Bacilos gramnegativos de ubicacin incierta

Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de Medicina - Microbiología e Inmunología
BACILOS GRAMNEGATIVOS DE UBICACIÓN INCIERTA
Dentro de esta categoría se incluyen diversos bacilos gramnegativos, pequeños, aerobios, que
requieren para su desarrollo una atmósfera rica en CO2 (capnófilos) y medios enriquecidos.
Estas bacterias pertenecen a los géneros Haemophilus, Brucella y Bordetella. Todas producen
patologías de gran importancia en medicina humana, algunas de ellas fatales si no se realiza
tratamiento adecuado.
Género Haemophilus
Su nombre significa afinidad por la sangre debido a
que requiere de factores hemáticos para su desarrollo.
Las especies más importantes son H. influenzae, H.
ducreyi, H. parainfluenzae y H. aphrophilus
Son bacilos y cocobacilos gramnegativos, se agrupan
en empalizada y algunos poseen una cápsula
polisacárida. Para su desarrollo requieren alguno o
ambos factores hemáticos para crecer (Factor V o
NAD y Factor X o Hemina).
Haemophilus influenzae
El nombre de la especie proviene de la creencia inicial de que era el agente causal de la gripe
(influenza), pero luego se demostró que puede aparecer produciendo una infección pulmonar
agregada en pacientes con gripe.
Determinantes antigénicos y de patogenicidad
La cápsula está constituida por un polisacárido, inmunógeno y antifagocitario del cual existen
diferentes serotipos; el polisacárido tipo b es el más frecuente en las cepas patógenas y es el
que se utiliza para fabricar vacunas.
La endotoxina: presente en la pared celular es similar a la de todas las bacterias
gramnegativas.
Acción patógena
Entre el 5 y el 10% de las personas sanas son portadoras de H. influenza en faringe y desde
allí puede producir los cuadros infecciosos. Entre las patologías que produce Haemophilus
influenzae se encuentran:
Meningitis: principalmente en menores de 5 años.
Neumonías: generalmente complicando cuadros virales.
Epiglotitis: es un cuadro grave que provoca asfixia.
Otitis y sinusitis: tanto agudas como crónicas.
Las cepas capsuladas, principalmente del tipo b son las causantes de meningitis y neumonía,
mientras que las otras infecciones son producidas por cepas no capsuladas.
Diagnóstico de laboratorio
Debido a que esta bacteria produce enfermedades muy graves, es imprescindible realizar un
diagnóstico etiológico con aislamiento, identificación y estudios de sensibilidad antibiótica del
germen.
El siguiente es el esquema diagnóstico para una infección por Haemophilus
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Muestras: LCR, secreción ótica, esputo, sangre, secreción sinusal, etc.
Coloración de Gram
Siembra en Agar sangre y Agar chocolate
Incubar 48 hs a 37ºC y 5% CO2
Coloración de Gram
Requerimiento de factores
Antibiograma
La siembra en agar sangre es para permitir el desarrollo de otras bacterias que puedan
producir la misma enfermedad mientras que el agar chocolate, por poseer factores hemáticos
debido a la sangre lisada por calor, permite el desarrollo de las especies de Haemophilus.
Para estudiar los requerimientos de factores, se siembra la cepa en estudio sobre la superficie
de una placa de agar Mueller-Hinton y se colocan 3 discos de papel impregnados con factores
V, X y V+X. Se incuba 24 hs a 37ºC y se observa alrededor de cuál disco desarrolló la bacteria
(ver figuras siguientes)
V
X
V
X
V
XV
XV
V
X
XV
XV
Requerimiento de:
Factor V
Factores X+V
Factor X
X
Ningún factor
En la tabla siguiente se muestran los requerimientos de factores de las principales especies de
Haemophilus
Especie
Requerimiento de
Factor V
Factor X
H. influenzae
+
+
H. ducreyi
+
-
H. parainfluenzae
-
+
Epidemiología y prevención
La bacteria se transmite de persona a persona por vía aérea a través de las gotitas de Pflügge,
ya sea desde personas enfermas o desde portadores nasofaríngeos. Las infecciones
generalmente no se manifiestan como brotes sino como casos aislados.
