Cámara Argentina de Laboratorios Independientes

Cámara Argentina de Laboratorios Independientes,
Bromatológicos, Ambientales y Afines
CUANTIFICACIÓN DE GLIFOSATO EN AGUAS DE LAVADO.
Desarrollo de un método análisis por LC-MS/MS.
El crecimiento de la población a nivel mundial incrementó la demanda de cultivos que llevó a la necesidad de aumentar
año a año la cantidad y tipos de productos agroquímicos usados. Como consecuencia directa de este aumento se
produce una gran acumulación de desechos originados por su utilización, lo que obliga a plantear estrategias que
tiendan a disminuir la contaminación generada. El lavado de envases para reducir los residuos contenidos en ellos es
una de las posibilidades planteadas para promover el reciclado de envases, brindar seguridad en el transporte, almacenamiento y/o lograr una disposición final correcta para evitar contaminaciones innecesarias.
Para definir una técnica de lavado que se adecue a normas actuales se debe contar con una metodología analítica que
permita la cuantificación del producto residual, por lo tanto es fundamental el desarrollo de un método de análisis de
las aguas de lavado confiable y robusto que permita la cuantificación inequívoca de dicho principio activo.
Uno de los agroquímicos más utilizados mundialmente es el glifosato (N- fosfonometil glicina); un herbicida no selectivo
de amplio espectro que actúa inhibiendo la producción de aminoácidos esenciales para el crecimiento de las plantas,
ocasionando su la muerte.
Sabiendo que el glifosato es una sustancia muy soluble en agua, usamos esta ventaja para desarrollar una metodología analítica por LC-MS/MS que permite realizar la cuantificación de glifosato en aguas de lavado en bajas concentraciones.
Como se trata de una molécula pequeña, muy polar y sin grupos grupos cromóforos o fluoróforos mejoramos el
comportamiento cromatográfico del glifosato mediante una reacción de derivatización pre-columna con FMOC-Cl que
en el medio adecuado (pH=9) reacciona con el grupo amino del glifosato y se forma una amida terciaria que aumenta
la sensibilidad sustancialmente.
MÉTODO CROMATOGRÁFICO
•
•
•
•
•
•
•
•
Equipo: LC-MS/MS, Agilent 1200Series-API 2000
Columna: Agilent XDB-C18, 4,6 x 50 mm, 1,8 um
Temperatura: 35°C
Volumen de inyección: 30 ul
Flujo: 0.35 ml/min
Sv A: NH4AcO 10 mM
Sv B: metanol
Gradiente:
Tiempo total (min)
50.0
75.0
90.0
90.0
75.0
50.0
% Sv A
% Sv B
0.0
4.0
6.0
18.0
20.0
22.0
50.0
25.0
10.0
10.0
25.0
50.0
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Av. de Mayo 981, 2º Piso, Of. 220 (C1084AAE), Buenos Aires, Argentina - Tel: 52740444 - fax: 52740450
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• Modo: MRM, positivo.
• Iones para cuantificación del analito: 392-167.
DP: 31
FP: 300
EP: 11
CEP: 20
CUR: 20
IS: 5500
TEM: 350
GS1: 50
GS2: 40
CXP: 2
CE: 20
• Iones para confirmación del analito: 392-149.
REACTIVOS Y SOLUCIONES
•
•
•
•
Glifosato 95%, activo técnico
FMOC-Cl, Aldrich
Borato de sodio, Merck
Agua deionizada Millipore
Se prepararon soluciones individuales de glifosato, borato de sodio y FMOC-Cl en agua a una concentración de 2.5
mM cada una.
Se probaron diferentes condiciones para la reacción de derivatización, variando concentraciones, para establecer las
condiciones óptimas de obtención de glifosato-FMOC. Para ello se trabajó con las diluciones descriptas en la siguiente
tabla:
Sc
Vol. Sc
glifosato
mMoles/ml
glifosato
Vol. Sc
borato de Na
mMoles/ml
borato de Na
Vol. Sc
FMOC
mMoles/ml
FMOC
1
2
3
4
5
240 ul
240 ul
240 ul
240 ul
240 ul
2.93 exp-5
2.93 exp-5
2.93 exp-5
2.93 exp-5
2.93 exp-5
240 ul
360 ul
240 ul
360 ul
360 ul
2.93 exp-5
4.50 exp-5
2.93 exp-5
4.50 exp-5
4.50 exp-5
240 ul
240 ul
480 ul
480 ul
480 ul
2.93 exp-5
2.93 exp-5
6.00 exp-5
6.00 exp-5
6.00 exp-5
En cada caso, el orden de agregado fue, sucesivamente: sc de glifosato, sc de borato de sodio y sc de FMOC. Luego,
se diluyeron con agua a 20.0 ml y se dejaron a temperatura ambiente, en reposo y sin abrigo de la luz durante dos
horas. En el caso de la solución 5, la dilución a volumen final se hizo luego de transcurrido este tiempo.
Estas soluciones fueron analizadas por LC-MS/MS, de acuerdo a los parámetros descriptos anteriormente. Los iones
usados para la cuantificación, 392 y 167, corresponden al Gly-FMOC+H+ y glifosato, respectivamente.
RESULTADOS
Seguidamente se presentan las áreas obtenidas para cada uno de los cromatogramas de las soluciones analizadas
Sample Name
1
2
3
4
5
Analyte peak area
(counts)
3.33E+06
3.27E+06
3.31E+06
3.28E+06
2.94E+06
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CONCLUSIONES
Al comparar las áreas de los distintos cromatogramas podemos observar que las respuestas obtenidas para cada
solución no varían significativamente aunque las condiciones de derivatización hayan sido diferentes. Por lo tanto no
sería necesario usar un exceso de los reactivos de FMOC ni de borato de sodio para que se produzca dicha reacción
ya que trabajando mol a mol en relación al glifosato se obtiene un resultado similar.
Por los datos presentados se puede inferir que la metodología analítica desarrollada es adecuada para la determinación de concentraciones de glifosato en el orden de los ppb. Además tiene como gran ventaja que no es necesario un
pre-concentración de la muestra, pudiendo realizarse el análisis directamente sobre las aguas del lavado de los
envases/equipos de aplicación. Este método aporta una sensibilidad adecuada que permite comprobar si los lavados
efectuados fueron suficientes para la eliminación del glifosato a los niveles requeridos.
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