Linfopred Lara

TÉCNICA INMUNOLÓGICA
LINFOPRED
INTRODUCCIÓN
La técnica LINFOPRED es una práctica inmunológica precedente, preparativa,
para que, una vez realizada, se pueda llevar a cabo la técnica que requiere lo que
se obtiene de esta práctica, que son linfocitos totales.
Por decirlo de alguna manera, es como uno de los pasos a seguir de todas las
técnicas que se realizan con linfocitos, pero, ajeno a eso, no deja de ser una técnica
que requiere un protocolo y unas condiciones específicas.
FUNDAMENTO
La técnica LINFOPRED consiste en la obtención de linfocitos totales, es decir,
separar los linfocitos de las demás células sanguíneas pero sin distinguir los B de
los T y luego estudiarlos. Esta técnica inmunológica es muy manual y se utiliza en
la mayoría de los casos para buscar el donante más óptimo para un receptor que
precise algún transplante, esto se hace con otra técnica en la que se enfrentan los
linfocitos de los posibles donantes extraídos por LINFOPRED y se enfrentan al
suero del posible receptor.
MATERIALES, REACTIVOS Y MUESTRA
-
3 tubos de sangre heparinizada por paciente
Tubos de ensayo
Liquido separador
Centrífuga
Pipetas
Medio lavador
Antibiotico de amplio espectro
Medio FSC (alimento para las células)
Cámara de Neubauer y microscopio
TECNICA PARA EXTRACCION DE LINFOCITOS UN SOLO
PACIENTE
1. En dos tubos de ensayo añadimos líquido separador (llenamos 1/3 de éste
por tubo)
2. repartimos los3 tubos de sangre del paciente en esos dos tubos de ensayo
con una pipeta Pasteur por las paredes, para evitar mezclar el líquido con
la sangre.
3. centrifugamos los 2 tubos 20 min a 2500 rpm
4. recogemos con pipeta Pasteur los linfocitos, que estarán entre el líquido
separador y el plasma formando una lamina blanca. Los glóbulos rojos
estarán en el fondo del tubo.
5. una vez recogidos los linfocitos y depositados en otro tubo de ensayo le
añadimos medio lavador suplementado al 1% con un antibiótico de amplio
espectro y lavamos dos veces a 1400 rpm durante 7 min.
6. decantamos el sobrenadante para quedarnos con los linfocitos ya lavados.
7. para mantener vivos los linfocitos (serán usados en 1ó 2 días) añadimos en
un frasco de 100 ml, 20 ml de FSC (medio liquido que nutre las células) y
antibiótico.
8. antes de usar los linfocitos hay que hacer el “ajuste de células”, que consiste
en dejar una cantidad aproximada de células en un volumen determinado.
Para ello, en una cámara de Neubauer, añadimos una gota de linfocitos que
estaban en medio FSC y diluimos hasta que queden unos 25 linfocitos por
campo microscópico. Este paso se puede hacer de una manera menos exacta
pero que da buenos resultados, pero sólo los muy expertos saben realizar.
9. dejamos los linfocitos en nevera hasta que se necesiten.