CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE NUCLEOPOLYHEDROVIRUS DE SPODOPTERA FRUGIPERDA, AISLAMIENTO TUCUMÁN. Yasem de Romero Marta G. y Romero Eduardo R.. Càtedra de Fitopatologia y de Fisiologìa Vegetal. Facultad de Agronomía y Zootecnia- UNT E-MAIL: [email protected] Trabajo financiado por CIUNT RESUMEN Para el control del gusano cogollero del maíz Spodoptera frugiperda, plaga clave del maíz en el noroeste argentino (NOA), se utilizan insecticidas químicos que muestran, en muchas ocasiones, una baja efectividad. Los baculovirus constituyen una alternativa biológica para el manejo del gusano cogollero. El objetivo de este trabajo fue conocer las características morfológicas del aislamiento Tucumán de Nucleopolyhedrovirus de Spodoptera frugiperda (VPNSf) determinando el diámetro y volumen de sus cuerpos de inclusión, largo y ancho de los nucleocápsides y viriones, número de nucleocápsides/virión, densidad de partículas virales por unidad de volumen de CPI y cantidad de viriones/poliedro. Se caracterizó morfológicamente al VPNSf aislamiento Tucumán, el que presentó poliedros de perfil poli3 gonal irregular, con diámetros medios 1,883 x 1,699 µm y volumen medio igual a 3,252 µm . El largo promedio de los nucleocápsides fue de 157 nm (97 –220 nm, Mo 200 nm) y el ancho medio 30 nm (24 – 36 nm, Mo 36). El número de nucleocápsides en cada partícula viral fue variable, entre 2 y 8 en las muestras observadas, siendo 3 la media 4 y el modo 5. La densidad fue de 37,6 viriones/µm . El número de viriones/poliedro se estimó en 122 y la cantidad de nucleocápsides/poliedro en 582,7. No se encontraron antecedentes referidos al volumen del poliedro, densidad de viriones, cantidad de partículas virales y nucleocápsides/poliedro del Nucleopolyhedrovirus de S. frugiperda, por lo que estos resultados constituyen un aporte al conocimiento de este baculovirus. Además, es la primera caracterización morfológica del MVPNSf, aislamiento Tucumán. Palabras clave: poliedrosis – Spodoptera frugiperda - morfología ABSTRACT Chemical insecticides are used for Spodoptera frugiperda control, a key pest affecting corn crops in northwestern Argentina. These insecticides, however, show frequently low effectiveness. The baculovirus are a biological alternative for the control of the fall armyworm. The objective of this research was the study of morphological characteristics of Nucleopolyhedrovirus of S. frugiperda native strain To determine the characteristic of the inclusion bodies and virions in the Laboratory of Electronic Microscopy of the NOA (CONICET-UNT) pictures were obtained with the scanning and transmission electron microscope.The morphological characterization of the VPNSf, Tucumán isolate, indicated the presence of polyhedra showing irregular polygonal profiles with 3 average diameters of 1.883 x 1.699 µm and an average volume of 3.252 µm . The average nucleocapsids length was 157 nm (97 – 220 nm, Mo 200 nm), while the average width was 30 nm (24 – 36 nm, Mo 36). The nucleocapsids number content in the viral particle ranged between 2 and 8 in the samples analyzed in this study, with 3 an average of 4 and a mode of 5. The average density was determined at 37.6 virions/µm . Number of virions and nucleocapsids per polyhedra were estimated as 122 and 582.7, respectively. It was the first morphological characterization of the VPNSf, Tucumán isolate. Key words: polyhedrosis - Spodoptera frugiperda- morphology. INTRODUCCION La primera cita científica de una enfermedad en insectos causada por un virus de la poliedrosis nuclear fue, probablemente, la descripción de la ictericia del gusano de seda realizada en 1808 (Bilimoria, 1991). Años después, se hicieron estudios microscópicos y se observaron cuerpos cristalinos altamente refractivos en el núcleo de las células en los gusanos con