Cribado en Castilla y León mediante co-test citología/genotipado HPV José Santos Salas Valién Servicio de Anatomía Patológica Complejo Asistencial Universitario de León Resumen Ø -Cribado en Castilla y León. Ø Programa. Ø Datos estadísticos. Ø -Técnica de HPV en CyL. Ø Utilidad del genotipado. Ø -Discrepancias Citologias/HPV. Ø Citología positiva/HPV (-). Ø HPV Alto riesgo (+)/Citología negativa. Cribado en Castilla y León Agradecimientos: Pedro Angel Redondo Cardeña Jefe de Servicio Servicio de Promoción de la Salud y Programas Preventivos Dirección General de Salud Pública Consejería de Sanidad Junta de Castilla y León Antecedentes Cribado CyL Ø 1986:Programa de Prevención de Cánceres e Infecciones Ginecológicas. Población diana 25 a 65 años, y con factores de riesgo fuera de esa edad. Valladolid. Ø 1993: El Programa se implanta en toda la Comunidad Autónoma. Ø 1994:Incorporación del Programa de Castilla y León en la Red Europea de cribado de Cáncer Cervical. Ø 2003: Se modifica la población diana: 35 a 65 años , y con factores de riesgo fuera de esa edad. Ø 2005: Se modifica la población diana, 30 a 65 años (de 20 a 29 años si presentan factores de riesgo). Modificación 2008-2012 Ø 2008: Población diana: 20 a 64 años. Pruebas de cribado: citología convencional y determinación de VPH (incrementar la sensibilidad). Ø 20-34 años (Intervalo de 3 años): • Ø Citología cervical convencional intervalo de 3 años 35-64 años (Intérvalo de 5 años): • • Citología cervical convencional. Determinación de VPH: Genotipado (CLART® HPV2) 35 genotipos. HR: 16,18,26,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,82 LR: 6,11,40,42,43,44,54,61,62,70,71,72,81,83,84,85,89 Distribución plataformas VPH Revisión Cribado noviembre 2012 Ø 2012: Población diana: 25 a 64 años. ØMujeres de 25 a 34 años: CCC con intervalo de 3 años (las dos primeras citologías con un intervalo de 12 meses). ØMujeres de 35 a 64 años: CCC y detección de VPH por genotipado, con intervalo de 5 años. 2013 Datos estadísticos Participación (1989-2015) (25-64 años) AREADESALUD NºDEMUJERES MJ.PARTICIPANTES % ÁVILA 62.321 31.803 51,03% BURGOS 141.715 83.416 58,86% LEÓN 126.029 56.510 44,84% ELBIERZO 54.716 28.344 51,80% PALENCIA 61.659 36.910 59,86% SALAMANCA 128.601 57.980 45,09% SEGOVIA 58.337 29.556 50,66% SORIA 33.969 17.747 52,24% VALLADOLID OESTE 101.710 64.446 63,36% VALLADOLID ESTE 108.510 66.455 61,24% ZAMORA 67.512 34.604 51,26% 945.079 507.771 53,73% Participación2015 (25-64años) AREADESALUD NºDEMUJERES MJ.PARTICIPANTES % ÁVILA 46.507 4.259 9,16% BURGOS 109.534 9.093 8,30% LEÓN 95.284 9.293 9,75% ELBIERZO 41.264 4.905 11,89% PALENCIA 47.141 6.203 13,16% SALAMANCA 100.558 7.370 7,33% SEGOVIA 44.455 3.538 7,96% SORIA 25.544 2.514 