Diapositiva 1

Cultivo Puro
Técnicas de aislamiento
Mantenimiento y preservación de cultivos puros
Morfología macroscópica
Morfología microscópica
Definición
 El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el
desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las
condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo
del laboratorio.
 Para determinar las características de especies concretas de
microorganismos, es imperativo que el organismo se aislé y se
desarrollo en el laboratorio como un cultivo libre de otras
especies.
Método para aislar cultivos puros.
 Técnica de siembra por estrías en placa
 Técnica por difusión en placa
Técnicas de
aislamiento
 Técnica de la placa vertida
 Técnica del enriquecimiento del cultivo
 Técnica de las diluciones en serie
 Aislamiento de una sola bacteria
Técnicas de siembra por estrías en placa
 Con un asa bacteriológica, se pasa una porción de la muestra a
la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se
siembra en el medio por estrías en cuadrantes.
Técnicas de siembra por difusión en placa
 Para sembrar por difusión en placa, por lo común se usa una
varilla de cristal estéril para esparcir la muestra.
 Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal manera
que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas
unas de otras.
Técnicas de siembra en placa
 Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo
viene a ser un cultivo puro.
 Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada cultivo se
observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.
Técnicas de siembra en placa
 Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo
viene a ser un cultivo puro.
 Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada cultivo se
observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.
Técnica de la placa vertida
 El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución
(adelgazamiento) de la muestra en tubos.
 El medio se mantiene al estado líquido a una temperatura
de
45 – 52º C para permitir que el inóculo se distribuya
adecuadamente en el medio.
 Esta técnica se hace en forma cualitativa o cuantitativa.
Técnica de la placa vertida
Técnica del enriquecimiento del cultivo.
 El principio de esta técnica, es procurar un ambiente de cultivo
diseñado (medio de composición conocida y condiciones
específicas de incubación) que pueda favorecer el desarrollo de
cierto tipo concreto de bacterias que necesitemos pero que no
sea adecuado para las demás
Técnica del enriquecimiento del cultivo.
 Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el
tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy
pequeñas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que
muchas de las otras especies presentes en el inóculo.
Técnica del enriquecimiento del cultivo.
Técnica de las diluciones en serie.
 Se realiza mediante diluciones seriadas.
 Se basa en cuando la muestra esté muy diluida
contendrá solamente la bacteria que buscamos.
 O dependiendo de la dilución realizada se aislara el
microorganismo adecuado.
Técnica de las diluciones en serie.
Dilución
Tipo de microorganismo
10-1 a 10-3
Hongos
10-4 a 10-6
Levaduras
10-7 a 10-10
Bacterias
 Para el aislamiento de microorganismos se puede
aplicar la técnica de aislamiento por estría o por
extensión en superficie (se trasfiere de 0.1 a 0.5
ml.)
Técnica de aislamiento de una sola célula
Micromanipulador y microscopio
equipado con agujas que se
pueden poner sobre objetos de
unos cuantos micrómetros de
tamaño.
Métodos de preservación
 Resiembra periódica a medios frescos.
– Depende de el medio de cultivo
– Temperatura propia para mantener los cultivos
– El tiempo de resiembra.
 Preservación de cultivos con una capa de aceite mineral.
– Para cultivos en agar inclinado el aceite deberá cubrir mas o
menos 1.5 cm. Del pico de flauta del agar inclinado.
Métodos de preservación
 Almacenamiento a temperaturas muy bajas.
– Nitrógeno líquido (temperatura de -196º C).
– Las células se congelan con un agente protector (glicerol o dimetil
sulfoxido).
 Colecciones de cultivos en distintas naciones.
– Kral (Praga)
– ATCC (Rockville, Maryland EE.UU.)
– Instituto Pasteur (Paris, Francia)
– BTCC (Londres, Inglaterra)
– Instituto Nageo (Tokio, Japón)
Número de cultivos de varias colecciones del mundo
por regiones.
ALGAS
BACTERIAS
HONGOS
Protozoarios
LEVADURAS
África (11)
19
1 917
340
812
51
Asia (30)
468
14 589
11 748
30
5 117
Australia y Nueva Zelanda (39)
39
6 902
7 464
2
325
Europa Oriental y Rusia (38)
1 058
22 208
7 115
25
5 000
Europa Occidental (100)
3 926
76 084
29 284
345
15 551
12
8 168
1 803
1
2 573
8 502
85
7
107
106 524
52 327
87
10 202
REGIÓN (COLECCIONES)
América Latina (23)
Medio Oriente (13)
América del Norte (67)
232