Rosco Diagnostica - Medica-Tec

Rosco Diagnostica
Diatabs™- Instrucciones para uso
Revisión:
DBV0008A
Fecha de publicación: 01.10.2003
Idioma:
Español
Diatabs™
Para la identificación bacteriana
Fabricante
ROSCO Diagnostica A/S, Taastrupgaardsvej 30, DK-2630 Taastrup, Dinamarca, www.rosco.dk
Uso previsto
En procedimientos cualitativos para la detección in vitro de propiedades microbianas en la identificación de
microorganismos. Diatabs se utiliza en los ensayos de identificación en forma de tabletas individuales.
Principios del procedimiento
Diatabs está disponible en dos modalidades: Diatabs para utilizar en placas de agar y Diatabs para disolver en líquido.
La mayoría de las Diatabs permiten una ejecución rápida del ensayo utilizando reacciones enzimáticas cromogénicas y
ensayos convencionales modificados. Las Diatabs para placas de agar detectan los patrones de sensibilidad naturales o
los requisitos de factores de crecimiento. Tras la incubación, se examinan las placas y se mide el diámetro de las zonas
de inhibición alrededor de la tableta comprimido para su interpretación con la tabla de zonas (sensibles/resistentes) de
cada tableta. Los Diatabs para líquido están basados en las propiedades enzimáticas de los microorganismos detectados
mediante diferentes sistemas de indicador. 1
Para más información sobre las Diatabs de identificación bacteriana, consulte la Guía de usuario Diatabs 2 en
www.rosco.dk.
Instrucciones de conservación
1)
2)
3)
A la recepción del producto consulte el símbolo de temperatura que figura en la etiqueta. Las Diatabs con un
símbolo en la etiqueta de 2 °C - 8 °C deben conservarse en frigorífico y las Diatabs con un símbolo de 25 °C como
temperatura máxima deben conservarse a temperatura ambiente.
Si las Diatabs se conservan en el frigorífico, deberá dejarse que los viales alcancen la temperatura ambiente
(durante 30 - 60 minutos) antes de proceder a su apertura para evitar así la formación de condensación en los
mismos.
Las Diatabs deben conservarse en los viales bien protegidos de la luz directa y de una humedad elevada. Si se
suministra con material absorbente de la humedad (cápsula desecante), este deberá conservarse en el vial.
La fecha de caducidad de los viales sólo es válida si se conservan los viales cerrados a la temperatura prescrita.
Reactivos
Los Diatabs son tabletas de 6 ó 9 mm que se suministran en viales de 15, 25 ó 50 unidades. Las tabletas de 9 mm llevan
impresos en ambas caras un código único de 5 caracteres. Las tabletas de 6 mm para su uso en agar presentan un código
de color mientras que los Diatabs para disolver en líquido no llevan código. El usuario deberá registrar el contenido del
tubo de ensayo cuando utilice más de una Diatabs.
Precauciones
Respetar las instrucciones para uso. Ninguno de las tabletas están previstas para uso en ensayos de sensibilidad. El
rendimiento de las Diatabs depende no sólo del tipo específico de Diatabs sino también del inóculo y del tiempo de
incubación utilizados así como de la interpretación del diámetro de la zona o del cambio de color. Los productos
deberán ser manejados exclusivamente por técnicos que dispongan de la formación adecuada. Utilizar unas pinzas para
manejar las Diatabs.
Deberán tomarse precauciones frente a los riesgos microbiológicos esterilizando adecuadamente las tabletas, los
recipientes, los medios y los tubos de ensayo tras su uso. Los productos Diatabs, tubo y las placas de agar con posibles
patógenos se eliminan como residuos microbiológicos.
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Muestras
Las muestras deben recogerse y manejarse de acuerdo con las directrices recomendadas y, además, deben ser un cultivo
puro totalmente típico de la especie que se desea identificar.
Procedimiento
Materiales suministrados: Diatabs del tipo indicado en la etiqueta del envase.
Materiales necesarios pero no suministrados: Medios de cultivo, tubos de ensayo, reactivos, medios de control de
calidad y equipos de laboratorio necesarios para realizar la identificación (p. ej., ansas para inoculación, bastoncitos de
algodón, pipetas y recipientes para recogida).