9,84% VALLADOLID OESTE 80.606 7.565 9,39% VALLADOLID ESTE 81.962 7.232 8,82% ZAMORA 48.761 5.312 10,89% 721.616 67.284 9,32% Participación por grupos de edad (25-64 años) AREADESALUD 25- 29 30- 34 35- 39 40- 44 45- 49 50- 54 55- 59 60- 64 ÁVILA % 64,88% 68,31% 63,21% 57,55% 59,03% 54,16% 40,88% 25,92% BURGOS 80 75,17% 77,39% 70,23% 61,82% 61,00% 54,95% 46,59% 34,82% LEÓN 70 53,79% 57,09% 55,45% 53,17% 54,62% 52,62% 44,52% 31,39% ELBIERZO 60 58,70% 63,60% 63,81% 62,87% 65,33% 59,43% 50,02% 38,83% PALENCIA 50 73,53% 76,80% 73,99% 71,98% 69,60% 63,67% 50,23% 30,51% SALAMANCA 40 55,21% 55,75% 54,52% 51,02% 52,00% 49,16% 42,30% 31,19% SEGOVIA 30 64,55% 67,79% 60,92% 57,39% 54,55% 51,99% 41,80% 27,39% SORIA 20 57,75% 65,06% 65,18% 62,67% 60,54% 59,49% 52,72% 33,50% VALLADOLIDOESTE 10 75,39% 76,86% 70,07% 66,56% 67,83% 65,76% 48,29% 35,25% VALLADOLIDESTE 0 72,80% 73,80% 67,65% 68,01% 69,08% 66,66% 50,78% 35,79% 25-29 30-34 35-39 40-44 45-49 50-54 ZAMORA 67,27% 72,10% 66,86% 63,58% 61,67% 57,87% CASTILLAyLEÓN 66,59 68,82 64,21 60,71 60,90 57,22 55-59 44,74% 46,04 60-64 32,73% 32,60 Diagnósticos citológicos: 2011 2012 2013 2014 2015 Total NºCitologías 85.748 71.901 55.574 62.729 68.316 344.268 Negativas 96,15% 97,46% 98,02% 98,00% 97,53% 97,34% Positivas 2,63% 2,48% 1,97% 2,00% 2,43% 2,34% No valorables 1,10% 0,07% 0,01% 0,00% 0,01% 0,32% Diagnósticos sobre las citologías positivas: ASC-US 61,30% 65,17% 71,95% 71,14% 66,52% 66,22% Bajo grado 30,60% 28,58% 22,35% 20,50% 27,26% 26,77% Alto grado 1,70% 1,92% 1,84% 2,06% 1,16% 1,77% Alteraciones glandulares 5,30% 4,26% 3,85% 6,30% 5,05% 4,98% Diagnósticos HPV 2011 2012 2013 2014 2015 TOTAL Nºdepruebas 56.342 42.869 35.944 44229 50.207 229.591 NOVALORABLES(%) 1988 (3,53%) 1964 (4,58%) 1974 (5,49%) 1265 (2,86%) 1097 (2,18%) 8288 (3,61%) NEGATIVOS 49287 (81,48%) 36701 (85,61%) 31143 (86,64%) 39780 (89,94%) 45707 (91,04%) 202618 (88,25%) 3789 (6,73%) 876 (1,55%) 2913 (5,17%) 3258 (7,60%) 678 (1,58%) 2580 (6,02%) 2827 (7,87%) 602 (1,67%) 2225 (6,19%) 3184 (7,20%) 629 (1,42%) 2555 (5,78%) 3403 (6,78%) 714 (1,42%) 2689 (5,36%) 16461 (7,17%) 3499 (1,52%) 12962 (5,65%) TOTALPOSITIVOSAR Positivo16-18 POSITIVOSARNO16-18 Resultado final cribado 2011 2012 2013 2014 2015 TOTAL PRUEBASREALIZADAS 85.734 72.133 55.538 62.670 68.210 344.285 RESULTADO NEGATIVO 80.669 (94,09%) 68.265 (94,64%) 51.840 (93,34%) 58.789 (93,81%) 63.607 (93,25%) 323.170 (93,87%) RESULTADO NOVALORABLE 2.969 (3,46%) 1.766 (2,45%) 444 (0,80%) 265 (0,42%) 233 (0,34%) 5.677 (1,65%) NODETERMINANTE 1 (0,00%) 412 (0,57%) 2.530 (4,56%) 2.225 (3,55%) 2.605 (2,82%) 7.773 (2,26%) RESULTADO POSITIVO 2.954 (3,45%) 2.231 (3,09%) 1.092 (1,97%) 1.839 (2,93%) 2.024 (2,97%) 10.140 (2,95%) Resultado final cribado (Positivos) 2011 2.954 (3,45%) 2012 2.231 (3,09%) 2013 1.092 (1,97%) 2014 1.839 (2,93%) 2015 2.024 (2,97%) TOTAL 10.140 (2,95%) 21 159 127 136 77 520 %cribado 0,02% 0,22% 0,23% 0,22% 0,11% 0,15% %positivas 0,71% 7,12% 11,63% 7,40% 3,80% 5,13% 29 119 160 170 65 543 %cribado 0,03% 0,16% 0,29% 0,27% 0,10% 0,16% %positivas 0,98% 5,33% 14,65% 9,24% 3,21% 5,36% 41 36 13 13 3 106 %cribado 0,04% 0,04% 0,02% 0,02% 0,00% 0,03% %positivas 1,38% 1,61% 1,19% 0,71% 0,15% 1,05% RESULTADO POSITIVO BAJOGRADO ALTOGRADO CARCINOMA Prevalencia de genotipos (2009-11) ‰ 14 12 10 ALTORIESGO BAJORIESGO 8 6 4 2 0 16 53 31 51 52 61 58 66 68 70 62 35 84 59 81 33 18 82 6 45 83 56 54 72 42 39 71 44 11 85 73 26 40 89 43 Prevalencia de genotipos (2012-15) ‰ ALTORIESGO BAJORIESGO Cambio en genotipos (2009-2015) ‰ 14 12 10 2009-2011 2012-2015 8 6 4 2 0 16 53 31 51 52 61 58 66 68 70 62 35 84 59 81 33 18 82 6 45 83 56 54 72 42 39 71 44 11 85 73 26 40 89 43 Técnica de HPV Técnica usada cribado CyL • Hibridación de ácidos nucleicos: – Southern Blot, Hibridación in situ, etc. • Hibridación + amplificación de señal – Hc2, Cervista. • Amplificación de ácidos nucleicos: – CLART HPV 2®, Cobas 4800, Inno-Lipa, Linear Array, Aptima, etc. CLART HPV 2® (Genómica) • AmplificaciónporPCR450pbdeL1. • Detecciónpormicroarraydebajadensidad (ClinicalArrayTechnology®),enfondopocillo placamicrotiter(CLART-Strip.CS®) Hibridación con sondas especificas inmovilizadas en zonas concretas y conocidas Unión del conjugado con la biotina de los productos amplificados Productos amplificados marcados con biotina Incubación con estreptavidinaperoxidasa La actividad peroxidasa provoca producto insoluble que precipita CLART® HPV2, (Controles) • ControldePCR:(Sehaproducido lareacción) • Unpardeprimers queamplificanunplásmidomodificado. • Evitalosresultadosconfalsosnegativos. • Controlgenómico :(Existe muestra) • AmplificaciónDNAdelpaciente. • Parejadecebadores,queamplificanunfragmentode892pb delgenhumanoCFTR. • Informaciónsobrelapresenciarealdemuestra. • Múltiples Puntos enelarray:(Tipo por triplicado) • Lospuntosseencuentrantriplementerepresentados. • Diferentessondasenelmismopuntoevitaninexpecificidades propiasdeladiversidad genética,quepodíangenerarfalsosnegativos. • Lospuntostantogenéricoscomoespecíficos,determinaránlasespeciesdevirus. CLART®HPV2 Muestra Extracción y Purificación DNA Extracción y Purificación Manual /Automática Amplificación 3 horas Visualización (2 horas) CLART®HPV2 SOFTWAREDEANÁLISISDEIMÁGENES APLICACIONESBIOINFORMÁTICAS -Procesamiento fácil yrápido dela imagen delarray. -Análisis delaimagen. -Informe deresultados finales. -Softwareespecífico. GESTIÓNDEDATOS -Almacenamientodedatos(hard disk). -Volcadoresultadosvíatelematica, previavalidación. CLART®HPV2 ¿Quénospuedeaportarelgenotipado delVPHenelcribado? HumanPapillomaVirus (HPV)inpatients withcervical pathologycompared withgeneral population. Astudyof6375cytologysamples in3years 250 200 150 100 50 0 16 53 31 52 51 58 66 35 70 59 PATOLOGIA 18 33 68 39 56 45 85 26 73 CRIBADO Cuesta A, Salas JS, González MA, Castro P, Rubio A, Ribas T. 24TH European Congress of Pathology. 