2-Estudio genético fetal.key
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HOSPITAL UNIVERSITARIO CRUCES ESTUDIO GENÉTICO FETAL CÓMO OBTENER MUESTRA DE TEJIDO FETAL Y! TIPOS DE ESTUDIOS GENÉTICOS Nerea Maiz Hospital Universitario Cruces, Barakaldo Universidad del País Vasco, UPV/EHU Jacobs, 1959 Los pacientes con síndrome de Down tienen 47 cromosomas Jacobs et al. Lancet 1959;4:710 Steele, 1966 El síndrome de Down es diagnosticado prenatalmente por amniocentesis Steele & Breg. Lancet 1966;2:742-3 AMNIOCENTESIS Técnica Tipo de Punción:! Perpendicular Oblicua Lugar de Punción:! Entre última costilla y espina iliaca antero-superior ✓ x ✓ Sonda Sonda Nicolaides, 1992 Spencer, 1999 BIOPSIA VELLOSIDADES CORIALES -Transabdominal- Técnica Sonda a d n o S ` BIOPSIA VELLOSIDADES CORIALES -Transcervical- Técnica García-Posada et al., Diagnóstico Prenatals 2012 AMNIOCENTESIS Y BVC Riesgo de pérdida fetal Amnio Amniocentesis BC BC 11 16 20 40 Gestación (sem) 15% Pérdidas fetales Estudios en seguridad BC Cochrane Library, Issue 4, 2003 Amnio 2% • Amnio 2° trimestre – aborto 1% • BC TA – No diferencias con amnio • Amnio precoz es peligrosa 1% 5 1% 11 16 Gestación (sem) 40 AMNIOCENTESIS Y BVC Cuándo BVC Riesgo basal 1/5000! • BC precoz 1/200-1500! • 8 semanas: Amputación! • 10 semanas: Falanges terminales • • Mecanismo:! • Hipoperfusión! • Embolización sustancias vasoactivas Firth et al., Lancet 1994;343:1069 BC antes de la semana 11 es peligrosa Amniocentesis • Amniocentesis precoz < 15 sem! • > % pérdida de líquido amniótico! • Talipes (1.4%)! • > % pérdida fetal (2.5%) Amnio antes de la semana 15 es peligrosa AMNIOCENTESIS Y BVC BVC AMNIO CORDOCENTESIS EG (semanas) 11-14 >15 >20 Aguja TA: 17, 18 G! TC: Forceps 20-22 G 20 G Pérdida fetal 1% 1% 2-3% Indicación Cariotipo! Enf. monogénica ! Estudio bioquímico Cariotipo! Enf. monogénica! Estudio bioquímico Cariotipo rápido! Enf monogénica rápida! Oligoamnios severo TIPOS DE ESTUDIOS GENÉTICOS Test combinado! riesgo 1/6 Array-CGH 12s: Biopsia corial! 16s: Amniocentesis 10 4 1 - d s a í FISH QF-PCR 48-72h Cariotipo! (citogenética) 3 sem ESTUDIO CROMOSÓMICO Citogenética • Cultivo celular! • Células en metafase (20 células)! • Tinción e identificación de cromosomas por patrón de bandas (bandas G)! • Automatización ! • Tiempo:! • líquido amniótico: 3 semanas! • vellosidad corial: ! • semidirecto: 2-3 días! • cultivo largo: 2-3 semanas TÉCNICAS MOLECULARES FISH • Células en interfase (no cultivo)! • Sondas bases complementarias de zona de ADN a estudiar.! • Sondas fluorescentes! • Diploide: dos sondas fluorescentes! • Triploide: tres sondas fluorescentes! • Monosómico: una sonda! • Tiempo: 24-72 horas TÉCNICAS MOLECULARES QF-PCR •No cultivo! •Amplificación, Diploide ! heterocigoto Diploide ! homocigoto ¿Monosómico? Triploide! ratio 1:1:1 Triploide! ratio 2:1 detección y análisis