FERTILIZANTES BIOLÓGICOS: DESARROLLO Y CONTROL DE

TRABAJO PRÁCTICO N° 6
FERTILIZANTES BIOLÓGICOS:
DESARROLLO Y CONTROL DE
CALIDAD DE INOCULANTES
Objetivos
•
•
•
•
Conocer los parámetros para la selección de
cepas.
Conocer las metodologías y procedimientos
microbiológicos para la evaluación y control de
los inoculantes más utilizados en la actualidad.
Adquirir habilidades y/o destrezas para la
evaluación de la inoculación a campo.
Valorar la responsabilidad, interacción,
cooperación y respeto para fomentar una
eficiente labor grupal.
Fertilizantes
Fertilizantes
no biológicos
•Formulados con compuestos
químicos orgánicos: compost,
lombricompuesto, estiércol,
abonos verdes, etc.
•Formulados con compuestos
inorgánicos: fosfato de amonio,
nitrato de amonio, etc.
Fertilizantes
biológicos
•Formulados con
organismos vivos
Productos que contienen
uno o varios
microorganismos como
principal componente
Inoculantes
o
Fertilizantes
biológicos
Microorganismos
Seleccionados
Viables
Benéficos
Para favorecer la nutrición y/o
promover el crecimiento de las plantas.
Inoculantes
o
Fertilizantes
biológicos
PGPR (promotores
del crecimiento)
Fijadores
de N2
Microorganismos
solubilizadores de
P de vida libre
Hongos
micorríticos
Mezcla de
microorganismos
no definidos
 Rizobios
 Azospirillum sp.
 Anabaena
INOCULANTE
Fertilizante biológico que se aplica a la semilla
en el momento de la siembra
Clasificación de Inoculantes
Líquidos
Según el soporte
Sólidos (turba)
Según la cantidad
de cepas que
contengan
Una: Monocepa
Varias: Multicepa
Inoculante efectivo
•
•
•
•
•
•
Formulado con microorganismos seleccionados
por su capacidad fijadora.
Microorganismos específicos para el cultivo a
tratar y adaptados a las condiciones
ambientales del lugar del cultivo.
Con un número adecuado de microorganismos.
Ley Nº 20466/80.
Presentar un soporte que proteja al rizobio, de
fácil aplicación y buena adherencia a la semilla.
No deben poseer contaminantes.
Envase adecuado y con instrucciones claras
Inoculante efectivo
CEPA + SOPORTE = CALIDAD
Eficiencia
(Especificidad y adaptación)
que garantice
viabilidad de
microorganismos
Desarrollo de un inoculante para leguminosas
nódulos
cortar la raíz
lavar
extraer los
nódulos
seleccionar
nódulos turgentes
macerar en 1
mL de H2O
estéril
enjuagar con H2O
estéril
desinfectar con
H2O2 (5 minutos)
colorear (Gram -)
incubar
incubar
estriar en
medio YEM
repicar
(pico de flauta)
conservar
Aislamiento de microorganismos: rizobios
Raíz de
leguminosa
1º
Extraer los nódulos
3º
Enjuagar con H2O estéril
2º
Desinfectar con H2O2 (20%) 5 minutos
Aislamiento de microorganismos: rizobios
5º
4º
Colocar los nódulos en un tubo
con 1mL de agua estéril
Macerar con varilla de vidrio
8º
Incubar a
28-30° C
7º
Estriar en medio YEM
6º
Extraer una alícuota
Aislamiento de microorganismos: rizobios
Cultivo de rizobio
9º
Colorear y observar
11º
Incubar y
conservar
10º
Repicar a “pico de flauta”
Producción de inoculante
Primera etapa: Selección de cepas
Testigo
Testigo
medio sin N
sin inocular
medio con N
sin inocular
Tratamientos
Control
medio sin N
inoculado con
cepa eficiente
medio sin N
inoculados con
cepas a testear
Selección de cepas: parámetros de evaluación
Ensayos de infectividad:
 Cantidad de nódulos
 Ubicación en la raíz
Selección de cepas: parámetros de evaluación
Ensayos de infectividad:
 Tamaño de nódulos
 Calidad al corte (color rojo)
 Actividad fijadora de nitrógeno.
