“DETERMINACION DE LA VARIABILIDAD DEL CONTENIDO Y LA COMPOSICION DE LA GRASA INTRAMUSCULAR EN CERDOS DE LA RAZA DUROC”. Alumno: Juan Cristóbal Pauta Labanda TUTOR: Marc Tor i Naudi Departamento de Producción Animal. AGRADECIMIENTO: A, Dios y la vida por haber hecho este sueño realidad y ayudarme a salir con fuerzas de los desafíos que me ha puesto en mi camino. A mis padres y hermanos que con su apoyo, supieron inculcar cada una de sus enseñanzas para seguir adelante. Al Gobierno del Ecuador que a través de la SENESCYT, supieron dar el apoyo económico y moral para seguir y poder culminar la maestría. A cada uno de mis profesores por su impartición de los conocimientos y en especial a mi director del proyecto Marc Tor i Naudi, Ana y Cristina encargadas del laboratorio por la paciencia que tuvieron para el desarrollo de esta investigación. JUAN CRISTÓBAL PAUTA LABANDA DEDICATORIA: Este trabajo está dedicado a DIOS a mis padres, y hermanos, profesores y la Senescyt que con la fuerza moral brindada he logrado terminar con bien la maestría y así poder ser un ente que apoyara al desarrollo de mi país Ecuador. JUAN CRISTÓBAL PAUTA LABANDA RESUMEN La calidad de la carne es el objetivo principal de las empresas se dedican a la producción porcina durante el trascurso de los anos. En la actualidad la mayor característica en la que está basada la calidad de la carne es que la misma contenga la mayor cantidad de GIM, es una de las características más importantes en la producción porcina. En el presente trabajo lo que se pretende es determinar las características y la cantidad de GIM entre diferentes tipos de músculos que a continuación mencionamos: GM, LM, SM, DA. Para lograr lo que pretende este estudio lo que hizo fue obtener muestras de los músculos antes mencionados y luego de un proceso previo en el laboratorio con lo cual se prepararon las muestras que se analizaron a través de la cromatografía de gases y así llegar a determinar la cantidad de GIM que contenía cada muestra de musculo. Una vez realizado todos los procedimientos dela laboratorio y a demás sacar las diferencias que se obtenían después de haber sido sometidas las muestras a la cromatografía de gases, lo que se llego a determinar es que en la mayoría de laos músculos resultaron ser significativas (p<0.05), llegando a la conclusión que cada uno de los resultados obtenidos se tenían una dispersión de heterogénea de ácidos grasos, los mismos que fueron determinados y a la vez clasificados de la manera de cómo se presentan los mismos, así tenemos que esta clasificación fue la que se menciona : SFA, PUFA, MUFA. La gran mayoría de estos en las cada una de las piezas utilizadas en el estudio, se encuentran dispersos de manera significativa, pero en algunos casos se hallaron una distribución igual entre algunos músculos ya que esto se evidencio cuando realizamos los análisis de las variables y así llegamos a esta conclusión la cual la estamos mencionando. Concluyendo que la técnica utilizada es confiable en más del 95%, y resulto tener un margen suficiente para ser aplicada en estudios similares a este ÍNDICE RESUMEN .................................................................................................... I INDICE DE GENERAL………………………………………………………….II INDICE DE TABLAS…………………………………………………………..IV INDICE DE FIGURAS .................................................................................V ABREVIATURAS .......................................................................................VI 1.INTRODUCCIÓN. ..................................................................................... 1 2. CALIDAD DE CARNE. ............................................................................ 3 2.1. DEFINICION Y CARACTERISTICAS PRINCIPALES ...................... 3 2.2. LA RAZA DUROC ............................................................................. 4 2.3. GRASA INTRAMUSCULAR .............................................................. 5 3. OBJETIVOS. ......................................................................................... 7 3.1. GENERAL ...................................................................................... 7 3.2. ESPECIFICOS ............................................................................... 7 4. MATERIALES Y MÉTODOS. ............................................................. 17 4.1. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS .......................................... 8 4.2. HOMOGENIZAR LA MUESTRA .................................................... 8 4.2.1. Material utilizado. ..................................................................... 9 4.3. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS .......................................... 9 4.4. EXTRACCIÓM DE AGUA DE LA MUESTRA ................................ 9 4.4.1. Liofilizador HETO, modelo FD8 ............................................. 10 4.4.2. Método soxhlet. ..................................................................... 10 4.4.3. Bases del soxhlet. .................................................................. 10 4.5. PROCEDIMIENTO PARA ESTERIFICAR LAS MUESTRAS ...... 11 4.5.1. Preparación de tubos........................................................ 11-12 4.5.2. Esterificar la muestra ........................................................ 12-13 4.5.3. Pesar la muestra .................................................................... 13 4.6. TRANSTERIFICACIÓN DIRECTA DE LOS TEJIDOS (ADAPATACIÓN DEL MÉTODO DE DANIEL C. RULE, 1997)............. 14 4.6.1. Objetivo y fundamento ........................................................... 14 4.6.2. Materiales y Aparatos. ........................................................... 14 4.6.3. Reactivos. ......................................................................... 14-15 4.6.4. Seguridad E Higiene. ............................................................. 15 4.6.5. Procedimiento. .................................................................. 15-17 4.7. MÉTODO CROMATOGRAFIA DE GASES ................................. 