Evitar el hacinamiento y realizar el aislamiento respiratorio del paciente enfermo son medidas
profilácticas útiles para prevenir la diseminación de la bacteria, pero la forma más efectiva de
prevenir las enfermedades invasivas por H. influenzae como meningitis y neumonías es la
aplicación de la vacuna con polisacárido capsular tipo b que es la cuádruple bacteriana
(D.P.T.Hib).
El plan de vacunación contra H. influenzae es el siguiente:
1era. dosis: 2 meses
2da. dosis: 4 meses
3ra. dosis: 6 meses
1er. refuerzo: 18 meses
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Género Bordetella
El nombre del género proviene del microbiólogo
francés Bordet. Las principales especies son B.
pertussis, B. parapertussis y B. bronchiseptica
Son cocobacilos gramnegativos, aerobios estrictos,
parásitos intracelulares que requieren de medios
enriquecidos para desarrollar.
Bordetella pertussis
El nombre de la especie significa productora de tos
y se debe a que es el agente causal de la tos
convulsa, tos ferina o coqueluche.
Determinantes antigénicos y factores de patogenicidad
Antígeno O: es el lipopolisacárido somático presente en todas las bacterias gramnegativas.
Antígeno K: polisacárido capsular que evita la destrucción de la bacteria por los macrófagos.
Citotoxina traqueal proteica: paraliza los cilios de las vías aéreas y produce muerte celular.
Hemaglutinina: permite la adherencia a las células epiteliales respiratorias.
Endotoxina: presente en la pared celular.
Factor histamín-sensibilizante: produce hipoglucemia y aumenta los efectos de la histamina y
serotonina con reacciones del tipo alérgico en vías aéreas.
Factor de proliferación de linfocitos
Patología
El hombre es el único huésped de B. pertussis, B. parapertussis puede infectar ovejas y B.
bronchiseptica infecta a animales y raramente produce infección en el hombre
La enfermedad denominada tos convulsa, tos ferina o coqueluche se presenta en tres períodos
y es más frecuente en la primera infancia:
Período catarral: contagioso
Período de estado: contagioso
Período de convalecencia: no contagioso
Diagnóstico de laboratorio
Aunque el diagnóstico de la tos convulsa es principalmente clínico, existen casos atípicos,
principalmente en pacientes inmunocomprometidos o en aquellos que han recibido alguna
dosis vacunal, los cuales requieren del diagnóstico de laboratorio.
Esta bacteria es de crecimiento lento y muy exigente en cuanto a sus requerimientos
nutricionales por lo que es infrecuente que se solicite el cultivo de una muestra para
diagnosticar esta enfermedad.
El siguiente esquema muestra los pasos del diagnóstico bacteriológico
Muestras: Hisopado nasofaríngeo o placa de tos
Coloración de Gram
Siembra en Agar Bordet-Gengou
Incubar 4 días a 37ºC
Coloración de Gram
Pruebas bioquímicas y serología directa
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El agar Bordet-Gengou es un medio que contiene agar, papa y glicerina con el agregado de
sangre desfibrinada y antibióticos lo cual lo hace un medio enriquecido y selectivo.
La confirmación del género puede realizarse mediante aglutinación de las bacterias que
desarrollaron enfrentándolas con sueros específicos (identificación serológica)
El diagnóstico serológico puede realizarse detectando anticuerpos IgG e IgA antitoxina
pertussis y anti hemaglutinina mediante la técnica de ELISA
Los anticuerpos vacunales no interfieren en el diagnóstico debido a que son del tipo IgG e IgM
pero dirigidos contra antígenos fimbriales y proteínas de membrana externa.
Epidemiología y profilaxis
La bacteria se transmite de persona a persona por vía aérea y la incidencia de la enfermedad
disminuyó significativamente con la vacunación.
Para la prevención se utilizan:
o Células bacterianas completas o vacuna celular (P) formando parte de la vacuna quíntuple
(D.P.T.Hib.HB) y de las vacunas triple bacteriana (DPT) y cuádruple bacteriana (D.P.T.Hib)
o Fracciones antigénicas denominada vacuna acelular (Pa) formando parte de la vacuna
triple bacteriana acelular (DTPa)
El plan de vacunación es el siguiente:
1ª dosis D.P.T.Hib.HB: 2 meses
2ª dosis D.P.T.Hib.HB: 4 meses
3ª dosis D.P.T.Hib.HB: 6 meses
1º. Refuerzo D.P.T.Hib: 18 meses
2º Refuerzo DPT: 6 años (ingreso escolar)
3º Refuerzo DTPa: 11 años
No debe aplicarse la vacuna anticoqueluche celular en mayores de 6 años debido a la posible
aparición de efectos adversos.
