Evaluación de la influencia del ambiente ecológico en la

Resumen: E-018
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006
Evaluación de la influencia del ambiente ecológico en la composición química
del aceite esencial de Aloysia citriodora Palau.
Torres, Ana M. - Ricciardi, Gabriela A. - Camargo, Francisco J.
1
Ricciardi, Armando I. - Dellacassa, Eduardo S.
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura (UNNE)
Av. Libertad 5400, Campus Universitario, Módulo de Química, Primer piso; 3400 Corrientes, Argentina.
Tel. (03783) 457996 int. 108; e-mail: [email protected]
1. Cátedra de Farmacognosia y Productos Naturales, Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo,
Uruguay, Av. Gral. Flores 2124, CP-11800, Montevideo, Uruguay. E-mail: [email protected]
Antecedentes
Aloysia citriodora Palau, pertenece a la familia de las Verbenáceas y es conocida botánicamente con los sinónimos:
Aloysia citriodora Ortega ex. Pers.; Aloysia triphylla (L’Hér.) Britton; Lippia citriodora (Lam) Kunth; Lippia triphylla
(L’Hér.) Kuntze (Zuloaga et al., 1999). Popularmente se la conoce en Argentina como “cedrón”, “hierba luisa”, “yerba
luisa” (Jozamí et al., 1982); “cerdón”, “cedrón de Castilla” (Martínez Crovetto, 1981); en Brasil: “erva cidreira”,
“cidro” (González Torres, 1997); en Paraguay: “poleo-í”. Por vía oral se emplea la decocción o infusión de las hojas y
tallos, para el tratamiento de afecciones gastrointestinales (Cáceres, A.; 1996; Bassols, et al., 1996) y para afecciones
respiratorias (Bassols, et al., 1996). Las hojas se utilizan para afecciones nerviosas (Bassols, et al., 1996; Cáceres, A.;
1996).
El extracto etanólico de hojas de esta especie tiene actividad contra E. coli, M. tuberulosis y S. aureus y también en
el tratamiento contra ácaros (Tetranychus telarius) y áfidos (Aphis gossypii). (Cáceres, A.; 1996)
En ensayos de laboratorio la infusión de hojas ha mostrado tener un fuerte efecto inhibidor de radicales superóxido,
y moderado hacia radicales oxhidrilo y de hipoclorito debido probablemente a la presencia de compuestos fenólicos
naturales y flavonoides. (Valentao et al., 2002)
En función de la importancia de las posibles aplicaciones de los extractos de Aloysia citriodora, y en particular de
su aceite esencial, en el presente trabajo se pretende determinar el efecto del sitio de crecimiento y la influencia
estacional sobre la composición química de este aceite.
Materiales y Métodos
Se separaron los aceites esenciales de muestras provenientes de la misma planta pero recolectadas en diferente
estado vegetativo y diferente ambiente ecológico (transplantada). De la localidad de San Lorenzo (80Km hacia el S de
la capital correntina, en campo), se colectó material vegetal en otoño, que rindió 0,2 % de aceite esencial (identificado
como I); una posterior recolección en primavera, de la misma planta dio un 0,7% de aceite esencial (identificado como
II) y finalmente de material vegetal proveniente de los tallos tiernos y hojas jóvenes de la planta transplantada y
cultivada, se obtuvo 0,5% de aceite esencial (identificado como I Imp). En todos los casos el aceite esencial fue
separado de la matriz vegetal por destilación por arrastre con vapor de agua, haciendo pasar 2 l de aguas de arrastre.
Los aceites separados eran de color amarillo limón, con un pronunciado y penetrante aroma a limón. Fueron
conservados en frascos color caramelo, en atmósfera inerte y a bajas temperaturas.
El examen de los componentes del aceite esencial se realizó por métodos cromatográficos, utilizando GC/FID y
GC/MS para determinar la proporción e identidad de los constituyentes. Para ello, se utilizaron los siguientes
equipamientos y condiciones: CG Shimadzu 14B, detector FID, procesador de datos EZ-Chrom, con columna capilar
SE 52 (Mega, Legnano, Italia) unida químicamente (25 m x 0,32 mm de diámetro interno y 0,25 µm de espesor de fase
fija), recubierta con 5% de fenil-polimetilsiloxano (0,40-0,45 µm de espesor de fase fija), temperatura en la columna: 60
ºC (8 min), aumentando hasta 180 ºC (3 ºC/min); luego hasta 250 ºC (20 ºC/min) y 250 ºC (10 min). Temperatura en el
inyector: 250 ºC, en el detector 280 ºC, modo de inyección split, relación de split 1:30; volumen de inyección de 0,2 µl
de esencia. Fase móvil hidrógeno, 55 kPa. La identificación y cuantificación se realizó por comparación de sus Índices
de Retención Lineal (IRL) determinados en relación a la serie homóloga de n-alcanos (C9-C26) con los de bibliografía
(Adams, 2001; Davies, 1990). La cuantificación se realizó considerando el área de picos, expresándose las proporciones
relativas como porcentajes obtenidos por normalización de la misma.
