍA. BIOTECNOLOGÍA: Es la aplicación de los principios de la ciencia y de la ingeniería a los procesos de transformación de ciertas materias mediante agentes biológicos para obtener bienes y servicios. Características básicas: Campo interdisciplinar Trabaja con seres vivos, sus componentes moleculares o sus funciones. Objetivo: obtener un producto (medicamento, vacuna,…) o un servicio (depuración de agua, terapia…) DESARROLLO HISTÓRICO: Desde la antigüedad: vino, pan, cerveza… Aztecas: cultivos de algas lacustres y espirulinas con fines alimentarios. Extracción de cobre con ayuda de microorganismos (Riotinto) Como ciencia surge en el s. XIX con Pasteur y sus estudios sobre fermentaciones. A mitad del s. XX: conocimiento de la base molecular de la herencia y desarrollo de la genómica. TIPOS DE PROCESOS TECNOLÓGICOS TRADICIONALES o Cultivo a gran escala de microorganismos. o Se controlan variables: pH, O2, nutrientes. o Técnicas: Técnicas genéticas clásicas: selección, recombinación,… Mejora de las condiciones para mejorar el rendimiento. Perfeccionamiento de técnicas de aislamiento y purificación de productos de interés. MODERNOS o Nuevos métodos de CULTIVOS CELULARES. o Trabajos con ANTICUERPOS MONOCLONALES. o INGENIERÍA GENÉTICA CULTIVOS CELULARES Técnicas para mantener células in vitro con sus propiedades intactas. Posibilidad de reproducción de células. Aplicaciones: o Investigación del cáncer o Vacunas antivirales o Clones de plantas o Tejidos para trasplantes o Producción proteínas. o Diagnóstico prenatal. 1 ANTICUERPOS MONOCLONALES En 1975 se desarrolló la TÉCNICA DE LOS HIBRIDOMAS para obtener los AcMo. Se obtienen células llamadas HIBRIDOMAS por fusión de de LINFOCITOS B de un organismo sensibilizado con un antígeno, con CÉLULAS TUMORALES de un mieloma (tumor linfocitario). El HIBRIDOMA hereda la capacidad de dividirse indefinidamente y la de producir un anticuerpo determinado. Aplicaciones: o Detectar moléculas en fluidos biológicos (drogas, hormonas, proteínas de tumores…) o Determinar grupos sanguíneos. o Transportar fármacos hasta el antígeno (que será una célula o tejido dañado) INGENIERÍA GENÉTICA La INGENIERÍA GENÉTICA O TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE reúne las técnicas que permiten modificar genéticamente la información genética e incluso combinar en un genoma secuencias de genes de organismos diferentes. Un ADN RECOMBINANTE es un fragmento de ADN construido artificialmente con segmentos no homólogos de organismos distintos. Las técnicas nos permiten: o AMPLIFICACIÓN GÉNICA: obtener grandes cantidades de copias de ADN o SECUENCIACIÓN DEL ADN. o Realizar TRANSGÉNESIS y obtener TRANSGÉNICOS. o MODIFICAR LA EXPRESIÓN DE ALGÚN GEN. El desarrollo de la Tecnología del ADN recombinante se inició con el descubrimiento en 1970 de las ENZIMAS DE RESTRICCIÓN: o Cortan el ADN por secuencias específicas y palindrómicas (capicúas). o Al cortar dejan extremos cohesivos y pegajosos de una sola hebra. o Cualquier extremos obtenido con una enzima de restricción hibrida con cualquier otro extremo generado con la misma enzima. TÉCNICAS DE INGENIERÍA GENÉTICA CONSTRUCCIÓN DE UN ADN RECOMBINANTE o Las moléculas de ADN recombinante contienen un vector y el gen de interés. o Vectores: plásmidos o virus que transfieren genes de un organismo a otro. o Los genes de interés se obtienen de genotecas creadas a partir de ARNm presentes en las células, que se copian en ADN mediante la acción de una transcriptasa inversa. 2 AMPLIFICACIÓN DEL ADN o CLONACIÓN BACTERIANA Se introducen los genes que se quieren amplificar en una bacteria El ADN se une a un vector (plásmido). El plásmido se replica y la bacteria se divide. En poco tiempo se tienen miles de bacterias con el gen. o REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Obtención de millones de copias de ADN en pocas horas. Se realiza con una ADN-polimerasa extraída de bacterias que viven en aguas termales (Thermus aquaticus) SECUENCIACIÓN DEL ADN o Mediante ELECTROFORESIS EN GEL (a finales de los 70) o Actualmente, proceso automatizado e informatizado en “SECUENCIADORES”. o GENÓMICA: Estudia el genoma de los seres vivos. El conjunto de todos los genes: GENOMA. Cataloga todos sus genes, determina su organización, estructura y función y estudia la interacción entre unos y otros. Aplicaciones: medicina, ganadería, agricultura, medio ambiente… Proyecto “GENOMA HUMANO” o PROTEÓMICA: Estudia el conjunto de proteínas expresadas por un genoma, una célula, un tejido. El conjunto de proteínas: PROTEOMA Varía con el individuo, su desarrollo, el tejido, las condiciones ambientales… Aplicaciones: medicina (identificación de marcadores parta diagnosticar enfermedades, identificación de nuevos fármacos) o PROYECTO GENOMA HUMANO Objetivo: conocer el contenido de genes de los 46 cromosomas humanos. Entre 1990 y 2000. Conclusiones: Entre 32000 y 39000 genes codificadores de proteínas (5% del ADN) El 50% es ADN basura: secuencias repetidas. Seres humanos compartimos el 99.9% del ADN. Repercusiones: Estudio de la base genética de 4000 enfermedades genéticas conocidas. Conocimiento del desarrollo embrionario. Avances en la evolución. 