Género Brucella
El nombre del género se refiere al microbiólogo
Bruce. Se conocen varias especies cuyos nombres
derivan del animal que se comporta como reservorio
principal B. melitensis (cabras), B. canis (perros), B.
suis (cerdos), B. ovis (ovejas) y de la patología que
produce en el ganado vacuno en el caso de B.
abortus.
Son cocobacilos gramnegativos, aerobios estrictos y
parásitos intracelulares. Su reservorio en la
naturaleza son principalmente los animales
domésticos de diferentes especies.
Determinantes antigénicos y factores de patogenicidad
Antígeno O: es el lipopolisacárido somático específico de género
Endotoxina: está presente en la pared celular
Multiplicación en macrófago: permite la diseminación linfohemática y permanencia en el
sistema retículoendotelial.
Patología
Brucella es el agente etiológico de la brucelosis animal (entre los cuales se considera una
enfermedad de transmisión sexual) y de la brucelosis humana (zoonosis).
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Los signos más típicos son la fiebre ondulante y los dolores articulares. Puede manifestarse en
forma aguda y cronificarse y despierta una gran respuesta de anticuerpos específicos.
Epidemiología y profilaxis
La brucelosis es una típica zoonosis donde el hombre es sólo un huésped accidental. Los
reservorios son principalmente el ganado caprino, ovino, porcino y vacuno en los cuales se
transmite por vía sexual y produce abortos.
En nuestro país existen dos grandes áreas endémicas de brucelosis, la zona litoral (Chaco,
Corrientes, Santa Fé y Buenos Aires) donde predomina B. abortus y la zona Centro-Oeste
(Córdoba, Mendoza, San Luis) donde predomina B. melitensis.
En el hombre la bacteria ingresa por vía respiratoria, oral a través de los alimentos
(principalmente lácteos), o cutánea por inoculación accidental y no se transmite directamente
de hombre a hombre
Las medidas profilácticas consisten en la vacunación de los animales, evitar el contacto con
restos de placenta o mortinatos animales, aplicación de medidas de bioseguridad entre
operarios del campo, mataderos y personal veterinario y control estricto de los alimentos de
origen animal, principalmente mediante pasteurización de la leche.
Diagnóstico de laboratorio
La gran variabilidad en las manifestaciones clínicas de la brucelosis, hace indispensable un
diagnóstico mediante el aislamiento de la bacteria y pruebas serológicas.
El siguiente procedimiento resume los pasos diagnósticos.
Muestras: Sangre, LCR, Médula Ósea, Abscesos
Coloración de Gram
Siembra en Medio Bifásico de Castañeda
Incubar 7 a 30 días a 37ºC y 5% CO2
Coloración de Gram
Pruebas bioquímicas
El hemocultivo es la técnica más recomendada en la etapa aguda mientras que las otras
muestras son más útiles en las etapas crónicas de la enfermedad.
El Medio de Castañeda es un medio bifásico (contiene agar y caldo) que permite una mejor
visualización de las colonias.
Para detectar anticuerpos anti-Brucella las pruebas más utilizadas son la reacción de
Huddleson y de Rosa de Bengala (Aglutinación directa en placa) o la reacción de Wright
(aglutinación directa en tubos). Una prueba positiva no discrimina la especie responsable. Se
consideran positivos títulos > 1:80 (en zona no endémica) y títulos > 1:160 (en zona endémica),
o un aumento de 4 títulos en el lapso de 10 días.
En las brucelosis crónicas las pruebas serológicas pueden dar resultados negativos debido a la
presencia de anticuerpos incompletos no aglutinantes por lo que debe realizarse la
reacción de Coombs anti-Brucella que consiste en adicionar inmunoglobulinas anti-IgG
humana a la prueba de aglutinación en tubo, las que actúan formando puentes entre los
anticuerpos presentes y permiten que se forme la red de aglutinación.