Para la identificación de los componentes, se utilizó un equipo GC/MS Shimadzu modelo QP 5050, equipado con
dos columnas capilares: una SE 52 (Mega, Legnano, Italia) unida químicamente (25 m x 0,25 mm de diámetro interno;
0,25 µm de espesor de fase fija), recubierta con 5% de fenil-polimetilsiloxano (0,25 µm de espesor de fase fija)
temperatura en la columna: 60 ºC (8 min.), aumentndo hasta 180 ºC a 3 ºC/min; luego hasta 230 ºC a 20 ºC/min.
Temperatura del inyector 250 ºC, modo de inyección split; relación de split 1:40; volumen de inyección: 0,2 µl de
aceite. Fase móvil: helio, 122,2 kPa (51,6 cm/seg), temperatura de interfase: 250 ºC; rango de adquisición de masa 40400 m/z. La otra fue una columna capilar de sílice fundida BP-20 (SGE, Australia) (25 m x 0,25 mm de diámetro
interno, recubierta con polietilenglicol 20.000 (0,25 µm de espesor de fase fija). Temperatura en la columna 40 ºC (8
min), aumentando hasta 180 ºC (3 ºC/min), y a 230 ºC (20 ºC/min). Temperatura del inyector 250 ºC, modo de
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inyección split, relación de split 1:40; volumen inyectado: 0,2 µl de aceite. Fase móvil: helio, 92,6 kPa (55,9 cm/seg),
temperatura en interfase: 250 ºC; rango de adquisición de masas: 40-400 m/z.
Los patrones de fragmentación de cada componente se compararon con los almacenados en la biblioteca de
espectros del software (Adams, 2001; Mc Lafferty, 1991).
Resultados y Discusión
Tabla de los componentes del aceite esencial de A. citriodora
IRL
Componentes identificados*
922 α-Tuyeno
929 α-Pineno
969 Sabineno
982 6-Metil-5-Hepten-2-ona
1027 Limoneno
1043 β-(E)-Ocimeno
1053 γ-Terpineno
1053 (E)-Sabineno hidrato
1100 α-Tuyona
1118 (E)-p-Menta-2,8-dien-1-ol
1126 Óxido de (Z)-limoneno (furanoide)
1145 Óxido de (E)-limoneno (furanoide)
1145 Citronelal
1157 Óxido de β-pineno
1167 Rosefuranoepóxido
1167 Dihidro carvona (?)
1241 Neral
1248 Piperitona
1272 Geranial
1316 m-Acetanisol
1327 δ-Elemeno
1360 α-Copaeno
1368 β-Burboneno
1371 Longicicleno
1400 α-Cedreno
1403 β-Cariofileno
1409 β-Copaeno
1419 α-(E)-bergamoteno
1436 α-Humuleno
1453 Alloaromadendreno
1460 Germacreno D
1481 Ar curcumeno
1500 Biciclogermacreno
1509 γ-Cadineno
1509 (E)-Cadina-1(2),4-dieno
1519 Cubebol
1520 β-Curcumeno
1525 δ-Cadineno
1579 Nerolidol
1584 Óxido de cariofileno
1608 Epóxido de humuleno II
1617 Espatulenol + Globulol
1645 epi-α-Cadinol
1667 Acetato de elemol
I
II
0,1
0,1
5,7
0,9
21,7
0,5
0,1
0,2
0,5
0,1
0,5
0,3
0,5
0,2
0,8
12,1
0,1
17,5
0,4
0,6
1,1
0,4
3,6
0,2
0,2
0,3
0,8
0,4
4,8
2,4
0,5
0,7
0,2
1,6
2,9
2,8
0,3
0,9
-
I IMP
0,2
0,2
15,1
2,2
37,7
1,2
tr
0,3
0,1
0,3
0,2
0,2
11,2
0,1
14,8
0,3
0,2
0,3
0,1
2,3
tr
0,1
tr
0,2
0,2
2,1
1,4
0,5
0,3
1,2
1,0
0,1
0,3
-
0,8
0,6
0,2
0,5
1,0
31,7
tr
37,7
1,8
1,7
0,5
1,0
tr
0,4
0,1
tr
11,4
0,3
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IRL
Componentes identificados*
1667 Farnesol
1667 (Z)-Nuciferol
(Z)- Lanceol
Total
Grupos de Componentes
Hidrocarburos Monoterpénicos
Monoterpenos Oxigenados
Hidrocarburos Sesquiterpénicos
Sesquiterpenos Oxigenados
I
II
I IMP
-
-
tr
tr
1,1
87
94,4
90,8
28,2
33,7
18,2
6,9
54,4
29,4
8
2,6
0,6
73,7
3,2
13,3
tr: indica proporción menor que 0,1%
*Componentes registrados según el orden de elusión con sus respectivos índices de retención lineal experimentales,
calculados en columna SE52.