ictericia. En 1913 se sugirió que la causa del “marchitamiento del gusano de seda” era viral y en 1918 se comprobó su etiología viral (Bilimoria, 1991). Inicialmente, los virus de insectos fueron clasificados teniendo en cuenta la morfología de los cuerpos de inclusión, viriones (partículas virales) y grupos de insectos atacados. Posteriormente, con los avances de los estudios bioquímicos, biofísicos y morfológicos fue posible reclasificar los virus de artrópodos colocándolos en siete familias y un grupo aparte (Alves, 1986). Entre ellas, Baculoviridae es una gran familia de virus con Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 533 cuerpos de inclusión (CI) que envuelven a los viriones y está compuesta actualmente por dos géneros: Nucleopolyhedrosis (VPN) y Granulovirus (VG). La mayoría de los baculovirus hasta el momento son VPN (Bilimoria, 1991).Éstos presentan un núcleo constituido por ADN envuelto por una estructura proteica denominada cápside. Este conjunto forma el nucleocápside, que es baciliforme, con un extremo plano y el otro en punta y que a su vez está envuelto por una doble membrana lipoproteica denominada envoltura. Ésta, con el nucleocápsde, forman el virión, que es considerado como la unidad infectiva del virus. Cuando en la matriz proteica (poliedro) se encuentra más de un nucleocápside por virión, éste es múltiple y pertenece al subgénero “multiple nucleocapsid virus group” (MVPN). Otros VPN poseen partículas virales que contienen solamente un nucleocápside por envoltura y pertenecen al subgénero “single nucleocapsid virus group” (SVPN). Algunos investigadores (Allaway & Payne, 1984, citado por Borges Maracaja et al., 1999) han sugerido que los baculovirus con nucleocápsides múltiples son menos específicos que los de nucleocápside simple, basándose en casos de VPN múltiple de amplio rango de hospedantes, como los de Anagrapha californica (Groner 1986, citado por Borges Maracaja et al., 1999), A. falcifera (Hostetter Putler, 1991) y Mamestra brassicae (Doyle et al., 1990). Sin embargo, los resultados obtenidos por Borges Maracajá et al.(1999) no apoyan la generalización de este concepto, ya que el más específico de los baculovirus estudiados por estos investigadores es el VPN de nucleocápsides múltiples de Spodoptera exigua, mientras que el de nucleocápside simple de Heliothis armigera mostró el mayor espectro de hospedantes. Los VPN tienen más de 100 viriones por cuerpo de inclusión (Kaya, 1999) y pueden llegar a 200 según el virus, el tejido y el hospedante (Borges Maracajá et al., 1999). En los virus de la poliedrosis nuclear múltiple (MVPN) el número de nucleocápsides que forman el virión varía ampliamente en cada virus y depende del virus y de la especie hospedante. Así, en una larva infectada de Cadra cautella el número osciló entre 1 y 24 y en una de Euproctis similis varió de 1 a 39 (Borges Maracaja et al.1999). Un MVPN de Agrotis segetum originario de Inglaterra tuvo un promedio de 4,0 nucleocápsides por partícula viral, con un rango entre 1 y 13; mientras que el mismo virus procedente de Polonia mostró una media de 3,9 nucleocápsides por partícula viral, con un rango entre 1 y 10. El MVPN de Mamestra brassicae presenta en promedio 2,4 nucleocápsides/partícula viral en un rango de 1 a 7 (Allaway, 1983). Allaway (1983). señaló valores típicos de 275 nm (largo) y 32,5 nm (ancho) para las dimensiones de los núcleocápsides, al no encontrar diferencias entre los baculovirus estudiados. Los tamaños de las partículas virales envueltas tienen un rango de 300 –330 nm de largo y 40-140 nm de ancho, dependiendo del número de nucleocápsides dentro de la envoltura. Las partículas virales envueltas solitarias miden típicamente 60-70 260-300 nm (Tinsley, 1979). Externamente, los cuerpos poliédricos de inclusión (CPI) de los VPN miden de 0,15 a 15 