17 4.7.1. Análisis ................................................................................... 17 4.7.2. Bases del cromatógrafo ......................................................... 17 4.7.3. Procedimiento ........................................................................ 18 4.7.4. Cálculos ............................................................................ 18-20 5. ANÁLISIS ESTADISTICO ............................................................. 21-22 7 RESULTADOS Y DISCUSIÓN ........................................................... 23 7.1. PRUEBA ENTRE LAS VARIABLES ....................................... 23-25 7.2. RESULTADOS DE VARIABLES EN MATERIA SECA, GRASA INTRAMUSCULAR Y ÁCIDOS GRASOS......................................... 25-27 7.3. RESULTADOS DE GRASA INTRAMUSCULAR ................... 28-29 8. CONCLUSIONES. ................................................................................. 30 9. BIBLIOGRAFIA ................................................................................ 31-34 10. ANEXO FOTOGRAFICO DEL TRABAJO REALIZADO EN EL LABORATORIO ........................................................................................ 35 ÍNDICE DE TABLAS Tabla 1: Condiciones de trabajo ............................................... 18-20 Tabla 2:Correlaciones entre todos los datos obtenidos. ........... 21-22 Tabla 3:Calculo de Media / E. Estándar y caracteristicas de los musculos utilizados en el experimento. ........................................... 23 Tabla 4: Calculo de variables de Materi seca, Grasa intramuscular y Ácidos grasos .................................................................................. 26 Tabla 5: Porcentaje de acidos grsos totales en Gluteo medio, Semimembranoso, Dorsal ancho y Longissimus dorsi en mg/g en cada muestra de estuido. ................................................................ 28 ÍNDICE DE FIGURAS Figura 1: Composición de la carne de Duroc………………………4 Figura 2: Cromatografo de gases…....……………………………20 Figura 3: Muestras de diferentes tipos de músculo. ................... 35 Figura 4: Muestras procesadas de diferentes tipos de músculo. 36 Figura 5: Muestras de diferentes tipos de músculo ya procesada. ...................................................................................................... 37 Figura 4 – 5: Pesaje de las muestras de diferentes tipos de músculo. ....................................................................................... 38 Figura 6: Preparacion de la muestras antes de ir al cromatografo. ...................................................................................................... 38 ABREVIATURAS GIM: Grasa intramuscular PUFA: Ácidos grasos poli saturados SFA: Ácidos grasos saturados. MUFA: Ácidos grasos monoinsaturados. MS: Materia seca E.E: Error estándar. LD: Longissimus dorsi (lomo) MSM: Musculo semimembranoso MGM: Músculo glúteo medio MDA: Musculo dorsal ancho GSC: Grasa subcutánea AG: Ácidos grasos. GD34: Grasa dorsal a nivel de la 3 y 4 costilla. PL34: Profundidad del lomo a nivel de la 3 y 4 costilla. n: Numero de muestras. 1. INTRODUCCIÓN. La calidad cárnica es un concepto plural que no tiene una definición única, la importancia de los diferentes aspectos cualitativos difiere en función del segmento de la cadena cárnica que los analice. Para la carne fresca, atributos como el color, la cantidad de grasa, la terneza, jugosidad y sabor son vitales para la decisión de la compra. Para la carne procesada, la atención se centra en factores como el pH, la capacidad de retención de agua, estabilidad oxidativa y ausencia de sabores anómalos. La importancia de cada uno de ellos también dependerá de si el destino final del producto elaborado es para cocidos o curados. Según las investigaciones danesas los requerimientos de grasa intramuscular para carne fresca con óptima calidad organoléptica están entre 2-3% (rangos 2-4) en el lomo a nivel de la última costilla. Se ha en contrado en diversos estudios que las razas tienen diferente contenido en grasa intramuscular, incluso cuando se comparan al mismo espesor de grasa subcutánea; en dichos estudios se encontró que la raza Duroc presenta más grasa intramuscular. Otros dos aspectos que afectan el contenido de grasa intramuscular son el sexo y el sistema de alimentación, encontrándose bajo en machos enteros y en animales alimentados en forma restringida. Sin embargo, en años más recientes, calidad de la carne han recibido más atención y se han cada vez más importante en los programas de mejoramiento de los productores y procesadores de tratar de satisfacer al consumidor la demanda de productos de alta calidad nutritiva, la calidad de la palabra puede significar muchas cosas, pero lo más importante, significa la satisfacción clientes con los productos de carne de cerdo. Muchos rasgos diferentes han sido identificados como indicadores de la aceptación del consumidor de carne de cerdo, e incluyen características como el color, la firmeza, el pH, la ternura, vetas de grasa, jugosidad y sabor. El objetivo del presente estudio se pretende estimar la cantidad de GIM en la raza Duroc, haciendo comparaciones de músculos diferentes que son: (LM, GM, SM, MD,) atraves de la aplicación de técnica de cromatografía de gases con la cual estará comprobando la variación que existe entre estas muestras obtenidas para este trabajo. Aunque la carne de cerdo de cualquiera de las razas existentes, pero en particular de la que hemos utilizada en este experimento está contenga una variación de la composición de la carne, ya que se encuentra influenciada por diferentes factores los cuales se puede atribuir a la genética, peso, edad del sacrificio y alimentación, entre otros. Los cerdos de la raza Duroc, han sido considerados por contener un alto rango de contener GIM con la finalidad de mejorar el crecimiento magro. Tal como lo indican los estos autores haciendo hincapié en la que se está considerando en la raza Duroc muestran superiores de GMI entre los tipos modernos, (Lo et al, 1992.; Edwards et al, 1992;... Oliver et al, 1994, Wood et al, 2004). Por otra parte hay que considerar que el contenido de la GMI y el contenido de ácidos grasos, se considera que desempeñan un papel importante en la calidad de la carne del cerdo, sobre todo porque muchos de estas piezas son utilizadas en productos curados y ayudan a la prevención de enfermedades de humanas, por la misma razón cada vez se realizan ensayos prácticos de estrategias encaminadas a la mejora la calidad de la misma. Este estudio estima que los parámetros de ácidos grasos de los diferentes sitios de tejido grasa de la carne, producción, y las características de calidad de los cerdos Duroc seleccionados en las áreas de LM, SM, AD GM y de esta manera sacar una relación de cómo se encuentra distribuidos los diferentes ácidos grasos en cada una de estas piezas, y de esta manera satisfacer a largo tiempo las expectativas del usuario. 