De la composición química de los aceites esenciales de la misma especie colectada en dos estados vegetativos
diferentes (I y II) se deduce que la influencia estacional no produce modificaciones mayores en la proporción de los
constituyentes químicos manteniéndose las fracciones de componentes agrupados en proporciones muy similares entre
sí con una ligera modificación en el contenido en hidrocarburos monoterpénicos en la esencia de primavera. Por otra
parte, comparando la composición de los aceites de la especie colectada en otoño (I), pero habiendo transplantado la
planta a un ambiente ecológico diferente (I Imp), se pone de manifiesto un enriquecimiento de la fracción
monoterpénica oxigenada (más específicamente coincidente con el aumento del contenido en Neral y Geranial) con la
concomitante disminución en la proporción de hidrocarburos monoterpénicos. Lo que permitiría asumir que la
composición del aceite esencial en esta especie está regulada por factores genéticos más que fenológicos o ecológicos.
Estos resultados aportan información importante a la hora de relacionar los variados usos de la especie con los
componentes químicos de su aceite esencial, sobre todo considerando la promisoria aplicación industrial de esta especie
tanto en cosmética como en farmacia.
Conclusiones
El aceite esencial de A. citriodora Palau, se caracteriza por la presencia mayoritaria de Neral y Geranial, conocidos
comúnmente como Citral, variando en proporción solamente por efecto del estado de crecimiento de la planta. Por el
transplante de la especie se observa un enriquecimiento en el contenido de estos componentes, sin que se modifique la
calidad del aceite esencial.
Por consiguiente se concluye que las aplicaciones principalmente debidas a estos constituyentes no revisten
modificaciones importantes por efecto del estado de crecimiento o del suelo, ubicando a esta especie en buen nivel,
dentro de aquellas que son promisorias para la industria farmacéutica o cosmética.
Agradecimientos
-Al Proyecto CYTED IV.20 que nos facilitó el acceso al equipamiento necesario para realizar el trabajo.
Bibliografía
-Adams, RP; 2001; “Identification of Essential Oil Components by Gas Chromatography / Quadrupole Mass
Spectroscopy”; Allured: Carol Stream, IL.
-Bassols, G y Gurni, A; 1996; “Especies de género Lippia Utilizadas en Medicina Popular Latinoamericana”;
Dominguezia, Vol. 13; Bs. As., pp. 14-25.
-Cáceres, A; 1996; “Plantas de Uso Medicinal en Guatemala”, Editorial Universitaria, Universidad de San Carlos de
Guatemala; pp. 7; 208-210.
-Davies, NW; 1990; “J Chromatogr”; 503: 1-24.
-González Torres, D; 1997; “Catálogo de Plantas Medicinales (y alimenticias y útiles) Usadas en Paraguay”; Litocolor
SRL, Paraguay; pps. 120 – 121.
-Jozamí, JM y Muñoz, J de D; 1982; “Árboles y arbustos indígenas de la Prov. de Entre Ríos”; Instituto Investigaciones
de Productos Naturales de Análisis y de Síntesis Orgánica (IPNAYS) (CONICET – UNL) Santa Fe, Argentina;
pps: 301; 304.
-Martínez Crovetto, R; 1981; “Plantas Utilizadas en Medicina en el NO de Corrientes”; Miscelánea 69, Fundación
Miguel Lillo, Tucumán, Argentina; pps. 89.
-McLafferty, FW y Stauffer, DB; 1991; “The Wiley/NBS Registry of Mass Spectral Data”, 5th edn. Wiley: New York.
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-Valentao, P, Fernandes, E, Carvalho, F, Andrade, PB, Seabra, RM y de Lourdes Basto, M; 2002; “Studies on the
antioxidant activity of Lippia citriodora infusion: scavenging effect on superoxide radical, hydroxyl radical and
hypochlorous acid”; Biol. Pharm. Bull., 25; 10: 1324-7
-Zuloaga, FG y Morrone, O (eds.); 1999; “Catálogo de las plantas vasculares de la República Argentina II”; Missouri
Botanical Garden Press, Missouri, U.S.A.; pps. 1137-1138.