micrones de diámetro y están compuestos principalmente de una proteína simple denominada poliedrina, que corresponde a cerca del 95% del contenido proteico del CPI (Ribeiro et al., 1998). Se ha comprobado que los cuerpos de inclusión juegan un rol muy importante en la protección ambiental de las partículas virales, preservando su infectividad. Esto está indirectamente sustentado por el hecho de que los hospedantes de los virus ocluidos son casi exclusivamente los estados larvales de insectos holometábolos. Por lo tanto la disponibilidad discontinua de individuos susceptibles hace necesario períodos de supervivencia viral fuera del hospedero (Allaway, 1983). Los CPI son llamados poliedros debido a que la mayoría de los VPN manifiestan una forma poliédrica (triangular, cuboide, pentagonal, hexagonal) cuando son observados al microscopio (Adams & Wilcox, 1982). El término “poliedrosis” deriva de la observación de que el núcleo de las células infectadas está colmados de cuerpos poliédricos de inclusión (Bilimoria, 1991). Desde el punto de vista práctico, además de la protección que le confieren a los viriones, la presencia de los cuerpos de inclusión trae aparejada una ventaja ya que permiten ser visualizados en el microscopio óptico. El volumen medio de los poliedros del MVPN de Agrotis segetum originario de Inglaterra, que contienen 3 en promedio 674 nucleocápsides por poliedro, fue de 9,71 µm , resultando significativamente más grande que 3 el MVPNAs originario de Polonia, cuyo volumen fue de 2,82 µm . El MNPV de Mamestra brassicae fue esti3 mado en 2,60 µm (Allaway, 1983). Siguiendo el protocolo (Allaway, 1983), el volumen medio del CPI del Heliothis armigera (= Helicover3 pa armigera) VPN fue 1,29 ± 0,09 µm y el número de viriones por poliedro resultó 113 ± 7,4 (Sudhakar & Mathavan, 1999). Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 534 Estudiando MVPN de A. segetum y MVPN de M. brassicae determinaron similares concentraciones de 3 partículas virales, con rango de 17,3 a 19,6 viriones/µm mientras que el número de partículas virales/CPI fue de 168 a 47, respectivamente. El número medio de nucleocápsides/CPI de MVPNAs originario de Inglaterra fue de 673 y en el procedente de Polonia, fue de 215. En el MVPNMb se cuantificaron 100 nucleocápsides/CPI El gusano cogollero Spodoptera frugiperda (Smith, 1797) (Lep.: Noctuidae) es la plaga clave del maíz en el noroeste argentino. Para su control se utilizan insecticidas químicos que muestran, en muchas ocasiones, una baja efectividad. Los baculovirus constituyen una alternativa biológica para el manejo del gusano cogollero ya que es un hospedero natural de los baculovirus Nucleopolyhedrovirus (VPN) y Granulovirus (VG), como así también del virus iridiscente (VI) perteneciente a la Familia Iridoviridae (Moscardi, 1991; Vera et al., 1995). Esta última familia se presenta en varios de invertebrados y posee similitud con los virus de vertebrados, por lo que su exploración como agente de biocontrol está limitada, fundamentalmente, por problemas de seguridad. El cuerpo de inclusión del Virus de la Poliedrosis Nuclear de S. frugiperda (VPNSf) mide 1,65 µm, según Sudhakar & Mataban (1999). Por otra parte, se describió un VPNSf encontrado en Venezuela, con CPI de 4 ó 5 lados, diámetro no uniforme y una dimensión mayor que la otra. El tamaño osciló de 1,40 x 1,20 µm a 1,90 x 1,60 µm (promedio = 1,60 x 1,50 µm) (Agudelo et al., 1983). Valicente et al. (1989) describieron los poliedros de un VPNSf aislado en Brasil, de contorno poligonal, con 1 a 3 micrones de diámetro, con grupos de 2 a 6 partículas baciliformes, de aproximadamente 50 nm X 250 300 nm, envueltos por una membrana común, caracterizando este VPN como tipo “multiple enveloped”. Se realizó el examen al microscopio electrónico de secciones delgadas del poliedro de