2. CALIDAD DE CARNE. 2.1. DEFINICIÓN Y CARACTERISTICAS PRINCIPALES Cuando nos referimos a la calidad de la carne, a parte de la garanta de salubridad de los alimentos, se incluyen de forma genérica en la definición de las características sensoriales, tecnológicas, nutricionales e higiénicas que se describen la carne perteneciente a una parte de la canal (Hambrecht, 2001 y Fischler, 2002).Pero el concepto de la calidad de la carne a diferencia de la cantidad es complejo, por tanto es difícil de definir y medir de una manera única simple. Esta complejidad es mayor cuando se trata del la carne de cerdo ya que esta se utiliza en distintos fines los cuales no requieren necesariamente de la materia prima (Sellier, 1998). La calidad organoléptica y tecnológica son las mas importantes para medir la calidad de la carne desde el punto de vista sensitivo, por parte del consumidor ya que son las cualidades más importantes que percibe en el momento del consumo de la carne, y el punto de vista técnico mediante aparatos de medición(Degesa, 2003). Las tres más importantes en la carne son: terneza, jugosidad y gusto, por eso se usan para definir la calidad organoléptica. En general, la grasa afecta a estas tres características (Wood et al., 1990). La grasa subcutánea supone más del 70% total de la grasa intermuscular un 20%, afecta en gran medida a las características organolépticas ya que es uno de los caracteres más importantes en la determinación de la calidad de la carne y se puede considerar que un mayor, porcentaje de GIM puede proporcionar mejores características. Por esta razón la mayor parte de los programas de selección se ha reconsiderado con la única finalidad de obtener mayor cantidad y calidad de carne. 2.2. LA RAZA DUROC La raza Duroc, presenta unas características productivas similares a otras razas porcinas (Tibau et al.1997) y se distingue por una mayor aceptabilidad de sus carnes debido a un mayor contenido de GIM en sus músculos (Barton – Gade, 1990, Edwards et al, 1992, Olivier et al, 1994) La carne de Duroc con alta infiltración afecta positivamente a la calidad sensorial, mientras que carnes con baja infiltración, presenta colores pálidos, excesiva dureza y sequedad así como la falta de gusto (carne insípida). Figura 1. Composición de la carne de Duroc. (pepeskitchen.blogspot.com) Es por ese motivo que en los últimos años, muchos esquemas de mejora genética porcina han incorporado en la raza Duroc sus esquemas de hibridación. Esta raza se la utiliza habitualmente como un macho finalizador, en toma de cruces para otras razas. También es destinado a la obtención de líneas maternas mediante cruzamientos con ibérico, Landrace, o Large White. Se pretende con esta raza recuperar, mediante programas de cruces, las características que se han perdido en otras razas debido a la intensiva mejora genética que han experimentado para mejorar los índices productivos. Esta línea genética se la considera como grasa, en principio con un menor rendimiento a la canal, aunque su mayor cantidad de GIM se hace más importante que en la de otras razas. El aspecto de la calidad de la carne es muy importante. 2.3. GRASA INTRAMUSCULAR Esta se la considera como un compuesto el mismo que aumenta la calidad e la carne, y su contenido graso suelen ser mal aceptadas, mientras que dietas con un contenido moderado o relativamente alto suelen ser muy apreciadas. Ciertos componentes y ácidos grasos volátiles de las grasa aportan aromas y sabores enriquecedores que favorecen la aceptación del alimento. (Sánchez – Muñiz, 2002). Los experimentos de Cameron et al (1999) han demostrado que tanto la selección por velocidad como la eficiencia del crecimiento magro han disminuido la GIM y han afectado su composición. Aunque no todos los estudios son coincidentes, el concepto de calidad no puede reducirse a una o dos variables, lo que parecería estar fuera dudad es que, con niveles actuales, el contenido en GIM de la carne esta positivamente relacionado con su aceptabilidad. Así, el consumidor exige un mínimo de GIM en la carne y que, según los usos, para poder detectar calidad organoléptica, al menos debe existir un 1% sobre la materia fresca de GIM (Wood et al, 1990). El nivel óptimo se situaría entre el 2 y 3% para el consumo. Se estima que por término medio el contenido de GIM tendría que llegar a doblarse (Estany, 2001 y Wood et al., 1990). La cantidad y calidad de GIM son importantes en el sabor, aroma y terneza de la carne, una carne demasiado magra es insípida, dura y seca, el veteado de la grasa en la carne afecta a la calidad sensorial de esta y en consecuencia a la aceptación por parte del consumidor. 3. OBJETIVOS. 3.1. GENERAL Determinación de la cantidad de grasa intramuscular que posee la carne de cerdo de la raza Duroc, en diferentes piezas musculares Longissimus dorsi, Semimembranoso, Dorsal ancho, Glúteo medio atraves del análisis de cromatografía de gases. 3.2. ESPECIFICOS Analizar el porcentaje de ácidos grasos que componen la carne de cerdo de la raza Duroc. Conocer las cantidades y distribución de los ácidos grasos en cada una de las piezas que se han tomado de muestra de la carne de cerdo Duroc. 4. MATERIALES Y MÉTODOS. 4.1. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS El objetivo se la preparación de las muestra es de sacar la mayor cantidad de agua presente en la muestra de carne, y así asegurarnos obtener la mayor cantidad de la grasa que sea más eficaz. 4.2. HOMOGENIZAR LA MUESTRA 4.2.1. Material utilizado. 110 Muestras de musculo entre los cuales tenemos: glúteo y lomo, semimembranoso y dorsal. Picadora de cuchillas Bisturí Fuentes de aluminio. Balanza. En primer paso se elimina los restos de grasa que se encuentra rodeando a la muestra, para de esta manera evitar la contaminación posteriormente se hace cortes a la muestra y se tritura en la picadora hasta conseguir una masa homogénea; las cuales se conservan en un congelador a – 20°C, en un periodo de 5 a 6 horas. 4.3. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS 1. Un día sacar las muestras del congelador y dejarlas que se descongelar. 2. Cortar un trozo de tocino y meterlo con la etiqueta a la bolsa otra vez 3. Del trozo que nos quedamos, separamos la piel de la grasa. Ponemos la piel y ponemos la grasa en una bandeja de aluminio. 4. Triturar la grasa con la picadora 5. Sacar los crisoles 30 minutos antes de pesar y colocarlos al desecador. 6. Por cada muestra tenemos dos replicas: a y b 7. Pesar el crisol, anotar el peso a T1 8. Pesar de 2 a 3 gr de la muestra, anotar el peso a T+MF1 9. Hacer lo mismo con la réplica b 10. Colocarlos los crisoles a la estufa de 100°C, durante un día. 11. Al día siguiente, poner el crisol de la estufa al desecador durante 30 minutos. 12. Pesar los crisoles y anotar el peso en el cuadro de T+ MS1. 13. Limpiar los crisoles, primero de todo borrar el lápiz del culo del crisol. 14. Poner los crisoles netos a la estufa a 100°C. 4.4. EXTRACCIÓM DE AGUA DE LA MUESTRA En este caso utilizaremos el liofilizador funciona de igual modo que en el proceso del lomo, y de los demás músculos que van hacer utilizados en la presente investigación. 4.4.1. Liofilizador HETO, modelo FD8 Proceso: Después de haber dejado a – 20°C, se introduce las bandejas congeladas en el liofilizador ya que el procedimiento usado en el laboratorio de la UdL trabajan con las muestras congeladas, para poder reducir el tiempo del programa liofilizado. El trabajo del liofilizador es que consigue deshidratar las muestras por sublimación debido a la acción de vacío que origina. Después de la liofilizar, las muestras se volverán a homogenizar en la picadora de cuchillas. Para seguir con el procedimiento, la muestra es sometida a un liofilizador así sacamos el agua de la muestra a ser procesada. 4.4.2. Método soxhlet. Una vez liofilizadas y homogenizadas, las muestras se someterán a un análisis para obtener la cantidad de materia de grasa contenida en las muestras que son el objeto del estudio. 4.4.3. Bases del soxhlet. El método consiste en la extracción del los lípidos de la muestra al ser estas solubles en disolventes orgánicos como éter de petróleo o el hexano. 4.5. PROCEDIMIENTO PARA ESTERIFICAR LAS MUESTRAS 4.5.1. Preparación de tubos 1. Limpiar los tubos con agua y jabón y dejarlos secar en la estufa a 50°C. 2. Cuando estén secos limpiarlos con metanol y volver a poner a la estufa. 3. Poner 2.5 ml de interno a cada tubo. Para poner el patrón a cada tubo primero se ha de limpiar la jeringa Hamilton y cloroformo, rechazar el cloroformo a la botella de residuos Halogenados. Al acabar se vuelve a limpiar la jeringa. Para preparar el patrón: (a la campana) Pesar 100mg de C: 15 (congelador - 40°C, cajón de arriba). Pesar 100mg de BHT. Diluirlo con 250 ml de cloroformo. 4. Evaporar los tubos al retro evaporador: Encender a tope el agua de la derecha Marcha muy poco el agua de la izquierda hasta que se vea que el refrigerante, comienza a moverse el agua. Colocar los tubos y dar un poquito de revoluciones Girar la llave del vacío escuchar el agua para saber si se hace bien el vacio = silencio. Si es así dar revoluciones hasta 70 aproximadamente. Cuando estén evaporadas aflojar las revoluciones y abrir la llave del vacío y después parar las revoluciones y sacar los el tubo. Dejar secar bien el cloroformo pesar y taparlos y ponerlos al congelador Parar el aparato y las aguas. 4.5.2. Esterificar la muestra 5. Sacar los tubos del congelador y dejarlos descongelar 6. Rotular 2 vasos de precipitación pequeños, uno con metanol y otro con Trifluoruro de boro. 7. Poner a cada tubo 2ml trifloruro de boro y después 2ml de metanol. 8. Tapar los tubos. 9. Anotar en una hoja el número de muestras para ponerles las etiquetas mas tarde. 10. Poner los tubos en el agitador durante 2 horas. Temperatura: 80°C y 70 rpm. Durante 2 horas ir controlando los tubos que no hiervan y evaporen el contenido del tubo. Si quiero sacar el tubo dejarlos enfriar unos segundos y cambiar el tapón hasta que no hierva. 11. Durante las 2 horas que se agitan los tubos, limpiar los viales de 4 ml con metanol y dejarlos a la estufa. 12. Hacer las etiquetas con los números que me anotado anteriormente. Colocar los viales ordenados del más pequeño al más grande. 13. Después de las dos horas sacar los tubos y dejarlos enfriar. 14. Llevar a la campana. Pipeta de 100oul y puntas azules Viales 4ml etiquetados. Vasos de precipitación con Hexa. Tubos esterificados. 15. poner a cada tubo 3ml de agua destilada y 2ml de hexano. 16. Tapar los tubos. 17. Agitar unos 15 segundos al agitador. 18. Centrifugarlos 5 min a 2500rpm. 19. Elimine el sobrenadante con una pipeta Pasteur y ponerlo al vial correspondiente. 20. Poner 1ml de hexano y repetir los pasos del 27 al 30. 21. Poner 1ml de hexano y volver a repetir los pasos el 27 al 30. 22. Finalmente poner una cucharadita de sulfato de sodio a cada vial, y taparlos y pasarlos en una caja al congelador. 4.5.3. Pesar la muestra 5. Etiquetar los tubos con el número de muestra correspondiente. Por cada muestra se utilizan 2 tubos de replica a y b 6. Echarlo el papel aluminio. 7. Pesar de 200 a 300 mg de la muestra, anotarlo el peso total y ponerlo en el mortero. 8. Cortar el papel aluminio. 9. Pesar 5 veces más de arena que es el peso de la muestra, anotarlo el peso arena y anotarlo y ponerlo en el mortero. 