USO PREVISTO: El HIV-1/2 Plus Combo Rapid Test es un

ESPECIFICACIONES DEL KIT:
Cat. No
Cantidad
Reactivo
ADRT0011
1 x 20
PRUEBAS
1 x 3 ml
Diluente
HIV
Almacenamiento
2-30◦C
HIV-1 y HIV-2 pueden provocar una fuerte respuesta
inmune, incluyendo la producción de anticuerpos. La
presencia de la anticuerpos anti HIV-1 y HIV-2 en
sangre, suero y plasma indica la exposición de un
individuo al virus de HIV-1 o HIV-2, siendo de gran valor
para el diagnóstico clínico.
USO PREVISTO:
PRINCIPIO DE LA PRUEBA:
El HIV-1/2 Plus Combo Rapid Test es un inmunoensayo
de flujo lateral para la detección y diferenciación
simultánea de anticuerpos anti-HIV-1 y Anti HIV-2 (IgG,
IgM, IgA) en suero humano, plasma o sangre completa.
Su uso está previsto como un test de cribado y como
ayuda en el diagnóstico de infección de HIV. Cualquier
muestra “reactiva” con el HIV-1/2 Ab Plus Combo Rapid
Test debe ser confirmada con un método alternativo
como ELISA o PCR.
El HIV-1/2 Plus Combo Rapid Test es un inmunoensayo
cromatográfico de flujo lateral. El test consiste de: 1) un
almohadilla coloreada que contiene el antígeno HIV-1
recombinante conjugado con oro coloidal (HIV-1
Conjugado), Antígeno HIV-2 conjugado con oro coloidal
(HIV-2 Conjugado) e IgG de conejo-oro conjugado, 3)
una membrana de nitrocelulosa que contiene dos
bandas de prueba (Bandas 1 y 2) y una banda control
(Banda C). La banda 1 esta pre-cubierta con antígeno
para la detección de anticuerpos anti-HIV 1. La banda 2
esta pre-cubierta con antígeno para la detección de
anticuerpos anti-HIV 2 y la banda C esta pre-revestida
de anticuerpo de cabra anti IgG de conejo.
RESUMEN Y EXPLICACION:
El Virus de Inmunodeficiencia I y II (HIV-1 y HIV-2) es un
virus envuelto dotado de una cadena simple de ARN. La
relación causal entre HIV-1 y HIV-2 y el síndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha sido establecida
desde hace décadas. HIV-1 ha sido aislado de pacientes
con SIDA y de individuos sanos con alto riesgo de
desarrollar SIDA. HIV-2 ha sido aislado de pacientes con
SIDA del oeste de África y de individuos seropositivos
asintomáticos.
Los dos tipos de HIV tienen una significante variación
en su secuencia. HIV-1 ha sido divido en 3 grupos: grupo
M (para el principal) que incluye al menos 10 subtipos
(A hasta J); grupo O (para atípicos); y grupo N (ni M, ni
O). De manera similar, el HIV-2 ha sido clasificado en al
menos 5 subtipos (A hasta E). Algunas variantes del HIV1 muestran un poco más de 50% de homología en sus
genes de la envoltura con la secuencia de las cadenas de
los prototipos más comunes.
Cuando un adecuado volumen de muestra es
dispensado en la ventana de muestra del cassette, la
muestra migra por capilaridad a través de del cassette.
Si los anticuerpos anti-HIV 1 están presentes en la
muestra, entonces migrarán a través de la almohadilla
conjugada donde se unirán al HIV-1 conjugado. El
inmunocomplejo será capturado en la membrada por el
antígeno pre-cubierto formando una banda de color
rojo en la región 1 indicando un resultado reactivo o
positivo. La ausencia de esta banda en la región del test
sugiere un resultado no reactivo o negativo. Si los
anticuerpos anti-HIV 2 están presentes en la muestra,
entonces migrarán a través de la almohadilla conjugada
donde se unirán al HIV-2 conjugado. El i
nmunocomplejo será capturado en la membrada por el
antígeno pre-cubierto formando una banda de color
rojo en la región 2 indicando un resultado reactivo o
positivo. La ausencia de esta banda en la región del test
sugiere un resultado no reactivo o negativo.
