LOS 10 CONSEJOS CLAVE PARA EL ENSAYO DE FERTILIDAD

LOS 10 CONSEJOS CLAVE PARA
EL ENSAYO DE FERTILIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO
Por Laurie Kundrat
Los ensayos de fertilidad pueden ser una molestia, pero son necesarios para determinar si un nuevo
lote de medio de cultivo es aceptable o no. Microbiologics ofrece la gama más amplia de productos de
control de calidad en microbiología para realizar los ensayos de fertilidad. La gama consiste en 4
productos (EZ-Accu Shot™, EZ-Accu Shot™ Select, EZ-CFU™ y EZ-CFU™ One Step) que están
diseñados para simplificar y facilitar las tareas a realizar durante los ensayos. Los cuatro productos
proporcionan entre 10 y 100 UFCs por 0,1 mL.
Los siguientes son mis 10 consejos más importantes para realizar satisfactoriamente los ensayos de
fertilidad de medios de cultivo.
1. Ensaya en paralelo
Según la USP, los crecimientos en nuevos lotes de TSA, SDA y PDA no se deberían diferenciar por
más de un factor de 2 a partir del valor calculado para un inóculo estándar. El valor de UFCs del
inóculo estándar se puede determinar calculando el número de colonias en el lote de agar previamente
aprobado.
Haz un ensayo del nuevo lote de agar en paralelo con el lote aprobado previamente por duplicado o
triplicado. El promedio de colonias en el nuevo lote puede variar en un factor de 2 respecto al promedio
del lote aprobado previamente. Al hacer las comprobaciones al mismo tiempo, se eliminan todas las
variables a excepción del medio de cultivo. La suspensión microbiana y las condiciones ambientales y
técnicas son exactamente las mismas.
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2. Duplica el inóculo para un medio selectivo, cuando sea necesario
Cuando uses EZ-Accu Shot™, EZ-Accu Shot™ Select, EZ-CFU™ y EZ-CFU™ One Step, puedes
necesitar inocular medio selectivo como el Agar MacConkey, con 0.2 mL en vez de 0.1 mL de
suspensión de microorganismos. El motivo de esto es que el medio selectivo puede ser ligeramente
inhibitorio sobre el microorganismo que debe crecer. Para determinar si el inóculo necesita ser
duplicado ensaya el medio selectivo en paralelo con un medio no selectivo como el TSA. Si no crecen
colonias en el medio selectivo y menos de 50 colonias en el no selectivo, el inóculo se puede duplicar.
Recuerda, no tienes que obtener un factor de 2 en el ensayo de fertilidad de un medio selectivo porque
la USP establece que el crecimiento en el nuevo lote de cultivo debe ser “comparable” al crecimiento
en el previo lote aprobado. El nuevo lote y el previo, deben ser analizados uno al lado del otro.
El agar de cetrimida es muy inhibitorio. Analiza el agar con colonias frescas crecidas a partir de KWIKSTIK™ Plus. KWIK-STIK™ Plus está sólo a 2 pasajes de la colección de referencia.
3. Usa agar no selectivo como control cuando compruebes medio de cultivo líquido
Para determinar si un nuevo lote de medio líquido es aceptable, haz un ensayo en paralelo del nuevo
lote, del previamente aprobado y de agar no selectivo. El agar no selectivo es necesario para
determinar la concentración de UFCs del inóculo. El nuevo lote de medio líquido será aceptable si:
- Es comparable en turbidez al lote previo de cultivo aprobado.
- El número de colonias en el agar no selectivo cumple las especificaciones (100 o menos
colonias cuando se analizan las propiedades de crecimiento promovido)
4. Calibra las pipetas rutinariamente
5. Calienta los pellets liofilizados antes de empezar el ensayo
Después de sacar los pellets liofilizados fuera de la nevera, déjalos temperar a temperatura ambiente
antes de sacarlos de sus viales. Normalmente tardan unos 30 minutos. En el caso de los EZ-Accu
Shot™, no abras el paquete durante ese tiempo porque hay un desecante en su interior. La humedad,
causada por el aire frío condensado en el vial, es perjudicial para los organismos liofilizados.
