Test CEDIA® Opiaceos 2K Assay In Vitro Diagnosticum 100090 (Kits de 3 x 17 mL) 100099 (Kits de 65 mL) 1815296 (Kits de 495 mL) Uso Precauciones y advertencias El Test CEDIA® Opiáceos 2K está diseñado para la determinación cualitativa de opiáceos en la orina humana (en una concentración de umbral de 2000 ng/mL).1 El test proporciona únicamente un resultado analítico preliminar. Se debe utilizar un método químico alternativo más específico para confirmar el resultado analítico. La gascromatografía/ espectrometría de masa (GC/EM) es el método de confirmación preferido.2 Siempre deben aplicarse consideraciones clínicas y el juicio profesional con todo resultado de test de consumo de estupefacientes, especialmente cuando se utilicen resultados positivos preliminares. Resumen y explicación del test El opio se obtiene de las vainas no maduras de la amapola opiácea Papaver somniferum.3,4 La morfina y la codeína son alcaloides naturales del opio.3,5 Ambas tienen usos médicos generalmente aceptados, en particular como analgésicos. Sin embargo, ambas drogas presentan riesgos de toxicomanía.3-7 La heroína es un compuesto sintetizado de la morfina y es el opiáceo más común en la drogadicción.8 El cuerpo metaboliza los opiáceos con gran rapidez, y el sitio principal del metabolismo es el hígado.5,6,9 La morfina se excreta en la orina como morfina conjugada, morfina libre y otros metabolitos en estado vestigial.4,5,9 La codeína se excreta en la orina como codeína libre y conjugada y morfina libre y conjugada.4,5 Después de una administración de codeína, la codeína total puede eliminarse más rápidamente que la morfina total, de manera que algunas muestras de orina de usuarios de codeína pueden llegar a revelar solamente la presencia de morfina total o una relación de morfina total a codeína total mayor que uno.4,6,8 La heroína se metaboliza rápidamente en sangre entera resultando en 6-monoacetilmorfina, que luego se hidroliza para formar morfina conjugada en el hígado.4,7 Se excreta en la orina principalmente como morfina conjugada, pero también en pequeñas cantidades bajo la forma de morfina libre y 6-monoacetilmorfina.4,7 La codeína no es metabolito de la heroína o morfina como anteriormente lo aseveraran ciertos investigadores.4,7 Sin embargo, la codeína se ha revelado como impureza en ciertas preparaciones de heroína, lo que explica su presencia en la orina de algunos adictos a la heroína.3,5,7 Según la dosis y la sensibilidad del método analítico, la morfina total puede detectarse en la orina hasta 72 horas después de la última administración de morfina, codeína o heroína.4,6,8,9 El Test CEDIA Opiáceos 2K recurre a la tecnología del ADN recombinante (patente estadounidense N° 4708929) para producir un sistema de enzimoinmunoensayo homogéneo sin igual.10 El test se basa en la enzima bacteriana -galactosidasa, que se divide en dos segmentos inactivos por medio de procedimientos de ingeniería genética. Estos fragmentos se recombinan espontáneamente para formar una enzima activa que, al reaccionar con el substrato, ocasiona un cambio de color que puede medirse por medio de la espectrofotometría. En el test, la droga en la muestra compite con la droga conjugada con un fragmento inactivo de la -galactosidasa en busca de un sitio de fijación de anticuerpos. Si la muestra contiene la droga, ésta se fija al anticuerpo, permitiendo que los fragmentos inactivos formen una enzima activa. Si la muestra no contiene droga, el anticuerpo se fija a la droga conjugada con el fragmento inactivo, e impide la reasociación de los fragmentos inactivos de -galactosidasa, impidiendo a su vez la formación de enzima activa. La cantidad de enzima activa formada y el correspondiente cambio de absorbancia son directamente proporcionales a la concentración de droga en la muestra. Reactivos 1 Tampón de reconstitución AE: Contiene 13 μg/mL anticuerpo monoclonal anti-opiáceos, sales de tampón y conservante. 