La prueba contiene un control, interno (Banda C) la cual
debe exhibir un color rojo del inmunocomplejo de IgG
de cabra anti-ratón/conjugado IgG de ratón anti
humano. De otra manera, el resultado de la prueba
seria inválido y la muestra debe ser repetida haciendo
uso de otro dispositivo.
REACTIVOS Y MATERIALES REQUERIDOS:
1. Cada kit contiene 20 cassettes, sellado en una bolsa
de aluminio con los siguientes artículos dentro:
a. Un cassette
b. Un gotero plástico
c. Un desecante
2. Diluente de muestra (1 botella x 3 ml)
3. Un inserto (Instrucciones de uso)
4. Control Positivo (disponible previa solicitud)
5. Control Negativo (disponible previa solicitud)
6. Reloj (No provisto)
7. Dispositivo de punción para sangre completa (no
provista)
ADVERTENCIA PRECAUCIONES:
Para Diagnóstico in Vitro
1. Este inserto debe ser leído completamente antes de
ejecutar la prueba. Fallas al seguir las instrucciones
causará resultados no confiables.
2. No abrir el empaque a menos que esté capacitado
para ejecutar el ensayo.
3. No use dispositivos expirados.
4. Todos los reactivos deben estar a temperatura
ambiente (15-30◦C) antes de usarlos.
5. No use los componentes de otros kits como sustituto
de componentes en este kit.
6. No use muestras hemolizadas.
7. Use ropa adecuada y guantes durante la
manipulación del kit y muestras. Deber lavarse las
manos después de ejecutar la prueba.
8. Los usuarios de este kit deben seguir las precauciones
universales
US CDC para la prevención de la
transmisión de HIV, HBV y otro patógenos.
9. No debe fumar, beber o comer en áreas donde las
muestras y kits son manipulados.
10. Descarte todas las muestras y materiales usados
para la realización de la prueba en contenedores para
material biológico.
11. Manipule el control positivo y negativo de la misma
manera que las muestras de pacientes.
12. Los resultados deben ser leídos dentro de los 15
minutos después de haber dispensado la muestra en el
cassette. La lectura de los resultados pasados los 15
minutos puede ocasionar una incorrecta interpretación.
13. No realice la prueba en cuartos con un flujo de aire
muy fuerte.
PREPARACION DEL REACTIVO Y ESTABILIDAD:
Todos los reactivos están listos para su uso. Almacene
los kits no usados a 2-30◦C. El control positivo y
negativo deben ser almacenados a 2-8◦C. Asegúrese de
que el dispositivo alcance la temperatura ambientes
antes de abrirlo. El kit es estable hasta la fecha de
expiración impresa en el empaque. No congele el kit ni
lo exponga a temperatura mayor de 30◦C.
TIPO DE MUESTRAS:
Considere cualquier material de origen humano como
infeccioso y manipule el mismo usando procedimientos
estándares de bioseguridad.
Plasma:
1. Obtenga la muestra en tubo de color lavanda, azul o
verde (contentivo de EDTA, citrato o heparina en
Vacutainer ® respectivamente) por venipunción.
2. Separe el plasma por centrifugación
3. Cuidadosamente retire el plasma y dispénselo en un
tubo pre-rotulado.
Suero:
1. Obtenga la muestra en tubo de color rojo (Vacutainer
® sin anticoagulante) por venipunción.
2. Permita la coagulación de la sangre.
3. Separe el suero por centrifugación.
4. Cuidadosamente retire el suero y dispénselo en un
tubo pre-rotulado.
Ejecute la prueba tan pronto como sea posible después
de su obtención. Si la prueba no puede ser realizada
inmediatamente, las muestras deben ser almacenadas a
2-8◦C hasta 5 días. Las muestras deben ser congeladas a
-20◦C para un almacenamiento más prolongado.
