HEMOGLOBINA Solución DRABKIN Código Presentación 02939 1 x 1000 ml Método CIANOMETAHEMOGLOBINA Para determinación de Hemoglobina en Sangre PRINCIPIO CALCULO La hemoglobina (Hb) presente en la muestra, en presencia de ferricianuro, se oxida a hemiglobina (Hi, también llamada metahemoglobina) que, a su vez, se combina con iones cianuro a pH 7,2 convirtiéndose en cianuro de hemiglobina (HiCN o cianmetahemoglobina). Todos los hemocromógenos, a excepción de la sulfohemoglobina, reaccionan completamente en 3 minutos y la lectura se efectúa a 540nm. FACTOR = Absorbancia Patrón Hemoglobina (g/dl)= Factor x Abs. Muestra CONTENIDOS VALORES DE REFERENCIA Hombres: 12.5 a 17.5 g/dl Mujeres : 11.5 a 15.5 g/dl REACTIVO Reactivo para Hemoglobina SOLUCION DRABKIN Potasio Ferricianuro Potasio Cianuro Buffer y estabilizantes 0.6mM 0.7mM cs CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO LINEARIDAD La reacción es lineal hasta 25 g/dl. Para valores superiores, se debe reprocesar con la mitad del volumen de muestra y el resultado obtenido se multiplica por dos (2). PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS • • • • Conservado entre 15°C y 30°C y protegido de la luz , estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. El reactivo tiene componentes tóxicos, evite el contacto con la piel, ojos y/o ropa. El reactivo contiene cianuro. No mezcle con ácidos. No use el reactivo si su color es diferente al amarillo o si es turbia o decolorada. MATERIALES ADICIONALES SUMINISTRADOS • • • • REQUERIDOS Concentración Patrón _______ NO REPETITIVIDAD Concentración media 8.9 g/dl 18.2 g/dl N 25 25 DE 0.9 1.2 CV% 1.1 1.4 REPRODUCIBILIDAD Concentración media 9 g/dl 13 g/dl N 25 25 DE 0.8 1.1 CV% 1.0 1.3 EXACTITUD Análisis de la regresión lineal obtenido con muestras de suero analizadas con el presente método y otro método similar se hallo un coeficiente de correlación (r) igual a 0.992 con una ecuación de regresión lineal y=0.985x+0.09 (n=27, Rango 8.9-12.6 g/dl). Patrón HEMOGLOBINA.. Espectrofotómetro o foto colorímetro de filtros capaz de medir absorbancia a 546nm. Pipetas automáticas. Cronometro y/o timer. INTERFERENCIAS Sustancias que causen turbidez pueden elevar falsamente el valor de Hemoglobina. Esto incluye los lipidos, proteinas plasmaticas anormales (macroglobulinemia) y hemolisis. Para una lista completa de los medicamentos y sustancias que pueden interferir en la determinación de 10 hemoglobina consulte Young, et al. MUESTRA Sangre Total a) Recolección: obtener sangre anticoagulada. b) Aditivos: deben emplearse anticoagulantes concentrados o anticoagulantes equilibrados y desecados.(citrato, EDTA o oxalato). c) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el contenido hemoglobínico de la sangre es estable hasta una semana en refrigerador (2-10oC). No congelar. BIBLIOGRAFIA 1. Stadie, W.C., J. Biol. Chem., 41:237, (1920) 2. Drabkin, D.L., Austin, J.H., J. Biol. Chem., 112:51, (1935). 3. Crosby, W.H., et al, U.S. Armed Forces Med J., 5:693, (1954). 4. Crosby, W.H., et al, Blood, 12:1132, (1957). 5. Eilers, R.J., Am. J. Clin. Pathol., 47:212, (1967). 6. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, p.411, (1976). 7. Henry, R.F., et al, Principles and Technics in Clinical Chemistry, 2nd Ed., Harper & Row, Hagerstown, MD, pp. 1128:1135, (1974). 8. Green, P., et al, Am. J. Clin. Path., 32:216, (1959). 9. Van Kampen, E.J., et al, Clin. Chem. Acta, 6:538, (1961). 10. Young, D.S., et al, Clin. Chem., 21:1D, (1975). 11. Wolf, P.L., Practical Clinical Hematology, John Wiley & Sons, NY, p. 144, (1973). PROCEDIMIENTO Índice de Símbolos Tome 3 tubos de ensayo y proceda así: BLANCO MUESTRA 5.0 ml 5.0 ml Reactivo Hemoglobina 0.02 ml Sangre Total Patrón PATRÓN 5.0 ml Producto para diagnóstico in-Vitro Referencia o Código Pruebas por Kit Para usar consulte las instrucciones Precaución Consultar las instrucciones Fabricante Número de Lote Fecha de Caducidad Fecha de Fabricación Limite de Temperatura Riesgo Biológico 0.02 ml Agite bien, espere 5 minutos y mida la absorbancia de la muestra a 540 nm o filtro verde (500 a 540) llevando el aparato a cero con blanco de reactivo. Obtenga el valor en g/dl de la muestra, utilizando la calibración (curva o factor) preparada con el patrón de hemoglobina. ESPECIALIDADES DIAGNOSTICAS IHR Ltda. PBX: +(2) 552 5444 / Calle 7 A No. 45-07 Santiago de Cali - Colombia e-mail: [email protected] www.ihrdiagnostica.com 1/1 2006-11v2.0