8-12 September 2012. Prague. HumanPapillomaVirus (HPV)inpatients withcervical pathologycompared withgeneral population. Astudyof6375cytologysamples in3years 140 120 100 80 60 40 20 0 61 62 81 72 6 83 82 PATOLOGIA 84 54 71 11 44 42 40 CRIBADO Cuesta A, Salas JS, González MA, Castro P, Rubio A, Ribas T. 24TH European Congress of Pathology. 8-12 September 2012. Prague. TipificacióndeHPVenpacientesconlesiónglandulary escamosasimultaneasdecérvixuterino(14casos) VPH 31 VPH 16 A Cuesta, JS Salas, P Castro, A Rubio, B Castañón, T Ribas XXVI Congreso Nacional de la SEAP-IAP. Cádiz 22-24/05/2013 Un virus, Una lesión QuintWycols.JPathol2012;227:62-71 Discrepancias Citología / HPV Citología (+) HPV (-) Citología (+) HPV (-) • 70 citologías durante 2014. Citología (+) HPV (-) • Reevaluación (1 Citotécnico + 2 patólogos): – Negativas: 34 – ASCUS: 15 – SIL: 15 • Solo en 7 seguimiento con HPV: –HPV (+): 4 –HPV (-): 3 De La Fuente Escobar JP. Reunión Anual SEC.2016. Citología (+) HPV (-) De La Fuente Escobar JP. Reunión Anual SEC.2016. Citología (+) HPV (-) • Revisar diagnósticos que emitimos (% ASCUS) Geisinger. et al. Am J Pathol 2007; 128:1010-101414 • Influencia del diagnostico citológico según status de HPV – Cuidado en las citologías de seguimiento postconización. – Cribado con citología en HPV (+) Moriarty A. et al. Arch Pathol Lab Med—Vol 138, September 2014 Discrepancias Citología / HPV HPV (+) Citología (-) Citología (-) HPV (+) • Citología (-) • HPV (+) – HPV 16/18 – HPV AR no 16/18 • Colposcopia – No concluyente Seriación+p16+Ki67 Thumbnail Legrado endocervix P-16 Ki 67 Seguimiento 273 pacientes HPV 16/18 y cito (-) • Seguimientode273pacientesremitidasalHospitaldeLeón: – HPV16y/o18 – CitologíaNegativaenelprogramadecribadodelaJuntadeCastillay León. • Serealizaelseguimientodeestaspacientes: – Colposcopia, citología,biopsiaydetecciónytipificacióndeHPV (CLART® HPV2),segúnloshallazgosencontrados. Plataforma VPH-León: 273 con seguimiento XXVII Congreso Nacional de la SEAP-IAP. 20-23 Mayo-2015 Lesiones por tipo HPV El 22,7% de las pacientes tuvieron CIN2+ Plataforma VPH-León: 273 con seguimiento XXVII Congreso Nacional de la SEAP-IAP. 20-23 Mayo-2015 ¿Qué pasa con los alto riesgo no 16-18? • 2014-2015 • HPValtoriesgono16/18 • 43casos – Sinlesión:32(74,4%) – Bajogrado:4(9,3%) – Altogrado:7(16,3%) HPV no 16/18 por lesión HPV