Medición del ph del Mueller Hinton

Medición del ph
del Mueller Hinton
Dr. Esteban Riera Fanego- Bioquímico- Microbiólogo
Consultor OPS
¿qué es el pH?
R ango
PH
H + conc (m ol/ L)
OH + conc (m ol/ L)
Ácido
0
1
2
3
4
5
6
1
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
0,00000000000001
0,0000000000001
0,000000000001
0,00000000001
0,0000000001
0,000000001
0,00000001
Neutro
7
0,0000001
0,0000001
Alcalino
8
9
10
11
12
13
14
0,00000001
0,000000001
0,0000000001
0,00000000001
0,000000000001
0,0000000000001
0,00000000000001
0,000001
0,00001
0,0001
0,001
0,01
0,1
1
¿qué es el pH?
Ec. Sörensen
pH = - Log10 [H+]n
[H+]= 0,0000001= 10-7
pH= - Log10 [H+]
pH= 7
–7=
-(-7)= 7
¿Cóm o se m ide?
ecuación de Nernst:
E = Eº - 2,3 RT x pH ;
nF
Eº = constante para cada solución;
R = constante de gas;
F= constante de Faraday;
T=temperatura en Kelvin;
n= carga del ión.
¿Cóm o se m ide?
ecuación de Nernst:
E = Eº - 59,16 m V x δpH
para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H+)
Pendiente ideal= 59,16 mV= 100% eficiencia
Pendiente =50 mV= 85% eficiencia
Eº (punto cero) 30 mV
P untos de Calibración del pHchím etro
ecuación de Nernst:
E = Eº - 59,16 m V x δpH
para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H+)
Pendiente ideal= 59,16 mV= 100% eficiencia
Pendiente =50 mV= 85% eficiencia
Punto cero (Eº)
30 mV
P untos de Calibración del pHchím etro
ecuación de Nernst:
E = Eº - 59,16 m V x δpH
para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H+)
Pendiente ideal para mediciones buffer pH 7
y pH 4 (δpH = 3)
Pendiente ideal= 59,16 mV x 3 = 177,5 mV
(100% eficiencia)
Pendiente =50 mV x 3 = 150 mV
( 85% eficiencia)
Punto cero (Eº) 30 mV
P untos de Calibración del pHchím etro
ecuación de Nernst:
E =Eº - 59,16 m V x pH
δpH
para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H+)
+mV
después del ajuste
0
- mV
7
pH
antes del ajuste
Ajuste del punto cero (Eº) ( pH7 = 0 mV)
P untos de Calibración del pHchím etro
ecuación de Nernst:
E = Eº - 59,16 m V x pH
δpH
+mV
para 25ºC (298ºK), y n=+1 (H+)
59,2
56,0
6
7
pH
- mV
Ajuste de la pendiente (m)
pH varía con la temperatura
de medición
4 factores:
1)
El coeficiente de temperatura de la solución
medida;
2)
La dependencia de la temperatura de la
“pendiente”
(ecuación de Nernst);
3) Posición del punto de intersección de las isotermas;
4)
Diferente
tiempo de respuesta del electrodo
(causada por cambios en la temperatura).
pH varía con la temperatura
de medición
1) El coeficiente de temperatura
de la solución medida;
I = [H + ] x [OH + ] = 10 -14 M olar
(a 25ºC);
Variación del pH de con la temperatura:
coeficiente de temperatura de la solución
Tem peratu
ra ºC
Buffer
pH 4,00
Buffer
pH 7,00
Buffer
pH 10,01
5ºC
4,00
7,09
10,25
10ºC
4,00
7,06
10,18
15ºC
4,00
7,04
10,12
20ºC
4,00
7,02
10,06
25ºC
4,00
7,00
10,01
30ºC
4,01
6,99
9,97
35ºC
4,02
6,98
9,93
40ºC
4,03
6,98
9,89
45ºC
40,04
6,97
9,86
50ºC
40,06
6,97
9,83
Variación del pH con la temperatura:
Ecuación de Nernst
ecuación de Nernst:
E = Eº - (2,3 RT )x pH ;
nF
Variación del pH con la temperatura:
Posición del punto de intersección
de las isotermas.
Calibración: dos puntos
Punto cero: pH 7 = 0 mV
Pendiente de la curva mV vs pH
Medir pH de Buffers a igual temperatura
que la solución.
Calibración: punto cero
Calibración: pendiente
¿Cómo medir el pH del Mueller
Hinton?
¿a qué tem peratura?
¿cuándo está derretido?
¿antes de autoclavar?
¿después de autoclavar?
¿Cómo medir el pH del Mueller
Hinton?
