“LA UNICA HERRAMIENTA QUE ESTANDARIZA LOS BANCOS DE

“LA UNICA HERRAMIENTA QUE
ESTANDARIZA LOS BANCOS
DE SANGRE : CALIDAD”
ALDREDO MARTINEZ
LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS
CEMIC
“ La única fuente de obtención de sangre es el ser
humano, por lo cual la misma debe emplearse en
condiciones de equidad, raciocinio e igualdad, de este
modo la disponibilidad de la misma y sus componentes
se transforman en una problemática de orden público e
interés nacional dada su calidad de irreemplazable y
necesaria”.
Marcos Andrés Bujas; “Revista Argentina de
Transfusión”, prologo de la editorial
“Guias Nacionales para el uso apropiado de
sangre y sus hemocomponentes”
Volumen XXXIII/ Nº 3,4/ 2007, Pag. 193
UN HIJO LE ESCRIBE A SU MADRE:
“MAMÁ AYUDAME A SABER QUE PASA CON
ESTE AMIGO QUE NO ALCANZO A ENTENDERLO,
PORQUE SE DIVORCIÓ DE SU MUJER SE
ENAMORÓ DE LA HERMANA DE SU CUÑADA
QUE ES MADRE DE SUS SOBRINOS, NIETOS
DE SU EX SUEGRO”
LA MADRE LE CONTESTA A SU HIJO:
“NO SE SI PUEDO AYUDARTE HIJO MIO, PORQUE
TAMBIEN YO TENGO ALGUNAS INCOGNITAS, YO SE
QUE ERES MI HIJO, PERO YO ESTUVE ENAMORADA
DE TU PADRE, QUE FUE MI CUÑADO, AUNQUE NO
ERA EL TIO DE TUS PRIMOS PERO SI EL HIJO DE
TU ABUELO Y EL HERMANO DE MI CUÑADA”
NO ENTENDER!!
RESULTADOS
QUE DEBEMOS HACER?
EN EL BANCO DE SANGRE EXISTEN
MÉTODOS:
-CUANTITATIVOS
- CUALITATIVOS
Métodos Cualitativos : Definición
METODOS CUALITATIVOS
RESPUESTA BINARIA:
SI - NO
PRESENCIA - AUSENCIA
POR ARRIBA DE UNA DETERMINADO NIVEL
(CONCENTRACIÓN)a
EXISTEN GUÍAS CLARAMENTE DEFINIDAS PARA
LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS CUANTITATIVOS.
NO EXISTEN LINEAMIENTOS CLAROS PARA LOS
MÉTODOS CUALITATIVOS .
LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO QUE
CARACTERIZAN A LOS MÉTODOS CUALITATIVOS Y
CUANTITATIVOS SON DISTINTOS.
VALIDACION
VERIFICACION
Validación. Definición
VALIDACION ES LA CONFIRMACIÓN MEDIANTE EL EXAMEN
Y LA PROVISIÓN DE UNA EVIDENCIA OBJETIVA DE QUE SE
HAN SATISFECHO UNOS REQUISITOS PARTICULARES
PARA UN USO PRETENDIDO Y ESPECIFICO
Verificación. Definición
“Verificar las especificaciones provistas por el
fabricante y asumimos que el ensayo puede
ser incorporado al laboratorio”
DEFINICION DE VALIDACION SEGUN LA NORMA ISO 8402
LAS PREGUNTAS A CONSIDERAR SON:
-CUMPLE ESE ENSAYO CON NUESTROS REQUERIMIENTOS
DE CALIDAD?
-DE ACUERDO A LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO
VOLCADOS POR EL FABRICANTE EN SUS INSERTOS (QUE
SE TRANSFORMARAN EN NUESTRAS ESPECIFICACIONES
A VERIFICAR),¿PODEMOS DECIR QUE EN FORMA TEÓRICA
EL ENSAYO CUMPLE CON NUESTROS REQUERIMIENTOS
DE CALIDAD
- ¿CÓMO PODEMOS ASEGURAR ESTO?
FABRICANTE
VERIFICACION
VALIDACION
PARAMETROS DE
DESEMPEÑO
BIAS, CV, RANGO
REPORTABLE
SE INCORPORA AL
BANCO DE SANGRE
“Los métodos cualitativos o semi-cualitativos
se suelen emplear como métodos de
screening”
Separan o discriminan muestras de un grupo más grande.
-Uno o más analitos por encima o por debajo de un valor
preestablecido.
