95 Acción germicida
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ACCIÓN GERMICIDA EFECTO DE DOSIS Un desinfectante es una sustancia química que mata las formas vegetativas de los microorganismos patógenos, pero no necesariamente sus formas esporuladas. Un germicida difiere de un desinfectante en que mata microorganismos que no necesariamente son patógenos. Como nosotros trabajamos con microorganismos patógenos preferimos utilizar el término germicida en las actividades de laboratorio. El desinfectante/germicida de uso doméstico más conocido es el hipoclorito de sodio (NaOCl), comercialmente conocido como água sanitária en Brasil (o lavandina en Argentina, Paraguay, Uruguay o lejía en España o como agua jano en Chile, por ejemplo.) En contacto con agua, los hipocloritos forman ácido hipocloroso que sufre una nueva reacción, originando oxígeno naciente, un poderoso agente antioxidante que puede destruir sustancias vitales. Cl2 + H2O → HCl + Ácido clorhídrico HClO → HCl HClO Ácido hipocloroso + O Oxígeno naciente BIBLIOGRAFÍA MALAJOVICH M.A. Actividades prácticas – Trabajar en condiciones de seguridad. Guía Nº 67, www.bteduc.bio.br PELCZAR M.J. et al. Microbiologia: conceitos e aplicações. Volume 1. Segunda Edição. São Paulo, Makron Books, 1996. Guia 94 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br ACCIÓN GERMICIDA / EFECTO DE DOSIS DE UM DESINFECTANTE ACTIVIDAD PRÁCTICA OBJETIVO Estudiar la acción germicida de diversas concentraciones de un desinfectante. MATERIALES Una placa de Petri con agar nutritivo estéril, 4 tubos con 2 mL de agua estéril, 4 pipetas de 1 mL, 1 pipeta Pasteur estéril, 1 swab (hisopo), 1 tubo con 4 mL de desinfectante, 1 pinza estéril, mechero Bunsen, un tubo con el cultivo bacteriano indicador (Escherichia coli, Bacillus subtilis o Micrococcus luteus), pilot (rotulador). PROCEDIMIENTO Seguir las normas de trabajo standard (Guía 67: Trabajar en condiciones seguras). A. PREPARACIÓN DEL CÉSPED BACTERIANO Con la pipeta Pasteur, colocar unas gotas del cultivo bacteriano en la superficie del agar nutritivo. Distribuir con un hisopo (swab) de modo de obtener un césped como indicado en la Guía Nº 82: la técnica del césped microbiano. B. PREPARACIÓN DE LAS DILUCIONES DEL DESINFECTANTE Transferir 2 ml de la suspensión bacteriana de un tubo al siguiente, iniciando el procedimiento a partir del tubo con el desinfectante concentrado. Utilizar una pipeta diferente de modo de evitar el arrastre de material de un tubo a otro. Un esquema general de representado en la Figura 1. los pasos a seguir se encuentra Entre una dilución y la siguiente, mezclar bien el contenido de los tubos, agitando por rotación. C. EL TEST 1. Rotular la placa dividiéndola en 6 sectores. 2. Colocar un disco estéril seco como control negativo (C-). Guia 94 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br ACCIÓN GERMICIDA / EFECTO DE DOSIS DE UM DESINFECTANTE 3. Tomar otro disco estéril con la pinza y embeberlo en la solución más diluida del desinfectante (6,25%). Abrir la placa y colocar el disco en el lugar correspondiente. Cerrar la placa. 4. Repetir el punto anterior con cada una de las soluciones restantes (12,5%, 25%, 50%). 5. Repetir lo mismo con el desinfectante concentrado (Control positivo, C+). 6. Incubar la placa a temperatura ambiente durante 48-72 horas. 7. Observar los resultados. La presencia de un halo en torno del disco de papel revela la acción germicida del desinfectante. NUESTRO COMENTARIO Esta actividad requiere bastante material y su ejecución presenta algunas dificultades. Sin embargo, los resultados son extremamente interesantes. La figura 2 muestra los resultados obtenidos con diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio (água sanitária Globo, comprada en un supermercado del barrio*). Utilizamos la misma serie de diluciones con dos bioindicadores diferentes: Escherichia coli y Bacillus subtilis. En el caso de Escherichia coli, se observa la acción germicida con diluciones de hasta 12,5%. En el caso de Bacillus subtilis, la acción germicida es mucho menos evidente, revelando la existencia de numerosas colonias resistentes incluso con altas concentraciones. *água sanitária es llamada lavandina en Argentina y otros países, lejía en España, y agua jano en Chile. ¿CÓMO MONTAR UN PROYECTO? Evaluar la acción germicida de diversos desinfectantes sobre un bioindicador microbiano. Evaluar la acción germicida de un desinfectante sobre diversos bioindicadores microbianos. Guia 94 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br ACCIÓN GERMICIDA / EFECTO DE DOSIS DE UM DESINFECTANTE Figura 1. La preparación de las diluciones del desinfectante. 2 mL Desinfectante concentrado 100% 2 mL Dilución 1:2 50% Dilución 1:4 25% 2 mL 2 mL Dilución 1:8 12,5% Dilución 1:16 6,25% Figura 2. Acción germicida de diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio (agua sanitária) sobre Escherichia coli y Bacillus subtilis. Bioindicador: Escherichia coli Guia 94 Bioindicador: Bacillus subtilis María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br