Intervalo aceptable
pH 7,2 a 7,4
Determinación de pH a 25,0ºC en días consecutivos, antes y
después de autoclavar
Variación del pH del MH autoclavado
durante 19 días consecutivos
Valores de pH
7,45
7,40
7,35
7,30
7,25
7,20
0
5
10
15
Días consecutivos de medición
Media pH antes autoclavar: 7,30
después autoclavar: 7,37
Diferencia significativa (valor p<0,001)
20
Medición del pH del MH a diferentes
temperaturas
Curva de variación del pH del MH
con la temperatura
temperatura ºC
50,0
40,0
MH SIN
AUTOCLAVAR
MH
AUTOCLAVADO
30,0
20,0
10,0
0,0
7,00
7,10
7,20
7,30
pH
7,40
7,50
Calibración del sensor de temperatura del
pHchímetro
Tm pHchímetro
Termómetr
o Mercurio
38,5
39
38
38
33,4
33,5
28,1
28
25,1
25
23
23
19,9
20
termómetro pHchímetro
Curva de Calibración del term óm etro
pHchím etro con term óm etro de Hg.
50
y = 1,014x - 0,3413
R2 = 0,9994
40
30
20
10
0
0
10
20
30
40
50
term óm etro m ercurio
Determinación de HUMEDAD DEL MUELLER HINTON
MH lote 1005002 Difco
Fecha de inicio de uso: 18 Nov/03
Fecha fin de uso: 29 Dic/03
Venc. Febr 2006
Medición de Humedad:
Humedad (%)= (peso final – peso inicial) X 100.
Peso inicial
MH Difco lote 1005002 con 41 días de uso.
Fecha 29 dic 2003
0 h: peso inicial= 5,033 g
30 min en estufa a 80ºC= 4,994 g
60 min en estufa a 80ºC= 4,982 g
90 min en estufa a 80ºC= 4,972 g
Humedad (%)= 1,2%
Fecha 20 ene 2004
0 h: peso inicial
= 5,011 g
45 min en estufa a 75ºC = 4,967 g
120 min en estufa a 75ºC = 4,884 g
Humedad (%)= 2,5%
Tiempo de uso del MH: 18 nov/03 a 20 ene/04= 62 días
EFECTO DEL pH EN EL ANTIBIOGRAMA
Efecto del pH
7,69 sobre
el halo de
inhibición
S. aureus ATCC 25923
Antimicrobiano
MH
pH 7,27
MH
pH 7,69
Dif. de
promedios
placa 1
placa 2
placa 1
placa 2
genta
26
26
29
29
3
aumenta
oxa
19
19
19
18
-0,5
s/c
tet
28
29
25
25
-3,5
disminuye
van
19
20
20
20
0,5
s/c
EFECTO DEL pH EN EL ANTIBIOGRAMA
E. Coli ATCC 25922
cip
35
34
40
40
5,5
aumenta
ctx
32
35
35
33
0,5
s/c
amk
24
24
27
27
3
aumenta
amp
18
19
17
14
-3
disminuye
genta
22
22
25
26
3,5
aumenta
tet
23
23
20
20
-3
disminuye
EFECTO DEL pH EN LA ACTIVIDAD DE LOS ATB
Atb que aumentan su actividad a pH ácido:
Amoxicilina
Ampicilina
Carbenicilina
Piperacilina
Tetraciclina
Doxiciclina
Minociclina
Nitrofurantoína
EFECTO DEL pH EN LA ACTIVIDAD DE LOS ATB
Atb que aumentan su actividad a pH alcalino:
Amicacina
Netilmicina
Estreptomicina
Tobramicina
Claritromicina
Eritromicina
Ác. Nalidíxico
Quinolonas fluoradas
EFECTO DEL pH EN LA ACTIVIDAD DE LOS ATB
Atb que disminuyen su actividad a pH ácido:
Azitromicina
Claritromicina
Clindamicina
Metronidazol
Atb que tienen pequeños cambios de actividad
con el aumento o disminución del pH:
Penicilina
Cefalotina
Cefalexina
Cefoperazona
Ceftazidima
Ceftriaxona
Cloranfenicol
Sultonamidas y trimetoprima
MEDIR EL pH del MH después de autoclavar,
a 25ºC, y triturado en un tuvo boca ancha.
MEDICIÓN DEL pH del Mueller Hinton
Recomendaciones.
1. La medición del pH del Mueller Hinton debe hacerse
por el método potenciométrico (pHchímetro) y no con
tiras de papel pH;
2. El pH del MH debe medirse después de autoclavado y
a 25ºC;
3. El pHchímetro debe calibrarse diariamente con
soluciones buffers ph7 y pH 4 o 10.
4. Verificar mensualmente el grosor y el pH del Mueller
Hinton. Registrar en el Control de Calidad Interno.
Dr. Esteban Riera
Coord. Prog. Antimicrobianos
LCSP. Marzo 2004