- Este valor preestablecido puede haber sido establecido de
distintas formas:
1) Organismo oficial
2) Control de Calidad Interno
3) Requerimientos del Cliente
VALOR DE CORTE
CUT OFF
Como pueden Verificarse los parámetros
de un ENSAYO
ESTÁNDAR INTERNACIONAL
PANELES DE SEROCONVERSIÓN
MUESTRAS CLINICAS
REQUERIMIENTOS MINIMOS PARA
LA VALIDACION Y/O VERIFICACION
DE UNA PRUEBA
Parámetros de Desempeño:
-Veracidad:
“Se define como el grado de acuerdo entre
una cantidad medida o calculada y a su valor
estimado (mejor estimación del valor
verdadero), mediante análisis de materiales
de referencia o comparación de resultados
con los obtenidos por un método de
Referencia.”
Precisión
LA PRECISIÓN ES CUAN CERCA LOS VALORES
MEDIDOS ESTÁN UNOS DE OTROS.
Precisión en condiciones de repetibilidad (Sr, SDr)
- El mismo procedimiento de medida
- El mismo laboratorio
- El mismo operador
- El mismo equipo
- Repeticiones en un intervalo corto de tiempo
“Es lo que comúnmente denominamos precisión
intra corrida o intra serie”
VALOR DE CORTE : “CUT Off”
“ES EL UMBRAL ESTABLECIDO POR EL
FABRICANTE POR ENCIMA DEL CUAL EL TEST
ES POSITIVO Y POR DEBAJO DEL CUAL EL TEST
ES NEGATIVO “
CUT OFF : 50%(+)- 50% (-)
C50
VALOR DE CORTE “CUT OFF”
RESPUESTA
NEGATIVA
IDEAL
RESPUESTA
POSITIVA
C= 0,02
CONCENTRACION
REAL
ZONA DE
VERDADEROS
NEGATIVOS
ZONA DE FALSOS
POSITIVOS
ZONA DE FALSOS
NEGATIVOS
C= 0,02
ZONA DE
VERDADEROS
POSITIVOS
CONCENTRACION
CURVA DE IMPRESICION
CONCENTRACIONES DEL ANALITO CERCANO
AL CUT OFF
INTERVALO 95 %
INTERVALO C5-C95
INTERVALO 95% (C5-C95)
C5
5%(+)
95%(-)
CUT OFF- (C5-C95)
50%(+)
50%(-)
C95
95%(+)
5%(-)
VERIFICACION DE PARAMETROS
DE ENSAYOS
CON MUESTRAS CLINICAS
1- Preparar tres tipos de muestras una con la
Concentración del cut off C50 y las otras dos con
un rango de concentraciones 20% por arriba del
cut off y 20% por debajo de manera de poder hacer
40 replicados sobre la misma muestra
2-Las muestras deben testearse 40 veces o más por
duplicado y determinar el porcentaje de resultados
positivos y negativos
ES EL C50 PREPARADO EL CORRECTO ?
REPLICADOS C50 REPLICADOS (+)
N=40
13
32.5
27
67.5
C50
REPLICADOS
C50 n=40
% (+)
18 A 22 (+)
C50
INCONSISTENTE
45 % A 55%
CONSISTENTE
EL RANGO DE CONCENTRACION +20% -20%
CONTIENE EL INTERVALO C5-C95 ?
1- SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL
RANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOS
ESTAN DENTRO DEL RANGO -20%. EL RANGO +20% -20%
ESTA DENTRO DEL INTERVALO C5-C95
2- SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL
RANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOS
ESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%
CONTIENE EL INTERVALO C5-C95
3- SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL
RANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOS
ESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%
ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C5-C95
4- SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DEL
RANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOS
ESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%
ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C5-C95
Falso Positivo (FP)
“Muestras (+) por el “test de screening” y (-) por
el método de referencia”
Falso Negativo (FN)
“Muestras (-) por el “test de screening” y (+) por
el método de referencia”
Tasa de Falsos Positivos
“Probabilidad de que una muestra con valor
verdadero negativo de un valor positivo por el
test de screening”
FP
TASA DE FP =
FP + TN
FP: Falso Positivo
FN: Falso Negativo
TP: Positivo Verdadero
TN: Negativo Verdadero
Tasa de Falsos Negativos
“Probabilidad de que una muestra con valor verdadero
positivo de un valor negativo por el test de screening”
FN
TASA DE FALSON NEGATIVOS =
FN + TP
TABLA DE CONTINGENCIA
Método X
Diagnóstico Clínico
Positivo
Negativo
Total
Positivo
A
B
A+B
Negativo
C
D
C+D
Total
A+C
B+D
N
S= 100% (A/A+C)
PVP= 100%{A/(A+B)}
E=100% (D/B+D)
PVN= 100%{D/(C+D)}
EE= 100%{(A+D)/N}
CONTROL CALIDAD EN
HERRAMIENTAS
MOLECULARES
FLUJO DE TRABAJO EN EL USO DE
HERRAMIENTAS MOLECULARES
Pre
analítico
Toma de muestra
Extracción ADN/ ARN
Almacenamiento
Analítico
Preparación reacción PCR
Amplificación
Detección
Post
analítico
Informe del resultado
Interpretación
DESAFÍOS DEL CONTROL
CALIDAD EN MÉTODOS
MOLECULARES
• Nuevas tecnologías y de rápida evolución
• Altas expectativas de precisión en pruebas
génicas
• Falta de materiales de control de calidad y
de calibradores estandarizados
• Posible contaminación de muestras,
equipos y aerosoles
• Presencia de inhibidores de amplificación
• etc.