Selección de cepas: parámetros de evaluación
Ensayos de efectividad:
• Nodulación
• Materia seca
• % de nitrógeno
Evaluación final a campo:
• Nodulación
• Peso seco de nódulos
• % de nitrógeno
• Rendimiento en grano
Producción de inoculante
Segunda etapa: Preparación a nivel industrial
Producción de inoculantes
Mangueras
Tapones
Biodigestores
Filtro de aire
Mechero
Aireador
Producción de inoculantes
Planta industrial
Control de calidad de inoculantes
inoculante sólido
(X g + X mL de
solución salina estéril)
Inoculante sólido
suspensión
Para inoculante sólido
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
9 mL de solución
salina estéril
10
-2
1 mL
10
-3
-4
10
-5
10
10
-6
1 mL
10
-7
10
-8
1 mL
medio Y.E.M.
incubar
calcular
Control de calidad de inoculantes
Para inoculante líquido
Inoculación a campo
Preparación del inoculante
1º - Dilución: para una distribución más homogénea
2º - El volumen total de líquido (agua + inoculante +
curasemilla) para la dilución, depende del tamaño de
las semillas:
•
•
semillas grandes: hasta 2,4 litros cada 100 kg de
semilla
(Soja: 900 mL / 100 kg)
semillas chicas: hasta 4 litros cada 100 kg de
semillas
(Alfalfa: 1000 mL / 100 kg)
Inoculación a campo
Recomendaciones generales
 Realizar la inoculación a la
sombra.
 Inocular la cantidad necesaria
para un día de siembra.
 Si debe aplicar curasemillas,
realice la mezcla de ambos
productos respetando el
volumen de agua y sembrar
inmediatamente.
Inoculación a campo
 No conservar el
inoculante mezclado con
el curasemillas durante
mucho tiempo.
 No usar herramientas o
recipientes que hayan
estado en contacto con
combustibles o
pesticidas.
Inoculación a campo
Si en la inoculación también
aplicamos curasemillas,
debemos respetar las normas
para manejo seguro de
agroquímicos
Inoculación a campo
Utilizar protección
en rostro y cuerpo
No mezclar y/o
conservar los productos
en botellas de bebida
TRABAJO DE LABORATORIO
1. Aislamiento de rizobios y visualización de
bacteroides a partir de nódulos de leguminosas.
a- Cortar las raíces de plantas noduladas.
b- Lavar las raíces con cuidado y sin romper los
nódulos.
c- Extraer de 5 a 10 nódulos turgentes
d- Desinfectar los nódulos extraídos con agua
oxigenada durante 5 minutos.
e- Enjuagar los nódulos con agua destilada estéril.
f- Macerar los nódulos extraídos en 2 mL de agua destilada
estéril.
g- Realizar estrías en medio Y.E.M. e incubar durante 7 días
a 28- 30°C.
h- A partir del macerado realizar una coloración de Gram.
i- Visualizar el carácter Gram y la forma de los bacteroides.
TRABAJO DE LABORATORIO
Nódulos (A; B; C) y bacteroides (D; E; F) de P. sativum (arveja).
TRABAJO DE LABORATORIO
2. Control de inoculantes para soja.
a- Bajo condiciones de asepsia, realizar la siembra de 2
inoculantes para soja.
b- Realizar diluciones al décimo (1/10) en solución
salina estéril.
c- Sembrar 1 mL de las últimas tres diluciones en cajas
de Petri estériles, utilizando 20 mL de medio Y.E.M.
previamente fundido y atemperado a 45- 50 °C.
d- Incubar durante 7 días a 28- 30°C.