1a Reactivo AE: Contiene 0,171 g/L aceptor enzimático, sales de tampón, detergente y conservante. 2 Tampón de reconstitución DE: Contiene tampón fosfato. 2a Reactivo DE: Contiene 23,3 μg/L dador enzimático conjugado a un derivado de la morfina, 1,67 g/L rojo de clorofenol- -D-galactopiranósido, estabilizador y conservante. Material adicional: Etiquetas de código de barras alternativas (Nos de catálogo 100090 y 100099 únicamente. Hágase referencia a la aplicación específica al analizador para obtener las instrucciones para el uso). Envase de analizador vacío para trasvasar la solución DE/AE (no de cat. 100099). Envase de analizador vacío para trasvasar la solución DE (no de cat. 1815296 únicamente). Material adicional necesario (venta por separado): Calibrador CEDIA Multidrogas, Cut-offs Primarios Los reactivos contienen azida sódica. Evitar el contacto con la piel y las mucosas. Enjuagar las áreas afectadas con agua en abundancia. En caso de contacto con los ojos o de ingestión, consultar inmediatamente a un médico. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las cañerías hasta formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Al desechar el reactivo debe enjuagarse con abundante agua para evitar la acumulación de azidas. Limpiar las superficies metálicas expuestas a la azida con hidróxido sódico al 10%. Preparación y almacenamiento del reactivo A continuación se describe la preparación de las soluciones para los analizadores Hitachi. Para otros analizadores, utilícese la aplicación específica al analizador. Retirar el kit del almacenamiento refrigerado (2-8°C) inmediatamente antes de preparar las soluciones. Preparar las soluciones en el orden siguiente para reducir el riesgo de una posible contaminación. R2 Solución donadorr enzimático: Conectar el envase 2a (ED Reactivo) al envase 2 (ED Tampón de reconstitución) utilizando uno de los adaptadores suministrados en el kit. Mezclar cuidadosamente por inversión, procurando que todo el material liofilizado del envase 2a se transfiera al envase 2. Evitar la formación de espuma. Desconectar el envase 2a y el adaptador del envase 2 y desecharlos. Tapar el envase 2 y dejar reposar durante aproximadamente 5 minutos a temperatura ambiente (15-25°C). Volver a mezclar. Anotar la fecha de reconstitución en la etiqueta del envase. R1 Solución aceptor Enzimático: Conectar el envase 1a (AE Reactivo) al envase 1 (AE Tampón de reconstitución) utilizando uno de los adaptadores suministrados en el kit. Mezclar cuidadosamente por inversión, procurando que todo el material liofilizado del envase 1a se transfiera al envase 1. Evitar la formación de espuma. Desconectar el envase 1a y el adaptador del envase 1 y desecharlos. Tapar el envase 1 y dejar reposar durante aproximadamente 5 minutos a temperatura ambiente (15-25°C). Volver a mezclar. Anotar la fecha de reconstitución en la etiqueta del envase. N° de catálogo 100099 - Analizador Hitachi 717, 911, 912 ó 914: Transvasar los reactivo reconstituidos a los francos de 100 mL vacíos R1 y R2 correspondientes suministrados con el kit. envases directamente en el compartimiento de reactivos del analizador. Analizador Hitachi 917 y Sistema Modular analytics P: Emplear los reactivos reconstituidos sin trasvarlos a los envases. Desechar los envases de 100 mL vacios. N° de catálogo 1815296 - Analizador Hitachi 747 y Sistema Modular analytics D: Transvasar mediante el embudo parte de la solución R2 al envase suministrado de solución R2, adecuadamente etiquetado. NOTA 1: Los componentes suministrados en este kit deben utilizarse en su conjunto. No mezclar componentes de lotes diferentes. NOTA 2: Para evitar la contaminación recíproca de los reactivos, no intercambiar los tapones de los envases de reactivo. La Solución R2 debe presentar un color amarillo naranja. Un color rojo o rojo púrpura indica que el reactivo está contaminado y debe desecharse. NOTA 3: Las Soluciones R1 y R2 deben estar a la temperatura del compartimiento de almacenamiento