Basic QC Practice ,3er edicion. Westgard
INCORPORACIÓN DE NUEVO ENSAYO MOLECULAR
¿POR DONDE EMPIEZO?
• Revisar bibliografía disponible
• Establecer la población a la que se le
realizara la prueba
• Seleccionar metodología apropiada para la
enfermedad o condición a evaluar
• Establecer las especificaciones analíticas y
determinar el procedimiento de control de
calidad
• Implicancias del ensayo y limitaciones
Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and Conditions
CDC. MMWR June 12, 2009
INCORPORACIÓN NUEVO
ENSAYO MOLECULAR
• Validación/ Verificación analítica
• Validación clínica
CONTROL DE CALIDAD :DISEÑADO PARA
CONTROLAR …
Integridad de la
muestra (DNA, RNA)
Preparación de la
muestra, amplificación,
detección.
Calibradores y controles
Documentación,
Documentación,
interpretación e informe
interpretación e informe
ETAPA PRE ANALÍTICA
SOLICITUD DEL TEST- TIPO Y TOMA DE MUESTRA-TRANSPORTE
• PLANILLAS: INFORMACIÓN PACIENTE O
CONSENTIMIENTO PARA TEST GENÉTICOS
• TOMA DE MUESTRA: TUBOS, MEDIOS DE
TRANSPORTE, HISOPO . ALMACENAMIENTO
HASTA EL PROCESADO (SEPARACIÓN DE
PLASMA)
• TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE LA
MUESTRA: TEMPERATURA Y CONDICIONES
• PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: TEMPERATURA
Y VELOCIDAD DE CENTRIFUGADO
Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and Conditions
CDC. MMWR June 12, 2009
ETAPA ANALÍTICA
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS- EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS
NUCLEICOS, PREPARACIÓN Y EVALUACIÓN;- REACCIÓN ENZIMÁTICA
O AMPLIFICACIÓN - DETECCIÓN DE ANALITOS - REGISTRO DE
RESULTADOS
• CONTROL AMPLIFICACIÓN: CONTROL POSITIVO,
NEGATIVO Y CUANTIFICADOS (DOS
CONCENTRACIONES) PARA TEST CUANTITATIVOS
• CONTROL DE EXTRACCIÓN ÁCIDOS NUCLEICOS
• CONTROL DE INHIBICIÓN: CONTROL INTERNO
• CONTROL DE CONTAMINACIÓN O DE REACTIVOS
• CONTROL DE INSTRUMENTAL
Eileen Burd. Clin Microbiol Rev.23 (3)550-576 .2010
FALSOS NEGATIVOS/
POSITIVOS
FALSOS NEGATIVO
• TOMA DE MUESTRA Y/O CONSERVACIÓN INADECUADA
• FALLA EN LA EXTRACCIÓN / AMPLIFICACIÓN : CONTROL
INTERNO
• PROBLEMAS TÉCNICOS: REACTIVOS O INSTRUMENTOS
FALSOS POSITIVO
CONTAMINACIÓN: CONTROL BLANCO DE REACTIVOS
Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and Conditions
CDC. MMWR June 12, 2009
ETAPA ANALÍTICA
FLUJO UNIDIRECCIONAL DE MUESTRAS, REACTIVOS
Y PERSONAL
Objetivo: minimizar la contaminación de reactivos y de las muestras
ETAPA ANALÍTICA
• FLUJO UNIDIRECCIONAL DE MUESTRAS,
REACTIVOS Y PERSONAL
Etapa analítica
A
M
P
L
I
C
O
N
E
S
ETAPA POST ANALÍTICA
• INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO
• INFORME DE RESULTADOS
• TIEMPO DE ENTREGA DEL
RESULTADO
• REGISTRO DE RESULTADOS
CRÍTICOS
• NUEVAS MUTACIONES DETECTADAS
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
DEFINICIÓN ISO
SISTEMA QUE CONTROLA OBJETIVAMENTE
LOS RESULTADOS DE LABORATORIO POR
MEDIO DE UNA AGENCIA EXTERNA,
INCLUYENDO LA COMPARACIÓN DE LOS
RESULTADOS DEL LABORATORIO A
INTERVALOS CON LOS DE OTROS
LABORATORIOS, SIENDO SU MAYOR
OBJETIVO EL ESTABLECIMIENTO DE LA
VERACIDAD
UN CONTROL DE CALIDAD EXTERNO…
•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE
•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE LA METODOLOGÍA
•HERRAMIENTA DE EDUCACIÓN CONTINUA
•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO ANALÍTICO Y SU
RELACIÓN CON LA CLÍNICA
•SOPORTE PARA EL CONTROL DE CALIDAD INTERNO
• VALIDACIÓN DE RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
TIPOS
TIPO 1
– DISEÑADO PARA INFORMAR A TERCEROS EL DESEMPEÑO DE
LABORATORIOS : AUTORIDADES, ORGANISMOS DE
ACREDITACIÓN, SEGURIDAD SOCIAL, ETC.