10. Mezclar bien en el mortero. 11. Poner el tubo etiqueta” dentro del vaso plástico y echarlo. 12. Pesar 75mg de la muestra (0.0750 – 0.0890mg aproxima), anotar el peso determinación. 13. Hacer los mismos pasos para alta replica. 14. Limpiar todo con papel. 15. Comenzar una nueva muestra 4.6. TRANSTERIFICACIÓN DIRECTA DE LOS TEJIDOS (ADAPATACIÓN DEL MÉTODO DE DANIEL C. RULE, 1997) 4.6.1. Objetivo y fundamento El método se basa en una reacción de los ácidos grasos a determinar. Los ácidos grasos de los triglicéridos es transformar en sus esteres metílicos por tal ser identificados y cuantificados por cromatografía gaseosa. 4.6.2. Materiales y Aparatos. Viales de 4ml con tapón recubierto de teflón. Rota evaporador R- 300 BUCHI Tubos de con tapón de rosca adaptables al retro evaporador Estufa de aire a 60 °C Gradilla metálica. Campana de extracción. Pipetas de Pasteur. Chupete Matraz aforado de 100ml. Baño maría Agitador ( vótex) Etiquetas adhesivas. 4.6.3. Reactivos. Solución de trifloruro de boro en metanol (20%) por síntesis. Hexáno por cromatografía gaseosa (98,8%). Metanol Sódico sulfato anhídrido purísimo por análisis. Trietilenglicol para síntesis BHT Tripentadecanoico (C: 15) Cloroformo. Acetona Agua destilada. 4.6.4. Seguridad E Higiene. Solución de trifloruro de boro en metanol (20%) R : 11 – 23/ 25 – 34 S: 16 – 26 – 36 – 44. Hexa para cromatografía gaseosa R : 11 – 23/ 25 S: 7 – 16 – 24– 45. Metanol. R : 11 – 23/ 25 S: 7 – 16 – 24– 45. 4.6.5. Procedimiento. Primer paso que se realiza es la, liofilizar las muestras con el programa #1, este consiste en picar las muestras, para coger 25mg de muestra, teniendo en cuenta que hay que coger 75mg de la carne y de arena ya que hemos utilizado una relación de 2: 1, a continuación preparar una solución 1mg/ml que metemos 1ml GT/muestra y 1mg de BHT/ muestra. A cada vial y ponemos 1ml de cloroformo dejamos que se evaporar el cloroformo porque queda el triglicérido (C: 15) en el tubo. La evaporación del disolvente se efectúa en un retro evaporador que presenta un adaptador para cada tubo asignado, la temperatura del baño metabólico del retro evaporador será de 50°C y la velocidad de rotación del mismo será del 50% el grifo que suministra agua a la trompa del vacio del reto evaporador ha de estar abierta al máximo, y la que suministra la refrigerador ha de estar poco abierta para evitar cambios de presión. El momento que se adaptan los tubos al retro evaporador la clave del cuerpo refrigerante ha de estar situada a 270°C hacia la derecha para que no exista el vacio en el sistema, y una vez adaptados a la clave se gira a 90°C hacia la derecha quedando en posición vertical y permita el vacio al sistema la evaporación de los disolventes deberá finalizar cuando los tubos se observe únicamente una fase grasosa. Antes de sacar los tubos del retro evaporador se ha de abrir la clave del cuerpo del refrigerante girando a 90°Ca la izquierda para así sacar el vacio en el sistema. Poner 75mg (25mg) de muestra dentro del tubo donde hay TG, poner a cada tubo 2ml de trifloruro de boro y 2ml de metanol y hacerlo en la campana, poner en marcha el baño maría un rato antes parra que se caliente a 80°C, meter los tubos tapados dentro del baño y agitar cada 5min con el vortex, mientras están los tubos del baño maría limpiar cada vial con metanol y etiquetarlos, después que han transcurridos 2 horas en el baño maría dejar enfriar los tubos, poner 3ml de agua destilada y 1ml de hexano, agitar los tubos 15 segundos al vortex, centrifugar por 10 min a 1500rpm .Coger la parte superior del tubo (sobrenadante) con una pipeta de Pasteur y pasarlo al vial correspondiente, volver a poner otro ml de hexano al tubo correspondiente y seguir los mismos pasos anteriores. Este proceso lo hacemos 3 porque hacemos 3 lavados es decir metemos 3ml de hexano, poner 2 cucharaditas de sulfato anhídrido puro a cada vial donde están los esteres metílicos de los ácidos grasos. Cuando se hayan recogido las tres fases hexánica, añadir a cada vial una punta de la espátula de sulfato de sodio anhídrido purísimo y conservar los viales en un congelador a – 40°C hasta el momento de realizar la cromatografía momento en el que se traspasara el contenido de los viales de 4ml a los viales de 1ml al inyector automático del cromatografía. 4.7. MÉTODO CROMATOGRAFIA DE GASES 4.7.1. Análisis Identificación y cuantificación relativa de los ésteres metílicos de los ácidos grasos por cromatografía gaseosa en columna capilar. 4.7.2. Bases del cromatógrafo El método del trabajo de la cromatografía de gases se basa en la de volatizar, la muestra con sus componentes a temperatura elevadas y en trasportar estos atraves de de una fase móvil (Helio en este caso), circulando por una columna capilar, la cual contiene una fase polar estacionaria para que los componentes de la muestra se separen, por un cambio denominado polaridad de forma final de los 30m de la columna existen, un detector de ionización el mismo que se llama el (FID) que genera una señal que es leída a su vez por un programa informático, el mismo que representara en forma de picos retenidos en diferentes periodos de tiempo los mismos que se los considera los cromatógramos. Al existir distintos componentes, no todos se volatilizan a la misma temperatura y por eso se trabaja con distintas condiciones en el aparato. 4.7.3. Procedimiento Primero se inyecta el patrón externo el cual se identifica y con el que comparamos los tiempos de retención de los picos, de las muestras inyectadas posteriormente para poder identificarlas así los ácidos grasos que componen la muestra. Las condiciones usadas para trabajar fueron en el cromatógrafo se indica en la siguiente tabla. Tabla 1 Condiciones de trabajo ZONA TEMPERATURA(°C) TIEMPO(min) RAMPA(°C/min) Inicio 150 1 - Rampa 225 1 4.5 A partir de las áreas de los picos obtenidos de los esteres metílicos por la cromatografía, se buscan los equivalentes a estos esteres y con ellos se podrá calcular la cantidad de lípidos totales. 