6. Usa el vial correcto de líquido hidratante al reconstituir los pellets
La especie Pseudomonas usa un líquido hidratante de diferente tipo respecto a las otras cepas de
microorganismos. El líquido contiene cloruro de magnesio.
7. Mezcla, mezcla, mezcla
Para obtener una suspensión homogénea:
- Calienta los pellets de EZ-CFU™ y EZ-CFU™ One Step en líquido hidratante precalentado a
34ºC-38ºC durante 30 minutos. Este paso permite que se derrita la gelatina.
- Después de añadir los pellets de EZ-CFU™, EZ-CFU™ One Step o EZ-Accu Shot™ al líquido
hidratante, mezcla hasta que los pellets no se distingan y la suspensión sea homogénea.
- Siembra la suspensión en una placa de agar con una asa de siembra. La placa de agar
debería estar seca antes de usarse.
- Mezcla la suspensión periódicamente si se realizan múltiples ensayos.
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8. Usa las condiciones ambientales que las especies necesitan
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Sigue las directrices de la farmacopea.
Aerobios como Pseudomonas aeruginosa y Bacillus subtilis necesitan oxígeno. Cuando se
analicen en un caldo de cultivo, proporciona espacio suficiente en la parte superior del tubo o
del contenedor y deja la tapa ligeramente suelta.
Usa un indicador anaeróbico al cultivar microorganismos anaeróbicos como Clostridium
sporogenes.
Controla y toma nota de las temperaturas de la incubadora dos veces al día.
Valida las incubadoras y calibra los termómetros habitualmente para asegurar que las
incubadoras se mantienen en el rango correcto de temperaturas.
9. Mantén los organismos templados… pero no MUY calientes
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¿Viertes el agar en placas? El agar derretido se debe mantener en un baño de agua a
temperatura inferior a 45ºC. Temperaturas más altas pueden dañar los microorganismos.
El agar derretido no debe mantenerse en el baño más de 3 horas.
El agar estéril y solidificado sólo puede volverse a derretir una vez más.
10. Asegúrate de que puedes encontrar todo tipo de organismos ajenos en tu producto
Organismos no descritos en la farmacopea pueden ser considerados inadmisibles. Por ejemplo,
organismos ambientales que puedan dañar un producto o ser perjudiciales para el consumidor. Para
ser detectados, algunos de estos organismos no deseados requieren cierto medio de cultivo o
condiciones de crecimiento dispares de las descritas en la USP. Para asegurar que tu laboratorio
puede detectar estos organismos en tu medio de cultivo, puede que quieras conservarlos y usarlos
como control de calidad. Para ello, Microbiologics ofrece una liofilización a medida.
Productos Microbiologics® para ensayos de fertilidad
Microbiologics® ofrece cuatro productos alternativos para la realización de los ensayos de fertilidad o
de promoción y crecimiento. Los cuatro productos proporcionan entre 10 y 100 UFCs por 0.1 mL de
suspensión hidratada como requiere la USP.
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EZ-Accu Shot™ Select
EZ-Accu Shot™
EZ-CFU™ One Step
EZ-CFU™
Descarga el siguiente documento para ver la comparativa entre los cuatro productos:
http://www.tiselab.com/pdf/Comparativa_GPT_Microbiologics_V2.pdf
Biografía
Laurie Kundrat es Technical Support Specialist en Microbiologics, Inc. Es
bióloga por la Universidad Case Western Reserve y obtuvo un título de
Tecnología médica por el Hospital General Fairview.
Con más de 25 años de experiencia, Laurie es una verdadera apasionada
por la microbiología y por el asesoramiento a clientes, a quienes ayuda a
utilizar satisfactoriamente los productos de Microbiologics.
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