VPNSf aislado de larvas encontradas en Oliveros, Santa Fe. Con 30 mediciones independientes, el diámetro promedio del cuerpo de inclusión fue 2,12 0,46 µm y el número más frecuente de nucleocápsides/virión fue 4 (Sciocco de Cap et al., 1996). Por su parte, se determinó que los nucleocápsides de VPNSf miden aproximadamente 40 x 220 nm (Hamm & Styer, 1985). No se encontraron antecedentes del volumen del poliedro, densidad de viriones, cantidad de partículas virales y nucleocápsides/poliedro del Nucleopolyhedrovirus de S frugiperda. Además, del aislamiento tucumano, no habían sido estudiadas, entre otros aspectos, sus características morfológicas. La importancia de los estudios morfológicos referidos al Nucleopolyhedrovirus de S. frugiperda, aislamiento Tucumán, radica, además de constituir un aporte a su conocimiento, en la probable relación entre la morfología de los baculovirus y su especificidad y virulencia (Allaway,1983; Borges Maracajá et al., 2000). También en que posibles variaciones de la morfología se producen después de sucesivas multiplicaciones, lo que incidiría en su efectividad como biocontrolador. Los aportes realizados en este trabajo sirven de base para futuras evaluaciones comparativas. El objetivo de este trabajo fue conocer las características morfológicas del aislamiento Tucumán de Nucleopolyhedrovirus de Spodoptera frugiperda (VPNSf) determinando el diámetro y volumen de sus cuerpos de inclusión, largo y ancho de los nucleocápsides y viriones, número de nucleocápsides/virión, densidad de partículas virales por unidad de volumen de CPI y cantidad de viriones/poliedro. MATERIALES Y MÉTODOS 1. Técnicas empleadas para la preparación y realización de fotografías 1.a. Microscopio óptico Para lograr mayor contraste de los cuerpos poliédricos de inclusión, a partir de una suspensión viral purificada se realizó la tinción de Giemsa (Poinar & Thomas, 1982). Se tomaron fotografías de los cuerpos de inclusión del virus de la poliedrosis nuclear de S. frugiperda, aislamiento Tucumán, en microscopio óptico Olympus BX 40, en la Cátedra de Fitopatología, FAZ – UNT. 1.b. Microscopio electrónico Las fotografías que permitieron conocer la estructura externa e interna del virus estudiado fueron efectuadas en el Laboratorio de Microscopía Electrónica del NOA (CONICET - UNT) con Microscopio electrónico de barrido JEOL JSM 35 CF y Microscopio electrónico de transmisión Zeiss EM 109. Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 535 2. Determinaciones, procesamiento y análisis de la información 2. a. Microscopio electrónico de barrido. En base a 13 fotografías efectuadas con el microscopio electrónico de barrido, las que en total incluyeron 120 poliedros, se evaluaron las características morfológicas de los cuerpos de inclusión del VPNSf, aislamiento Tucumán. En las mismas se realizaron mediciones del diámetro mayor, menor y medio de los poliedros, sobre la base de dos determinaciones perpendiculares entre sí y el promedio de ambas. Con los datos de las muestras se efectuaron análisis estadísticos destinados a conocer el tipo de distribución de las variables evaluadas. Una vez confirmada su distribución normal, se procedió mediante análisis de la varianza (ANVA) para un modelo totalmente aleatorizado, a evaluar la homogeneidad de los valores del diámetro mayor, menor y medio entre las distintas fotos de origen y asimismo a estimar la potencial diferencia entre el diámetro mayor y menor de los poliedros. Para la comparación de medias se empleó el test de Tukey al 5% de probabilidad. También se utilizó para evaluar la diferencia entre el diámetro mayor y menor del poliedro, la prueba “t” para muestras grandes, de igual número de casos y con varianzas homogéneas. A partir de estas medidas básicas, se calculó el radio y el volumen de cada poliedro, considerándolos