I. Diatabs en agar
Para la identificación puede ser útil la sensibilidad de los microorganismos aislados en muestras clínicas frente a
agentes antimicrobianos o de otro tipo. Los microorganismos se pueden identificar y diferenciar midiendo el diámetro
de la zona tras el cultivo con un inóculo estandarizado aplicado a un agar específico.
I.1. Preparación del inóculo
Suspender varias colonias morfológicamente similares de una placa de agar cultivada durante 18-24 h (no selectiva) en
4-5 ml de solución de NaCl al 0,9 % para obtener una turbidez similar a la del patrón McFarland 0,5.
I.2. Inoculación
Al cabo de 15 minutos, introducir un bastoncito de algodón estéril en la suspensión ajustada y eliminar el resto de
inóculo del bastoncito presionando firmemente contra el interior del tubo. Al cabo de 15 minutos utilizar los bastoncitos
para inocular el agar especificado en la Tabla 1. Inocular la superficie seca de la placa de agar pasando el bastoncito por
toda la superficie. Dejar secar la superficie durante 3-5 minutos y como máximo 15 minutos antes de aplicar las Diatabs
en la superficie del agar.
I.3. Incubación y lectura de las placas
Transcurridos 15 minutos, colocar el agar hacia arriba e incubar las placas según la especie (aerobios, anaerobios o en
CO2 al 5-10% ) de acuerdo con la Tabla 1. Examinar las placas tras incubar durante toda la noche, salvo que se indique
lo contrario en la Tabla 1.
Medir los diámetros de las zonas de inhibición completa observadas mediante inspección visual. Las zonas se miden
con una precisión de un milímetro.
RESULTADOS:
Comparar el diámetro de zona registrado con los de la Tabla 1. Los resultados para una muestra específica se registran
como Sensible (S) o Resistente (R) de acuerdo con las zonas de interpretación. Utilizar la Tabla 1 para realizar una
identificación preliminar de la cepa bacteriana.
II. Diatabs para líquidos
II.1. Preparación del inóculo
El microorganismo que se desea analizar debe tener entre 18 y 24 horas y ser un cultivo puro. Los aislados de
crecimiento lento pueden analizarse con un cultivo de 48 horas.
Preparar en un tubo una suspensión fuerte (como mínimo patrón McFarland 4) del microorganismo analizado en 0,25
ml de solución salina. Puede inocularse una batería de Diatabs con un mismo inóculo.
II.2. Inoculación
Añadir una Diatabs al tubo. Algunas Diatabs requieren, además, la adición al tubo de 3 gotas de aceite de parafina
estéril (especificado en la Tabla 2).
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II.3. Incubación y lectura de los tubos
Cerrar el tubo e incubar a 35-37 °C durante 4 horas, durante la noche o según lo especificado en la Tabla 2.
Tras la incubación observar el viraje de color. En algunas Diatabs es necesario añadir un reactivo antes de leer el color y
algunas Diatabs pueden presentar dos reacciones.
Tras la interpretación del color de la primera reacción, añadir un reactivo y leer el nuevo color (especificado en la Tabla
2).
RESULTADOS:
Los Diatabs para líquido se clasifican según la reacción de color. En la Tabla 2 se muestran las reacciones de color para
las cepas negativas y positivas. Anotar la puntuación en un formulario adecuado.
III. Diatabs para otros procedimientos
Oxidasa
Colocar un papel de filtro grueso en una placa de Petri vacía y colocar la tableta de Diatabs sobre ella. Añadir una gota
de solución salina sobre la parte superior del comprimido, esperar 60 segundos y añadir otra gota de solución salina
sobre dicha parte superior. Cuando el papel de filtro esté húmedo, frotar la colonia sobre el papel de filtro húmedo
aprox. a 3-8 mm del borde del comprimido utilizando un ansa de plástico. Realizar la lectura al cabo de 2 minutos.
Pueden analizarse varios aislados con la misma Diatabs y el mismo papel de filtro.
Factores X, V y X+V
Para diferenciar Haemophilus spp. se utilizan tabletas con el factor de crecimiento X (hemina), con el factor V (NAD) o
con ambos factores (X+V). Los tres comprimidos se colocan en el agar, los del factor X y el factor V separados entre sí
2 cm y el del factor X+V más alejado de ellos. Utilizar únicamente un medio libre de los dos factores de crecimiento (p.
ej., agar TSA).