de reactivos del analizador antes de proceder al test. Véase la aplicación específica al analizador para obtener informaciones adicionales. NOTA 4: Proteger el reactivo AE de una exposición prolongada y continua a una luz intensa para asegurar su estabilidad. Almacenar los reactivos a 2-8°C. NO CONGELAR. Para averiguar la estabilidad de los componentes sin abrir, véanse las etiquetas de la caja o de los envases para obtener la fecha de caducidad. Solución R1: 60 días refrigerados en el analizador o a 2-8°C. Solución R2: 60 días refrigerados en el analizador o a 2-8°C. Recogida y manipulación de muestras Las muestras de orina deben recogerse en recipientes limpios de vidrio o de plástico. Centrifugar las muestras muy turbias antes de realizar la prueba. Manipular la orina humana como si se tratara de material potencialmente infeccioso. Si se sospechara una adulteración, deberá obtenerse otra muestra para el análisis, ya que la adulteración de las muestras de orina puede afectar los resultados del test. Los Lineamientos imperativos para los programas federales de control de drogas en el lugar de trabajo; Lineamientos Finales; Circular (Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs; Final Guidelines; Notice) recomiendan que las muestras no sometidas a un test inicial dentro de los 7 días de su llegada al laboratorio se conserven en unidades de refrigeración seguras.11 Procedimiento del test Especificidad Al analizar los siguientes opioides con el Test CEDIA Opiáceos 2K se comprobaron las reacciones cruzadas indicadas a continuación: Para efectuar este test pueden utilizarse analizadores químicos capaces de mantener una temperatura constante, de pipetear muestras, de mezclar reactivos, de medir la velocidad de absorbencia y de cronometrar la reacción con exactitud. Microgenics, parte de Thermo Fisher Scientific pone a su disposición las hojas de aplicación con los distintos parámetros correspondientes a los instrumentos específicos. Efectuar la programación por medio de la lectura de los parámetros de aplicación a partir del diskette de aplicaciones o la hoja de códigos de barra según corresponda. Concentration ensayada (ng/mL) % Reactividad cruzada Morfina 2000 100 Compuesto Codeí na 1600 107 Usar el Calibrador Multidrogas, Cut-offs Primarios, para analizar los resultados. Para los analizadores Hitachi, colocar el calibrador de umbral en la posición estándar apropiada (S1) seleccionada por el usuario. Consultar la aplicación específica del analizador para más información. Diacetilmorfina 2000 65 Dihidrocodeína 2000 89 Hidrocodona 2000 77 La buena práctica de laboratorio recomienda emplear los controles cada día que se analicen muestras de paciente y cada vez que se efectúe una calibración. Se recomienda utilizar dos niveles de controles: uno 25% por encima y el otro 25% por debajo del umbral seleccionado. Los valores obtenidos para los controles deben recaer dentro de los límites especificados. Si se detectaran tendencias o variaciones repentinas, se deben revisar todos los parámetros operativos u obtener la asistencia del Apoyo Técnico al Cliente de Microgenics. Todos los requisitos de control de calidad deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de acreditación locales, estatales o federales. Hidromorfona 2000 79 Control de calidad y calibración12 Imipramina Resultados y valores esperados El calibrador de umbral de 2000 ng/mL se utiliza como referencia para distinguir entre muestras positivas y negativas. Las muestras que produzcan valores de respuesta iguales a o mayores que el valor de respuesta del calibrador se consideran positivas. Las muestras que produzcan valores de respuesta menores que el valor de respuesta del calibrador se consideran negativas. Para otros analizadores, véase la aplicación específica al analizador para obtener informaciones adicionales. Limitaciones 1. Un resultado positivo únicamente indica la presencia de opiáceos. No indica ni mide la intoxicación. 