3 TRANSFERENCIA NUCLEAR. CLONACIÓN o CLONACIÓN: Técnica de transferencia de un genoma completo. o Primera clonación: oveja Dolly. o Aplicaciones: Médicas: producir órganos para trasplantes, producir proteínas humanas, cultivo de células madre. Producción de sustancias industrialmente. Recuperación de especies en peligro de extinción. Mantener características valiosas en agricultura y ganadería. APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIA ALIMENTARIA EDULCORANTES: fructosa, aspartamo ADITIVOS ALIMENTARIOS: ácido málico. POTENCIADORES DE SABOR: glutamato sódico. MICROPROTEÍNAS ALIMENTARIAS DE ORIGEN MICROBIANO: o Polvo de espirulina (cianobacteria) o Levadura seca o Proteínas de algas o Proteínas de mohos FERMENTACIONES: o FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA: o La llevan a cabo levaduras del género Saccharomyces. o Producen la fermentación que va a producir el vino, la cerveza, el sake, alcohol industrial y el pan. o Estos microorganismos sólo pueden fermentar azúcares de 6 carbonos, por lo que sus disacáridos y polisacáridos deben previamente ser descompuestos en hexosas. o FABRICACIÓN DEL VINO Fermentación alcohólica de glucosa y fructosa presentes en el zumo de uva, para dar etanol y dióxido de carbono. La uva se prensa para obtener el mosto. . Sobre la piel de la uva se encuentra la levadura Saccharomyces cerevisiae. Entre 7 y 11 días de fermentación. Primero aerobia, y después anaerobia, controlando la temperatura, ya que si aumenta en exceso puede destruir las levaduras. Se aclara el vino para eliminar la turbidez. Estabilización para que precipiten las partículas en suspensión. Obtención de vino joven. Envejecimiento en barricas para obtener vinos viejos. Para obtener vino tinto, se deja la piel u hollejo de la uva negra. El alcohol extrae los pigmentos de este hollejo. 4 Vinos blancos: mosto de uvas sin piel. En algunos vinos se produce una segunda fermentación espontánea por acción de las bacterias del ácido láctico, disminuyendo su acidez. Los vinos espumosos se obtienen añadiendo azúcar para que se produzca una nueva fermentación, esta vez a presión.Las bebidas destiladas se obtienen por destilación del alcohol obtenido en la fermentación. o FABRICACIÓN DE LA CERVEZA Los cereales a partir de los que se obtiene contienen almidón, que previamente hay que hidrolizar a glucosa. El cereal más empleado es la cebada, aunque también se puede hacer con arroz o maíz. El grano se maltea: se humedece, para que las semillas empiecen a germinar. Se seca, y se muele; así se libera la diastasa, una amilasa que hidroliza el almidón a glucosa. Se separa el extracto acuoso del triturado sólido, se añade lúpulo y se cuece. El lúpulo da el sabor amargo e impide que crezcan bacterias. Al hervirlo se desnaturalizan las amilasas. A la mezcla se le añaden las levaduras que llevan a cabo la fermentación en los días siguientes (entre 5 y 10). Se deja madurar la cerveza un cierto tiempo. Filtración y pasteurización. o FABRICACIÓN DEL PAN Mezcla de harina y agua. Levadura: Saccharomyces cerevisiae. Los enzimas de la harina transforman el almidón en glucosa, que fermenta produciendo CO2. Las burbujas de este gas quedan atrapadas en la masa, que por ello aumenta su volumen. El alcohol producido se desprende durante la cocción, a la vez que se inactivan las levaduras y se elimina el agua. FERMENTACIÓN LÁCTICA o FABRICACIÓN DEL QUESO Fase I: Formación de cuajada Las bacterias lácticas (Streptococcus) producen ácido láctico, que coagulan la sproteínas al disminuir el pH. La coagulación se completa añadiendo cuajo o renina. Fase II: Maduración del queso. Adición de bacterias lácticas que hidrolizan proteínas. Si un porcentaje muy alto de proteínas se hidrolizan en péptidos solubles se obtienen los quesos blandos. Si se hidroliza un bajo porcentaje: quesos duros. Adición de levaduras y hongos: quesos blandos. 