Incubar por la noche a 35-37 °C durante 18-24 horas y observar si existe o no crecimiento en las proximidades de la
tableta. Si el microorganismo sólo requiere el factor X, crecerá solamente en las proximidades de las tabletas de factor
X y X + V; si el microorganismo sólo requiere el factor V, crecerá solamente en las proximidades de las tabletas de
factor V y X + V y si requiere ambos factores X y V, crecerá solamente en las proximidades de las tabletas de factor X
+ V.1
CONTROL INTERNO DE CALIDAD
Para monitorizar el rendimiento de los comprimidos deberá utilizarse un procedimiento de control de calidad con cepas
ATCC o cepas positivas o negativas conocidas. El control de calidad deberá realizarse de acuerdo con los
procedimientos de control de calidad de laboratorio reconocidos. En las Tablas se presentan las reacciones de color
negativas y positivas así como las cepas sensibles o resistentes que indican el correcto rendimiento de todo el
procedimiento. Si se observan resultados de calidad aberrantes, no deberán registrarse los resultados.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
1.
2.
3.
4.
5.
Deberán utilizarse cultivos puros de microorganismos ya que una población microbiana mixta daría lugar a
resultados aberrantes.
El uso de Diatabs para la identificación de microorganismos y la interpretación de los resultados requiere la
presencia de un técnico experto en métodos microbiológicos generales que sepa manejar de forma razonable
conocimientos, experiencias, información sobre muestras así como otros procedimientos pertinentes antes de
establecer la identidad del aislado.
Los resultados de ensayos adicionales pueden afectar al resultado de la identificación final.
Las tabletas no están previstas para su uso en procedimientos de ensayo de sensibilidad.
La exactitud de las Diatabs está basada en las propiedades microbianas in vitro conocidas para especies
bacterianas específicas clínicamente relevantes1. Si se observan resultados atípicos o incoherentes se recomienda
repetir el ensayo. Un resultado imprevisto debe ser notificado, pudiéndose enviar los aislados a laboratorios de
referencia para su posterior análisis.
REFERENCIAS:
1)
2)
Murray P.R. et al. 2003. Manual of Clinical Microbiology, 8th ed., ASM, Washington DC.
Diatabs User's Guide 5th ed. 2000. www.rosco.dk
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Tabla 1. Interpretación de los resultados de Diatabs (en agar)
Revisión:
Fecha de publicación:
Idioma:
DIATABS
(Principios activos por
tableta)
Bacitracin low 0.4 U
Ø
Código*
mm
Procedimiento
Zona
mm
> 15
6
BaL
9
BORON
Brilliant Green 100 µg
6
BrG
Standard II
≥ 10
C-390 40 µg
9
C-390
Standard I
≥ 12
Colistin 10 µg
9
Co.10
Standard II
9
CL500
9
CYC15 Standard I en
Boronic Acid 250 µg
Standard I
en agar de
sangre TSA
Interpretación
Sensible
Estreptococos betahemolíticos Grupo A
Zona
mm
< 14
DBV0009F
30.11.2006
Español
Cepa CC
Resistente
Otros estreptococos
Sensible
Resistente
S. pyogenes ATCC 12344
S. bovis ATCC 15351
B. fragilis ATCC 25285
F. necrogenes ATCC 25556
Detección de AmpC Beta-lactamasas mediadas por plásmidos.
(Research use only)
(Colistin sulphate)
Cloxacillin 500 µg
(Research use only)
Cycloheximide 15 µg
agar Shadomy
modificado
(Cycloheximide < 0.02 %)
Deferoxamine 250 µg
9
DEFRX Standard I a
6
≥ 25
≥ 16
Ver texto
6
(Hemin chloride 260 µg)
S. aureus ATCC 25923
C. glabrata
< 25
C. albicans
C. krusei
C. pseudotropicalis
C. lusitaniae
S. epidermidis
Otros estafilococos
≤ 14
S. hominis
S. lutrae
H. influenzae:
Se requieren ambos factores X y V.
Crecimiento alrededor del factor X+V y entre el factor X y el
factor V.
H. parainfluenzae:
Sólo se requiere el factor V.
Crecimiento alrededor del factor V y del factor X+V.
C. albicans ATCC 64548
C. krusei ATCC 6258
S. epidermidis ATCC 12228
S. aureus ATCC 25923
B. fragilis ATCC 25285
E. coli ATCC 25922
G. vaginalis ATCC 14018
E. coli ATCC 25922
Factor X + V
6
Metronidazole 5 µg
9
MTR.5 Standard II
≥ 15
Bacterias anaerobias
Metronidazole 50 µg
9
MTR50 Standard III
≥ 12
Gardnerella vaginalis
DBV0009F
Fusobacterium spp.
P. aeruginosa ATCC 27853
(b-Nicotinamide adenine
dinucleotide sodium 175 µg)
Factor X
< 10
Otros Pseudomonas
Ninguna
P. aeruginosa
S. maltophilia ATCC 13637
spp. y no
zona
fermentadoras
P.ej. grupo B. fragilis d E. coli ATCC 25922
P. ej., Fusobacterium Ninguna
≥ 10
d
zona
spp.
Detección de AmpC Beta-lactamasas mediadas por plásmidos.
(Deferoxamine mesylate)
Factor V
Bacteroides spp.
Ninguna
zona
< 12
Bacterias aerobias y
microaerofílicas
Lactobacilos
Corinebacterias
H. influenzae ATCC 49247
H. parainfluenzae ATCC 7901
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DIATABS
(Principios activos por
tableta)
O/129 150 µg
Ø
Código*
mm
Procedimiento
Interpretación
Zona
mm
≥ 16
9
O/129
Standard b
6
OPT
>9
P.ej. Porphyromonas
spp. d
(2,4-Diamino-6,7-diisopropylpteridine phosphate salt)
Optochin 10 µg
≥ 18 (CO2)
6
OXG
Standard
TSA con
5 % sangre.
Incubado +/CO2
Standard II
9
PSAE
Standard I c
≥ 18
6
SPS
Standard III
≥ 10
6
TEL
Standard I
> 15
(Ethylhydrocuprein HCl)
Oxgall 1000 µg
(1,10 Phenanthroline)
S.P.S. 1000 µg
Vibrio spp.
Plesiomonas
Zona
mm
< 16
Cepa CC
Resistente
Sensible
Resistente
Aeromonas
Enterobacteriaceae
Kocuria rhizophila ATCC 9341 E. coli ATCC 25922
Otros estreptococos
no hemolíticos
S. pneumoniae ATCC 49619
S. bovis ATCC 15351
P. ej. grupo
Bacteroides fragilisd
S. aureus ATCC 25923
B. fragilis ATCC 25285
Otras Pseudomonas
≤ 14
spp., no fermentadoras
y Enterobacteriaceae
Gardnerella vaginalis
P. aeruginosa
E. coli ATCC 25922
P. aeruginosa ATCC 27853
G. vaginalis ATCC 14018
Kocuria rhizophila ATCC 9341
Estreptococos y la
mayoría de
enterococos
E. faecalis
S. bovis ATCC 15351
E. faecalis ATCC 29212
S. pneumoniae
≥ 20 (aerob)
(Oxgall)
Ps. aeruginosa Screen 80 µg
Sensible
< 16 (CO2)
< 18 (aerob)
Ninguna
zona
(Sodium polyanethol sulfonate)
Tellur 500 µg
(Potassium tellurite)
< 12
* El código en negrita figura impreso en los comprimidos.
Procedimiento:
Standard I:
El ensayo se realiza con un inóculo equivalente a McFarland 0,5 en agar Mueller Hinton incubado aeróbicamente a 35-37 °C durante la noche si en la tabla no se especifica el agar
o las condiciones de incubación.
Standard II:
El ensayo se realiza con un inóculo equivalente a McFarland 0,5 en FAA+sangre incubados aeróbicamente a 35-37 °C durante 24-48 horas si en la tabla no se especifica el agar o
las condiciones de incubación.
Standard III: El ensayo se realiza con un inóculo equivalente a McFarland 0,5 en agar Mueller Hinton + sangre incubado a 35-37 °C con CO2 al 5-10 % durante la noche si en la tabla no se
especifica el agar o las condiciones de incubación.
a)
b)
c)
d)
Medir en la zona las colonias de tamaño normal y descartar las colonias semiinhibidas. No utilizar agar con sangre.
Utilizar medio básico de agar-sangre (Oxoid) con NaCl al 0,5%. Incubar durante 24 horas. La resistencia adquirida frente al trimetoprim también lo será frente a O/129.
Medir únicamente la zona clara.
Puede utilizarse para separar los principales grupos de bacterias anaerobias habituales.
DBV0009F
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Tabla 2. Interpretación de los resultados de Diatabs (en líquido)
DIATABS
(Principios activos por tableta)
Acetamide Hydrolysis
Código
Procedimiento
ACM
Standard
ADO
Standard
Alk P
Standard
(Acetamide 1.5 mg)
Adonitol
(Adonitol 3 mg)
Alkaline Phosphatase
Tiempo de
incubación
(4 h)
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
(p-Nitrophenyl-Phosphate 0.1 mg)
Alpha-Fucosidase
α-FUC Standard
(p-Nitrophenyl-α-L-Fucosidase 0.2 mg)
α-GAL Standard
Alpha-Galactosidase
(p-Nitrophenyl- α-D-Galactopyranoside 0.3 mg)
α-GLU Standard
Alpha-Glucosidase
(p-Nitrophenyl-α-D-Glucopyranoside 0.3 mg)
Alpha-Mannosidase
α-MAN Standard
(p-Nitrophenyl-α-Mannopyranoside 0.3 mg)
Arginine Dihydrolase
ADH
Standard+oil
(L-Arginine HCl 3 mg)
Beta-Fucosidase
ß-FUC Standard
(p-Nitrophenyl-ß-L-Fusosidase 0.2 mg)
Beta-Glucosidase
β-GLU Standard
(p-Nitrophenyl-ß-D-Glucopyranoside 0.3 mg)
Beta-Glucuronidase (PGUA)
PGUA Standard
(p-Nitrophenyl- ß -D glucuronic acid 0.3 mg)
Standard
Beta-Lactamase (Acido)
(Penicillinprocaine 4 mg, Penicillin G sodium 4 mg)
Beta-N-Acetylglucosaminidase
β-NAG Standard
(p-Nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide 0.2 mg)
Beta-Xylosidase
β-XYL Standard
(p-Nitrophenyl ß-D-xylopyranoside 0.3 mg)
Bile Esculin
BE
Standard
CIT
Standard
(Esculin 2 mg, Oxgall 9 mg)
Citrate
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
15-20 min.
y hasta 4 h
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
18-24 h
Interpretación
Positivo
Negativo
Control de calidad
Positivo
Negativo
Rojo
Amarillo, naranja P. aeruginosa ATCC 27853
E. coli ATCC 25922
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo
intenso
Amarillo
Rojo,
rojo anaranjado
K. pneumoniae ATCC 13883
E. coli ATCC 25922
Incoloro,
amarillo claro
Incoloro
E. coli ATCC 25922
S. haemolyticus ATCC 29970
B. fragilis ATCC 25285
E. coli ATCC 25922
Amarillo
Incoloro
E. coli ATCC 25922
P. aeruginosa ATCC 27853
Amarillo
Incoloro
S. maltophilia ATCC 13637
P. aeruginosa ATCC 27853
Amarillo
Incoloro
L. monocytogenes ATCC 19115
E. coli ATCC 25922
Rojo
Amarillo
P. aeruginosa ATCC 27853
K. pneumoniae ATCC 13883
Amarillo
Incoloro
S. intermedius ATCC 27335
E. coli ATCC 25922
Amarillo
Incoloro
K. pneumoniae ATCC 13883
Morganella morganii ATCC 25830
Amarillo
Incoloro
E. coli ATCC 25922
K. pneumoniae ATCC 13883
S. aureus ATCC 29213
S. aureus ATCC 25923
P. aeruginosa ATCC 27853
S. aureus ATCC 25923
K. pneumoniae ATCC 13883
E. coli ATCC 25922
Amarillo
Violeta
(o marronáceo)
Amarillo
Incoloro
intenso
Amarillo
Incoloro
Negro, gris
Rojo
Incoloro,
E. faecalis ATCC 29212
gris claro
Amarillo, naranja P. aeruginosa ATCC 27853
S. pneumoniae ATCC 49619
Proteus vulgaris ATCC 13315
(Citrate 2 mg)
DBV0009F
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DIATABS
(Principios activos por tableta)
d-Xylose
Código
Procedimiento
XYL
Standard
4h
o durante la noche
ESC
Standard
4 h (o hasta 24 h)
(d-Xylose 2 mg)
Esculin Hydrolysis
Tiempo de
incubación
Interpretación
Positivo
Negativo
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Negro, gris
(Esculin 2 mg)
Gamma-Glutamyl Aminopeptidase
γ-GLU Standard+I
(Gamma-Glutamyl-β-Naphthylamide 0.2 mg)
Glucose
GLU
Standard
HIP
Standard+IV
4h
IAC
Standard
4h
o durante la noche
INU
Standard
4h
o durante la noche
LAC
Standard
4h
o durante la noche
ARA
Standard