2. Las semillas de amapola puede contener opiáceos, y el consumo de alimentos que contienen semillas de amapola puede causar un resultado de test positivo.13 3. Otras sustancias y/o factores no enumerados aquí pueden interferir con el test y causar resultados erróneos (p.ej., errores técnicos o de procedimiento). Características específicas 13 Los resultados típicos que se obtienen con el analizador Hitachi 747 se indican a continuación. Los resultados obtenidos en su laboratorio pueden ser distintos. Precisión Los estudios de medición de la precisión, utilizando reactivos y calibradores comerciales, rindieron los siguientes resultados en mA/min con un analizador Hitachi 717 siguiendo los lineamientos para un experimento NCCLS de repetición modificado. Precisión Intraserie (n=21) x̄ SD %CV Control Bajo 247.6 3.01 1.2 Calibrator de umbral 301.6 3.37 1.1 Control Alto 362.2 4.73 1.3 Control Bajo 64 Morfina-6-glucurónido 3500 57 6-Monoacetilmorfina 2500 80 Meperidina 1.000.000 0,2 Oximorfona 100.000 2,4 Oxicodona 64.000 3,9 Compuesto ng/mL Compuesto ng/mL Acetaminofeno 500.000 Fenciclidina 500.000 Acido acetilsalicílico 500.000 Fenobarbital 500.000 Acido salicilúrico 500.000 Fluoxetina 500.000 Amoxicilina 100.000 Levotiroxina Anfetamina 500.000 Metadona 500.000 Benzoilecgonina 500.000 Metanfetamina 500.000 Captopril 500.000 Nifedipina 500.000 Cimetidina 500.000 Propoxifeno 500.000 Clordiazepóxido 100.000 Ranitidina 500.000 Diazepam 500.000 Secobarbital 500.000 9 Digoxina 100.000 11-nor-∆ -THC-COOH Enalapril 500.000 Verapamil Substance 10.000 500.000 Concentratión Substance Concentratión Acetona < 1,0 g/dL Galactosa < 10 mg/dL Acido ascórbico < 1,5 g/dL -globulina < 0,5 g/dL x̄ SD %CV 247.9 10.62 4.3 Acido oxálico < 0,1 g/dL Glucosa < 3,0 g/dL < 0,5 g/dL Hemoglobina < 0,3 g/dL Calibrator de umbral 301.6 13.09 4.3 Albumina sérica humana Control Alto 365.1 15.47 4.2 Cloruro de sodio < 6,0 g/dL Riboflavina Creatinina < 0,5 g/dL Urea Etanol < 1,0 g/dL Exactitud Con el Test CEDIA Opiáceos 2K se analizaron 200 muestras clínicas de orina y 20 muestras a las que se había agregado morfina hasta ± 25% del umbral de prueba de 2000 ng/mL en un analizador Hitachi 717 utilizando el Test CEDIA Opiáceos como referencia, con los siguientes resultados: + 84 35* - 0 101 < 7,5 mg/dL < 5,0 g/dL Sensibilidad La sensibilidad del test, o su límite de detección (LOD por sus siglas en inglés), representa la menor concentración de opiáceos que puede distinguirse del calibrador negativo, y es de 60,8 ng/mL. Test CEDIA Opiáceos 2K + Test CEDIA Opiáceos 50.000 No se observó interferencia alguna con las siguientes sustancias agregadas a las concentraciones endógenas normales presentes en la orina en análisis realizados con el Test CEDIA Opiáceos 2K: Precisión Interserie (n=61) Muestra 2,3 2000 Compuestos sin relación estructural analizados con el Test CEDIA Opiáceos 2K arrojaron resultados negativos en las concentraciones indicadas a continuación. Los resultados de este test únicamente diferencian entre muestras positivas (> 2000 ng/mL) y negativas, sin estimar la cantidad de droga detectada en una muestra positiva. Muestra 90.000 Morfina-3-glucurónido * Las 35 muestras se analizaron con GC/EM y revelaron un contenido de 172-1899 ng/mL de morfina. 2 Bibliografía 1. Mandatory guidelines for federal workplace drug testing programs. Federal Register. 1997; 62 (189):51118-51120. 2. Hawks RL. Analytical methodology. In: Hawks RL, Chiang CN, eds. Urine Testing for Drugs of Abuse. 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Servicio al cliente y de asistencia técnica en EE.UU: 1-800-232-3342 Microgenics GmbH Spitalhofstrasse 94 D-94032 Passau Germany Tel: +49 (0) 851-88 68 90 Fax: +49 (0) 851-88 68 910 Para actualizaciones de folletos, visite: www.thermoscientific.com Otros países: Comuniquese con su representante local de Thermo Fisher Scientific. CEDIA es una marca registrada de Roche Diagnostics. 10006525-2-ES 2014 06 3