5 Adición de esporas de mohos (Penicullium roqueforti): quesos enmohecidos, como el cabrales español, el roquefort francés, el stilton inglés, el gorgonzola italiano o el azul danés. Adición de bacterias que producen ácido propiónico y que liberan CO2: gruyère. o FABRICACIÓN DEL YOGUR Leche entera que fermenta por la acción de Streptococcus termophilus y Lactobacillus vulgaris a 40ºC FERMENTACIÓN ACÉTICA o VINAGRE A partir de vino o alcohol destilado, mediante bacterias aerobias (Gluconobacter o Acetobacter). INDUSTRIA QUÍMICA PLÁSTICOS: o Obtención de óxidos de alquenos para fabricar plásticos y espumas de poliuretano. o A partir de la bacteria Methylococcus capsulatus, que no produce residuos contaminantes. DISOLVENTES, RESINAS, BARNICES, FIBRAS. DETERGENTES BIOACTIVOS: Llevan enzimas procedentes de bacterias que eliminan manchas. INDUSTRIA ENERGÉTICA Obtención de BIOCOMBUSTIBLES: o BIOALCOHOLES: a partir de biomasa y con hongos (Saccharomyces) o BIOACEITES: cultivo de plantas ricas en aceites vegetales. o BIOGÁS: Gas natural en yacimientos, generado por bacterias metanógenas. MINERÍA Obtención de cobre: o Se riega el material extraído con ácido sulfúrico, favoreciendo el desarrollo bacteriano. o Los microorganismos extraen soluciones de cobre. o Las soluciones se acumulan en balsas. o El cobre liberado se recoge. 6 AGRICULTURA Y GANADERÍA Desde hace miles de años el hombre ha realizado SELECCIÓN ARTIFICIAL. Las nuevas técnicas permiten obtener ORGANISMOS GENÉTICAMENTE MODIFICADOS (OMG) o Mejora genética de plantas: resistencia a plagas, a herbicidas, mejores frutos, maduración más tardía… o Mejora genética de animales: más rendimiento de carne, leche, huevos, lana,….; resistencia a enfermedades; crecimiento más rápido; producción de vacunas y fármacos… MEDICINA Obtención de FÁRMACOS: o Organismos en los que se introduce un gen de interés: hormonas, vacunas, interferón, factores de coagulación, antibióticos… o Animales transgénicos en los que se introduce el gen de una proteína terapéutica que se necesita. Generación de MODELOS ANIMALES clonados con una elevada tasa reproductiva y una genética similar a la humana. Sirven para estudiar enfermedades cardiovasculares, cánceres, envejecimiento celular… TERAPIA GÉNICA: o Tratamiento de una enfermedad con base genética introduciendo genes correctos en el organismo que intenten corregir el efecto de los genes defectuosos. o Puede ser: Ex vivo: Extracción de células del enfermo. Cultivo. Inserción en ellas del gen normal y reintroducción en el enfermo. In vivo: Genes introducidos en vía sanguínea en vectores. Los vectores llegan a células diana. In situ: Introducción directa de genes en tejidos afectados. o Problemas: Integración del gen en el genoma al azar. Los vectores o células portadoras de los genes terminan por morir, desapareciendo el efecto terapéutico. TRASPLANTE DE ÓRGANOS: o Obtención de órganos para trasplantes a partir de animales manipulados genéticamente, para que no provoque rechazo inmunológico. o Extracción de células madre de embriones humanos obtenidas por clonación de las células del propio enfermo. Problemas éticos, morales, políticos, religiosos… o La investigación se encamina al uso de células madre del cordón umbilical, células madre adultas o a las procedentes de embriones rechazados de la fecundación in vitro. 7 MEDIO AMBIENTE Se llama BIORREMEDIACIÓN al conjunto de procesos encaminados a la eliminación de la contaminación del agua, el suelo o el aire. Para ellos e aprovecha la actividad descomponedora de algunos microorganismos. o BIODEGRADACIÓN DE SUSTANCIA TÓXICAS, como plaguicidas, metales pesados, hidrocarburos de mareas negras… Algunas bacterias (Pseudomonas o Amorphoteca) eliminan los hidrocarburos de los vertidos de crudo. Algunas bacterias (Arthrobacter) eliminan insecticidas. Otras (Clostridium) eliminan explosivoscomo el TNT. Algunos microorganismos pueden acumular grandes cantidades de metales pesados (uranio, plata…) que luego pueden ser filtrados y recuperados. o DEPURACIÓN BIOLÓGICA DE AGUAS RESIDUALES Se realizan procesos de lagunaje donde diferentes algas y bacterias llevan a cabo distintos procesos químicos que eliminan productos contaminantes. o COMPOSTAJE Fermentación de residuos sólidos orgánicos y de los fangos de las depuradoras por microorganismos para obtener abonos ricos en nitrógeno. o PRODUCCIÓN DE BIOPLÁSTICOS por microorganismos. o RECUPERACIÓN DE ESPECIES EN PELIGRO DE EXTINCIÓN. 8