4h
o durante la noche
LDC/
Standard+oil
Leer en
primer lugar
LDC y
después +IIa
Standard+I
3-4 h (o hasta 24 h)
(D-Glucose monohydrate 2 mg)
Hippurate Hydrolysis
4ho
Durante la noche
4h
o durante la noche
(Hippuric acid Sodium-salt 3 mg)
Indoxyl Acetate
(Indoxyl acetate 5 mg)
Inulin
(Inulin 3 mg)
Lactose
(Lactose monohydrate 3 mg)
l-Arabinose
(L-Arabinose 3 mg)
LDC/Indole
(L-Lysine 3 mg, L-Tryptophane 0.7 mg)
IND
Leucine Aminopeptidase
LAP
(L-Leucine-β-naphthylamide-HCL 20 µg)
l-Rhamnose
RHAM Standard
(L-Rhamnose 3 mg)
Lysine Decarboxylase (LDC)
LDC
Standard+oil
MAL
Standard
(L-Lysine 3 mg)
Maltose
(Maltose monohydrate 3 mg)
DBV0009F
4ho
Durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o hasta 24 h
4h
o durante la noche
Naranja rojizo
Rojo
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Fucsia oscuro,
azul
Sedimento
azul, verde
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Azul, violeta
Rojo,
rojo anaranjado
Control de calidad
Positivo
Negativo
E. coli ATCC 25922
Morganella morganii ATCC 25830
Incoloro,
K. pneumoniae ATCC 13883
gris claro
Amarillo
P. aeruginosa ATCC 27853
Amarillo, naranja
Rojo,
P. aeruginosa ATCC 27853
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
Incoloro,
amarillo claro
Sobrenadante
sin color, ligeramente coloreado
Rojo,
rojo anaranjado
S. pyogenes ATCC 12344
S. agalactiae ATCC 12386
E. coli ATCC 25922
A. lwoffii ATCC 9957
Campylobacter jejuni ATCC 33291 E. faecalis ATCC 51299
S. mutans ATCC 25175
E. coli ATCC 25922
Rojo,
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
Proteus vulgaris ATCC 13315
Rojo,
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
S. aureus ATCC 25923
Amarillo, verde,
gris
E. coli ATCC 25922
(LDC pos., IND pos.)
Proteus vulgaris ATCC 13315
(LDC neg., IND pos.)
Rojo
Amarillo
Naranja rojizo
Rojo
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Azul, violeta
Violeta fuerte
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo
S. bovis ATCC 15351
Amarillo, naranja
Rojo,
K. pneumoniae ATCC 13883
rojo anaranjado
Amarillo, verde,
gris, azul claro
Rojo,
rojo anaranjado
K. pneumoniae ATCC 13883
(LDC pos., IND neg.)
Aerococcus viridans ATCC 700406
Proteus vulgaris ATCC 13315
K. pneumoniae ATCC 13883
Enterobacter cloacae ATCC 13047
E. coli ATCC 25922
Morganella morganii ATCC 25830
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DIATABS
(Principios activos por tableta)
Mannitol
Código
Procedimiento
MAN
Standard
4h
o durante la noche
MSE
Standard
4h
o durante la noche
MEL
Standard
4h
o durante la noche
NO3
Standard+V
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
3-4 h (para no
fermentadoras 1824 h)
(D-Mannitol 3 mg)
Mannose
(D-Mannose 3 mg)
Melibiose
(D-Melibiose 3 mg)
Nitrate Reduction
(Sodium Molybdate 40 µg, Potassium nitrate 4 mg)
ONPG (Beta-Galactosidase)
ONPG Standard
(o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside 0.4 mg)
ONPG/PYR
(o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside 0.4 mg,
L-pyrrolidonyl-ß-naphthylamide 0.2 mg)
Ornithine Decarboxylase (ODC)
ONPG/ Standard
Leer en
primer lugar
PYR ONPG y
después +1
ODC Standard+oil
(L-Ornithine HCl 3 mg)
Oxidase
OXI
Ver texto
(Tetramethyl-p-Phenylenediamine 0.7 mg)
PGUA/Indole
(p-Nitrophenyl-β-D-Glucoronic acid 0.4 mg,
L-Tryptophane 1 mg)
Porphyrin (d-Ala)
Tiempo de
incubación
4h
o hasta 24 h
Realizar la lectura
al cabo de 2
minutos.
3-4 h (o hasta 24 h)
PGUA/ Standard
Leer en
primer lugar
IND PGUA y
después +IIa
ALA Standard+IIb 4-6 h (o hasta 24 h)
(d-Aminolevulinic acid 0.1 mg)
Proline Aminopeptidase
PRO
Standard+I
PZA
Standard a
PYR
Standard+I
RAF
Standard
(L-proline ß-Naphthylamide-HCl 80 µg)
Pyrazinamidase
(Pyrazinamide 0.9 mg)
Pyrrolidonyl Aminopeptidase
(L-Pyrrolidonyl-ß-Naphthylamide 0.2 mg)
Raffinose
(D-Raffinose pentahydrate 3 mg)
DBV0009F
4ho
Durante la noche
4h
o durante la noche
4ho
Durante la noche
4h
o durante la noche
Interpretación
Positivo
Negativo
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Rojo, rosa
Control de calidad
Positivo
Negativo
Rojo,
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
Proteus vulgaris ATCC 13315
Rojo,
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
Proteus vulgaris ATCC 13315
Rojo,
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
Proteus vulgaris ATCC 13315
E. coli ATCC 25922
S. saprophyticus ATCC 15305
Amarillo
Incoloro,
rosa claro
Incoloro
E. coli ATCC 25922
S. aureus ATCC 25923
Amarillo
Incoloro
S. haemolyticus ATCC 29970
(ONPG neg., PYR pos.)
Proteus vulgaris ATCC 13315
(ONPG neg., PYR neg.)
Rojo
Amarillo, naranja
Azul, violeta
Violeta fuerte
Azul, fucsia
Amarillo, verde,
gris, azul claro
Sin cambio de
color
E. coli ATCC 25922
K. pneumoniae ATCC 13883
P. aeruginosa ATCC 27853
E. coli ATCC 25922
Amarillo
Incoloro
E. coli ATCC 25922
(PGUA pos., IND pos.)
Enterobacter cloacae ATCC 13047
(PGUA neg., IND neg.)
Rojo
Amarillo
Rojo, rosa en
la fase acuosa
inferior
Naranja rojizo
Rojo
Naranja, rojo
Incoloro
fase acuosa
Proteus vulgaris ATCC 13315
(PGUA neg., IND pos.)
H. parainfluenzae ATCC 7901
H. influenzae ATCC 49247
P. aeruginosa ATCC 27853
Cl. perfringens ATCC 12917
E. coli ATCC 25922
S. aureus ATCC 25923
Naranja rojizo
Rojo
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo
Amarillo, naranja
Incoloro,
amarillo claro
Amarillo
Amarillo, naranja
Rojo,
rojo anaranjado
Enterobacter cloacae ATCC 13047 E. coli ATCC 25922
Enterobacter cloacae ATCC 13047 E. coli ATCC 25922
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Rosco Diagnostica
DIATABS
(Principios activos por tableta)
Sorbitol
Código
Procedimiento
SOR
Standard
4h
o durante la noche
SUC
Standard
4h
o durante la noche
IND
Standard+IIa 4 h
o durante la noche
TDA
Standard+III
TTR
Standard
TRE
Standard
TRIB
Standard
4h
o durante la noche
TRYP
Standard+I
URE
Standard
URE/
Standard
Leer en
primer lugar
URE y
después
+IIa
Standard
Leer en
primer lugar
URE y
después +III
Standard+VI
4ho
Durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
(D-Sorbitol 2mg)
Sucrose
(Saccharose 3 mg)
TDA or Indole: Indole
(L-Tryptophane 1 mg)
TDA or Indole: TDA
(L-Tryptophane 1 mg)
Tetrathionate Reductase
(Tetrathionate 2 mg)
Trehalose
(D-Trehalose dihydrate 2 mg)
Tributyrin
(Tributyrin 2 mg)
Trypsin
(Na-Benzoyl-DL-Arginine-ß-Naphthylamide 0.2 mg)
Urease
(Urea 8 mg)
Urease/Indole
(Urea 4 mg, L-Tryptophane 1 mg)
IND
Urease/TDA
URE/
(Urea 4 mg, L-Tryptophane 1 µg)
Voges-Proskauer
(Sodium Pyruvate 2 mg, Creatine 0.1mg)
DBV0009F
Tiempo de
incubación
TDA
VP
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
o durante la noche
4h
Interpretación
Positivo
Negativo
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Rojo
(fucsia, rosa)
color de la
capa
superficial
Marrón, rojo
Control de calidad
Positivo
Negativo
Rojo,
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
Proteus vulgaris ATCC 13315
Rojo,
rojo anaranjado
Enterobacter cloacae ATCC 13047 Morganella morganii ATCC 25830
Amarillo
Proteus vulgaris ATCC 13315
K. pneumoniae ATCC 13883
Amarillo, naranja Proteus vulgaris ATCC 13315
K. pneumoniae ATCC 13883
Amarillo
Naranja rojizo
Proteus vulgaris ATCC 13315
E. coli ATCC 25922
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Amarillo,
amarillo
anaranjado
Naranja rojizo
Rojo
Rojo/fucsia b
Rojo,
rojo anaranjado
E. coli ATCC 25922
Morganella morganii ATCC 25830
Rojo
P. aeruginosa ATCC 27853
E. coli ATCC 25922
Amarillo
S. maltophilia ATCC 13637
Amarillo, naranja
Amarillo, naranja Proteus vulgaris ATCC 13315
Rojo, fucsia
Amarillo
Rojo
Amarillo, naranja
Rojo, fucsia
Amarillo
Rojo, marrón
Rojo, rosa
Amarillo, naranja
Incoloro (sin
Enterobacter cloacae ATCC 13047 E. coli ATCC 25922
cambio de color)
E. coli ATCC 25922
E. coli ATCC 25922
Morganella morganii ATCC
25830 (URE pos., IND pos.)
K. pneumoniae ATCC 13883
(URE pos., IND neg.)
E. coli ATCC 25922
(URE neg., IND pos.)
Proteus vulgaris ATCC 13315
(URE pos., TDA pos.)
K. pneumoniae ATCC 13883
(URE pos., TDA neg.)
E. coli ATCC 25922
(URE neg., TDA neg.)
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Rosco Diagnostica
Procedimiento:
Standard:
Preparar en un tubo una suspensión bacteriana (como mínimo McFarland 4) de una placa incubada durante la noche en 0,25 ml de solución salina. Añadir una Diatabs, cerrar el
tubo e incubar a 35-37 °C.
Standard+oil: Preparar en un tubo una suspensión bacteriana (como mínimo McFarland 4) de una placa incubada durante la noche en 0,25 ml de solución salina. Añadir una Diatabs y 3 gotas de
aceite de parafina, cerrar el tubo e incubar a 35-37 °C.
a) Preparar la suspensión bacteriana en agua destilada. Después de la incubación añadir una gota de solución de sulfato ferroso de amonio al 5% w / v en agua purificada (recién preparada y
almacenada a -20ºC ). Para Corinebacterias utilizar el inóculo McFarland 8.
b) En caso de incubación durante la noche solamente el rojo fuerte o el fucsia fuerte son positivos.
Reactivos que deben añadirse tras la incubación:
I.
Añadir 3 gotas de reactivo de aminopeptidasa (Rosco #92231) y leer la reacción de color a los 5 min.
IIa. Añadir 3 gotas de reactivo de Kovacs (Rosco #92031), agitar y leer la reacción de color de la capa superficial a los 3 min.
IIb. Añadir 4 gotas de reactivo de Kovacs (Rosco #92031), agitar y esperar 10 min.
III. Añadir 2 gotas de solución de cloruro férrico al 10% y leer la reacción de color a los 5 min.
IV. Añadir 5 gotas de solución de ninhidrina al 3,5% (Rosco #91731), cerrar el tubo y volver a incubar durante 10 min. Leer a los 5 min.
V.
Añadir 1 gota de N,N-dimetil-α-naftilamina y 1 gota de solución sulfanílica. Leer a los 2 min.
VI. Añadir 2 gotas de solución de alfa-naftol (5% en etanol) y a continuación 1 gota de KOH al 40% y agitar.
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