Practica N° 3 Cromatografia de Capa Fina 2015

Universidad Central de Venezuela
Facultad de Agronomía
Departamento de Química y Tecnología
Cátedra de Análisis de Productos Agrícolas I
INFORME POST – LABORATORIO CROMATOGRAFIA CAPA FINA
2. Introducción
3. Objetivos de la práctica
4. Muestras, equipos y fundamento
 Muestras usadas, equipos e instrumentos empleados y
 Fundamento de la practica
5. Resultados:
A. Esquematice el procedimiento empleado para el desarrollo de cada
Práctica.
B. 1era. Parte:
- Presentar cuadro de las distancias recorridas por las manchas y calcular el Rf de
cada una.
- Comparar los diámetros de cada mancha.
- Relacione la concentración de Colesterol sembrados en la placa con los Rf y
diámetros de las manchas.
- ¿Es la solución de Colesterol una muestra pura?. Razone su respuesta.
C.
-
2da. Parte:
Presentar cuadro de las distancias recorridas y calcular el Rf de cada una.
Hacer un dibujo de la placa con las manchas.
Realice un análisis de la misma basado en: Rf, tamaño de las manchas, cantidad de
manchas por muestra (pureza), fluorescencia.
6. Conclusión:
7. Bibliografía
8. Anexos
REALICE UN BREVE RESUMEN E INTERPRETACIÓN DE LA SEPARATA
QUE SE PRESENTA A CONTINUACION:
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Práctica Nº 3.-CROMATOGRAFIA CAPA FINA
APA 2015
CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA APLICADA EN LA
CARACTERIZACIÓN DE MUCÍLAGO DE Opuntia hyptiacantha
Sarahí, Rodríguez González1*; Héctor Eduardo, Martínez Flores1; Lourdes I., Macías
Rodríguez2; Carla Karina, Chávez Moreno1.
1Programa
Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas, Facultad de Químico
Farmacobiología, 2Instituto de Investigación de Ciencias Químico biológicas, Universidad
Michoacana de San Nicolás de Hidalgo.
*[email protected]
INTRODUCCIÓN
En el estado de Michoacán se han registrado 20 especies de Opuntia (Segura et al., 2009),
Entre las especies silvestres se han identificado: Opuntia hyptiacantha, O. atropes, O.
joconostle, O. streptacantha y O. tomentosa (Bravo-Hollis, 1978), las cuales han sido poco
estudiadas, pero representan un gran potencial para su estudio y caracterización ya que
podrían traer grandes beneficios tecnológicos, económicos, sociales y culturales (Sáenz et al.,
2006).
Las pencas de nopal excretan una sustancia “viscosa” llamada mucílago, es uno de los
componentes más importantes ya que forma parte de la fibra dietética (FD) del nopal (Gibson y
Nobel, 1990), es un polisacárido fibroso, altamente ramificado con azúcares y ac. Uronicos.
Debido a su conformación polimérica y sus propiedades reológicas y funcionales los mucílagos
representan compuestos de gran interés para la investigación y el desarrollo de productos en el
sector industrial de alimentos y farmacia. Por lo tanto, es muy importante caracterizar
químicamente el polisacárido (mucílago) de O. hyptiacantha, para determinar sus componentes
a fin de establecer sus posibles aplicaciones, para esto se debe de asegurar que la extracción
del mucílago sea la adecuada y no afecte la estructura nativa del polisacárido.