TIPO 2
– DISEÑADO PARA REPORTAR DESEMPEÑO ANALÍTICO A LOS
PARTICIPANTES
TIPO 3
– DISEÑADO PARA RESPALDAR SOLUCIONES DE PROBLEMAS
EN LOS LABORATORIOS.
TIPO 4
– DISEÑADOS PARA EVALUAR MÉTODOS DE MEDICIÓN Y
APARATOS IVDS
DIAPOSITIVA Dra. Silvia Quiroga
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
OBJETIVOS
• ESTIMULAR LA FILOSOFÍA Y PRÁCTICA DEL CONTROL
DE CALIDAD
• RESPALDAR LA CONFIABILIDAD DE LOS RESULTADOS
DE LOS LABORATORIOS CON UNA EVALUACIÓN
INDEPENDIENTE
• MEJORAR EL CONSENSO ENTRE LABORATORIOS
CONTROLAR METODOLOGÍAS Y EQUIPOS DISPONIBLES
COLABORAR EN LOS PROCESOS DE ACREDITACIÓN /
CERTIFICACIÓN DE LOS LABORATORIOS
• VALIDAR LOS RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN
OBJETIVOS DE CONTROL DE CALIDAD
EXTERNO PARA ENSAYOS DE BANCO DE
SANGRE
DESEMPEÑO
DEL PARTICIPANTE
CONTROL DEL DESEMPEÑO
DESEMPEÑO
DEL MÉTODO
HERRAMIENTAS
MUESTRAS ADECUADAS ?
DISEÑO DEL ESQUEMA
EVALUACIÓN APROPIADA
SEGUIMIENTO
COMUNICACIÓN CON
LOS PARTICIPANTES
EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE
UN MÉTODO
• INCLUYE REACTIVOS, CALIBRADOR
Y EQUIPO
• ASPECTOS: TRAZABILIDAD,
ESPECIFICIDAD, RANGO DINAMICO,
LÍMITE DE DETECCIÓN, LIMITE DE
CUANTIFICACIÓN
INTERFERENCIAS, PRECISIÓN
CONTROL DE CALIDAD DEBE CREAR
GRUPOS HOMOGÉNEOS DE USUARIOS
DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE
• DESEMPEÑO DE LOS LABORATORIOS
PARTICIPANTES
• VARIACIÓN INTRA LABORATORIO
• VARIACIÓN INTER LABORATORIO
• RELACIONES ENTRE PROCEDIMIENTOS DE
RESULTADOS ANALÍTICOS Y:
– procedimientos analíticos adecuados
– reactivos comerciales
– instrumentos analíticos
– constituyentes del material de control de
calidad
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
EDUCATIVO
EL ORGANIZADOR
EL OBJETIVO DEL CC DEBE SER DELINEADO ANTES DE
COMENZAR LA RONDA Y PREPARAR LAS MUESTRAS
LAS MUESTRAS DEBEN DAR INFORMACIÓN CORRECTA Y
SER APROPIADAS PARA EL OBJETIVO
LOS ORGANIZADORES DEL CC DEBEN BUSCAR EL
ORIGEN DE RESULTADOS ABERRANTES Y ENCONTRAR EL
REMEDIO APROPIADO
OBJETIVOS DEL PROGRAMA
DE CC
MONITOREO DE LOS PARTICIPANTES, SIN ESPECIFICAR
LA CALIDAD ESPERADA
COMPARACIÓN ENTRE LOS DISTINTOS GRUPOS
COMPARACIÓN ENTRE DISTINTOS MÉTODOS
EVALUACIÓN DE FACTORES DE CALIDAD
CUALES SON LAS DESVENTAJAS
PARA REALIZAR UN CCE
1- LAS MUESTRAS A EVALUAR DEBEN PREPARASE CON UN
ESTANDAR INTERNACIONAL
2- DISTINTOS TIPOS DE HERRAMIENTAS MOLECULARES
3- DNA ES MAS ACCESIBLE QUE RNA
4- NO EXISTEN MÉTODOS DE REFERENCIA
“ DONAR SANGRE NO ES
DOLOROSO, NECESITARLA Y NO
TENERLA SÍ ”
GRACIAS…