Evite múltiple ciclos de congelación/descongelación.
Antes de realizar la prueba, descongele las muestras a
Temperatura ambiente, mezcle lentamente.
Las
muestras contentivas de partículas deben ser aclaradas
por centrifugación antes de ejecutar la prueba.
Sangre Completa:
1. Gotas de sangre completa pueden ser obtenidas en
tubos con anticoagulante (EDTA, Citrato o Heparina) por
punción del dedo o venipunción. NO use muestras
hemolizadas para realizar la prueba.
2. Muestras de sangre completa deben ser refrigeradas
(2-8◦C) si la prueba no se va a realizar inmediatamente.
Las muestras deben ser analizadas dentro de las 24
horas de obtención.
PROCEDIMIENTO:
Paso 1: Las muestras y el kit debe estar a temperatura
ambiente si están refrigerados o congelados. Mezcle las
muestras bien antes de realizar el ensayo una vez que
se descongelen.
Paso 2: Cuando esté listo para realizar la prueba, abra la
bolsa contentiva del cassette por la muesca y retire el
dispositivo. Coloque el cassette en una superficie plana
y limpia.
Paso 3: Asegúrese de colocar el ID de paciente en el
cassette.
Paso 4: Para Sangre Completa
-Dispense 1 gota (aprox. 40-50µl) de sangre
completa en el circulo indicativo de MUESTRA
-Dispense 1 gota (aprox. 35-40µl) de diluente de
muestra inmediatamente.
Paso 5: Active el cronómetro
Paso 6: Los resultados pueden ser leídos en 15 minutos.
Resultados positivos pueden ser visibles en menos de 1
minuto.
No lea los resultados después de los 15 minutos. Para evitar confusión,
descarte el cassette después de interpretar el resultado.
CONTROL DE CALIDAD:
Utilizando casetes HIV / Sífilis Ab Combo Ensayo Rápido
como se describe en el procedimiento anterior, ejecute
1 control positivo y 1 control negativo (proporcionado a
pedido si los controles de calidad externos no están
disponibles en el laboratorio) en las siguientes
circunstancias para supervisar el rendimiento de
pruebas:
1. Un nuevo operador utiliza el kit, antes de realizar las
pruebas.
2. Se utiliza un nuevo dispositivo de prueba.
3. Se utiliza un nuevo envío de kits.
4. La temperatura de almacenamiento del kit esta fuera
de 2-30 ° C
5. La temperatura de la zona de ensayo está fuera de
15-30 ° C
RESULTADOS ESPERADOS:
1. NO REACTIVO/NEGATIVO: Si solo la banda C está
presente, la ausencia de cualquiera de las bandas (HIV
1/HIV-2) indica que no se detectaron anticuerpos en la
muestra. El resultado es NO REACTIVO.
Para Suero/Plasma
-Llene el gotero con la muestra. Mantenga el
gotero verticalmente y dispense 1 gota (aprox.
35-50µl) en el circulo indicativo de MUESTRA,
asegurándose de que no queden burbujas.
-Agregue 1 gota (aprox. 35-50µl) de diluente de
muestra inmediatamente.
2. RESULTADO POSITIVO:
2.1 Adicional a la presencia de la banda C, si la
banda 1 se desarrolla, la prueba indica la
presencia de anticuerpos para HIV-1. El
resultado es HIV-1 REACTIVO.
Negativo
Total
2.2 Adicional a la presencia de la banda C, si la
banda 2 se desarrolla, la prueba indica la
presencia de anticuerpos para HIV-1. El
resultado es HIV-2 REACTIVO.