esféricos. Posteriormente se efectuaron análisis de estadística descriptiva para las variables disponibles. Para el cálculo del volumen medio (V ) de la población de cuerpos de inclusión del VPNSf, aislamiento m Tucumán, se aplicó la siguiente fórmula (Allaway, 1983): 3 2 V = 4 / 3 π (r + 3 r σ r) m m m La varianza del volumen y el error estándar del volumen medio se calcularon mediante las siguientes fór2 2 4 2 mulas: σ v = 16 π r σ r y σ v = σ v / v n , donde m m 2 2 V : volumen medio, r : media del radio, σ r : varianza del radio, σ v : varianza del volumen, σ v error m m m: estándar del volumen medio, n: número de mediciones 2.b. Microscopio electrónico de transmisión Sobre las secciones de los cuerpos de inclusión disponibles en 7 fotografías realizadas con el microscopio electrónico de transmisión, se realizaron 16 mediciones del diámetro mayor y menor (dos determinaciones perpendiculares entre sí), del área de la sección del poliedro y 16 recuentos del número de viriones presentes por sección. Además, se efectuaron 28 determinaciones del largo y 36 del diámetro de los viriones, y 30 recuentos del número de nucleocápsides por virión y el largo de los nucleocápsides. Para seleccionar un método adecuado de medición del área de cada sección de los poliedros fotografiados, se trabajó sobre 7 fotografías en las que se efectuó la determinación patrón de dos formas: por medio de un planímetro mecánico, modelo R. & A. Rost, Wien XV y por el método de la cuadrícula (mediante el “scanneo” de la imagen ampliada de la fotografía, superponiéndola sobre una grilla con cuadrículas de superficie conocida). Esta información fue comparada con un método simple de estimación del área que consistió en asumir que cada 2 sección presentaba un área circular calculable mediante la fórmula: A (área Sección) = π r , estimando el radio a partir del promedio de los diámetros perpendiculares disponibles de cada sección. Al obtener un elevado ajuste entre los procedimientos patrones y esta alternativa, este método fue el utilizado para las determinaciones del área de sección del poliedro y fue la base para el cálculo volumétrico. La estimación de la densidad de partículas virales por unidad de volumen de CI se realizó a partir del número que aparece en las secciones de los cuerpos de inclusión (Allaway ,1983). Para cada sección de los cuerpos de inclusión se calculó el volumen cortado (V ) mediante la fórmula: V = A (2 / 3 L + 2 / 3 d + t) donde L: longitud S S de las partículas virales, d:diámetro partículas virales, t: ancho del corte (0,08 µm)., A: área de la sección. A partir del número de viriones por sección y del volumen de cada sección determinado en cada caso, se 3 calculó el número de viriones por mm de poliedro. Posteriormente se efectuaron análisis de estadística descriptiva para todas las variables medidas y calculadas, estimando los descriptores estadísticos. Además, se efectuó un análisis de la variación de la frecuencia porcentual de nucleocápsides /virión de VPNSf, aislamiento Tucumán. Luego, se estimaron los valores típicos y la variabilidad del número de viriones/poliedro y del número de nucleocápsides/poliedro del VPNSf, aislamiento Tucumán, a partir de la variación del volumen de cada poliedro de la muestra (fotografías de microscopio 3 electrónico de barrido), con el Nº medio de viriones/µm y el número medio NC/virión, determinados a partir de las fotografías efectuadas con el microscopio electrónico de transmisión. Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 536 RESULTADOS Y DISCUSIÓN En la figura 1 se observan los cuerpos de inclusión del VPNSf aislamiento Tucumán, los que, teñidos con Giemsa se presentaron de color azul, siendo más visibles que en observaciones microscópicas comunes. Esto permitió la toma de fotografías con el microscopio óptico. Figura 1 Cuerpos poliédricos de inclusión refringentes de VPNSf, aislamiento Tucumán. Fotografía con aumento 100 X en aceite de inmersión con microscopio óptico. Esta imagen evidencia lo que constituye una clara ventaja de los VPN desde el punto de vista práctico, ya que pueden ser observados y recontados con un microscopio óptico de uso común en cualquier laboratorio, a diferencia de otros virus que por su reducido tamaño, requieren de un microscopio electrónico. Para determinar la forma y tamaño de los cuerpos poliédricos de inclusión del VPNSf se tomaron fotos con el Microscopio Electrónico de Barrido, las que se presentan en la Figura 2. En la misma se observa la forma poliédrica irregular característica, con predominancia de la forma cuboide (Adams & Wilcox, 1982) en los poliedros de VPNSf aislamiento Tucumán. Los cuerpos de inclusión del Nucleopolyhedrovirus de S. frugiperda, aislamiento Tucumán, mostraron perfil poligonal (Figura 2), (Gerk et al., 1997), con diámetro no uniforme (Cuadro 1), coincidiendo con lo expresado por Agudelo et al. (1983). Figura 2 Poliedros purificados a partir de larvas de S. frugiperda infectadas con MVPNSf, aislamiento Tucumán. Microscopio electrónico de barrido LAMENOA. Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 537 Cuadro 1 Características morfológicas externas del VPNSf, aislamiento Tucumán, a partir de las fotografías tomadas con el microscopio electrónico de barrido. # Prueba t para diámetro mayor vs menor: Diferencia altamente significativa (t= 11,41; P(T<=t): 4,05*E-21)..¨ Cálculos según metodología de Allaway (1983). Además, como se destaca en el Cuadro 2, presentaron un diámetro mayor medio de 1,883 µm (1,378 2,499 µm) y un diámetro menor medio de 1,699 µm (1,142 - 2,428 µm; n= 120), valores algo superiores a los obtenidos por Agudelo et al. (1983) para un aislamiento venezolano cuya media, sobre 20 mediciones, fue de 1,60 x 1,50 µm (1.40 x 1.20 µm a 1.90 x 1.60 µm). Cuadro 2. Caracterización de parámetros morfológicos internos de VPNSf, aislamiento Tucumán, según fotografías del microscopio electrónico de transmisión. A su vez, los poliedros fueron apenas más pequeños que los determinados en VPNSf de Oliveros, Santa Fe (Berreta et al., 1998), con valor medio 2,12 mm ± 0,46 ; n = 30 y en el aislamiento brasilero, con 1-3 mm (Valicente et al., 1989). A su vez, se encuentran dentro de las medidas dadas para los VPN en general (Bilimoria, 1991; Alves, 1998, Moscardi, 1986; Sciocco, 1994 y Gerk et al.,1997).El volumen medio de los poliedros de 3 MVPNSf aislamiento Tucumán fue de 3,252 µm . Si bien no se encontraron antecedentes referidos al volumen de poliedros de MVPN de Spodoptera frugiperda, el valor obtenido muestra que son significativamente más 3 pequeños que MVPNAs (A. segetum) oriundo de Inglaterra (9,71 µm ) y apenas más grandes que el procedente 3 3 de Polonia (2,82 µm ) y que el MVPNMb (Mamestra brassicae) (2,60 µm ) (Allaway, 1983). Se observaron cuerpos de inclusión con viriones inmersos, con varios nucleocápsides (Figura 3), por lo que el virus de la poliedrosis nuclear de S. frugiperda, aislamiento Tucumán, corresponde al tipo múltiple (VPNM), coincidiendo con la bibliografía (Agudelo et al., 1983; Berreta et al., 1996; Gerk et al.,1997). Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 538 Figura 3. Izquierda: Sección de CPI, mostrando su diámetro irregular y los viriones en su interior. (Aumento: 50080 X), Derecha: Nucleocápsides agrupados caracterizando este VPN como de tipo “multiple envelope” (MVPN).