Presentación IMEGEN

Identificación y cuantificación de Quimerismo
Hematopoyético
mediante PCR cuantitativa en tiempo real
analizando polimorfismos de inserción/deleción
“Nuevas tecnologías basadas en Biomarcadores para Hematología”
Una oportunidad para la colaboración entre sector biotecnológico y Sistema Nacional de Salud
19 de marzo de 2013
Fundación Jiménez Díaz
Dr. Antonio Jimenez-Velasco, Hospital Carlos Haya, Málaga
Dra. Ana Martínez-Hortigüela, Instituto de Medicina Genómica, Valencia
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Servicios de diagnóstico genético de utilidad clínica;
desarrollo a medida de protocolos de detección de cualquier
enfermedad genética descrita
Amplio catálogo con más de 900 enfermedades genéticas
Investigación y Desarrollo
Transferencia de Tecnología
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QUIMERISMO
Células linfohematopoyéticas no propias
del receptor que aparecen
como resultado de un trasplante alogénico.
La determinación cuantitativa de la
presencia de quimerismos
hematopoyéticos
en el periodo post-transplante
permite la predicción de recaídas
y la toma de decisiones terapéuticas.
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MÉTODOS DE ESTUDIO DEL QUIMERISMO
SENSIBILIDAD
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ESTUDIO DEL QUIMERISMO
MEDIANTE REAL TIME PCR
SEGUIMIENTO POSTRASPLANTE
Calibrador: Receptor pre-ALO: 100%
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Los estudios convencionales mediante
PCR-VNTR-STR no poseen la suficiente
sensibilidad en la detección de células
residuales
del
receptor,
pudiendo
anticipar sólo el 50% de las recaídas
de los pacientes con LA y alo-TMO.
La decisión de una intervención
terapéutica para impedir la recaída
debe estar basada en el incremento
del quimerismo y no en el
establecimiento de un nivel o valor de
riesgo derivado de una única
determinación aislada.
Las nuevas técnicas de cuantificación
por PCR en tiempo real son
actualmente la metodología de
elección en el seguimiento del QH.
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imegen® - Quimera Screening I
Identificación de la informatividad de
8 polimorfismos para el análisis de
quimeras hematopoyéticas
imegen® - Quimera Screening II
Identificación de la informatividad de
7 polimorfismos para el análisis de
quimeras hematopoyéticas
Se considera que un polimorfismo es informativo cuando se detecta en el receptor del
trasplante y no en el donante.
El análisis molecular de los polimorfismos SRY y RhD no es necesario ya que SRY es
informativo cuando el receptor es varón y la donante mujer. RhD es informativo cuando el
receptor tiene grupo sanguíneo Rh+ y el donante RhResultados
Resultados
Polimorfismo
Informatividad
Receptor
Donante
1
MID 2113
+
+
No informativo
2
GSTM1
+
-
Informativo
3
MID 1385
-
+
No informativo
4
MID 1732
-
-
No informativo
5
rs4399
+
-
Informativo
6
MID 1039
+
+
No informativo
7
Xq28
-
-
No informativo
8
GSTT1
+
-
Informativo
Polimorfismo
Informatividad
global
acumulada
95,5%
Informatividad
Receptor
Donante
1
MID 154
+
+
No informativo
2
rs4399del
+
-
Informativo
3
MID 1385del
-
+
No informativo
4
MID 1732del
-
-
No informativo
5
THRY
+
-
Informativo
6
MID 1039del
+
+
No informativo
7
R271
-
-
No informativo
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imegen® - Quimera
Cuantificación relativa de polimorfismos de inserción/deleción
en quimeras hematopoyéticas
mediante PCR a tiempo real
El set imegen®-Quimera contiene los oligonucleótidos necesarios para cuantificar
polimorfismos de inserción/deleción o alelos nulos respecto a la cantidad total de ADN
presente en la muestra.
SRY
Xq28
R271
RhD
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CUANTIFICACION RELATIVA
Razón Normalizada = (Ediana)∆Cp diana (calibr. – muestra) ÷ (Eref)∆Cp ref (calibr. – muestra)
- Gen de referencia: Beta globina
- Calibrador de la reacción: muestra RECEPTOR pre Alo-TPH
SENSIBILIDAD: 10-4-10-5
(0,01-0.001%)
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Código
Nombre del set
Nº
reacciones
Código
Nombre del set
Nº
reacciones
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Screening I
48
IMG-116-12
Cuantificación de MID1039 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-22
Screening II
48
IMG-116-13
Cuantificación de MID1385del en quimeras
hematopoyéticas
50
IMG-116-2
Cuantificación de SRY en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-14
Cuantificación de MID1732del en quimeras
hematopoyéticas
50
IMG-116-3
Cuantificación de MID154 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-15
Cuantificación de MID2113del en quimeras
hematopoyéticas
50
IMG-116-4
Cuantificación de MID1385 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-16
Cuantificación de XQ28del en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-5
Cuantificación de MID1732 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-17
Cuantificación de rs4399del en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-6
Cuantificación de MID2113 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-18
Cuantificación de RhD en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-7
Cuantificación de XQ28 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-19
Cuantificación de MID1946 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-8
Cuantificación de GSTT1 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-20
Cuantificación de THRY en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-9
Cuantificación de R271 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-21
Cuantificación de MID1039del en quimeras
hematopoyéticas
50
IMG-116-10
Cuantificación de rs4399 en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-23
Cuantificación de Factor VII en quimeras hematopoyéticas
50
IMG-116-11
Cuantificación de GSTM1 en quimeras hematopoyéticas
50
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imegen® - Quimera
Interpretación de Resultados
Para realizar la cuantificación relativa de la quimera hematopoyética se ha
desarrollado un software específico, que permite obtener el resultado
mediante introducción de los siguientes parámetros:
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GRACIAS
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