2.3 Adicional a la presencia de la banda C, si las
bandas 1 y 2 se desarrollan, el resultado
también REACTIVO. Para diferenciar el tipo de
infección por HIV, diluya la muestra con
diluente de muestra 1:50 o 1:100. Luego ejecute
la prueba haciendo uso de un nuevo cassette
(Vea limitaciones de la prueba -#5)
0
20
980
980
980
1000
Sensibilidad Relativa: 100%, Especificidad Relativa: 100%,
Acuerdo Global: 100%
2. Rendimiento Clínico para la Prueba HIV-2 Ab
Un total de 195 muestras provenientes de
sujeto susceptibles se analizaron con el HIV ½
Ab Plus Como Rapid Test y por la Administración
de Drogas del Estado Chino (SDA) EIA. La
comparación para todos los sujetos se muestra
en la siguiente tabla:
EIA
Positivo
Negativo
Total
HIV-1/2 Ab Combo
Rapid Test
Positivo
Negativo
20
0
0
175
20
175
Total
20
175
195
Sensibilidad Relativa: 100%, Especificidad Relativa: 100%,
Acuerdo Global: 100%
Las muestras que resulten REACTIVAS o POSITIVAS deben ser
confirmadas con un método alternativo como ELISA o PCR y los
hallazgos clínicos antes de cualquier diagnóstico
3. RESULTADO INVALIDO: Si no hay banda C, la prueba
es inválida aun y cuando aparezca la banda 1 o 2. En
este caso, repita la prueba con un nuevo cassette.
LIMITACIONES DE LA PRUEBA:
1. El Procedimiento del ensayo y la interpretación del
resultado deber se seguido muy de cerca cuando
determine la presencia de anticuerpos anti HIV en el
suero, plasma o sangre completa de los sujetos.
2. El HIV-1/2 Ab Plus Como Rapid Test está limitado a la
detección cualitativa de anticuerpos anti HIV-1 y anti
HIV-2 en suero humano, plasma y sangre completa. La
intensidad de la banda no se correlaciona con el titulo
de anticuerpos presente en la muestra.
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO:
1. Rendimiento Clínico para la Prueba HIV-1 Ab
Un total de 1000 muestras provenientes de
sujeto susceptibles se analizaron con el HIV ½
Ab Plus Como Rapid Test y por la Administración
de Drogas del Estado Chino (SDA) EIA.
EIA
Positivo
HIV-1/2 Ab Combo
Rapid Test
Positivo
Negativo
20
0
Total
20
3. Un resultado NO REACTIVO para un individuo indica
ausencia detectable de anticuerpos HIV-1 o HIV-2. Sin
embargo, un resultado no reactivo no excluye la
posibilidad de exposición o infección con HIV-1 o HIV-2.
4. Un resultado NO REACTIVO puede ocurrir si la
cantidad de anticuerpos presentes en la muestra está
por debajo del límite de detección del ensayo o los
anticuerpos no son no están presentes durante la fase
de la enfermedad en la cual se obtuvo la muestra.
5. Tal y como se ilustra en INTERPRETACION DE LOS
RESULTADOS DEL ENSAYO-2,3 las 3 bandas (1,2 y C)
pueden desarrollarse cuando se analizan muestras que
contienen altos títulos de anticuerpos anti HIV-1. Para
diferencia la reactividad cruzada: diluya la muestra con
diluente de muestra 1:50 o 1:100, luego haga otra
corrida empleando un nuevo cassette. Solo las bandas
1 y C aparecen cuando la infección por HIV-1 está
presente. Si las bandas 1,2 y C la prueba indica
exposición al virus HIV-1 y HIV-2.
6. Si la sintomatología persiste mientras el resultado de
la prueba HIV1/2 Ab Plus Combo Rapid Test es NO
REACTIVO, es recomendable obtener una nueva
muestra en pocos días o usar un método alternativo7. Algunas muestras contienen inusualmente altos
títulos de de anticuerpos heterófilos o factor
reumatoide que pueden afectar los resultados
esperados.
8. Los resultados obtenidos con esta prueba solo deben
ser interpretados en conjunto con otros procedimientos
diagnósticos o hallazgos clínicos.
BIBLIOGRAFIA: