Adriana Murillo-Williams1, Andrés Monge Vargas2 y Álvaro Azofeifa Delgado3 Ingeniero Agronómo. PhD. Fisiología y Producción de Cultivos. Centro para Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS). Universidad de Costa Rica. [email protected] Ingeniero Agronómo. Licenciado en Agronomía. Centro para Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS). Universidad de Costa Rica. [email protected] Ingeniero Agronómo. MSc Biotecnología. Centro para Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS). Universidad de Costa Rica. [email protected] INTRODUCCIÓN transgénico a las arvenses y a arroz no transgénico, así como la expresión del rasgo transgénico en la progenie (Oard et al, 2000; Chen et al, 2004; Rong et al, 2005; Sánchez-Olguín et al 2009). OBJETIVO GENERAL Determinar el efecto del enterramiento sobre el porcentaje de dormancia, germinación y muerte de semillas de dos variedades comerciales de arroz. MATERIALES Y MÉTODOS El experimento se estableció en una finca comercial de arroz en la localidad de Cañas, Guanacaste. Grupos de 100 semillas de las variedades comerciales de arroz Palmar 18 y CR5272 se empacaron y se enterraron a diferentes profundidades (0, 15, 30 cm) (Fig 1) en el campo, en bloques de 12 parcelas. El ensayo fue colocado en un arreglo de bloques completos al azar con 4 repeticiones. Las semillas restantes se almacenaron a 7oC. La germinación, mortalidad (Fig 3) y dormancia de los lotes de semillas en almacenamiento varió de acuerdo con la variedad. Para CR 5272 el porcentaje de dormancia disminuyó gradualmente en el tiempo (Fig 4) mientras que para Palmar 18 se disminuyó drásticamente en los primeros meses y luego aumentó, posiblemente por la inducción de dormancia secundaria. A B C Figura 3. A) Semillas germinadas con plántulas normales B y C) Semillas consideradas muertas Variedad Palmar 18 Figura 1. Empaque de semillas y establecimiento del experimento en Agosto de 2011 en la localidad de Cañas, Guanacaste. Se llevaron a cabo los muestreos del material cada mes. Las semillas desenterradas en el campo se llevaron al Laboratorio de Semillas del CIGRAS para ser desinfectadas superficialmente y colocadas sobre papel para germinación a 30oC. Se realizaron evaluaciones del material a los 8 y 15 días después de la siembra. Las variables evaluadas fueron: porcentaje de germinación, porcentaje de semillas muertas y porcentaje semillas no germinadas viables (con dormancia). La viabilidad de semillas no germinadas se determinó con una solución al 1% de cloruro de tetrazolio. Se consideraron semillas viables en las que se observaron embriones teñidos de rojo (Fig 2). Semillas Muertas Semillas Vivas Figura 2. Determinación de la viabilidad de semillas de arroz no germinadas por medio de la prueba de tetrazolio RESULTADOS El porcentaje inicial de germinación, muerte y dormancia de semillas de los lotes de semillas utilizados en este experimento se detallan a continuación: Cuadro 1. Determinación inicial de germinación, muerte y dormancia de semillas recién cosechadas de las variedades Palmar 18 y CR 5272. Variedad Germinación (%) Muerte (%) Dormancia (%) Palmar 18 15 3 82 CR 5272 25 17 58 Variedad CR-5272 80 80 Porcentaje % 100 100 60 40 60 40 1 2 3 4 5 Meses en almacenamiento Semillas germinadas 6 1 2 3 4 5 Meses en almacenamiento Semillas con dormancia 6 Variedad CR-5272 100 100 80 80 60 60 40 40 20 20 100 100 80 80 60 60 40 40 20 20 100 100 80 80 60 60 40 40 20 20 1 20 20 Variedad Palmar 18 Semillas superficiales (%) En Costa Rica, la disponibilidad de arroz genéticamente modificado resistente a herbicidas puede representar una alternativa para los agricultores para el control selectivo de malezas y reducir los costos de mano de obra. Sin embargo, varios estudios han demostrado el flujo de genes de arroz En condiciones de campo, tanto la cosecha de arroz mecanizada como la manual conducen a la pérdida de semillas. En un caso hipotético en el cual se sembrara arroz genéticamente modificado en el país, si las semillas que caen al suelo tienen o adquieren dormancia y no germinan poco después de su caída, se incorporarán en el banco de semillas. De acuerdo con su grado de dormancia, la germinación de estas semillas variará en tiempo y espacio, por lo que se aumentan las posibilidades de traslape de los períodos de floración de la especie genéticamente modificada con el arroz silvestre. Por lo tanto, es importante conocer el grado de dormancia de las semillas a la cosecha y el tiempo que éstas permanecen viables en el suelo. 15 cm de profundidad (%) Las variedades de arroz (Oryza sativa) varían considerablemente en su grado de dormancia (Jennings y de Jesús, 1964), la cual es una característica de la semilla que controla la germinación de éstas (Finch-Savage y Leubner-Metzger, 2006) y determina la sincronía y el porcentaje de germinación de semillas viables que permanecen en el banco de semillas (Finkelstein et al 2008). 30 cm de profundidad (%) 1 2 3 Porcentaje % Costa Rica Dormancia de semillas de arroz (Oryza sativa) 2 3 4 5 Meses después de siembra 6 1 2 3 4 5 Meses después de siembra 6 Figura 5. Porcentajes de germinación, mortalidad y dormancia de semillas de las variedades Palmar 18 y CR 5272 enterradas a diferentes profundidades en un campo comercial de arroz en la localidad de Cañas, Guanacaste. Semillas muertas Figura 4. Porcentajes de germinación, mortalidad y dormancia de semillas de las variedades Palmar 18 y CR 5272 almacenadas por 6 meses a 7oC. Debido a la gran cantidad de lluvia durante los primeros meses luego de establecido el experimento, las parcelas que se iban a mantener en secano se inundaron, por lo que se mantuvieron en esta condición. En las pruebas de campo, la germinación fue mayor en semillas colocadas en la superficie del suelo, en la cual las semillas germinaron, o murieron (Fig 5). La mortalidad fue mayor en semillas enterradas a 15 y 30 cm y los porcentajes de dormancia fueron 0,006 %, 1,2 % y 2,1 % en semillas enterradas a 0, 15 y 30 cm de profundidad, respectivamente (Fig 5). CONCLUSIONES • Los resultados de este trabajo indican que la ruptura de dormancia en semillas que caen al suelo y no se entierran es muy alta, por lo que la mayoría germina. Esto puede generar recomendaciones para productores en cuanto a la preparación del suelo en caso de contar con variedades genéticamente modificadas. • La mortalidad de semillas aumenta cuando éstas son enterradas. Sin embargo, los porcentajes de dormancia disminuyen cuando las semillas son enterradas. • Un pequeño porcentaje de semillas enterradas se mantiene con dormancia y otro porcentaje tiene la capacidad de germinar inmediatamente después de desenterrada. REFERENCIAS • Chen, L.J., D. S. Lee, Z. P. Song, H. S. Suh, and B. Lu. 2004. Gene flow from cultivated rice (Oryza sativa) to its weedy and wild relatives. Annals Bot. 93:67-73. • Finch-Savage, W.E., and G. Leubner-Metzger. 2006. Seed dormancy and the control of germination. New Phytol. 171:501-523. • Finkelstein, R., W. Reeves, T. Ariizumi, and C. Steber. 2008. Molecular aspects of seed dormancy. Annu. Rev. Plant Biol. 59:387-415. • Jennings, P.R., and J. de Jesus Jr. 1964. Effect of heat on breaking seed dormancy in rice. Crop Sci. 4:530-533. • Oard, J., M.A. Cohn, S. Linscombe, D. Gealy, and K. Gravois. 2000. Field evaluation of seed production, shattering, and dormancy in hybrid populations of transgenic rice (Oryza sativa) and the weed, rid rice (Oryza sativa). Plant Sci. 157:13-22. • Rong, J., Z. Song, J. Su, H. Xia, B. Lu, and F. Wang. 2005. Low frequency of transgene flow from Bt/CpTl rice to its nontransgenic counterparts planted at close spacing. New Phytol. 168:559-566. • Sanchez-Olguin, E.R., G. Arrieta-Espinoza, J.A. Lobo, and A.M. Espinoza-Esquivel. 2009. Assessment of gene flow from an herbicide resistant indica rice (Oryza sativa L.) to the Costa Rican weedy rice (Oryza sativa) in Tropical America: factors affecting hybridization rates and characterization of F1 hybrids. Transgenic Res. 18:633-647. AGRADECIMIENTOS Al Global Environment Facility, la Coordinación y colaboradores del proyecto LAC Biosafety y al CIGRAS. A los asistentes Alejandro Morales, Alejandro Ureña, Viviana Madrigal, José González, Tatiana Vargas, Elian Méndez y Mariela Machado.