ANTI–D MONOCLONAL (IgM) SUERO PARA GRUPO SANGUINEO

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ANTI–D MONOCLONAL (IgM)
SUERO PARA GRUPO SANGUINEO
Para uso en lámina, tubo y método de micro placa
El suero humano Anti D Monoclonal IgM es una proteína baja formulada para uso en lámina, tubo rápido
y métodos de micro placa.
El uso de este suero por los métodos apropiados detectara los fenotipos Dweak (DU).
EXPRESIONES DEL ANTIGENO DEBIL RhD – Dweak /(DU)
Los términos colectivos de DU son ampliamente usados para describir células las cuales tienen diferencias
cuantitativas (débil) o cualitativas (parcial) del normal de los positivos RhD de las células rojas. Este
suero aglutina directamente en los D positivos de las células rojas y en la mayoría de los ejemplos del
Dweak /(DU).
PRINCIPIO DEL SUERO Y PROCEDIMEINTO DE LA PRUEBA.
Los procedimientos recomendados para la utilización de esta prueba, son basados en la aglutinación
(grupos) de las células rojas de la sangre que tienen antígeno D en la presencia de un anticuerpo IgM
Anti–D. El suero ha sido optimizado para su uso y es proveído con las técnicas recomendadas para ser
utilizado sin adiciones o diluciones adicionales. Almacenar entre 20C –80C, no refrigerar.
El
almacenamiento prolongado a altas temperaturas puede causar una perdida acelerada de la actividad del
suero
PRECAUCIONES
1.
Todos los productos de banco de sangre deben ser tratados Como potencialmente infecciosos. La
fuente utilizada para producir este suero ha sido sometida a pruebas de VIH y VCH y el resultado
ha sido resultado negativo. En el Reino Unido la prueba de HBsAg en microbiología es requerida.
Ningún régimen conocido de prueba puede ofrecer una garantía completa que ningún producto
derivado de la sangre humana es incapaz de transmitir agentes infecciosos. Se debe tener
cuidado en el uso y en el traspaso del envase y de su contenido.
2.
El reactivo contiene 0.1% w/v Azido de Sodio. Azido de Sodio puede ser toxico si es ingerido
Y puede reaccionar al plomo y al cobre de la plomería formando sales explosivas altamente
toxicas. Si el reactivo va a ser vaciado por la tubería, esto debe hacerse con grandes cantidades
de agua.
3.
El producto debe ser claro. Si se observa turbio esto puede indicar una contaminación bacterial.
El reactivo no debe ser usado si una precipitación o una fibra de gel o alguna partícula extraña se
encuentran presente.
4.
Este suero es para uso profesional In Vitro únicamente.
CONSEJOS AL USUARIO
Se recomienda que el control positivo (el ideal es células R1r) y el control negativo (células rr) sean
probadas en paralelo con cada grupo de pruebas. No es requerido utilizar un control diluyente con todos
los resultados de todas las pruebas realizadas con este suero. Solo digitando las células rojas de un
paciente que se conoce que tiene auto - anticuerpos o proteínas o aparentemente bajo grado de Du se
recomienda el uso de un control diluyente. Este debe ser probado en paralelo con el suero.
TECNICAS RECOMENDADAS
1.
1.1
1.2
1.3
Técnica en Lámina
Una suspensión de células rojas de sangre de 35–45% en suero o plasma puede ser utilizada.
A un volumen de suero en una lamina limpia y etiquetada adicione el volumen equivalente a la
prueba de suspensión de células rojas.
Mezcle el suero y la células sobre un área de 2cm. de diámetro aproximadamente de forma suave
y continua balanceando la lámina. Lea microscópicamente a los 2 minutos.
Nota: No confunda los efectos de secado con los resultados de débiles positivos.
2.
2.1
2.2
2.3
2.4
Técnica en tubo con centrifugación
A un volumen de reactivo en un tubo de prueba etiquetado, adicione el volumen igual a 3–5% de
suspensión de prueba de células rojas.
Mezcle e incube entre 18 0C–230C durante por lo menos 1 minuto.
Centrifugue a 1000 r.c.f. durante 20 segundos o durante una alternativa apropiada de fuerza y
tiempo
Agite suavemente el tubo para hacer caer las células rojas y examinar microscópicamente para
aglutinación.
2.5
Las pruebas indeterminadas o negativas deben ser incubadas por 15 minutos a 370C y re centrifugadas las reacciones 2.3. Dweak pueden mejorar gracias a esta incubación adicional.
3.
3.1
Técnica de Tubo – Sedimentación
A un volumen de reactivo en un tubo de prueba etiquetado adicione el volumen equivalente a
3–5% de la suspensión de la prueba de las células rojas.
Mezcle e incube a 180C –230C por 60 minutos.
Agite suavemente el tubo para dejar caer las células y examinar microscópicamente por
aglutinación.
Nota: La técnica de tubo con centrifugación es recomendada para la detección de D weak/(Du).
3.2
3.3
3.4
METODOS GENERALES DE MICROPLACA
4.
4.1
Fase Liquida del método de micro placa
Prepare una suspensión de prueba de células rojas de 3–5% en Búfer de fosfatasa salina o 1-2% de
Potenciador de baja Ionización Salino (LISS)
4.2
Adicione una gota (aproximadamente 35-40 l) del reactivo al pozo apropiado de la prueba.
4.3
Adicione un volumen igual de la suspensión de células al pozo apropiado de la prueba.
4.4
Mezcle el contenido de cada pozo de forma manual o en un agitador de micro placa (el tiempo
requerido para lograrlo dependerá de la velocidad y la orbita del agitador)
4.5
Incube el micro placas a temperatura ambiente durante 15 a 20 minutos.
4.6
Centrifugue las micro placas durante 40 segundos a 100 r.c.f. o a una velocidad optima
alternativa para utilizar centrifuga.
4.7
Re-suspenda las células rojas usando el agitador de micro placa a una velocidad apropiada para
un tiempo y una agitación optimas.
4.8 Lea los resultados microscópicamente o con un lector
automático
LIMITACIONDES DEL PROCEDIMIENTRO DE MICROPLACA
Las Micro placas rigurosas de poliestireno son generalmente mas apropiadas que aquellas que son
elaboradas de PVC. Cada grupo de micro placas debe ser evaluado por el sistema prioritario del usuario
para aceptar si son las más adecuadas para el uso rutinario. Los grupos de micro placas muestran altos
niveles de estática y ataduras de proteínas no pueden ser tratadas al colocarlas en remojo con agua
destilada o enjuagándolas con una solución de Albúmina Bovina Salina al 1% (Las placas lavadas deben
ser secadas antes de su uso). El uso de tiempos de centrifugación inapropiados y velocidades
inapropiadas sobre vigoriza la re suspensión de los puntos de célula centrifugados y esto puede tener un
efecto adverso en los resultados de la prueba mostrando falsos positivos y falsos negativos.
LIMITACIONES
Algunos ejemplos de Dweak puede que no sean aglutinados de forma directa cuando se usa el método de
teja. Los resultados indeterminados en el método de teja deben ser confirmados utilizando un método de
tubo. Los falsos positivos y los falsos negativos pueden ocurrir a través de una contaminación de los
materiales de la prueba o de alguna desviación de la técnica recomendada.
REFERENCIAS
1.
2.
Widmann F.K. ed Technical Manual 10th ED Washington DC, American Association of Blood Banks
1990, Chapter 11.
.Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers
1975:178 3.Issit P.D. Applied Blood Group Serology 3rd Edition, Montgomery Scientific
Publications, Miami, Florida, USA, 1985, Chapter 10.