4.7.4. Cálculos Con el mismo principio para la identificación de cada éster metílico constituye de la muestra, detallado en el aparato de la cromatografía gaseosa, se procede al cálculo del porcentaje de GIM presente en las muestras utilizadas y estas a la vez expresadas como cantidad de triglicérido: Calculo del Factor Respuesta (Ri): Se relaciona la respuesta de cada acido graso (i) con la del patrón interno (C: 15). Ri = (Psi/PsC: 15)*(CC: 15/Ci) Donde: Psi= Área del pico de cada acido graso del patrón externo. PSC: 15:0= Área del pico de C: 15:0 en el patrón externo. Ci= Concentración de cada acido graso del patrón externo. CC: 15:0= Concentración del C: 15:0(patrón interno) del patrón externo. En la siguiente figura de detallan estos requerimientos en un cromatógrafo de gases: Gas de arrastre o acarreador 1. 2. 3. 4. Puerto de inyección Una columna Un detector Un registrador o cualquier otro dispositivo de salida para medir la señal del detector 5. Cromatograma. Figura de cromatógrafo de gases# 2 Contenido de ésteres metílicos: Se calcula la cantidad del éster metílico (WFAMEi) para cada ácido graso (i). WFAMEi = (Pti*WtC: 15:0*(1/fTGi C: 15:0) / (Pt C: 15:0*Ri) Dónde: WFAME= > g de cada FAME Pti= > área de pico de cada acido graso (i) en cada muestra. WtC: 15:0 = > patrón interno C: 15:0, añadido a cada muestra. FTGI C: 15:0 = > factor de conversión de FAME a triglicérido equivalente del C: 15:0. Pt C: 15:0 = > área del pico del patrón interno C: 15:0, en cada muestra. Ri > = factor de respuesta de cada acido graso (i). 5. ANÁLISIS ESTADISTICO Los datos se analizaron mediante el paquete estadístico SAS-system V8 1999. Primeramente se analizaron los datos obteniendo la media de los datos con el error estándar, con lo cual se llego a determinar cómo se encontraban relacionados entre sí, por lo cual llegamos a sacar las diferencia que existían en los mismos aplicando dicho procedimiento. En la tabla # 1 esta detallado todo lo que antes mencionamos. Se realizo el análisis de correlaciones entre variables. Tabla 2 Correlaciones entre todos los datos obtenidos. n 2 Prof. Lomo 3 y 4 costilla Prof. Grasa dorsal.3 y 4 MAGRO 37,25± 7,47 19,7 ± 0,59 44,75 ± 2,65 5 10 3 1 15 23 3 15 20 38,95 ±3,17 37,01 ± 3,44 45,85 ±2,42 40,41 ±0 44,04 ±1,41 42,78 ±1,2 43,28 ±3,96 40,45 ±1,99 37,5 ±1,97 21,52 ± 1,32 23,6 ± 0,92 17,85 ± 1,77 21,02 ± 0 24,36 ± 0,69 22,9 ± 0,68 23,46 ± 1,34 23,53 ± 1,02 24,65 ± 0,77 43,9 ± 2,42 41,26 ± 1,73 48,94 ± 1,6 45,57 ± 0 40,77 ± 1,03 42,62 ± 0,83 42,45 ± 2,33 41,53 ± 1,43 39,25 ± 1,01 97 Correlaciones entre todos los datos obtenidos Ácidos Grasos C:14 C:16 C:16:1 C:18 C:18:1 C:18:2 C:20 C:18:3 C:20:1 C:20:2 C:20:4 GIGM 2,7 ± 0,1 27,0± 0,8 5,5± 0,2 12,1 ± 0,4 68,2 ± 1,9 18 ± 0,4 0,2 ± 0,01 1,2± 0,03 1,5 ± 0,05 1,1 ± 0,1 2,6 ± 0,1 GILM 2,4± 0,1 27,1 ± 1,3 4,9 ± 0,2 12,4 ± 0,6 56,9 ± 2,6 11,5 ± 0,3 0,2 ± 0,01 0,7 ± 0,02 1,1 ± 0,1 0,6 ± 0,03 2,3 ± 0,03 GIMSM 1,4± 0,1 13,5 ± 0,8 2,6 ± 0,2 6,2 ± 0,4 37,4 ± 2,8 10,5 ± 0,5 0,1 ± 0,01 0,5 ± 0,03 0,7 ± 0,1 0,5 ± 0,03 2,4± 0,1 GIMAD 4,1± 0,2 43,5 ± 2,2 6,1 ± 0,3 21,7± 1,2 83,8± 3,8 17,8± 0,6 0,3 ± 0,02 1,2 ± 0,05 1,7 ± 0,1 1,1 ± 0,05 2,2± 0,1 MGGS 10,9± 0,2 115,6 ± 1,9 17,8 ± 0,5 54,8± 3,6 328,7± 3,8 114,5± 3,5 0,93± 0,03 9,4± 0,3 9,8± 0,2 7,6± 0,2 1,2± 0,02 7 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 7.1. PRUEBA ENTRE LAS VARIABLES Para realizar, los primeros resultados del estudio empezamos haciendo un cálculo de media y también el error estándar y así procede al análisis de los datos que obtenidos del laboratorio, a continuación en la tabla siguiente se tiene una descripción de lo antes mencionado. Tabla 3: Calculo de Media / E. Estándar de GIM. ÁCIDOS GRASOS GRASA INTRAMUSCULAR GLÚTEO MEDIO GRASA INTRAMUSCULAR LONGISSIMUS DORSI GRASA INTRAMUSCULAR SEMIMEMBRANOSO GRASA INTRAMUSCULAR DORSAL ANCHO GRASA SUBCUTÁNEA C:14 2,7 ± 0,1 2,4± 0,1 1,4± 0,1 4,1± 0,2 10,9± 0,2 C:16 27,0± 0,8 27,1 ± 1,3 13,5 ± 0,8 43,5 ± 2,2 115,6 ± 1,9 C:16:1 5,5± 0,2 4,9 ± 0,2 2,6 ± 0,2 6,1 ± 0,3 17,8 ± 0,5 C:18 12,1 ± 0,4 12,4 ± 0,6 6,2 ± 0,4 21,7± 1,2 54,8± 3,6 C:18:1 68,2 ± 1,9 56,9 ± 2,6 37,4 ± 2,8 83,8± 3,8 328,7± 3,8 C:18:2 18 ± 0,4 11,5 ± 0,3 10,5 ± 0,5 17,8± 0,6 114,5± 3,5 C:20 0,2 ± 0,01 0,2 ± 0,01 0,1 ± 0,01 0,3 ± 0,02 0,93± 0,03 C:18:3 1,2± 0,03 0,7 ± 0,02 0,5 ± 0,03 1,2 ± 0,05 9,4± 0,3 C:20:1 1,5 ± 0,05 1,1 ± 0,1 0,7 ± 0,1 1,7 ± 0,1 9,8± 0,2 C:20:2 1,1 ± 0,1 0,6 ± 0,03 0,5 ± 0,03 1,1 ± 0,05 7,6± 0,2 C:20:4 2,6 ± 0,1 2,3 ± 0,03 2,4± 0,1 2,2± 0,1 1,2± 0,02 En donde cada unos de los músculos que se hicieron estudio nos dan una serie de resultados, en cada una de su composición como es el caso de los SFA ( Ácidos grasos saturados) C: 14+ C: 16 + C: 18+ C: 20 en GM se encuentra en una proporción de 2.7mg diferente a los demás como es el caso del mismo ácido graso 2.4mg, en cambio el SM, 1.4mg, el DA en una proporción de 4.1, siendo el más relevante la cantidad de grasa subcutánea con un rango de 10.9 mg, en cambio para el caso del C:16, contienen un valor de 27 mg para los algunos músculos como son : GM, LM, y existe una parición de contenido en Sm con una cantidad de 13,5 mg, pero los más relevantes en este ácido en el DA, con 43, 5 mg, mientras la grasa subcutánea tiene un promedio de 115, 6 mg, para el C: 20 tienen una cantidad de que varía de 0.2 a 0.3 en cada uno de los músculos, teniendo en cuenta que para la grasa subcutánea esta en un valor siempre más elevado en este caso 0.93mg, esto es el caso de los SFA ( Ácidos grasos saturados). Para seguir haciendo el análisis correspondiente a los resultados emitidos por el laboratorio seguiríamos con la diferenciación de los demás los cuales se los denomina: MUFA( ácidos grasos monoinsaturados) que comprende a los C:18:1 + C:18:3 + C:20:1, en cada uno de los músculos hacemos la misma comparación para saber en qué proporción se encuentran los mismos, tal es el caso del primero en el que tenemos que en algunos músculos esta en un promedio del 5.5 GM mg, LM:4.9mg, SM: 2.6 mg, DA: 6.1mg, sobresaliendo en porcentaje nuevamente la grasa subcutánea, con promedio de 17,8mg y así es el caso para los demás ácidos que están representados por los