Nuevo lanzam Nuevo lanzamiento de producto

Nuevo lanzamiento de producto
Información de pedido
Nº Catálogo
3380
Nombre del producto
Sistema de expresión de
proteínas secretadas en B.
subtilis
Tamaño
10
reacciones
MSDS
N/A
Descripción del producto
Bacillus subtilis es cada vez un sistema más popularmente utilizado en la expresión de
proteínas recombinantes.. Con su facultad de secretar las proteínas directamente al
medio de cultivo, su gran capacidad de adaptación, su alto poder de fermentación a
gran escala y su nombramiento como producto GRAS por la FDA, no es de extrañar que
la mayoría de enzimas de producción industrial se expresen en especies de Bacillus
tales como B. subtilis. Sin embargo la optimización de la secreción es necesaria para
alcanzarel
el máximo rendimiento.
rendimiento Para solucionar el problema, el sistema de expresión
e
de proteínas secretoras en B. subtilis de Takara, permite el rápido desarrollo
des
de una
librería de clones de B. subtilis en el que cada uno de ellos
llos contiene una región PBE-S,
PB
en donde el ORF de la proteína de interés está fusionada con secuencias de 173
péptidos de señal única. Realiza un ensayo downstream para identificar y seleccionar
clones que secreten una mayor cantidad de proteína funcional al medio de cultivo, y
así podrás identificar rápidamente el “péptido señal” con el que obtendrás una
expresión
esión eficiente de tu proteína.
Esquema del producto
173 distintos tipos de DNA SP están insertados en la región aprE SP.
Mapa del vector para DNA pBE-S, un vector lanzadera B. subtilis /E. coli usado con el sistema de expresión de proteínas
secretadas en B. subtilis
Inserción de un gen target en el MCS del ADN pBE-S
Linealización del plásmido mediante la escisión con Mlu I y Eco521
Inserción del la mezcla ADN SP mediante reacción In-Fusion
Transformación en E.coli HST08
Preparación de la biblioteca de plásmidos
Transformación en B.subtilis (cepa RIK1285)
Screening de la expresión o actividad de la proteína diana
Diagrama del procedimiento experimental del sistema de expresión de proteínas secretadas en
B. subtilis
Características y aplicaciones
Características
-
-
-
Incluye DNA pBE-S, que es un vector lanzadera de E.coli/B. subtilis con un
promotor derivado de B. subtilis (aprE), un péptido-señal secretor (aprE SP),un
sitio multiclonaje y una secuencia His-tag en 3’(C-Terminal)
Incluye también una mezcla de DNA SP, una librería de secuencias de DNA que
codifica para 173 péptidos de señal única que pueden ser insertados por
delante de un gen de interés
Compatible con los kits de clonaje In-Fusion y sistemas para permitir
construcciones fáciles y rápidas
Incluye B. subtilis de la cepa RIK1285
Aplicaciones
-
Expresión de proteínas solubles recombinantes, secretadas directamente en el
medio de cultivo
La expresión de proteínas en un sistema susceptible de poder usarse a media o
gran escala, además de cultivos a pequeña escala
Expresión de proteínas con estructuras complejas, tales como proteínas con
puentes disulfuro (S-S)
Generación de proteínas “target” en un huésped considerado como “Generally
Regarded As Safe”(GRAS, por la FDA)
Práctico para facilitar la purificación de proteínas recombinantes con un
adecuado marco de lectura y una cola HIS-TAg C-terminal
Posicionamiento del producto
La producción de proteínas recombinantes mediante el uso de Bacillus subtilis como
huésped, facilita la solubilidad y la secreción de las mismas. Este huésped es
especialmente efectivo para proteínas con estructuras complejas como aquellas que
contienen puentes S-S. A diferencia de los sistemas de expresión con E.coli, las
proteínas recombinantes producidas con B.subtilis están libres de endotoxinas.
Razones para que el investigador utilice este producto:
-
-
Para la rápida optimización del péptido-señal a utilizar para un alto rendimiento
de la proteína secretada
Expresión de la proteína soluble y expresión de la proteína funcional
Por la necesidad de un huésped que esté considerado por el FDA como GRAS
Facilidad en la purificación de la proteína recombinante directamente del
medio de cultivo con el adecuado clonaje In-Frame, requiere un C-terminal His
tag para facilitar la purificación
Para cuando se necesite una serie muy apropiada para el medio y una
fermentación a gran escala
Expresión de proteínas de estructura compleja, tales como puentes de
disulfuro (S-S).
Componentes
Componente
Concentración
Mezcla ADN SP
0.032 pmol/µL
0.5 µg/µL
ADN pBE-S
B. subtilis RIK1285
(glycerol stock)
No hay muestra disponible
Volumen
45 µL
20 µg
100 µL x 2
Almacenamiento
20°C
Temperatura
de envío
80°C
Vida útil
12 meses