(Aumento: 140.600). Microscopio electrónico de transmisión LAMENOA Existe una relación directa evaluada y habría, probablemente, una distribución homogénea de las partículas virales o viriones en el poliedro, lo que permitiría la estimación del número total de viriones y del volumen de los poliedros a partir de las secciones de los mismos. El número más frecuente de nucleocápsides/virión observado en las muestras fotografiadas fue de 5 unidades (23,3%) y en segundo lugar, 4 y 7 unidades (20% en cada caso). Menos frecuentes fueron los viriones con 2 nucleocápsides (16,6%), luego los de 6 nucleocápsides (10%), 3 unidades (6,7%), y por último, los de 8 (3%). Por lo expuesto, el número de nucleocápsides en cada partícula viral varió ampliamente, coincidiendo con lo expresado por Borges Maracajá et al. (1999) para los VPN de Cadra cautella y E. similis, y por Allaway (1983) para los VPN de A. segetum y M. brassicae. La media fue 4,767 nucleocápsides/virión y el modo 5 nucleocápsides/virión, uno más que el número más frecuente citado por Sciocco de Cap (1996), seguido en frecuencia decreciente por 4 y 7 unidades. El largo medio de los nucleocápsides (Cuadro 2) fue de 157 nm (97 – 220 nm, Modo: 200 nm) y el ancho medio fue de 30 nm (24 – 36 nm y Modo de 36), más pequeños que los descriptos por Valicente et al. (1989). 3 Se estimó en 37,6 el número medio de viriones/µm del VPNSf, aislamiento Tucumán (Cuadro 2), resultado que indica una densidad mayor (cerca del doble) a las estimadas para VPNAs y VPNMb (Allaway, 1983), lo cual es compensado si se compara con el volumen del CPI de VPNAs originario de Inglaterra. El número medio de viriones/poliedro fue 122, valor que se encuentra incluido dentro de los indicados para los VPN en general (Kaya, 1999; Borges Maracajá et al., 1999). El número de nucleocápsides por poliedro se estimó en 582,7 (Cuadro 3), valor más próximo a la cantidad estimada para VPNAs originario de Inglaterra, aunque éste tiene el triple de volumen de CPI que el VPNSf, aislamiento Tucumán. La estimación del número de nucleocápsides/virión cobra importancia ya que tendría correlación positiva con la virulencia del patógeno (Allaway, 1983). Cuadro 3. Variabilidad del número de viriones/poliedro y de nucleocápsides por poliedro del VPNSf, aislamiento Tucumán, calculado usando la variación del volumen del poliedro de la muestra de VPN Tu3 cumán (M.E. de barrido) y el Nº medio de viriones/µm y el Nº medio NC/virión. (M.E. de transmisión). Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 539 CONCLUSIONES Se caracterizó morfológicamente al MVPNSf, aislamiento Tucumán. Presenta poliedros de perfil poligonal 3 irregular, con diámetros medios 1,883 x 1,699 µm y volumen medio igual a 3,252 µm . El largo promedio de los nucleocápsides fue de 157 nm (97 –220 nm, o 200 nm) y el ancho medio 30 nm (24 – 36 nm, o 36). El número de nucleocápsides en cada partícula viral es variable, entre 2 y 8 en las muestras observadas, siendo la media 4 y el modo 5. La densidad fue de 37,6. El número de viriones/poliedro se estimó en 122 y la cantidad de nucleocápsides/poliedro en 582,7. No se encontraron antecedentes referidos al volumen del poliedro, densidad de viriones, cantidad de partículas virales y nucleocápsides/poliedro del Nucleopolyhedrovirus de Spodoptera frugiperda, por lo que estos resultados constituyen un aporte al conocimiento de este baculovirus. Avances en la Producción Vegetal y Animal del NOA. 2007 - 2009 | 540 BIBLIOGRAFIA Adams, J.R. & Wilcox, T.A.1982. Scanning electron microscopical comparisons of insect virus occlusion bodies prepared by several techniques. J. Invertebr. Pathol. 40:12–20. Agudelo, F., Romano, M.; Wassink, H. & Cuello de Uzcategui, R. 1983. Una poliedrosis de Spodoptera frugiperda en Venezuela. Turrialba 33(3): 219-22. Allaway, G. 1983. Virus particle packaging in baculovirus and cytoplasmic polyhedrosis virus inclusion bodies. J. Invertebr. Pathol. 42:357–368. Alves, S. B. 1986. Controle microbiano de insetos. 1° Edición. Editora Manole Ltda. San Pablo, Brasil. 407 pp. Alves, S. B. 1998. Editor. 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