mismos. Ahora para finalizar este resultado variabilidad que existe entre los músculos tomamos en cuenta a los últimos clasificados que se denominan: PUFA (Ácidos grasos poliinsaturados) que comprenden el : C:18:3+ C:20:2+ C:20:4, que para cada uno de las muestras analizadas se encuentran en una proporción de ; GM: 1.2mg, LM: 0.7mg, SM: 0.5mg, DA: 1.2mg ocurre nuevamente que en caso del subcutáneo hay una gran diferencia de 9.4mg, C: 20:2 también existe la misma relación si consideramos el primer musculo GM: 1.1mg en SC: 7.6mg, para el C:20:4, GM, LM, SM, la variación que existe entre los mismos no en muy marcada, ya que los promedios están de ; 2.2 mg que sería la media entre los mismos, pero recalcando que este ácido en el SC, está en una proporción menor a la que tienen las demás muestras, en rango de 1.2mg. En conclusión consideramos que de la clasificación de la mayoría de los ácidos presentes en cada una de las muestras de músculos analizadas, existe variaciones del contenido de los ácidos grasos en proporciones que no son reveladoras para la mayoría de ellos pero en el caso del Sc, existía una información que de acuerdo a la clasificación que les dimos a la misma tenían una proporción significativa. 7.2. RESULTADOS DE VARIABLES EN MATERIA SECA, GRASA INTRAMUSCULAR Y ÁCIDOS GRASOS Posteriormente una vez ya analizado los datos de la tabla anterior procedemos a realizar nuevos cálculos de los cuales obtendremos lo que se denomina el análisis de las variables utilizadas para el desarrollo del estudio, entre las mismas tenemos: Materia seca y grasa intramuscular, en que proporciones se encuentran y a la vez los diferentes ácidos grasos presentes en cada uno de los músculos seleccionados en el desarrollo experimental. Tabla 4. Calculo de variables de MS, GIM AG. Materia seca GRASA SUBCUTANEA GRASA INTRAMUSCULAR GLÚTEO MEDIO GRASA INTRAMUSCULAR LONGISSIMUS DORSI (n= 15) (n= 109) (n= 52) c 92,99± 0,38 b 27,74 ± 0,16ª c d 29,61± 0,15 b GRASA INTRAMUSCULA R SEMIMEMBRANO SO GRASA INTRAMUSCULAR DORSAL ANCHO (n= 51) (n= 42) - - GIM 70,39± 0,79 14,70 ± 0,37 12,62 ± 0,54 8,03 ± 0,49ª 19,46 ± 0,85e C:14 10,91± 0,19e 2,66± 0,078cd 2,44 ± 0,10d 1,42 ± 0,10ª 4,06 ± 0,22b C:16 115,56± 1,89e 26,95± 0,78cd 27,10 ± 1,32d 13,49 ± 0,79ª 43,54 ± 2,19b C:16:1 17,79 ± 0,52e 5,49± 0,20c 4,88 ± 0,22d 2,62 ± 0,24ª 6,07± 0,29bc C:18 54,83 ± 1,47e 12,06± 0,37cd 12,38 ± 0,64d 6,17 ± 0,35ª 21,68 ± 1,18b cd d 56,94 ± 2,57 37,40 ± 2,79ª 83,75 ± 3,81 b c 11,54 ± 0,29 d 10,46± 0,49 ad 17,76 ± 0,55 b cd 0,16 ± 0,010 d 0,069 ± 0,06ª 0,30 ± 0,017 e 68,18± 1,85 C:18:1 328,71 ± 3,64 C:18:2 114,46 ± 3,51e 17,97± 0,38 0,93 ± 0,027e 0,15± 0,005 C:20 b C:18:3 9,42 ± 0,28e 1,20 ± 0,032c 0,71 ± 0,023d 0,50± 0,032ad 1,17 ± 0,04b C:20:1 9,77 ± 0,15e 1,53 ± 0,046c 1,11 ± 0,054d 0,70 ± 0,057ª 1,74 ± 0,08b C:20:2 7,6 ± 0,18e 1,06 ± 0,085c 0,59 ± 0,026d 0,46 ± 0,030ª 1,13 ± 0,04b C:20:4 1,15 ± 0,020ª 2,59 ± 0,10c 2,28 ± 0,034d 2,23 ± 0,05b 2,43 ± 0,07e Una vez realizados los cálculos entra las variables y así lograr determinar cómo se encuentran los diferentes ácidos grasos pero antes hay que señalar que tomamos encuentra la materia seca, grasa intramuscular y la mayoría de componentes de la grasa intramuscular, entonces llegamos a determinar lo que encuentra y como se encuentra la distribución de los mismos, a la vez considerando los valores de significancia p<0.05. Ahora con todo lo antes mencionado estaría detallando los valores de cómo se encuentran distribuidos en cada uno de los músculos que se han desarrollado el análisis. En los: C: 14 = 2.66± 0.078mg, C: 16= 29.95± 0.78mg, C: 18= 12.6 ± 0.37mg C: 18:1= 68.18 ± 1.85mg, C: 20= 0.15±00.5mg, los cuales forman parte de la en la composición de los ácidos grasos en el GIMGM, se encuentran en una proporción igual por lo que resultan ser iguales tanto para el GM Y LM, en cada uno de los componentes en una proporción determinada. En cambio sí observamos los cómo están distribuidos GIMSM, tenemos una variación de que no está marcada y así tenemos: C: 18:2 = 10.46 ± 0.49mg, C: 18:3 = 0.50 ± 0.032mg en los cuales también estamos confirmando, que resultan cada uno de estos componentes se encuentran en una proporción igual por las características que se están confirmando luego del análisis previo realizado en estudio, en donde comparten algunos de sus componentes en los dos ácidos grasos ya que estos se pueden estar inmersos en una pequeñas proporciones, por otro lado la cantidad de cómo se encuentran distribuido en los diferentes músculos como es el caso de C:16:1 = 6.07 ± 0.29mg, estos también los encontramos que están formando parte del musculo el Dorsal ancho y glúteo medio son totalmente iguales ya que forman en pequeñas cantidades se los puede encontrar . Posteriormente la mayoría de los demás ácidos que forman parte de SFA, MUFA y PUFA, se encuentran distribuidos en proporciones significativas los cual nos lleva a determinar que cada uno de los mismos se los puede llegar a encontrar, en cantidades significativas para cada una de las muestras de los músculos examinados, considerando que los mismos comparten valores de significancia de (p<0.05). También la distribución de los mismos no depende de algunas de los valores que tomamos encuentra como es el caso del la edad del animal y el peso de la canal de los mismos ya que estas variables son independientes para cada uno de los componentes que estas buscando, y con esto diríamos que si tomamos en cuenta alguna otra variable que consideramos obtendremos el mismo resultado o tal vez estaríamos determinando otra conclusión de los resultados antes mencionados. 7.3. RESULTADOS DE GRASA INTRAMUSCULAR Una vez hecho el análisis de los resultados citados anteriormente ahora, se hace un nuevo cálculo en el cual comparamos los porcentajes de ácidos grasos en la carne en que porcentaje se encuentran para cada una de las muestras del laboratorio, en la tabla siguiente se describe los resultados obtenidos. Tabla 5. Porcentaje de grasa intramuscular en las diferentes muestras de musculo. GRASA SUBCUTANEA GRASA INTRAMUSCULAR GLUTEO MEDIO % GRASA (n= 15) (n= 109) C:14 1,62± 0,029ª 1,90± 0,026 C:16 17,21± 0,21ª C:16:1 C:18 GRASA INTRAMUSCULAR LONGISIMUS DORSI GRASA INTRAMUSCULAR SEMIMEMBRANOSO (n= 52) (n= 51) c 2,07± 0,04 d 19,13± 0,12 c 2,65± 0,086ª 8,16± 0,16d GRASA INTRAMUSCULAR DORSAL AMCHO (n= 42) e b 1,82± 0,04 2,19± 0,050 22,22± 0,23 18,28± 0,52ª 23,52± 0,25 3,92± 0,10d 4,07± 0,075d 3,31± 0,16b 3,30± 0,077b 5,54± 0,37ad 10,10± 0,17c 8,42± 0,27e 11,69± 0,19b b c d e b C:18:1 48,98 ± 0,30 d 48,58± 0,22 47,13± 0,31 47,52± 0,79 45,55± 0,40ª C:18:2 17,03± 0,44d 13,12± 0,17b 10,12± 0,26c 14,61± 0,41e 10,008± 2,51ª C:20 1,13± 0,003e 0,11± 0,001c 0,13± 0,003de 0,086± 0,006e 0,16± 0,003b C:18:3 1,40± 0,035d 0,86± 0,010c 0,61± 0,014ab 0,66± 0,1e 0,65± 0,013b C:20:1 1,45± 0,020e 1,08± 0,010c 0,92± 0,014d 0,87± 0,021ª 0,944± 0,014b C:20:2 1,13± 0,023d 0,76± 0,054c 0,504± 0,014a 0,61± 0,01e 0,62± 0,010bc 0,17± 0,002ª cd C:20:4 1,94 ± 0,09 d 2,09± 0,10 e 3,76± 0,22 1,33± 0,07b En este caso los valores de significancia que se obtiene de los análisis que obtuvimos son los que en la mayoría de los casos como es el caso de el musculo GM, LM Y DA, están completamente interrelacionados entres si ya que cada uno de los componentes que se encuentran en formando parte de los mismos se distribuyen en una proporción especifica en cada uno de los músculos que se estudiaron, y con todo estos antecedentes hemos considerado mencionar de una manera detallada las proporciones de los mismos y así tener una visión objetiva de la cantidad y la distribución de los mismos, en diferentes músculos. Así tenemos que en el GM, C: 18:5 = 54±0.37mg, C: 20:4 = 1.94±0.09mg, LM, C: 20= 0.13±0.003mg, y por ultimo DA, C: 20:2= 0.62±0.010mg, estos son aquellos que están compartiendo componentes iguales para cada uno de los mismos, con la diferencia que entre ellos y en cambio el resto de ácidos grasos su distribución que se hace realmente igual, pero como lo mencionamos en el resto de resultados la otra cantidad de componentes de grasa intramuscular, están en una proporción significativa es decir que están en proporciones de p<0.05. Para finalizar con interpretación de las tablas que hemos construido con la finalidad de sacar las relaciones que existe entre la grasa intramuscular, de las piezas de músculos examinados estamos ya teniendo las bases suficientes para poder sacar algunas de las conclusiones, y determinar que la pieza de músculo así sea de un mismo animal la variaciones de la grasa intramuscular se esta se encuentra distribuida de manera distinta ya que cada uno de sus componentes como son: SFA, MUFA, PUFA, se encuentran en cantidades diferentes y que en algunos casos estos se pueden estar en mayor o en menor cantidad pero que entre los mismos, son capaces de presentarse en un músculo y otro estar, formando parte de los mismos y se ubican con la única finalidad de estar, compartiendo características entres sí. Finalmente así se llega a la comprensión de cómo estos tienen una manera distinta de presentarse. 8. CONCLUSIONES. La mayoría de los SFA, que forman parte de los músculos Dorsal ancho, Semimembranoso se encuentran en una mayor proporción que el resto de muestras analizadas. Los PUFA, se encuentran en mayor porcentaje en los músculos como: Longissimus dorsi, Semimembranoso y Dorsal ancho, haciendo relación que el mayor cantidad se encuentran en el Subcutáneo. Los MUFA, que a nivel de: Glúteo medio, Semimembranoso y Longissimus dorsi, su variación no está muy heterogénea. En la mayoría de las muestras estudiadas, la GIM se encuentra en una distribución es significativa. Dentro de las piezas de músculos como: GIMGM y GIMLM, los ácidos grasos se ubican en proporciones con diferente resultado pero a nivel del análisis de las variables son completamente iguales ya que se comportan de la misma manera entre ellos. Las variaciones de GIM, cada uno de los músculos se está confirmando que su distribución, es heterogénea por lo cual tenemos variaciones significativas en la mayoría de las mismas pero en otros casos son parecidos. 9. BIBLIOGRAFIA J. Casellas, J. L. Noguera, J. Reixach, I. Díaz, M. Amills and R. Quintanilla originally published online Apr 23, 2010. Bayes factor analyses of heritability for serum and muscle lipid traits in Duroc. Pigs. http://jas.fass.org/cgi/content/full/88/7/2246. K. Suzuki*1, M. Irie †, H. Kadowaki, T. Shibata, M. Kumagai*, and A. Nishida*. © May 31, 2005 American Society of Animal Science. Genetic parameter estimates of meat quality traits in Duroc pigs selected for average daily gain, longissimus muscle area, backfat thickness, and intramuscular fat content. K. Suzuki,*1 M. Ishida, H. Kadowaki, T. Shibata, H. Uchida, and A. Nishida*. © March 14, 2006 American Society of Animal Science. 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EFECTO DE LA GENÉTICA Y GRASA DEL ALIMENTO SOBRE LAS CARACTERÍSTICAS DE LA CANAL Y DE LA CARNE EN EL CERDO. [email protected] Muñoz, M., Rodríguez, M.C., Fernández, A., Barragán, C., Alves., E. y Silió, L. INIA, Departamento de Mejora Genética Animal, 28040 Madrid. (2007). Validación de los efectos del snp acaca: c.5634t>c sobre la composición de ácidos grasos en cerdos ibéricos puros y cruzados con Duroc. [email protected]. Daniel C. Rule. Meat Science, Vol. 46, No. I, 23-32, 1997 c 1997 Elsevier Science Ltd. Direct transesterification of total fatty acids of adipose tissue, and of freeze-dried muscle and liver withboron-trifluoride in methanol. Jorge Santiago Eusse Gómez. Universo Porcino. 2009. Calidad de la carne de cerdo. www.produccion. http://www.produccion-animal.com.ar/ http://www.produccion-animal.com.ar/. es.carnsgascons.com/categorias/cerdo-duroc/ http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S18711413060003 57. 10. ANEXO FOTOGRAFICO DEL TRABAJO REALIZADO EN EL LABORATORIO Figura 3: Muestras de diferentes tipos de músculo. Figura 4: Muestras procesadas de diferentes tipos de músculo. Figura 5: Muestras de diferentes tipos de músculo ya procesada. Figura 4 – 5: Pesaje de las muestras de diferentes tipos de músculo. Figura 6: Preparación de la muestras antes de ir al cromatografo