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Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview®– Tinción Avanzada
Tinción de Plata para Fibras Reticulares (Reticulina)
Instrucciones de uso
Análisis técnico
Análisis
Microtomía
Realice los cortes de 4 a 6 micrones.
Fijación
No existen requisitos especiales. La fijación con formol neutro tamponado al 10% es apropiada.
Control de calidad
Debe utilizarse un corte de hígado.
Todos los reactivos de tinción deben almacenarse en un refrigerador a 2-8 °C. Los reactivos de tinción de Fibras
Reticulares son solo para uso “In Vitro”. Algunos de los reactivos utilizados en este kit se consideran tóxicos.
Consulte las Hojas de datos de seguridad de los materiales para conocer la Información de salud y seguridad.
El reactivo de Plata Amoniacal es estable, pero pueden aparecer precipitado que no influirá negativamente en
la tinción de las Fibras Reticulares. Todos los demás reactivos son estables y no deben formar precipitados de
aplicarse los parámetros de almacenamiento habituales. Se recomienda que la Plata Amoniacal y la solución
Reductora se desechen después del uso. El resto de componentes pueden filtrarse y volver a usarse. Todos los
colorantes utilizados en estas formulaciones están certificados por la Biological Stain Commission.
Procedimiento técnico
Solución de trabajo de Plata Amoniacal
Debe prepararse en el momento de utilizarse:
1. Colocar 5ml de Nitrato de Plata al 10% en un matraz limpio.
2. Añadir Hidróxido de Amonio gota a gota y agitar hasta que el precipitado formado apenas se disuelva (tener
precaución de no mezclar más de lo debido).
3. Añadir 5 ml de Hidrato de Sodio al 3%.
4. Añadir Hidróxido de Amonio gota a gota hasta que el precipitado se disuelva completamente.
5. Añadir Nitrato de plata al 10% gota a gota hasta que 1 gota provoque turbidez en la solución (el objetivo
deseado es una leve turbidez).
6. Diluir la solución en 50 ml de agua desionizada y transferir a un recipiente Coplin limpio.Desechar la
solución de Plata Amoniacal después de usar. No reutilizable.
Protocolo técnico parar tinción de Fibras Reticulares
1. Desparafinar e hidratar los cortes con agua desionizada.
2. Oxidar el corte en una solución de Permanganato de Potasio al 1% durante 5 minutos
3. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada durante 1 minuto.
4. Blanquear en Ácido Osálico al 1% durante 2 minutos o hasta que los cortes disminuyan su coloración.
5. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada durante 1 minuto.
6. Colocar los cortes en Sulfato de Amonio Férrico al 2,5% durante 15 minutos.
7. Enjuagar bien los cortes con varios cambios en agua desionizada.
8. Impregnar los cortes con la solución de trabajo de uso inmediato de Plata Amoniacal durante 2 minutos.
9. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada.
10. Sumergir rápidamente en la Solución Reductora hasta cubrir el portaobjeto en la solución y los cortes viren
uniformemente a color marrón oscuro-negro. Enjuagar el portaobjeto en la solución durante 1-2 minutos.
11. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada durante 1-2 minutos.
12. Virar en Cloruro Áurico al 0,1% durante 5-10 minutos. El fondo deberá aparecer en gris-lavanda con las
Fibras Reticulares en negro. Evitar un viraje excesivo que dé un resultado no deseado en tonalidad rosa a
rojo.
13. Enjuagar con agua desionizada.
14. Introducir los cortes en una solución de Tiosulfato de Sodio al 5% durante 1 minuto.
15. Enjuagar con agua desionizada durante 2 minutos.
16. Realizar tinción de contraste con Rojo Nuclear Rápido durante 5 minutos (opcional).
17. Enjuagar con agua desionizada.
18. Deshidratar los cortes en alcohol al 95% durante 1 minuto.
19. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
20. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje
con un medio de montaje sintético.
Comentarios técnicos
La alcalinidad de la Plata Amoniacal puede provocar que los cortes se desprendan de los portaobjetos. Por lo
tanto, se recomienda usar portaobjetos cubiertos con polilisina o portaobjetos con adhesivo Bond-Rite. Para
todas las técnicas de Plata deben utilizarse fórceps de plástico o fórceps de metal cubierto de parafina para
evitar la formación de un precipitado de plata. Las bandejas para tinción deben lavarse meticulosamente y, luego,
enjuagarse con varios cambios de agua desionizada para eliminar la posibilidad de que se formen precipitados de
plata y garantizar la aparición de la reacción primaria.
La solución de trabajo de Plata Amoniacal debe ser preparada en el momento de utilizarse. No reutilizar la
solución de Plata Amoniacal preparada ya que los precipitaos pueden provocar inestabilidad de los componentes
en determinadas condiciones de almacenamiento.
Probable modo de acción
El Permanganato de Potasio es el agente oxidante en esta técnica. Es seguido de un tratamiento con Ácido
Osálico para eliminar el exceso de Permanganato. Este paso sirve para mejorar las sucesivas tinciones de las
Fibras Reticulares. Un paso de sensibilización usando Sulfato de Amonio Férrico impregna la Fibra, creando un
puente metalo-orgánico que es reemplazado por la plata durante el posterior tratamiento con Plata Amoniacal.
Para hacer visible la plata se utiliza una solución Reductora de Formaldehido diluido. Las estructuras tisulares
que han sido impregnadas por la solución de plata aparecerán ahora marrón-negro. El Cloruro Áurico es utilizado
para virar la tonalidad de los cortes, obteniendo un mejor contraste y claridad ya que el oro reacciona y se combina con la plata reducida. La plata no reducida es eliminada mediante tratamiento con solución de Tiosulfato de
Sodio. Una tinción de contraste opcional con Rojo Nuclear Rápido permite tinción del fondo así como de detalles
del núcleo.
Références
1. Bancroft, J.D. and Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York,
NY, 1977.
2. Sheehan, D.C. and Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972.
5. Luna, L.G., Histopathologic Methods and Color Atlas of Special Stains and Tissue Artifacts. American Histolabs,
Inc. Gaithersburg, MD, 1992.
6. Carson, F.L. Histotechnology : A Self-Instructional Text, 2nd Edition. ASCP Press, Chicago, 1997.
Información para pedidos
Producto Tamaño
Cant.
REF
Kit de Plata para Fibras Reticulares 1 Kit 1
87025
Solución de Ácido Osálico 125 ml
1
88045
Solución de Permanganato de Potasio
125 ml
1
88046
Solución de Sulfato de Amonio Férrico
125 ml
1
88047
Resultados
Solución reductora
500 ml
1
88048
Fibras Reticulares – Negro
Fibras Elásticas – Negro
Fibras Nerviosas – Negro
Colágeno – Lavenda a Rosa
Núcleo y fondo – Rojo
Solución de Cloruro Áurico
125 ml
1
88026
Solución de Tiosulfato de Sodio
125 ml
1
88025
Solución de tinción Rojo Nuclear Rápido de Kernechtrot
125 ml
1
88049
Solución de Nitrato de Plata (10%) 125 ml
1
88050
Solución de Hidróxido de Amonio
8 ml
1
88051
Solución de Hidróxido de Sodio 125 ml
1
88052
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