MATERIALES Y MÉTODOS
La extracción del mucílago de Opuntia hyptiacantha se efectuó mediante el método de
extracción de Opuntia ficus indica desarrollado por Rodríguez-González (2010) a partir de las
técnicas de Forni et al. (1994) con las sugerencias de Medina-Torres y col. (2000) citado por
Arizmendi en el 2004, y modificado por Zavala-Mendoza (2012). Las variables de modificación
del método fueron: Relación nopal/H2O, tiempo y temperatura de calentamiento. Para verificar
si el polisacárido está presente en la muestra extraída a 65°C, 75°C y 83°C (2 h.) relación
nopal/H2O (1:2, W/V) (Zavala-Mendoza, 2012), y comprobar si la temperatura de extracción
afecta a la estructura del mucílago (aparición de monosacáridos libres) se realizó una
cromatografía de capa delgada (TLC), esto se realizó con y sin lavados previos del nopal en
H2O desionizada. Por otra parte, también se realizó la TLC de los lavados del nopal, y
comprobar si estos contienen monosacáridos libres, y eliminarlos antes de la extracción. La
TLC se llevó a cabo de acuerdo a Ribeiro et al., 2010. Posteriormente, se modificó la relación
de nopal/H2O (sin H2O, 1:1, 1:2), así como el tiempo de extracción (0 min., 1 h y 2 h) y se corrió
las TLC de cada extracción antes de precipitar con etanol al 96%. Después, se llevó a cabo la
extracción con H2O (1:1), con etanol al 50% (1:1), con etanol al 80% (1:1) (todas estas sin
temperatura y tiempo de extracción) y se corrieron las TLC antes de precipitar con etanol al
96% y de los precipitados en polvo de estos mismos. Y por último se corrió en una misma
placa, para comparar, la TLC del mucílago en polvo extraído con etanol al 50 y 80% (1:1), y del
mucílago en polvo extraído según el método de Zavala-Mendoza (2012) (relación nopal/H2O
1:8, a 83 °C por 2 h.) y del mucílago extraído de acuerdo al método de Rodríguez-González
(2010) (relación nopal/H2O 1:2, a 83 °C por 1 h.)
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados de la primer corrida de TLC, indican que hubo presencia d(mayoritariamente Xilosa), así
como las presencia de ac. Urónicos, aunque tambien se encontró la presencia del polisacarido en menor
cantidad, tanto en las corridas con lavados y sin lavados previos. Se observó que en la extraccion a
temperatura ambiente con y sin lavados, resultó con menor concentracion de monosacáridos y ac.
Urónicos (Fig. 1). Lo cual indica que la temperatura si afectó a la estruactura del mucílago. En la TLC de
los lavados del nopal no hubo presencia de monosacáridos, polisacarido, ni ac. Uronicos. En los
resultados de la TLC de la modificación de la relación nopal/H2O y tiempo de extracción (Fig. 2) hubo
presencia de monosacaridos y del polisacarido, aunque la mancha menos concentrada fué en la corrida del
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mucílago con extracción nopal/H2O 1:2 (W/V) pero, esto se puede deber a que hay menos conentración
de monosacáridos ya que hay más cantidad de H2O, por lo tanto, esto no quiere decir que efectivamente
haya menos concentración de monosacáridos en esta extracción, así que, se decidió que la relación
nopal/H2O debe ser 1:1 para obtener resultados más confiables. Y en las corridas de TLC del tiempo de
extracción, la corrida a 0 min. Fué menos concentrada que las otras dos (Fig. 3). En los siguientes
resultados, hubo presencia tanto de monosacáridos como del polisacárido, aunque con H 2O resultó menos
concentración que con etanol al 50 y 80%, esto es de mucílago antes de precipitar con etanol al 96% (Fig.
4), pero al llevar a cabo las TLC de estas con mucílago precipitado en polvo, en la extracción con etanol
al 50 y 80% no hubo presencia de monosacáridos ni ac. Urónicos, pero si del polisacárido (Fig. 5). Al
comparar las TLC de estas extracciones con las de los métodos mencionados en metodología se observó
que en el mucílago estraído por estos métodos, al contrario, si hubo presencia de monosacáridos y ac.
urónicos adémas del polisacárido (Fig. 6).
CONCLUSIONES
La presencia de monosacáridos y ac. uronicos se debe posiblemente a la temperatura y tiempo de
extracción, así como al solvente utilizado (etanol); este último es un factor importante ya que disuelve a
los monosacáridos y ac. Urónicos libres, que al momento de precipitar con etanol al 96% no permite que
estos sean precipitados junto con el polisacarido, por lo tanto, sólo precipita el mucílago sin la presencia
de estos.
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