de secuencias específicas de ADN! •Analizador genético automatizado! •Diploide: Dos alelos de un cromosoma: ! •heterocigoto: dos picos en un ratio 1:1! •homocigoto: un pico! •Triploide: ! •tres picos con un ratio 1:1:1! •dos picos con un ratio 2:1 ó 1:2! •Monosómico: un pico (diferenciar de muestra homocigota)! ! •Tiempo: 24-72 horas TÉCNICAS MOLECULARES Array-CGH Normal no ganancias ni pérdidas CNV(Copy number variants)! • • • • • Ganancias, pérdidas ! Localización en el cromosoma! Identificación de genes que causan fenotipos clínicos! Alteraciones de todo el cromosoma (aneuploidías)! Alteraciones de segmentos del cromosoma: deleciones, duplicaciones, polimorfismos Array-CGH: Resultados CNV benigno • Frecuente! • No se asocia a patología! • Casi siempre heredado CNV patológico • Asociado a fenotipo anormal CNV incierto! (VOUS) • Heredado, Estudio a los padres • No heredado: CNV de significación incierta! • Tamaño?! • Localización? Array-CGH: Indicaciones Anomalías estructurales N=2,858, Anomalías ecográficas y cariotipo normal CNV patológicos (%) Anomalía Aislada +otras anomalías SNC 6,5% 11,0% Corazón 2,5% 11,7% Cara 6,8% 10,6% Respiratorio 8,0% 9,5% Gastrointestinal 14,3% 3,0% Pared abdominal 7,3% 2,8% Genitourinario 6,1% 8,0% Musculoesquelético 8,9% 8,3% Higroma/hidrops 4,3% 10,5% TOTAL 5,3% 7,1% Shaffer et al. Prenatal Diagnosis. 2012;32:986-95 Array-CGH: Indicaciones TN AUMENTADA & CARIOTIPO NORMAL Estudio TN CVN patológico Resolución Schou 2009 >99p 0/100 (0%) 3 Mbp Leung 2011 >3,5 mm 4/48 (9,5%) 100 kb Filges 2012 >3 mm ó > 1:10 0/100 (0%) 600 kb >4 mm 6/96 (6,3%) Scott 2013 >3,5 mm 1/41 (2,4%) 400 kb Rooryck 2013 >3,5 mm 3/57 (5,3%) 400 kb Schaffer 2012 TOTAL 14/443 (3,2%) Schou et al. Ultrasound Obstet Gynecol. 2009;34:618-22! Leung et al. Ultrasound Obstet Gynecol. 2011;38:314-9! Filges et al. Mol Cytogenet. 2012;5:38! Shaffer et al. Prenatal Diagnosis. 2012;32:986-95! Scott et al. Ultrasound Obstet Gynecol. 2013; in press! Rooryck et al. Eur J Med Genet. 2013; in press ADN FETAL LIBRE ! EN SANGRE MATERNA Fragmentos extra derivados de la trisomía 21 fetal • Cada hilo representa miles de fragmentos de cf DNA • El exceso de fragmentos de cf DNA del cromosoma 21 en la trisomía 21 es pequeño, pero se puede medir mediante secuenciación de DNA ADN FETAL LIBRE ! EN SANGRE MATERNA TD TFP Trisomía 21 590 / 594 (99.5%) 0.1% Trisomía 18 222 / 230 (97%) 0.1% Trisomía 13 30 / 38 (79%) 0.1% • El test de cf DNA no es un test diagnóstico para reemplazar a las pruebas invasivas! • El test de cf DNA es superior a todos los otros test para screening de trisomías 21, 18 y 13 Chiu et al, 2011; Chen et al, 2011; Ehrich et al, 2011; Palomaki et al, 2011; Bianchi et al, 2012; Sparks et al, 2012; Ashoor et al, 2012; Norton et al, 2012 MEDICINA FETAL CRUCES! ! [email protected]! [email protected]! ! 94 600 6000 Ext 7034 Gracias
